Componentes qumicos y Actividad antimicrobiana de Indian frondosa verde

vegetal Cardiospermum

halicacabum

R. Jeyadevi , T. Sivasudha , A. Ilavarasi ,y N. Thajuddin

Informacin Autor notas Artculo Derecho de Autor y la licencia para la informacin

Abstracto
Ir:

Introduccin
Productos naturales de los microorganismos han sido la principal fuente de
antibiticos. Pero con la creciente aceptacin de la medicina a base de hierbas como una
forma alternativa de cuidado de la salud, la seleccin de plantas medicinales para los
compuestos activos se ha convertido en muy importante ya que estos pueden servir como
fuentes prometedoras de nuevos antibiticos [ 1 ]. Los antibiticos que se utilizan hoy en
da exhibe demritos y efectos secundarios cierto, por lo que no ha habido un creciente
inters en los alimentos naturales para el barrido de los radicales libres debido a su gran
aceptacin. Alrededor del 80% de las personas en los pases en desarrollo todava dependen
de la medicina tradicional basada en gran medida en las plantas y los animales para su
atencin primaria de salud. La mayora de la gente prefiere las hierbas medicinales, debido
a los efectos de alta toxicidad y secundarios de las drogas sintticas. Las plantas
medicinales juegan un papel importante en el desarrollo de agentes teraputicos
potentes. India es reconocida como una tierra de plantas a base de plantas y por lo tanto, los
datos cientficos sobre dichas plantas podra ser de importancia clnica.
Halicacabum Cardiospermum (Sapindaceae) es un escalador herbcea de aproximadamente
2-4 m de largo, de hoja perenne, ramificada con frutas infladas contienen patrn en forma
de corazn blanco en la semilla distribuida en las regiones tropicales y subtropicales de
frica y Asia, y con frecuencia consume como verdura de hoja verde en la
India. C. halicacabum se conoce comnmente como la vid Globo, guisante corazn
(Inglaterra), Parol-Paralon (Filipinas), Jia hu gua (China) y Mudakathan Keerai
(TamilNadu, India).C. halicacabum utilizado en Indian sistema de la medicina tradicional
para el tratamiento del reumatismo, lumbago, tos, hipertermia, enfermedades nerviosas,
rigidez de las extremidades y mordedura de la serpiente [2 ]. La actividad anti-inflamatoria
del extracto etanlico de C. halicacabum hojas contra el edema de la pata de la rata
inducido por carragenina ya se ha observado experimentalmente en ratas
[ 3 ]. Gopalakrishnan et al. [ 4 ] inform de la actividad analgsica y vasodepresivo
de C. halicacabum . El extracto etanlico de C.halicacabum demostrado tener actividad

antipirtica contra la pirexia inducida por la levadura en ratas [ 5 ], la actividad anti-lcera

[ 6 ] y anti efecto hiperglucmico [ 7 ]. El extracto de etanol de la C. halicacabumsuprime
la produccin de TNF-alfa y xido ntrico en clulas mononucleares de sangre perifrica
humanos [8 ]. El perfil de cidos grasos de extracto de aceite de semilla
de C. halicacabum revela la presencia de cido palmtico, cido oleico, cido esterico,
cido linoleico, y cido eicosenoico [ 9 ]. El phytoconstituent responsable de la actividad
ansioltica de C. halicacabum fue identificado como cardiospermin, un glucsido
cianognico [ 10 ]. Autores inform recientemente la actividad antiartrtica
de C. halicacabum contra la artritis inducida por adyuvante en ratas Wistar [ 11 ]. As, el
principal objetivo del trabajo fue analizar los componentes qumicos y evaluar la actividad
antibacteriana y antifngica del extracto de hoja de etanlico deC. halicacabum (ECH).
Ir:

Materiales y METODOS
Material Vegetal

Las hojas de la planta C. halicacabum se obtuvieron de distrito de Tiruchirappalli, Tamil

Nadu, India y taxonmicamente identificada por el Departamento de Ciencias Vegetales de
la Universidad Bharathidasan, Tiruchirappalli, Tamil Nadu, India. Las hojas se recogieron y
se lavaron con agua para eliminar todos los residuos no deseados.
Preparacin del extracto

