MICROPROPAGACIN

CULTIVO IN VITRO DE EMBRIONES DE MAZ

El maz (Zea mays) es un cereal de la familia Graminaceae originario del continente americano y
actualmente cultivado en casi todo el mundo.

Como en todas las monocotiledneas, el cotiledn tiene como funcin la transferencia de los
nutrientes del endosperma a la plntula en desarrollo. En el cultivo in vitro, el medio nutritivo
sustituye al endosperma, ya que el embrin es eliminado junto con el cotiledn (Figura 1).
En biotecnologa vegetal, esta forma de cultivo in vitro permite rescatar embriones hbridos,
resultantes de cruzamientos incompatibles. Tambin se utiliza para romper la dormicin de las
semillas, acortando as el ciclo de vida de algunas plantas. Se trata de un buen modelo para los
estudios fisiolgicos ligados a la germinacin de las semillas o al desarrollo de las plntulas.
As como otros rganos de las plantas, los embriones pueden ser cultivados en un medio nutritivo
con agua, sales minerales, azcar y agar.

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Figura 1. El grano de maz

A. Estructura del grano

Pericarpio
Endosperma
Embrin
Cotiledn
B. Extraccin del embrin

BIBLIOGRAFA

T. T. FURTADO, FONSECA DA SILVA V.C. e MANN V.S. Cultivo de embries de milho. Trabalho de finalizao do
curso mdio tcnico de Biotecnologia do Instituto de Tecnologia ORT do Rio de Janeiro, 2002.
MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagacin. Gua 80: Micropropagcin en el laboratorio de enseanza;
Gua 85: Desinfeccin de los instrumentos; Gua 90: Desinfeccin de los explantes y Gua 96: Los medios de
cultivo. http://www.bteduc.bio.br
Video: Extraccin y siembra del embrin de maz.
MY AGRICULTURE INFORMATION BANK http://www.agriinfo.in/ SHOESTRING BIOTECHNOLOGY. National
Association of Biology Teachers

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ACTIVIDAD PRCTICA
OBJETIVO
Cultivar embriones de maz, in vitro.

MATERIALES
1 trozo de espiga de maz, tubos de ensayo con medio nutritivo* estril, 1 cuchillo o 1 bistur, palitos
estriles, agua sanitaria diluida al medio, 3 frascos de agua destilada estril, alcohol 96, alcohol
70, mechero Bunsen (opcional).
* El medio nutritivo (Murashige & Skoog, Taji o Knop) es una solucin de sales minerales a la que
se adiciona sacarosa (1 a 5%), agar (0,7%) y agua de coco, como se indica en las Guas 111:
Micropropagacin: medios clsicos y 112: Micropropagacin: medios alternativos.

PROCEDIMIENTO

La limpieza del lugar de trabajo es fundamental, as como la higiene de las manos. El

lugar de trabajo ser desinfectado con alcohol 70. Los participantes se lavarn muy
bien las manos y los antebrazos con agua y jabn, antes de pasarse alcohol 70.
Cuidado! El alcohol es inflamable. Esterilizar el material contaminado antes de
descartarlo.

1. Desinfeccin de los explantes

o Separar con un cuchillo los granos de maz.
o Desinfectar los granos con solucin de agua sanitaria
(15 minutos), agitando suavemente.
o Lavar los granos tres veces con agua destilada estril
(1, 3 y 5 minutos)

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2. Extraccin del embrin

o

Cerca del mechero Bunsen y con mucho cuidado, presionar suavemente el grano de maz para
facilitar la salida del embrin.

Sujetar el embrin con un palito estril (Participante A). El procedimiento puede ser visto en el
vdeo: Extraccin y siembre del embrin de maz.

3. Sembrado del embrin

o

Abrir el tubo de ensayo con medio de cultivo estril y flamear la boca del tubo (Participante B).

Dejar caer el embrin dentro del tubo (Participante A).

Flamear nuevamente la boca del tubo y cerrarlo (Participante B).

A continuacin, verificar que el embrin quede en contacto con el medio. Si no fuera as, agitar
suavemente el tubo de modo de acomodar el embrin en el medio.

4. Incubacin
En presencia de luz, a temperatura ambiente.

5. Establecimiento del cultivo a cultura

Realizar mediciones semanales de la altura del epictilo (mm).

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NUESTRO COMENTARIO
Este protocolo est basado en el trabajo final del Curso Medio Tcnico de Biotecnologa de Tassia
Torres Furtado, Vania Carolina Fonseca da Silva y Vtor Soares Mann titulado Cultivo de embries
de milho, desarrollado en 2002 en el Instituto de Tecnologa ORT de Ro de Janeiro.
Los autores no tuvieron dificultades en el seguimiento del crecimiento del embrin (Figura 2). Ellos
trabajaron con dos medios alternativos, medio bsico de Taji y medio de coco. Los resultados pueden
apreciarse en el Grfico 1, que muestra que los embriones de maz se desarrollan mejor en medio
bsico Taji que en medio de coco. El medio Taji parece agotarse ms tarde (3 semanas) que el medio
de coco (2 semanas).
En repeticiones posteriores de esta actividad, desinfectamos los granos de maz con alcohol y con
Clor-in 10 sin que se observara un aumento significativo de las contaminaciones.

CMO ARMAR UN PROYECTO?

Alterar la composicin del medio de cultivo
Analizar el crecimiento in vitro de embriones de otras monocotiledneas.

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Figura 2. Desarrollo in vitro de embriones de maz.

Primera Hoja
Coleptilo
Races adventicias
Raz principal

Primer hoja

Coleptilo
Races adventcias

Raz principal

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Grfico 1. Crecimiento de los epictilos de plntulas de maz, a partir de embriones cultivados en dos
medios alternativos (T. Torres Furtado, V.C. Fonseca da Silva e V. Soares Mann, Instituto de
Tecnologa ORT de Ro de Janeiro, 2002)

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