Universidad Nacional Autnoma de Mxico.

Facultad de Estudios Superiores Iztacala.

Carrera de Cirujano Dentista.

Mdulo de Instrumentacin.

Microscopa y Aislamiento e identificacin de bacterias de cavidad bucal.

Chvez Vidal Mara Fernanda.

Pineda Chiquito Diana Laura.
Romero Vargas Jessica Andrea.
Valencia Moreno Luis Giovanni.
Alcntar Ibarra Alberto.
Villanueva Balderas Nayib.

Grupo-1112.

Equipo #2.

Gonzlez Villanueva Jos ngel.

Rodrguez Trinidad Iris de los ngeles.
09/Octubre/2015.

INTRODUCCIN DEL TEMA.

Antecedentes histricos.
En las primeras dcadas del siglo XVII se iniciaron experiencias con lentes (as
llamadas por tener forma de lentejas) a fin de lograr el mayor aumento posible.
Los instrumentos para aumentar la visin de los objetos, o microscopios (la
palabra griega significa para ver lo pequeo) comenzaron a usarse
progresivamente. Por primera vez la biologa se ampliaba y extenda gracias a un
mecanismo que llevaba el sentido de la vista humana ms all de sus lmites
naturales. As, los naturalistas podan describir en detalle los pequeos
organismos, cosa de otro modo imposible, y los anatomistas podan descubrir
estructuras hasta entonces invisible. Se les considera como los seres vivos ms
antiguos ya que se han encontrado fsiles de bacterias correspondientes al
periodo precmbrico; es importante saber que se les conoce como cosmopolitas
ya que existen en todos los hbitats. Las bacterias son las ms simples y
abundantes de los organismos y pueden vivir en tierra, agua, materia orgnica, o
en plantas y animales.
Estado actual.
Desde 1660 hasta la actualidad el microscopio ptico ha sido el pilar
fundamental en el conocimiento de lo invisible. Aunque su poder de resolucin
aument a travs del tiempo (con la mejora en la calidad de las lentes) al igual que
el poder de magnificacin, su factor limitante fue la longitud de onda de la luz. En
1930 el mundo submicroscpico se ampli con la aparicin del microscopio
electrnico cuya ventaja principal con respecto al microscopio ptico es un
aumento de 1000 veces en la magnificacin del material observado acompaado
de una mayor capacidad de resolucin generando una mejor definicin y una
ampliacin del mundo microscpico. ADN, virus y pequeas organelas fueron
observadas por primera vez con este microscopio. La microflora de la cavidad
bucal consiste en bacterias, levaduras, algunos hongos, micoplasma, protozoarios
y virus. Cuando hablamos de placa bacteriana dental, el grupo bacteriano ms
alto encontrado es el de los cocos gram positivos, los bacilos largos y cortos gram
positivos, bacterias filamentosas y levaduras; mientras que en menor proporcin
tenemos los cocos gram negativos y los bacilos gram negativos,
Justificacin.
Los primeros en usar el microscopio, incluso Malpighi, usaron sistemas de
lentes que producan aumentos mucho mayores que los obtenidos con una sola
lente. Sin embargo, empleaban lentes imperfectos, de superficies irregulares y con