Las hojas se cortaron en trozos pequeos, se congelaron en nitrgeno lquido, se liofilizaron

utilizando un liofilizador de vaco (Christ alpha 1 - 2 / LD plus , Alemania) y la muestra
liofilizada se tritur groseramente en polvo se almacena a -20 C. Diez gramos de polvo se
extrajo con 200 ml de etanol al 99% utilizando un aparato de Soxhlet. El disolvente se
evapor bajo presin reducida a 45 C usando un evaporador rotatorio (Buchi R-210,
Suiza) para producir un rendimiento de 9% de extracto seco. El extracto seco obtenido se
almacen a -20 C hasta su uso posterior. A continuacin, el extracto se resuspendi en
agua destilada estril para producir la concentracin deseada y se utiliza para posterior
anlisis.
Anlisis FT-IR

FT-IR es la herramienta ms poderosa para la identificacin de los tipos de enlaces

qumicos (grupos funcionales). Los espectros FT-IR de ECH se registraron en un Perkin
Elmer modelo 2000 FT-IR espectrmetro (Thermo Fisher Scientific Inc., MA, y

EE.UU.). La muestra seca se moli con polvo de bromuro de potasio y se presiona en pellet
para la medicin de espectrometra en el rango de frecuencia de 4,000-400 cm -1 .
GC-MS anlisis

Se realiz GC / MS anlisis de los extractos de etanol usando un Shimadzu QP-2010 Plus

con el sistema de desorcin trmica TD 20. Para la deteccin de MS, se utiliz el modo de
ionizacin de electrones con energa de ionizacin de 70 eV, con un intervalo de masas, m /
z 50 -550. Un Omega Cera-30 m 0,25 mm ID, grosor de pelcula de 0,25 micras se utiliz
para GC / MS. La temperatura de la columna se program desde 70 hasta 220 C a una
velocidad de 4 C / min con las temperaturas inferior y superior estn mantenidos para 3 y
20 min, respectivamente. El inyector de GC y MS temperaturas lnea de transferencia se
fijaron en 230 y 280 C, respectivamente. GC se realiz en el modo normal. Se utiliz
helio como gas portador y el caudal se mantuvo a 1 ml / min. Un volumen de inyeccin de
1 l de ECH se inyect en la columna.Composicin qumica de ECH se identificaron por su
tiempo de retencin y patrn de fragmentacin de masas utilizando los datos de las normas
en Wiley y NIST-biblioteca masa bases de datos espectrales [ 12 ,13 ]. El porcentaje de
composicin de ECH se calcul el rea del pico.
Patgenos Microbianos

Un conjunto de cepas bacterianas gram negativos de referencia de saber. Escherichia

coli (MTCC 739 y MTCC 2939), Aeromonas hydrophila sub sps. (MTCC
1739), Pseudomonas aeruginosa (MTCC 2453 y MTCC 1934), Enterobacter faecalis y una
cepa bacteriana Gram positiva Staphylococcus aureus sub sps.aureus (MTCC 2940) y una
cepa del hongo Candida albicans (MTCC 227) se obtuvieron de tipo microbiano Culture
Collection (MTCC), Instituto de Tecnologa Microbiana (IMTECH), Chandigarh.Adems
de que las cepas resistentes a mltiples frmacos clnicamente aislado
( Shigella sp., Klebsiella pneumoniae y Citrobacter fruendii ) se obtuvieron de un hospital
Gobierno, Thanjore, Tamil Nadu, India.Las cepas bacterianas se mantuvieron en tubos
inclinados de agar nutriente, subcultivados regularmente y almacenadas a 4 C para su uso
posterior.
Preparacin del inculo

Un asa de siembra de cultivo bacteriano crecido durante la noche se inocul en 5 ml de

agua de peptona, se incubaron a 37 C durante 6 h. Este crecimiento activo suspensin de
cultivo se ajust con agua de peptona con el fin de obtener una turbidez que podra ser
visualmente comparable con 0.5 estndar MacFarland que ha sido preparado mediante la

adicin de 0,5 ml de cloruro de bario 0.048 con 99,5 ml de 0,36 N de cido sulfrico. La
turbidez es aproximadamente igual a 1-2 x 10 8 UFC / ml.
Determinacin de la actividad antimicrobiana

