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ASESOR:
COLABORADOR:
-
PIURA PER
SUMARIO
1. DATOS GENERALES
1.1. Ttulo del Anteproyecto de Tesis
1.2. Autor
1.3. Asesor
1.4. Asesor Estadstico
1.5. Facultad
1.6. Departamento acadmico
1.7. Lugar de estudio
1.8. rea de estudio
2. DEFINICION DEL PROBLEMA
2.1. Ttulo
2.2. Antecedentes
2.3. Justificacin
2.4. Objetivos
2.4.1.1. Objetivos Generales
2.4.1.2. Objetivos Especficos
2.5. Enunciado del Problema
2.6. Hiptesis
3. MARCO TEORICO
3.1. Marco conceptual
3.2. Bases Tericas
3.3. Definicin de Trminos
4. DEFINICIN DE LAS POBLACIONES DE ESTUDIO
4.1. Caractersticas Generales
4.1.1.1.1. Criterios de Inclusin
4.1.1.1.2. Criterios de Exclusin
4.2. Ubicacin Temporo Espacial
5. METODOLOGA
5.1. Tipo de Investigacin
5.2. Universo
5.3. Poblacin
5.4. Tamao y seleccin de la muestra.
6. OPERACIONALIZACIN DE VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIN
7. RESULTADOS
8. DISCUSIN
9. CONCLUSIONES
10. RECOMENDACIONES
11. ANEXOS
12. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
RESUMEN
Este estudio tiene como objetivo determinar y comparar las especies de
enterobacterias presentes en Anadara tuberculosa (conchas negras) y Argopecten
purpuratus (conchas de abanico) adquiridas en el terminal pesquero de Piura
durante el periodo de Octubre - Diciembre del 2012.
Para este estudio adems se contabilizar la carga bacteria presentes en cada
uno de estas especies de conchas. Esto nos reflejar el impacto que tienen estos
alimentos al ser consumidos.
Resultados (an no se hace la parte prctica).
INTRODUCCIN
1. DATOS GENERALES
1.1. Ttulo
Enterobacterias clnicamente significativas en Anadara tuberculosa
(conchas negras) y Argopecten purpuratus (conchas de abanico)
procedentes del terminal pesquero de Piura durante el periodo de
Octubre Diciembre del 2012.
1.2. Autores
-
1.3. Asesor
Mcblgo. Jaime Fernndez Ponce.
1.4. Colaborador
Blgo. Humberto Rivera Calle.
1.5. Facultad
Facultad de Medicina Humana
Escuela de Medicina Humana.
1.6. Departamento acadmico
Departamento acadmico de Medicina.
rea clnico quirrgica.
1.7. Lugar de estudio
Piura
1.8. rea de estudio
Terminal pesquero de Piura
2. DEFINICIN DEL PROBLEMA
2.1. Ttulo
Enterobacterias clnicamente significativas en Anadara tuberculosa
(conchas negras) y Argopecten purpuratus (conchas de abanico)
procedentes del terminal pesquero de Piura durante el periodo de
Octubre Diciembre del 2012.
2.2. Antecedentes
En noviembre del 2000 en un trabajo presentado por la Facultad de
Ciencias de Ingeniera de la Universidad Tecnolgica Equinoccial, sobre
AISLAMIENTO
IDENTIFICACIN
DE
ENTEROBACTERIAS
diversas
tcnicas
como
enriquecimiento,
aislamiento
Objetivos Generales
2.4.1.2.
Objetivos Especficos
.
-
Aislar enterobacterias.
Identificar las enterobacterias obtenidas en las siembras.
Recuento de la carga bacteriana en las conchas negras y de abanico.
2.6. Hiptesis
Se sabe que Anadara tuberculosa habitan en aguas estuarinas mientras que
Argopecten purpuratus habitan exclusivamente en aguas de mar; por ende se
supone que las especies de enterobacterias se encuentren en ambas sern
distintas.
3. MARCO TEORICO
3.1. Marco conceptual
ENTEROBACTERIA
La familia
con
tractos
urinarios
patolgicos
(litiasis,
anomalas
los
siguientes:
portador
asintomtico,
gastroenteritis
aguda,
S.
paratyphi
ocasionalmente,
S.
typhimurium18.
Es
un
hallazgo
que
representa
con
ms
frecuencia
Una concha es la cobertura dura, rgida y exterior que poseen ciertos animales.
Solo se consideran conchas los exoesqueletos de los moluscos.
