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CENTRAL
DEL ECUADOR
Facultad de Ciencias
Qumicas
Biologa
Molecular
Carrera
de: Bioqumica
Clnica
TEMA:
Tcnica
molecular:
FISH
REALIZ
Jeann
ADO
eth
POR:
Vsco
FECH 2015
nez
A: Julio
26
Definicin:
La tcnica de hibridacin in situ (FISH: Fish in situ hibridation) es una
tcnica molecular que permite la deteccin de secuencias genticas
de cidos nucleicos especficas en las distintas bandas existentes de
los cromosomas, permitiendo observar de forma directa, mediante un
microscopio, la localizacin de dichas secuencias detectadas.
Fundamento:
La tcnica FISH es basada en la estructura de doble cadena del ADN,
aprovechando el hecho de que las bases nitrogenadas del ADN son
complementarias: adenina - timina y citosina - guanina.
La tcnica de FISH consiste en disear una sonda 1, que es
complementaria a una regin especfica de la cadena de ADN que se
desee analizar, esta sonda se marca con una sustancia fluorescente
(un fluorocromo) y se aade a la muestra que contiene el material
gentico objeto de estudio. (Halder, Jain, Chaudhary, Gupta, & Kabra,
2013)
Mediante calor el ADN se desnaturaliza, separndose las dos
cadenas, y la secuencia gnica en el ADN en estudio que es
complementaria a la de la sonda fluorescente se une (hibrida) con
esta y queda marcada con una seal fluorescente que puede
visualizarse en un microscopio de fluorescencia. (Strepparava, Wahli,
Segner, Polli, & Petrini, 2012)
La resolucin de las tcnicas de citogentica molecular se define
como el tamao mnimo que debe tener una alteracin para ser
detectada y se mide en nucletidos o pares de bases. Este proceso se
evidencia en a imagen 1.
El cromosoma que contenga la secuencia target u objetivo del
anlisis, se pintar a manera de bandas fluorescentes que se
evidencian en un microscopio de fluorescencia como se indic
previamente, en la Imagen 2 se muestran un ejemplo de
cromosomas marcados con la sonda de hibridacin aplicada.
Adems el protocolo a seguir cuando se presenta una muestra a
analizar mediante hibridacin in situ con fluorescencia se muestra en
la Imagen 3, donde se evidencia paso a paso el proceso a seguir
desde la preparacin de la muestra hasta su observacin en el
microscopio respectivo.
Imagen 2. Parte de un cariotipo enlazado a una tcnica FISH con fluorescencia roja.
(Q. Wang et al., 2015).
Aplicacin:
Ventajas y Desventajas:
Presenta numerosas ventajas, pero tambin desventajas que se
exponen en la tabla 1.
FISH
Ventajas
Generalmente no requiere
clulas en divisin, aunque
hay ciertos tipos que s lo
requieren.
Elevada rapidez.
Puede
analizar
grandes
cantidades de clulas.
Elevada
sensibilidad
y
especificidad.
Muestras
pueden
ser
almacenadas
en
parafina
congeladas sin problema.
Ciertos tipos de FISH como el
multicolor
y
el
inverso
permiten obtener informacin
Desventajas
La eleccin y diseo de las
sondas puede ser complicado
y difcil de conseguir.
Solo puede estudiar unas
pocas alteraciones a la vez.
CONCLUSIN
La tcnica molecular FISH se basa en un mtodo de hibridacin de
secuencias especficas de ADN, mediante el empleo de sondas marcadas
con fluorescencia, las cuales deben ser correctamente diseadas y
seleccionadas para aumentar la sensibilidad y especificidad de la prueba,
las principales ventajas consisten en la deteccin sencilla de secuencias que
se pueden observar en un microscopio de fluorescencia, lo cual no es
posible con una tcnica de cariotipo normal. Las aplicaciones son muy
diversas desde la clasificacin de cromosomas en un cariotipo hasta la
deteccin de mutaciones estructurales para analizar anomalas y posibles
enfermedades como cncer y trastornos metablicos.
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