LABORATORIO CLINICO DE

REFERENCIA

PROLAB
GRUPO DE INVESTIGACIONES Y
EPIDEMIOLOGIA
MEDELLIN, ANTIOQUIA
MEDELLIN
2010

Fabio Restrepo Restrepo, MD

Medico microbilogo laboratorista
G
Gerente
t en Salud
S l d Pblica
Pbli
Natalia Loaiza Daz
Mdico Magister en Microbiologa
Marcela Arrubla Villa
Bacteriloga Epidemiloga
Sandra Patricia Cossio Cossio
Bacteriloga rea Inmunologa
Jaime Ordez Molina,
Molina MD,
MD PhD
Asesor, Epidemilogo

AGRADECIMIENTOS
Al laboratorio Clnico PROLAB, sus directivas y a todo
gran equipo
q p p
profesional, p
por su apoyo
p y y decisin en
su g
el desarrollo de la investigacin, a la casa comercial
Quick por facilitar logstica a la investigacin, asi como
a la
l U
Universidad
i
id d CES por su asesora
en ell di
diseo

epidemiolgico y desarrollo de la investigacin.

ESTRUCTURA DE LA HEMOGLOBINA

PESO MOLECULAR 64456 kDALTONS

COMPONENTE PROTEICO: GLOBINA
ES UN TETRMERO
4 SUBUNIDADES POLIPEPTDICAS:
C/U CON UN BOLSILLO EXTERIOR
ENTRE LAS 4 :UNA CAVIDAD CENTRAL
2 (141 AA)Y 2 NO (146AA)

LAS CADENAS DE GLOBINAS

Son las subunidades proteicas, en la molcula de
hemoglobina hay 4 globinas,
globinas con un grupo hemo en
cada una de ellas ( total cuatro hemo)
hemo).
Tipos de cadenas globnicas
globnicas:: alfa , beta , gamma ,
delta , psilon , y zeta .
Varan segn la especie,
especie y son expresadas en diferentes
etapas del desarrollo
desarrollo..

SINTESIS Y PRESENTACIN DE LA HEMOGLOBINA A

LO LARGO DEL DESARROLLO
DESARROLLO.
Embrin,
Saco vitelino

Saco vitelino

Gower I: (2- 2).

Gower II: (
2 - 2).
)
Portland I: ( 2- 2).
Portland II: (2 . 2).
Portland III: (( 2- 2)).

8 semana

Hgado

Hemoglobina Fetal F : (
2- 2).
> 10% de Hb A: (
( 2- 2)

18 semana-nacimiento.

Medula sea.

6 meses de vida la Hb F ha bajado

a un 2 - 3%.
3%

* En el adulto: Hb A (>90%) y Hb minoritaria A2 ( 2.0 3.0%) (

2- 2).

HEMOGLOBINA NORMAL DEL ADULTO

TIPO DE Hb

ESTRUCTURA

A (96%)

2 2

A2(2.5--3%)
A2(2.5

22

F(<1%)

2 2

FUNCIONES DE LA HEMOGLOBINA
Transporte de oxigeno O2 desde los pulmones hasta los
tejidos y de anhdrido carbnico C02 en sentido inverso.
Cada molcula de HEMOGLOBINA, puede unirse a un
mximo de cuatro molculas de O2 una por cada HEMO
HEMO.
HEMOGLOBINA + O2

REVERSIBLE
REVERSIBLE.

La ( ) de O2 la Po2 = Hb+ O2 (saturacin).

Po2 = Hb libera O2.

El ERITROCITO
Es un disco bicncavo el cual posee una depresin central, esta
desprovisto de organelas
organelas,, su misin fundamental es transportar y proteger
lla HEMOGLOBINA para que pueda
d realizar
li
su ffuncin
i respiratoria.
i t i
Sobrevida
Sobrevida:: 120 das
das..
Recorre 600 Km
Km.. de territorio
vascular,
l
pasa por vasos de
d
dimetro 10 veces inferior al
suyo..
suyo
Alta capacidad de
deformabilidad..
deformabilidad
El eritrocito senil es eliminado
por el SMF del bazo
bazo..

El producto final de la muerte y

catabolismo del eritrocito es la
bilirrubina.