Las conchas tienen tres capas, aunque alguna de ellas puede desaparecer en
ciertos grupos de moluscos. La ms interna es el ncar o endostraco. Es una
mezcla orgnica de capas de conquiolina (una escleroprotena) y cristales
de aragonito.
La
intermedia
es
el mesostraco,
donde
aparecen
cristales
: Pectinidae
Nombre Cientfico
Nombre comn
: concha de abanico
Nombre ingls
: Scallop
Nombre FAO
Ingls
DISTRIBUCIN
Argopecten purpuratus se distribuye desde Paita, Per (Alamo y
Valdivieso, 1987) hasta Valparaso, Chile (Bore y Martnez, 1980), dentro
de bahas semi-protegidas con sustratos sedimentarios (Brand, 1991).
Verticalmente ocupa la zona infralitoral de fondos arenosos, areno-
curso
irregular
con
clulas
en
diferentes
estadios
de
la
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de la familia Enterobacteriaceae crecen fcilmente en los
medios de cultivo.
Las muestras de materiales generalmente estriles, como el lquido
cefalorraqudeo o un tejido que se obtienen durante la ciruga, se pueden
inocular en medios de agar sangre no selectivos. Los medios selectivos
(p.ej., agar de Mac Conkey, agar eosina-azul de metileno [EMB]) se usan
para el cultivo de muestras que suelen estar contaminadas por otros
microorganismos (p. ej., esputo, heces)
selectivos diferenciales
Conkey:
colonias
rosadas
(fermentan
lactosa),
colonias
lactosa),
colonias
Se inserte el cuchillo entre las dos valvas hacia la charnela del marisco. Se
empuje el cuchillo haca el interior y abra la valva superior hacia fuera, dejando
que el lquido intervalvar drene a un recipiente estril pesado, bolsa o matraz.
Se pasa el filo a travs del msculo separando los ligamentos que lo atan a la
valva.
Se retire la concha superior y se raspa el msculo vaciando el contenido en el
recipiente, bolsa o matraz. Se repita la operacin con los ejemplares
seleccionados.
Homogenizacin y dilucin usando el homogenizador o licuadora.
Se pesa 50g del alimento en un vaso de licuadora estril de alta velocidad y se
aade 450 ml de agua para dilucin estabilizada con fosfato de Butterfield y se
mezcla durante 2 minutos.
O en su defecto se pesa el matraz que contiene el msculo y lquido tisular y se
resta el peso del matraz para obtener el peso de la muestra. Se agrega el lquido
de dilucin estril a razn de 2 partes por peso. Se transfiere al recipiente del
homogenizador y se somete a alta velocidad (12000 rev/min) durante 60 segundos
a 4 sesiones de velocidad de 15 segundos de intervalo. Se deja reposar 30
segundos y se transfiere 30 ml del homogenizado a 70 ml del lquido de dilucin
estril. Esto constituye la dilucin 10-1 (1 en 10).
Se prepara la siguiente dilucin 10-2 (1 en 100) aadiendo 10 ml de la primera
dilucin en 90 ml del lquido de dilucin. Si se espera que los niveles del
microorganismo sean altos, se preparan entonces las diluciones 10-3 y 10-4 de la
misma forma. Se guarda el remanente a 4C.
* Homogenizacin y dilucin Usando el Stomacher (optativo)
ANLISIS DE SALMONELLA
Generalidades:
Los mtodos que se aplican para el anlisis de mariscos son solo para los
productos que se destinan al consumo humano directo, pero no son utilizados
para la clasificacin de reas de recoleccin o cultivo de mariscos.
El siguiente mtodo es vlido para el aislamiento de los numerosos serotipos de
Salmonella pero no para Salmonella Typhi, para el cual se utiliza otro mtodo ms
adecuado.
Materiales
Medios de cultivo:
Agua Peptonada Tamponada (APT) (ej, Oxoid CM 509 o equivalente)
Caldo Peptonado Rappaport Vassiliadis Soya (RVS) (ej. Oxoid CM 866 o
equivalente)
Agar XLD (ej. Oxoid CM 469 o equivalente)
Agar Verde Brillante (BGA) (ej. Oxoid CM 329 modificado o equivalente)
Preparacin de la muestra
Se sigue el procedimiento del mtodo para E. coli anterior.
Procedimiento:
Homogenizacin y pre-enriquecimiento
Con homogenizador o licuadora. Se pesa una cantidad separada de 25 g en un
matraz estril. Se aade 50 ml procedente de un volumen medido de 225 ml de
Agua Peptonada Tamponada y se homogeniza a alta velocidad por un total de 60
segundos (ver mtodo de E.coli). Se agrega el restante del APT y se mezcla bien.
