LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR

DEPARTAMENTO DE BIOLOGA

Semana 1
Manejo del Microscopio de luz

Para esta prctica debe realizar un trabajo previo, el PRELABORATORIO.

Objetivos
1. Identificar los componentes del microscopio ptico.
2. Aprender la forma correcta de utilizar el microscopio ptico.
3. Observar las caractersticas de la imagen microscpica.
Introduccin
Desde comienzos del S XVII Jean Faber acu el trmino MICROSCOPIO para describir las
lentes que dise Zacaras Janseen en 1590, con el cual se observaban estructuras de
insectos imperceptibles al ojo humano. El desarrollo de la microscopa permiti el inicio del
estudio de estructuras, clulas y molculas no visibles a simple vista. En la figura 1
evidenciamos en escala, el tamao de varias de estas estructuras.

Figura 1. Escala logartmica del tamao relativo de molculas, clulas y organismos

pluricelulares (Sadava et al., 2014).
Antony van Leewenhoek (1632-1723) de profesin sastre, invent el microscopio ptico para
ver de mayor tamao las tramas de los hilos de las telas que utilizaba; con este instrumento,
Leewenhoek describi observaciones de bacterias, protozoos, hidras y espermatozoides de
varias especies de animales. Robert Hooke (1635-1703) utiliz un microscopio para observar
un trozo de corcho y a partir de sus observaciones denomin Clula a la estructura que
compone ese tejido vegetal.
Hoy, el microscopio ptico sigue siendo un instrumento muy til en investigacin en ciencias
biolgicas para la observacin de clulas de tamaos en el rango de 100nm a 100um, a
pesar de la aparicin de otros tipos de microscopios ms sofisticados y de mayor poder de
aumento.
1

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El equipo ms comn en los laboratorios de docencia e investigacin es el microscopio

ptico de campo lumnico o claro, pero podemos encontrar microscopios pticos de campo
oscuro, de fluorescencia, de contraste de fase, de contraste de interferencia y confocales. En
la figura 2 observamos imgenes de clulas en diferentes microscopios pticos.

Figura 2. Clulas observadas en microscopio ptico de campo claro, de contraste de fases,

de contrate de interferencia, de fluorescencia y confocal (Sadava et al., 2014).
Otros microscopios no basados en la transmisin de luz, son el microscopio electrnico (de
transmisin y de barrido) y los microscopios de barrido por sondeo (SPM: Scanning probing
microscopy) que incluyen al microscopio de efecto tnel y al microscopio de fuerza atmica.
El microscopio ptico consta bsicamente de tres sistemas: el de iluminacin, el mecnico y
el ptico, sistemas que debemos conocer para el adecuado manejo de estos equipos.

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PRE-LABORATORIO (Debe estar resuelto por el estudiante antes de ingresar al

laboratorio)
1. Recuerde el tamao de clulas y estructuras: ingrese a los siguientes
vnculos.
http://learn.genetics.utah.edu/content/cells/scale/ . Utilice el botn gris para acercar la
imagen y evidenciar estructuras de diferente tamao.
http://www.life10e.com/act05.01.html . Resuelva los interrogantes.
2. Realice la siguiente lectura de imgenes reales e imgenes virtuales antes
del laboratorio
http://fisica.medellin.unal.edu.co/recursos/lecciones/imagen/index_01.htm.
3. Partes Del Microscopio ptico:
Sistema mecnico: base, pie o brazo, tubo del microscopio, platina, revolver y tornillos
macromtrico y micromtrico
Sistema ptico: oculares y objetivos.
Sistema de iluminacin: lmpara o foco, condensador y diafragma
Ubique en el siguiente esquema cada una de las partes del microscopio.