ESTRUCTURALES:
DEFECTOS HEREDITARIOS EN LA ESTRUCTURA DE
LA GLOBINA
(CUALITATIVAS)
NO ESTRUCTURALES
DEFECTOS HEREDITARIOS EN LA TASA DE
SNTESIS DE ALGUNA DE LAS CADENAS DE
GLOBINA
(CUANTITATIVAS)

ESTRUCTURALES:
-- MUTACIN PUNTUAL: SUSTITUCIN DE UN
AMINO ACIDO POR OTRO
OTRO, HbS,
HbS HbC
-- MUTACIONES : SUSTITUCIN DE 2 AA
-- DELECIN DE UNO O MS AA
-- ALARGAMIENTO DE UNA DE LAS CADENAS
-- FUSIN DE CADENAS
-- MS DE 700 VARIANTES DE DIFERENTE
EXPRESIVIDAD CLNICA(LA

MAYORA
SON
BENIGNAS)

ESTRUCTURALES:

FORMACIN DE POLMEROS (TACTOIDES)

(
)
DISTORSIN DE LA FORMA (FALCIFORMACIN)
DISMINUCIN DE LA SOLUBILIDAD, PRECIPITACIN
(IRREVERSIBLE)
ESTANCAMIENTO
DISMINUCIN LOCAL DE PO2
MODIFICACIN DE LA CARGA :MENOS NEGATIVA

TALASEMIAS: Grupo de trastornos genticos en la sntesis de

hemoglobina,
g
en los que
q se forman cadenas g
globnicas de estructura
normal pero se sintetizan a menor velocidad.

Talasemias
Talasemias:: Disminucin en la sint
sint.. de la cadena .
Talasemias
Talasemias:: Disminucin en la sntesis de la cadena .

PROBABILIDADES

NORMAL
AA

PORTADOR
AS/AC/A+

ENFERMO
SS/SC/S+

PROBABILIDADES

AA X AA

AA = 100%

PROBABILIDADES
AA X AS

AA = 50%

AS = 50%

PROBABILIDADES
AA X AC

AA = 50%

AC = 50%

PROBABILIDADES
DOS PORTADORES
SILENCIOSOS
AS X AS

AA = 25%
AS = 50%
SS = 25%

PROBABILIDADES
DOS PORTADORES
SILENCIOSOS
AS X A+

AA = 25%
AS = 25%
A+ = 25%
S+ = 25%

PROBABILIDADES
DOS PORTADORES
SILENCIOSOS
AS X AC

AA = 25%
AS = 25%
AC = 25%
SC = 25%

PROBABILIDADES
AA X SS

AS = 100%

MANIFESTACIONES
CLNICAS:
ANEMIA
DOLOR ARTICULAR
NECROSIS SEA

Anemia hemolitica cronica

Vaso oclusin de la
microvasculatura(necrosis)
microvasculatura
(necrosis)
Infecciones

INFARTO DE RGANOS
ASINTOMTICA

Secuestro esplnico agudo

lcera vascular

Necrosis de cadera

Complicaciones De HbSS

 Causas de Dolor Agudo

Agudo.
Crisis vaso oclusiva.
Sndrome torc
torcico agudo.
Sndrome mano
mano--pie.
Secuestro esplnico.
Priapismo.
Priapismo
Sndrome del cuadrante superior derecho.

Epidemiologa de las Hemoglobinopatas

Se estima que alrededor de 250 millones de personas en el mundo (4.5%) son
portadoras de un gen de la hemoglobina potencialmente patolgico
Cada ao nacen unos 300.000 nios afectados
y alrededor del 70% de
La enfermedad de clulas falciformes constituye
las alteraciones de la hemoglobina en el mundo.
En Estados Unidos,
Unidos pas con una elevada proporcin de poblacin negra
negra, se
estima que la anemia de clulas falciformes afecta aproximadamente a
unas 72.000 personas y hasta uno de cada 1.000 nacidos vivos puede
presentarla.
En Europa el porcentaje de portadores de hemoglobinopatas se sito, segn un
documento publicado en 1995, entre el 9% para Grecia o el 5% para Italia y el
0.14% para Dinamarca o el 0.19% para Alemania, lo que indica la existencia
de gran variacin entre pases.

En Australia (Melbourne) un estudio realizado en el ao 1999 en mujeres

embarazadas puso de manifiesto que EL 6% de la poblacin estudiada era
embarazadas,
portadora de algn tipo de hemoglobinopata, siendo la ms frecuente la
betatalasemia con un 3%, seguida de la Hemoglobina S con un 1.8%.

La mayor prevalencia de hemoglobinopatias est centrada en las regiones del

rea Mediterrnea, Norte de frica. Oriente Medio, India, Sudeste de Asia
y Sur de China, en las que la frecuencia de portadores se sita entre el 1 y el
20% En pases
20%.

mediterrneos

como Grecia,
G
Chipre
C
o Cerdea
C
esta cifra
f
se sita entre el 13 y el 18%.

Organizacin Mundial de la Salud dos resoluciones sobre las

hemoglobinopatas.
Resolucin de la 59 Asamblea Mundial de la Salud (mayo de 2006) sobre la
anemia falciforme y la resolucin de la 118 reunin del Consejo Ejecutivo de la
OMS sobre
b lla ttalasemia.
l
i
-Se pide a los pases afectados y a la Secretara de la OMS que fortalezcan su
respuesta a estos trastornos. Concretamente, la OMS:
- Llevar a cabo una labor de concienciacin de la comunidad internacional
acerca de la carga mundial de estos trastornos;
- Fomentar el acceso equitativo a los servicios de salud;
- Prestar apoyo tcnico a los pases en materia de prevencin y tratamiento de
estos trastornos, y Fomentar y apoyar la investigacin para mejorar la calidad
de vida de los afectados29.