La sensibilidad de las cepas bacterianas de prueba para extracto etanlico

de C. halicacabum se midi por medio de zona de inhibicin utilizando pocillo de ensayo
de difusin. 20 ml de esterilizado Muller Hinton Agar (MHA) se vertieron en petriplates y
se deja solidificar. Un hisopo estril se sumergi en suspensin de caldo de 0.5 estndar
MacFarland. El exceso de suspensin se elimin por girar el hisopo contra la pared del
tubo. Las superficies enteras de las placas MHA se repartirn uniformemente. Wells se
cortaron en placas de agar con barrenador bien estril y se llenan con 100 l extracto de la
planta. Las placas inoculadas se incubaron a 37 C durante 24 h y se midi la zona de
inhibicin resultantes y se incubaron durante otras 24 h para encontrar cualquier efecto
bacteriosttico. El experimento se repiti tres veces para asegurar la sensibilidad de los
patgenos al extracto de la planta. Los patgenos que mostraron zona clara de inhibicin de
ms de 10 mm se consideraron para ser sensibles. El cloranfenicol (10 g) y nistatina (20 g)
fueron utilizados como estndares de referencia positivos para bacterias y hongos,
respectivamente, para determinar la sensibilidad de las cepas probadas.
Concentracin Inhibitoria Mnima

La concentracin mnima inhibitoria (MIC) del extracto de la planta se llev a cabo

utilizando el mtodo de dilucin en caldo [ 14 ]. Para las bacterias, caldo nutriente que
contiene diferentes concentraciones (20-200 mg / ml) de extracto de etanol se prepararon y
se inocul con 0,1 ml de inculo. Para hongos, caldo de dextrosa de Sabouraud que
contiene diferentes concentraciones (20-200 mg / ml) de la ECH se prepararon y se inocul
con 0,1 ml de inculo. Los cultivos inoculados se incubaron a 37 C durante 24 h. La
menor concentracin del extracto que provoca una inhibicin completa de crecimiento se
tom como MIC despus de 24 h de incubacin. Los resultados se compararon con
cloranfenicol antibitico estndar y nistatina para bacterias y hongos,
respectivamente. Todas las pruebas se llevaron a cabo tres veces.
Ir:

Resultados y discusin
Halicacabum Cardiospermum es un cultivo alimentario sin cultivar, ampliamente
distribuido en la India y se consumen como verdura de hoja verde. Los espectros de FT-IR
de ECH crudo se muestran en la Fig. 1 .Pico de absorcin fuerte y amplia en 3,356.49 cm -

para OH vibraciones de tensin, picos a 2,364.53 y 2,135.63 cm -1 para CH estiramiento

vibraciones, y un fuerte extensa absorcin en la regin de 1,649.08 para flavonoide
carbonilo (C = O) estiramiento y 1,248.94 cm -1 para alcano o vibraciones alifticos ster se
observaron en los espectros. Adems, los picos caractersticos a 2,927.17 cm -1 (para
CH 2 estiramiento), 1,420.73 cm -1 (para CH 3 estiramiento) y 616,6 cm -1 , tambin se
observaron (alquino) en la Fig. 1 . El espectro de FT-IR de ECH confirma la presencia de
grupos funcionales para los fenlicos y flavonoides, que son ampliamente informaron por
su potencial antioxidante. Los flavonoides y cidos fenlicos tienen antibacteriano,
antifngico, antiviral, hepatoprotectora, inmunomoduladora, y las propiedades antiinflamatorias [ 15 ].
1

Fig. 1
Espectros FT-IR de extracto de hoja de etanol de C. halicacabum

Gas Cromatograma de ECH se presenta en la Fig. 2 . Tabla 1 muestra los componentes

qumicos identificados en la ECH por anlisis GC-MS y enumeradas en el orden de tiempo
de retencin. Veinticinco compuestos fueron identificados en el extracto etanlico
de C. halicacabum hojas. Ciclohexano-1, 4, 5-triol-3-ona-1-carboxlico (0,67%), 1hydroxytetradecane (29,6%) seguido de cariofileno (8,4%), neophytadiene (11,11%), 1, 2carboxlico benzenedi cido (3,39%), benzaldehdo, fitol, cido hexadeconoic (13,67%), y
cido octadeconoic (4,90%) fueron identificados como los principales componentes
qumicos.