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Equipos y Materiales para el laboratorio

Microscopio
Portaobjetos y cubreobjetos
Papel para lentes (papel de arroz)
Aceite de inmersin
Recortes de peridico con letras pequeas, no imgenes.
Recortes de papel milimetrado en cuadrados

Procedimiento
Esta prctica est organizada DOS actividades diferentes:
1. Complete la siguiente tabla de acuerdo con el microscopio que le prestaron en
clase: El aumento que presentan los lentes (ocular y objetivos) se expresa como X y
al observar una imagen en el microscopio, el aumento total es el producto
(multiplicacin) del nmero X del ocular y el del objetivo seleccionado. Las diferencias
entre microscopios estn dadas por el aumento de los lentes.
Aumento total de la imagen
Aumentos del ocular
Aumentos del objetivo 1 (menor aumento)
Aumentos del objetivo 2
Aumentos del objetivo 3
Aumentos del objetivo 4 (mayor aumento)
2. Procedimiento de observacin detallado:
Tenga en cuenta que: 1) el condensador consta de un sistema de lentes de gran abertura sujetos a una montura,
colocados entre la platina y la lmpara, puede subirse y bajarse a voluntad y tiene la finalidad de concentrar los
rayos de luz para dirigirlos hacia la preparacin. El correcto uso de este dispositivo es clave para asegurar la
adecuada observacin de los especmenes. 2) El diafragma se encuentra unido al condensador y regula la
cantidad de rayos luminosos que inciden sobre la preparacin.

a. Sintese frente al microscopio y ajuste la silla de manera que sus ojos queden a la altura
de los oculares con el fin de mantener una posicin erguida durante la observacin.
b. Revise que los objetivos y oculares se encuentren limpios y en buen estado, lmpielos con
papel de arroz o papel para lentes.
c. Verifique que en la posicin de observacin se encuentre el objetivo de menor aumento
(4x). Al tiempo compruebe que la platina y el condensador se encuentren abajo y que el
diafragma este cerrado.
d. Verifique el encendido de lmpara, para lo cual el mando de ajuste de la intensidad de luz
debe estar con la menor intensidad y solo se procede a aumentar dicha intensidad segn la
necesidad de iluminacin.

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e. Prepare la muestra que va observar. Coloque una gota de agua sobre la lmina
portaobjetos, encima ponga un trozo de peridico y disponga una laminilla en ngulo de 45
respecto al portaobjetos; deje caer la laminilla cubreobjetos lentamente y evite que se formen
burbujas. Si queda agua debajo del portaobjetos squela con una toalla de papel.

f. Ubique la muestra en la platina siguiendo las instrucciones:

- Gire el tornillo macromtrico para alejar la platina del objetivo.
- Ubique la lmina con la preparacin en la platina (asegrese que la lmina se encuentre
seca) y ajstela con los clips de la platina.
- No mueva el portaobjetos directamente con la mano, ya que esto daara los
mecanismos giratorios de los mandos, utilice los tornillos del carro.
g. Ajuste la distancia interpupilar. Para observar la muestra es necesario regular los oculares
con respecto a la distancia que se tiene entre los ojos, con el fin de observar slo una
imagen. Se deben ajustar los oculares para que el campo izquierdo y derecho coincidan
completamente.
h. Ajuste diptrico (compensa diferencia entre la visin de los ojos):
- Observe por el ocular derecho (con su ojo derecho) y ajuste la calidad de visin con el
tornillo macromtrico y micromtrico.
- Observe por el ocular izquierdo (con su ojo izquierdo), luego gire nicamente el anillo de
ajuste ptico en el ocular.
i. Ajuste del enfoque:
- Observe a travs del objetivo de 4x, acerque y mueva (con el tornillo macromtrico) la
platina hasta conseguir un enfoque grueso.
- Una vez obtenga un enfoque grueso ajuste el enfoque de la imagen con el tornillo
micromtrico.
- Gire el revlver hasta ubicar el objetivo de 10X.
j. Ajuste de la posicin del condensador y del diafragma de apertura.
Aumento del
Objetivo
4x
10x
40x
100x

