PROBLEMAS SOBRE ENZIMAS

1. La enzima mlico deshidrogenasa cataliza la reduccin de oxaloacetato con NADH, a malato y

NAD+. En el siguiente experimento se sigui la desaparicin del NADH, midiendo su absorbancia a
340 nm. Si se emplearon 35 ng de protena de la preparacin enzimtica, en una cubeta de 3 mL,
para este experimento, determine la actividad de la enzima en unidades internacionales y la
actividad especfica de esta preparacin.
tiempo (min) 0.00
Absorbancia 1.34

0.10
1.28

0.20
1.26

0.30
1.22

0.50
1.16

0.85
1.10

1.50
1.02

2.00
0.99

2. Se ha determinado la velocidad inicial de una reaccin catalizada enzimticamente para diversas

concentraciones de sustrato. Los datos obtenidos son los siguientes:
[S] (mol/L)
5
10
20
50
100
200

V [(mol/L).min-1]
22
39
65
102
120
135

a) Estime Vmax y KM a partir de un grfico directo de V frente a [S]. Tiene dificultades para obtener
respuestas claras?
b) Utilizando una representacin de Lineweaver-Burk analice los mismos datos y encuentre los
anteriores parmetros.
c) Consulte la representacin de Eadie-Hofstee y calcule los parmetros con ella.
d) Calcule Kcat. si la concentracin total de la enzima fuera 1nmol/L. Cuantas molculas de
sustrato puede procesar una molcula de enzima por segundo?
e) Calcule Kcat / KM . Esta es una enzima eficiente?
3. Se estudia la cintica del estado estacionario de una enzima en ausencia y en presencia de un
inhibidor. La velocidad inicial viene dada en funcin de la concentracin del sustrato en la
siguiente tabla:
V [(mmol/L)-1. min-1
Sin inhibidor
con inhibidor

[S] (mmol/L)
1.25
1.67
2.50
5.00
10.00

1.72
2.04
2.63
3.33
4.17

0.98
1.17
1.47
1.96
2.38

a) Qu tipo de inhibicin se ha producido?

b) Determine Vmax y KM en ausencia y en presencia del inhibidor. Que diferencias encuentra?
4. Una enzima se estudia en ausencia y en presencia de inhibidor con concentracin diferente. Los
datos de la velocidad inicial frente a la concentracin de sustrato en cada caso son:
[S] (mmol/L)
1.25
1.67

Sin inhibidor
1.72
2.04

V [(mmol/L)-1. min-1
con inhibidor 3 mM
1.25
1.54

con inhibidor 5 mM
1.01
1.26

2.50
5.00
10.00

2.63
3.33
4.17

2.00
2.86
3.70

1.72
2.56
3.49

a) De que tipo de inhibicin se trata.

b) Determine Vmax y KM para cada concentracin del inhibidor.
c) Estime K1 a partir de los datos.
5-Considere a la enzima Invertasa, que cataliza la hidrlisis de Sacarosa a fructosa y glucosa. Esta
enzima posee una Km para sacarosa de 0.5 mM y una constante cataltica de 175 min -1. Si se mide
su actividad en presencia de 0.25 mM de sacarosa con 25 pmol de enzima en la cubeta - qu
velocidad de catlisis se observar? - qu fraccin representa esto de la Vmax que se podra
calcular en esta reaccin si se variase la cantidad de sacarosa? - Cunto sustrato habra que aadir
para que la velocidad observada alcanzase 0.95% de la Vmax? - Qu importancia podra tener esto
para la posible aplicacin industrial de la enzima? - Explique sus respuestas.
6.. La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres diferentes concentraciones de enzima
y a diferentes concentraciones de sustrato fu la siguiente:
[Enz] (mg de protena)

0.1

[AcetilCoA] (mM)

0.2

0.5

Vel (mmol

/ min)

0.05

0.275

0.546

1.373

0.14

0.482

1.001

2.502

0.23

0.580

1.185

2.891

0.32

0.642

1.385

3.463

0.50

0.755

1.494

3.656

0.59

0.766

1.497

3.810

a) Calcular para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmax.

b) Son los valores de Km y Vmax iguales o diferentes?
c) Explique si lo que observ es lo que esperaba obtener
d) Sabiendo que la enzima pesa 220 000 grs/mol, haga una grfica de Vmax vs mmol de enzima.
e) Qu representa la pendiente de esta grfica?
7. Se realizaron estudios de inhibicin para dos enzimas diferentes presentes en el suero bovino. Se
vari la concentracin de sustrato a en ausencia y en presencia de tres concentraciones diferentes de
inhibidores de cada enzima. En cada caso encontrar:
a) El tipo de inhibicin.
b) El valor de Km y Vmax.
c) El valor de Ki para el inhibidor.
Enzima: Fosfatasa alcalina de suero bovino, inhibidor: Oxalato de Bromolevamisol
[Bromolevamisol] (mM)

16

40
-1

mgProt.-1)

[Sustrato] [FP](mM)

Velocidades

iniciales

(mmol min

0.1

0.231

0.210

0.191

0.158

0.3

0.431

0.369

0.309

0.239

0.7

0.607

0.488

0.425

0.277

1.3

0.751

0.599

0.467

0.304

1.8

0.811

0.657

0.530

0.319

2.6

0.912

0.657

0.546

0.328

4.1

0.957

0.688

0.561

0.351

5.8

0.981

0.741

0.558

0.344

Enzima: Transaminasa Glutmico Pirvica.

[2hidroxisuccnico]
(mM)
[Sustrato]
(mM)

0.0

[Glu] Velocidades

1.0

2.0

5.1

iniciales

(mmol / min

/ mgProt)

0.6

0.59

0.48

0.38

0.24

1.4

1.12

0.91

0.78

0.51

2.9

1.63

1.43

1.19

0.87

5.2

1.94

1.70

1.64

1.19

8.0

2.19

1.94

1.94

1.56

10.3

2.28

2.06

1.99

1.74

16.0

2.32

2.33

2.24

1.89

25.1

2.62

2.53

2.25

2.09

8- La enzima Aspartato transaminasa, que cataliza la reaccin:

Aspartato + Oxoglutarato
Glutamato + Oxaloacetato
se realizaron los siguientes tres experimentos el siguiente experimento:

[Asp] = 1 mM

[OxG] =

0.02 mM

[OxG] =

0.5 Mm

[OxG]
(mM)

Vel
(mol/min)

[Asp]
(mM)

Vel
(mol/min)

[Asp]
(mM)

Vel
(mol/min)

0.002

0.444

0.007

0.411

0.007

0.468

0.018

2.031

0.048

1.268

0.048

2.017

0.037

2.781

0.171

1.722

0.171

3.317

0.063

3.336

0.335

1.850

0.335

3.866

0.094

3.756

0.547

1.983

0.547

4.123

0.493

4.324

1.016

2.031

1.016

4.324

a) Calcule Km y Vmax para cada sustrato.

b) Cambian las Vmax? Explique su respuesta
c) Explique que pas en el segundo experimento, con respecto al tercero.
d) Cantos y cules valores de Km debo considerar para describir la afinidad de la enzima por sus
substratos?
e) Qu conclusin se podra sacar de esos datos?

8- El RNA se hidroliza rpidamente en solucin alcalina. Sin embargo el DNA que carece del -OH
en la posicin 2'- del anillo furansido de la ribosa es resistente a esta condicin. Basado en su
conocimiento del mecanismo qumico de la RNAasa explique esta observacin.