Fig. 2
Cromatograma del extracto de hoja de etanol de C. halicacabum

Tabla 1
Los componentes qumicos de extracto de hoja de etanol de C.halicacabum

El extracto etanlico se tradujo en diferentes zona de inhibicin (11-18 mm) para todos los
patgenos microbianos ensayadas excepto C. fruendii y K. pneumoniae (Tabla 2 ). De
todos los organismos probados,S. aureus y A. hydrophila resultaron ser los ms sensibles
entre las bacterias utilizadas en el presente estudio (Fig. 3 a, b). Curiosamente ECH
exhibi zona de inhibicin de aproximadamente 16,3 mm contra E. coli(MTCC 739) pero
result ser bacteriosttico despus de 48 h (Fig. 3 c). El MIC de ECH para las bacterias
oscila entre 80 y 125 mg / ml. ECH mostr actividad mxima contra S. aureus con la zona
de inhibicin alrededor de 18 mm seguido de A. hydrophila aproximadamente 17 mm
y E. coli aproximadamente 16,3 mm. El ECH mostr actividad mnima
contra Pseudomonas spp., Enterococcus faecalis (Tabla 2 ). Por otra parte, ECH mostr
zona de inhibicin de aproximadamente 11 mm de dimetro en contra de la resistencia a
mltiples frmacos Shigella sp. Adems de la actividad antibacteriana, ECH tambin
exhibi actividad anticandidal en contra de la prueba C. albicans (MTCC 227), mostrando
una zona de inhibicin de 15 mm (Fig. 4 ). El anlisis fitoqumico revel la deteccin de
diversos grupos funcionales de alcoholes, fenoles, alcanos, alquinos y compuestos
flavonoides en ECH y que podra ser responsable de su actividad antibacteriana. Los
fitoqumicos han sido ya informado por su actividad antibacteriana y que podra atribuirse a
su capacidad para formar complejos con, protenas solubles extracelulares y la pared celular
bacteriana [ 16]. Los informes previos demostraron la actividad antibacteriana de los
compuestos fenlicos y flavonoides [17 , 18 ]. Por otra parte, tambin se sugiri que los
compuestos en cantidades ms bajas podran estar involucrados en algn tipo de sinergia
con el compuesto activo. Los fitoqumicos presentan actividad antimicrobiana a travs de la
formacin de un complejo con la pared celular bacteriana. El presente estudio evalu la
actividad antimicrobiana de la planta medicinal C. halicacabum . Los resultados se
consideran importantes ya que todos los organismos ensayados son patgenos importantes
de seres humanos y animales y se les resistencia a otros medicamentos se presentan en
muchas literaturas [ 19 - 21 ] Los antibiticos de origen vegetal tienen un enorme potencial
teraputico y han demostrado ser eficaces en el tratamiento de enfermedades infecciosas
reduce simultneamente los efectos secundarios que se asocian a menudo con los

antibiticos sintticos [ 22 ]. Productos de plantas permanecen como un depsito de

compuestos qumicos tiles no solamente como medicamentos, pero tambin sirven como
plantillas nicas para la fabricacin de anlogos sintticos. El extracto de hoja
de C. halicacabum poseen actividad antibacteriana apreciable, por lo que esta planta podra
ser utilizado para el tratamiento de enfermedades infecciosas causadas por
microorganismos que muestran resistencia a los antibiticos disponibles en la actualidad.

Tabla 2
La actividad antimicrobiana de extracto de hoja de etanol de C.halicacabum

Fig. 3
Efecto de inhibicin de extracto etanlico de C. halicacabum (ECH) y
cloranfenicol control positivo ( C ) contra los microorganismos de ensayo de
difusin tambin. una A. hydrophila , b S. aureus y efecto bacteriosttico en
( c ) E. coli (MTCC 739)

Fig. 4
Zona de inhibicin antifngica de extracto etanlico de C. halicacabum( ECH ) y
nistatina control positivo ( N ) en contra de C. albicans

El presente estudio muestra la actividad antimicrobiana de C. halicacabum . El anlisis GCMS del extracto etanlico de C. halicacabum revela la presencia de fitoqumicos

antimicrobianos. La actividad antimicrobiana observada confirma la efectividad del uso

tradicional de este medicamento a base de hierbas contra los microbios. Esperamos que los
resultados presentados contribuirn al conocimiento de la composicin qumica
de C. halicacabum en general, y como una fuente de productos naturales con uso potencial
en la industria farmacutica.
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Agradecimientos
Damos las gracias a la Comisin de Becas Universitarias, Nueva Delhi, India por el apoyo
financiero. A. Ilavarasi reconoce el Departamento de Ciencia y Tecnologa (DST) para
INSPIRE-JRF compaerismo.Tambin agradecemos a la seora K. Kanagalakshmi y la
seora B. Vikneswari por su ayuda en la interpretacin de resultado FT-IR.
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