Se incuba a 37C1 por 18-24 h.
Enriquecimiento Selectivo
Se transfiere 10 ml del cultivo en APT a 100 ml de Caldo Selenito F. Se incuba a
37C1 por 242 h.
Subcultivo
Al final del perodo de incubacin, se repica el cultivo en Selenito al Agar Citrato
Desoxicolato (DCA) y al Agar Bismuto Selenito. Se utiliza un asa de metal de 2- 3
mm de dimetro para estriar hasta el agotamiento para obtener colonias aisladas.
Se incuban las placas a 37C por 18 a 24 h. Se examinan las placas para ubicar
las colonias sospechosas de Salmonella. Se incuban de nuevo las placas por 24 h
ms (482 h en total) y se examinan de nuevo al fin de la incubacin.
Se comprueban las colonias por medio de pruebas bioqumicas y serolgicas.
ANLISIS DE VIBRIONES
Referencia:
Manual de Anlisis Bacteriolgico del FDA, USA. 2001
Materiales:
Medio de cultivo Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa (TCBS).
Procedimiento:
Se pesa 30 g de tejido entero del bivalvo y se homogeniza con 200 mL de agua
peptonada alcalina (APA) a doble concentracin, se homogeniza e incuba a 36 C
por 6-18 horas.
Se retiran los frascos de la incubadora con cuidado, evitando mover demasiado
el caldo; se toma con un asa de siembra una asada de la pelcula superficial
formada por el crecimiento bacteriano y se estra en placas con agar Tiosulfato
Citrato Bilis Sacarosa (TCBS). Se incuba a 36C por 18-20 horas.
Se observan las colonias de color amarillo o del color del medio (verdes) y se
repican en tubos con agar triptona soya (TSA) inclinado, para realizar luego las
pruebas bioqumicas respectivas.
ANLISIS BIOQUIMICOS
Para obtener identificar las especies de enterobacterias presentes en conchas
negras y conchas de abanico, es necesario interpretar los resultados.
Se sigue el siguiente esquemai para realizar el procedimiento:
otros
gneros
de
la
familia
Enterobacteriaceae
coliformes
fecales
incluyen
un
grupo
de
microorganismos
la
mayor
parte
de
las
Enterobacteriaceae
proceden
de
Multiplicacin
crecimiento
toxignicos.
microbiana
que
pudiera
haber
permitido
el
METODOLOGIA
5.1 Tipo de Investigacin:
5.2 Universo:
Conchas negras y de abanico procedentes de diversos lugares de la
Regin llegadas al terminal pesquero de Piura.
5.3 Poblacin:
DEFINICIN
CONCEPTUAL
DEFINICIN
OPERACION
AL
INDICAD
OR
TIPO DE
VARIABL
E
ESCALA
DE
MEDICI
N
VALOR
ES
FINALE
S
Enterobacter
ias
Bacilos
grannegativos, es
el grupos de
mayor especie,
son anaerobios
facultativos,
generalmente
catalasa (+) y
oxidasa (-).
Molusco bivalvo
de la familia
Arcidae, es un
organismo que
alcanza una talla
promedio de 62 mm
de altura por 49 mm
de longitud.
Conchas
negras
Conchas de
abanico
Especie Molusco
bivalvo de la Familia
Pectinidae que
presenta dos valvas
comprimidas,
articuladas
dorsalmente, con 23
a 26 costillas
radiales que
delimitan surcos en
los que se
encuentran
estriaciones
transversales.
7. RESULTADOS
8. DISCUSIN
9. CONCLUSIONES
10. RECOMENDACIONES
Diferentes
especies de
enterobacter
ias a
encontrarse
en conchas
negras y
conchas de
abanico.
Conchas
obtenidas
del terminal
pesquero de
Piura.
1.
Ausencia
2.
Presencia
(cantidad
)
Cuantitati
va
Cualitativ
a
NMP
(Nmer
o ms
probabl
e).
1
2
1
1. Buen
estado
2.
Tamao
promedio
Cualitativ
a
- Buen
estado
Tamao
1
Conchas
obtenidas
del terminal
pesquero
1. Buen
estado
2.
Tamao
promedio
Cualitativ
a
- Buen
estado
Tamao
11. ANEXOS
Enterobacterias.
Revisado
el
15/10/12.
Disponible
online
en:
[http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Enterobacterias_Med
icine2010.pdf]
Test
bioqumicos.
Revisado
el
15/10/12.
Disponible
en:
[http://microbiology.free.fr/Presentations/Biochemicaltests.pdf]
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