29 Organizacin Mundial de la Salud. Drepanocitosis y otras hemoglobinopatas. Nota descriptiva No 308, Agosto 2006

Frecuencia de hemoglobinopatas reportadas para diferentes regiones del pas.

Frecuencia de hemoglobinopatas reportadas para diferentes regiones del pas.

FRECUENCIA DE HEMOGLOBINOPATIAS REPORTADAS PARA

VARIAS REGIONES DEL PAIS

ESTUDIO

POBLACION

MUESTRA

FRECUENCIA

Restrepo y cols.

Mixta

2.817

7.6%

Espinel

Negra

1 043
1.043

3 8%
3.8%

Bernal y cols.

Mixta

544

14.3%

Silva y cols.
cols

Mixta

230

10 0%
10.0%

Porque investigar sobre hemoglobinopatias?

- Prevalencia

alta de la enfermedad a nivel mundial

- Programas de tamizaje universal en otros pases

-Recursos tcnicos y logsticos presentes en nuestro pas
-Ofrecer alternativas profilcticas y teraputicas oportunas
- Estudios
E t di similares
i il
en otras
t
regiones
i
d
dell mundo
d

DESARROLLO DE LA INVESTIGACION

- Revisin de literatura, recopilacin de bibliografia, orientada a estudios de

prevalencia en el mundo y latinoamrica
- Diseo del estudio y asesora epidemiolgica y estadstica
- Presentacin de Anteproyecto
- Desarrollo Cronolgico
- Apoyo logstico con casa comercial
- Apoyo con universidad CES, para diseo epidemiolgico y desarrollo de
la investigacin
- Inicio de procesamiento de muestras y recopilacin de datos.

-Estudio de tipo prospectivo ..prevalencia de hemoglobinopatas

- Poblacin de recin nacidos del rea metropolitana de la ciudad de Medelln,
- Febrero y Agosto de 2009.
- Software estadstico Epi-Info
-Muestra.. 520 muestras. prevalencia esperada del 7%
poder
d estadstico
t d ti mnimo
i
de
d 80% y
intervalo de confianza del 95%.

-Se aumento la muestra de estudio a 2637

Se aumento poder estadstico a
casi el 100%,
Disminuyendo los errores tipo 1 y 2 al
mnimo.

-Muestras que llegan al laboratorio clnico PROLAB

Papel de filtro de cordn umbilical de Recien Nacidos
Hospitales pblicos y privados
TSH Neonatal.
Procesamiento en la seccin de Pruebas Especiales del laboratorio,
1 test de tamizaje de TSH neonatal
2 Determinacin de hemoglobinas normales y anormales
VARIANT II
cromatografa liquida de alta resolucin (HPLC)
separa e identifica las diferentes fracciones de hemoglobinas: Fetal (F)
(F),
A1c, Adulto (A), S, C, E/A2 y D.
Punto de referencia : 1% del rea total de la hemoglobina
Ante la presencia de una hemoglobina anormal o variante,
Confirmacin por electroforesis en medio alcalino y o cido como mtodo
de referencia para detectar y diferenciar hemoglobinas
hemoglobinas.

Ci i d
Criterios
de rechazo
h
d
de muestras:
Muestras que no traspasaban el papel de filtro
Muestras con secado insuficiente
Muestras diludas con halo
Muestras con cogulos
Muestras sobresaturadas

VARIANT II HEMOGLOBIN TESTING SISTEM (Bio-Rad).

-Intercambio catinico, tiempo de retencin.

-espectrofotmetro a dos longitudes de onda, una inicial a 415 nm y una final de 690 nm
- Dos controles de calidad interno, con distintas variantes de hemoglobina. El control 1
(C1) constituido por hemoglobinas F, A, A2/, E, S y el control 2 (C2) por hemoglobina
F, A, D, C.

RESULTADOS
Total de muestras
recibidas

2637

Total de muestras
descartadas

10

0.4%

Tatal
T
t l de
d muestras
t
analizadas

2627

100%

Total muestras positivas

93

3.53%

HbS

54

58%

HbC

38

41%

HbD

1.%

HbSC

HbSD

HbA2

Hb por tipos:

RESULTADOS
Sensibilidad de la
prueba en los
resultados
lt d

100%

Especificidad de la
prueba en los
resultados

99.1%

Valor PP

75.5%

Valor PN

100.0%

Total de muestras
analizadas por
electroforesis

43

100 % de correlacin
con la cromatografia

HbS

29

HbC

13

HbD