Posicin
Condensador
Abajo
Abajo Centro
Centro
Arriba

del

Apertura del diafragma

Completamente cerrado
Semiabierto
Semiabierto
Completamente abierta

Medio entre la muestra

y el lente del objetivo
Aire
Aire
Aire
Aceite de inmersin

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Nota: es importante tener cuidado de no incrustar los objetivos en las lminas, por lo que se recomienda ir
subiendo la platina lentamente mirando directamente y no a travs del ocular. Cuando ya se encuentre cerca la
preparacin, proceda a observar a travs del ocular enfocando la muestra con ayuda de los tornillos macro y
micromtrico.

k. Coloque en un portaobjetos un trozo de papel peridico seco y cbralo con una laminilla.
Colquelo sobre la platina de manera que quede sostenido por el carro. Luego enfoque con
el objetivo de menor aumento y escoja un trozo de papel donde pueda identificar una o
varias letras. En el crculo que se encuentra a continuacin (que representa el campo visual
del microscopio) dibuje la imagen que observa teniendo en cuenta el tamao que observa y
el tamao del crculo dibujado de forma que se refleje una gran similitud entre las imgenes.

Objetivo ____X Aumento Total ____X

La imagen se ve derecha o se ve invertida? Es virtual o es real?

Cuando termine de realizar las observaciones, BAJE la platina, gire el revlver y coloque en
posicin de observacin nuevamente el objetivo de menor aumento. En este momento puede
retirar su preparacin.
l. Utilizacin del aceite de inmersin. ste se usa exclusivamente cuando se va a observar
con el objetivo de 100x.
Los rayos luminosos se refractan o se desvan cuando pasan de la lmina portaobjeto al aire
que est entre el portaobjetos y el lente del objetivo debido a que el ndice de refraccin del
aire es menor que el del vidrio. La entrada de la luz en el objetivo de 100x es pequea y la
mayora de los rayos luminosos se refractan y se pierden, para corregir esto debemos
colocar entre la lmina y el objetivo de 100 X una sustancia que tenga un ndice de
refraccin aproximadamente igual al del vidrio (aceite de inmersin), consiguiendo de esta
forma una mayor resolucin y una imagen ms clara.
El procedimiento es el siguiente:
- Enfoque la muestra con el objetivo de 4X.
- Coloque una gota de aceite de inmersin sobre el cubreobjetos.
- Mueva el revlver directamente hacia el objetivo de 100x.
- Enfoque con el tornillo micromtrico.

Notas: 1) una vez se haya colocado el aceite de inmersin sobre la preparacin ya no se puede volver a usar el
objetivo 40x sobre esa zona. 2) Nunca se debe retirar la muestra con el objetivo de inmersin en posicin de
observacin. Se debe bajar la platina y en ese momento retirar la lmina. 3) Al finalizar el trabajo se debe
limpiar el objetivo de inmersin (100X) con papel de arroz.

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Al finalizar esta prctica y TODAS LAS DEMS, el Microscopio se debe quedar con las siguientes posiciones: (1)
dejar puesto el objetivo de menor aumento (4X) en posicin de observacin, (2) bajar la intensidad de la luz al
mnimo, la platina debe estar arriba, (3) el interruptor principal apagado y (4) el cable del microscopio debe
desconectarse de la toma y dejarlo enrollado en el equipo.

Preguntas
1. Cul es la funcin de cada una de las partes del microscopio ptico que marc
en la figura del prelaboratorio?
2. En qu consiste el ndice de refraccin? Cul es su aplicacin? Cite ejemplo
del ndice de refraccin de algunos medios y sustancias transparentes.
Bibliografa
Sadava, D., Hillis, D.M., Craig, H.C., M.R. Berenbaum. 2014. LIFE: The Science of Biology.
Tenth Edition. Sinauer Associates, Inc. 1394 p.
http://learn.genetics.utah.edu/content/cells/scale/
http://www.life10e.com/act05.01.html