fallas internas. Si se intentaba lograr un aumento apreciable, la visin de los

detalles se haca confusa.
Un comerciante holands, Anton van Leeuwenhoek usaba lentes simples, que
por su reducido tamao podan obtenerse de pequeos trozos de cristal perfecto.
Puliendo cuidadosamente dichos fragmentos, logr aumentar un objeto hasta 270
veces sin perjuicio de la nitidez. Tena 419 lentes alguna de las cuales eran de
cristal de roca y hasta de diamante, en algunos casos no eran mayores que el
tamao de un alfiler, por lo que sus microscopios tenan un tamao diminuto
comparados con otros de la misma poca.
Con esas lentes observaba todo lo que poda y logr describir los glbulos
rojos de la sangre y los capilares con mayor detalle que los verdaderos
descubridores: Swammerdam y Malpighi. Pero lo ms sensacional de todo ello fue
su descubrimiento de pequeos organismos invisibles a simple vista, al estudiar
aguas estancadas con su microscopio, con todos los atributos de la vida. Las
descripciones de van Leeuwenhoek eran, desde luego, imprecisas, pero no cabe
duda que fue el primero en ver lo que ms tarde se llamaran bacterias y
animalculos, como los denomin entonces, conocidos hoy como protozoarios
que en griego significa pequeos animales.
Trascendencia.
Los microscopios pticos de hoy son descendientes directos de los
instrumentos acromticos victorianos. El microscopio compuesto del siglo XVII,
con sus tubos deslizantes, plataforma nivelada y pilar termin por morir. Cuando
naci el microscopio compuesto acromtico se instal en el mismo montaje de los
microscopios Bancks; este nuevo diseo tena una columna principal con los
controles de enfoque, una plataforma para los especmenes, un brazo
transversal para componentes optico, un espejo bilateral y un lente condensador
para dirigir la luz a travs de la muestra. Algunos de los modelos ms elaborados
del siglo XIX, como el Dollond, tenan una plataforma mecnica. Existen dos
tipos bsicos de microscopios electrnicos los cuales fueron inventados al mismo
tiempo pero tienen diferentes usos. El microscopio electrnico de transmisin
(MET) proyecta electrones a travs de una fina capa de tejido o material a
observar produciendo una imagen en dos dimensiones sobre una pantalla
fosforescente. El brillo en un rea particular de la imagen es proporcional al
nmero de electrones que son transmitidos a travs del material. El microscopio
electrnico de barrido (MEB) produce una imagen que da la impresin de ser en
tres dimensiones. Este microscopio utiliza dos o tres puntos de la muestra donde
llegan los electrones que escanean la superficie del espcimen a observar y salen
del espcimen como electrones secundarios siendo detectados por un sensor. La
imagen se produce como el espcimen entero, a diferencia del MET donde la
imagen corresponde slo a los electrones transmitidos. Las tcnicas como la
tincin de gram se utilizan para separar las bacterias en gram positivos y gram

negativos. Estas diferencias se atribuyen a la composicin qumica distinta de las

paredes de ambos grupos bacterianos. La placa dentobacteriana es una identidad
estructural especfica, aunque altamente variable, que resulta de la colonizacin y
crecimiento de microorganismos sobre la superficie de los dientes, tejidos blandos,
restauraciones y aparatos bucales. Esta es una comunidad de microorganismos
vivos, formada habitualmente por numerosas especies y cepas incluidas dentro de
una matriz extracelular formada por productos del metabolismo bacteriano y
sustancia del suero, saliva y dieta.
OBJETIVOS DE LA PRCTICA.
1.- Describir el manejo, cuidado y funcionamiento del microscopio ptico
compuesto.
2.- Aplicar los conocimientos adquiridos para la aplicacin microscpica.
3.- Realizar un esquema de las observaciones, identificando las estructuras
contenidas en las mismas.
4.- Realizar tcnicas bacteriolgicas para el estudio de microorganismos de
cavidad bucal de la orofaringe.
5.- Aislar bacterias de cavidad bucal y orofaringe.
6.- Identificar las bacterias aisladas por su morfologa macroscpica y
microscpica.
7.- Realizar pruebas de antibiograma a srtaphylococcus sp. Aislados.
Material

2 Microscopios Fotnicos compuestos

Aceite de inmersin
Papel Seda
5 Hisopos estriles
1 Gradilla
1 Tubo estril
1 Caja Petri estril
2 Pipetas estriles de 1 ml
1 Mechero Bunsen
1 Lmpara de Exploracin
1 Paquete de Gasa
5 Portaobjetos
2 Asas
1 Puente de tincin
2 Abatelenguas estriles
3 Cajas Petri con agar sangre
1 Caja Petri con manitol salado

1 Tubo de Rugosa
1 Tubo con 9.9 ml de solucin salina estril
1 Pizeta con agua destilada
1 Tren de Gram
1 Tripie
1 Bao Mara
10 Portaobjetos
2 Asas bacteriolgicas
1 Tubo con medio de microinoculacin
Recursos Biolgicos:
Muestras de Saliva
Saliva de lengua
Lgrima
Exudado Faringeo

