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EL NOMBRE
DE LA
COMPAA]
CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO
IONICO
Integrantes: | lvarez - Costanzo - Diaz Zegarra -Gerez- HollmanHurtado- Lucero- Macuso- Ruggieri- Strack
INTRODUCCIN.
La cromatografa de intercambio inico es un mtodo que permite la separacin de molculas
basada en sus propiedades de carga elctrica. Se compone de dos fases: la fase estacionaria o
intercambiador inico, y la fase mvil. La fase estacionaria insoluble lleva en la superficie cargas
electrostticas fijas, que retienen contraiones mviles que pueden intercambiarse por iones de la
fase mvil, la cual suele ser una disolucin acuosa con cantidades moderadas de metanol u otro
disolvente orgnico miscible con agua que contiene especies inicas generalmente en forma de
buffer. Los iones de sta compiten con los analitos por los sitios activos de la fase estacionaria.
FUNDAMENTO
El principio bsico de la cromatografa de intercambio inico es que las molculas cargadas se
adhieren a los intercambiadores de forma reversible de modo que dichas molculas pueden ser
asociadas o disociadas cambiando el ambiente inico. La separacin mediante intercambiadores
inicos se realiza por lo general, en dos fases: en la primera las sustancias a separar se unen al
intercambiador utilizando condiciones que originan una unin fuerte y estable; a continuacin, se
eluye de la columna con buffers de diferentes pH o diferente fuerza inica, compitiendo los
componentes del buffer con el material por los sitios de unin.
+
Un intercambiador inico es, por lo general, un polmero que tiene grupos cargados unidos. La
mayora de las protenas son estables dentro de un margen de pH determinado (es decir, hay un
margen en el que no se desnaturalizan), en el que estn cargadas positiva o negativamente. Por lo
tanto si una protena es estable a valores de pH por encima del punto isoelctrico, se debe utilizar
un intercambiador anicnico. Si es estable a valores de pH situados por debajo del punto
isoelctrico, debe utilizarse un intercambiador catonice.
INTERCAMBIADORES ANINICOS: Son portadores de grupos con cargas positivas que unen
aniones de forma reversible. Si el grupo cargado es positivo, es un intercambiador de aniones. Los
intercambiadores dbilmente bsicos ms corrientes son los grupos aminos alifticos o aromticos.
INTERCAMBIADOR CATINICO: Los intercambiadores catnicos son portadores de grupos con
carga negativa que unen cationes de modo reversible. Un grupo tpico que se utiliza en los
intercambiadores de cationes es el grupo sulfnico, SO-3. Si se une un H+ al grupo, se dice que el
intercambiador se encuentra en forma cida y puede, por ejemplo, intercambiar un H+ por un Na+
o dos H+ por un Ca+2. El grupo cido sulfnico es un intercambiador de cationes fuertemente
cido. Otros grupos de utilizacin corriente son el carbonilo e hidroxilo fenlico, dos
intercambiadores catinicos dbilmente cidos.
PROCEDIMIENTO
Esta tcnica est basada en 4 etapas:
1- Equilibrio:
El primer paso es el equilibrio de la fase estacionaria con las condiciones iniciales deseadas.
Cuando el equilibrio se ha logrado, toda la fase estacionaria se encuentra asociada a iones
complementarios (que pueden ser cloro o sodio). Por ejemplo, un intercambiador catinico
+
sulfonado asociado a Na producto de la disociacin de NaOH.
2- Aplicacin y Lavado:
El paso siguiente es sembrar la muestra a la cual queremos filtrar a travs de la columna mediante
un lavado especfico. Para ello es necesario aplicar un buffer con el mismo pH y fuerza inica que
el buffer inicial para que todas las protenas cargadas se unan al intercambiador. Por ejemplo: A la
forma sdica de la resina lavada se le aade una solucin cida (pH=3) de la mezcla de
aminocidos; a dicho pH los aminocidos se encuentran en forma de cationes con carga neta
positiva. Los aminocidos catinicos tienden a desplazar algunos de los iones ligados a las
El cloruro de sodio (NaCl) se emplea normalmente para regenerar las resinas fuertemente cidas
usadas en ablandamiento, y las resinas fuertemente bsicas en la eliminacin de nitratos.
En ablandamiento, el cloruro de potasio (KCl) puede tambin emplearse cuando la presencia de
sodio en la solucin tratada es indeseable.
En ciertos procesos de tratamiento de condensados muy calientes, el cloruro de amonio (NH4Cl)
se puede utilizar tambin.
En la eliminacin de nitratos, la resina fuertemente bsica se puede regenerar con otros
compuestos que producen iones de cloruro, tales como el cido clorhdrico (HCl).
o
o
o
o
pH: Las resinas cidas fuertes siguen ionizadas incluso en disoluciones muy cidas, en
cambio las resinas cidas dbiles se protonan a un pH prximo a 4 y pierden su capacidad
de intercambio catinico, reducindose as, el tiempo de retencin. Los grupos muy
bsicos de amonio cuaternario siguen siendo catinicos a cualquier valor de pH. Los
bsicos dbiles de amonio terciario se desprotonan en disoluciones moderadamente
bsicas y pierden entonces su capacidad, reducindose tambin el tiempo de retencin.
Gradiente: Aumentando la concentracin de la fase mvil, los iones compiten cada vez
ms favorablemente con la muestra por los sitios activos cargados de la fase estacionaria.
Esquema del gradiente del Buffer con contraiones cargados negativamente. Se presenta un grfico
con el poder de elusin (fuerza inica) y el porcentaje de protena eluda, que muestra una
gradiente directamente proporcional.
Porosidad: El tamao del poro de la resina al que se une el compuesto mvil por
intercambio inico influye directamente en la capacidad de unin. En membranas cuyo
tamao de poro es pequeo (menor de 600) no hay espacio suficiente para unir el in
dentro de dichos poros por lo que la cantidad de intercambiador por unidad de superficie es
menor. Sin embargo, en membranas con tamao de poro mayor (mayor de 600) se
puede unir el compuesto mvil dentro de dichos poros, con lo que se incrementa la
cantidad de intercambiador por unidad de superficie. La porosidad busca una mayor
superficie de intercambio.
Donde existe mayor porosidad (derecha), se puede unir el compuesto mvil dentro de estos poros
incrementando la cantidad de intercambiador de superficie.
BIBLIOGRAFA
(1) http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia(2) Harris, Daniel C.Anlisis
Qumico Cuantitativo,
(2) http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r49958.PDF
(3) Lehninger, Principios de bioqumica, quinta edicin.
(4) Voet Bioquimica, tercera edicin y cuarta edicin.