4. Mtodo
1.- Obtener las muestras biolgicas
1.1.- Exudado Faringeo: Con un hisopo y abatelenguas se pide al paciente que
abra la boca, baje la lengua y se raspa ligeramente las amgdalas mientras se gira.
1.2.- Lgrima: Con el asa esterilizada en fuego se toma una muestra tocando
ligeramente el lagrimal.
1.3.- Lengua: Con un hisopo se pide al paciente que abra la boca y saque la
lengua al mismo tiempo que se raspa con un hisopo girndolo.
1.4.- Saliva: El paciente saliva y la vacia dentro de un tubo de ensaye estril
2.- Etiquetar los medios de cultivo con tipo de muestra, nombre del paciente,
fecha, grupo, equipo.
3.- Descarga o sembrado en el medio de cultivo adecuado
3.1.- Exudado Faringeo: Con la caja Petri cerca de la flama del mechero y el
hisopo se hace una descarga en una zona especfica de la caja que contiene agar
sangre y manitol salado.

3.2.- Lgrima: Con la caja Petri cerca de la flama del mechero y el asa esterilizada
en la flama, se elige una zona de enfriamiento y posteriormente se hace una
descarga en una zona especfica de la caja con agar sangre.
3.3.- Lengua: Con la caja Petri cerca de la flama del mechero y el hisopo se hace
una descarga en una zona especfica de la caja con agar sangre.
3.4.- Saliva: Licuar el medio de Rogosa en bao mara, tomar 1ml de la muestra
de saliva y agregarlo a la solucin salina agitando, y vaciarlo dentro de una caja
Petri para que enfri.
4.- Aislamiento por estria cruzada: De donde se realiz la descarga se hace un
estriado en zig-zag perpendicular a la zona de enfriamiento ya sea con el asa o el
hisopo y se avanza al centro de la caja abarcando un tercio, este paso se realiza
2 veces ms girando la caja 90 sin tocar la zona de enfriamiento y con estras
ms amplias.
5.- Frotis Directo
5.1.- Con Hisopo: En un portaobjetos limpio y etiquetado se frota el centro con el
hisopo, dejarlo secar.
5.2.- Con Asa: En un portaobjetos limpio y etiquetado se frota el centro con el asa,
dejarlo secar.
6.- Incineracin del Hisopo y Esterilizacin del asa
7.- Se fija el Frotis con la flama del mechero hasta una temperatura donde no nos
quememos
8.- Realizar la Tcnica de Tincin de Gram
8.1.- Aplicar cristal violeta y dejar reposar 1 minuto.
8.2.- Lavar con agua.
8.3.- Aplicar lugol y dejar reposar 1 minuto.
8.4.- Lavar con agua.
8.5.- Decolorar con Alcohol Acetona
8.6.- Lavar con agua
8.7.- Aplicar safranina y dejar reposar un minuto.
8.8.- Lavar con agua
8.9.- Sacudir exceso de agua y dejar secar
9.- Observar al Microscopio
10.- Los medios de cultivo son sometidos a incubacin

11.- Realizar la caracterizacin macroscpica de las colonias aisladas en las cajas

de cultivo describiendo: tamao, color, forma, elevacin, luz reflejada, superficie,
bordes y hemlisis.
12.- Realizar un frotis de las colonias aisladas
12.1.- Sobre un portaobjetos limpio colocar con ayuda del asa estril una gota de
solucin salina isotnica
12.2.- Abrir la caja de colonia de inters cerca de la flama y enfriar en la misma
zona de enfriamiento previa.
12.3.- Tomar muestra de la colonia.
12.4.- Combinar la muestra con el agua y extender en el centro del portaobjetos.
12.5.- Dejar secar.
12.6.- Fijar por medio de frotis
13.- Realizar la Tincin de Gram
14.- Observar al microscopio la colonia, el Gram, la forma y agrupacin.

TABLA DE RESULTADOS.

COLONIAS

TAMAO

COLOR

FORMA

ELEVACIN

SUPERFICIE

BORDE

Convexa

LUZ
REFLEJADA
Opaca

4.5 mm

Circular

3mm

3
4

7.5mm
4.5mm

5
6

3.5mm
3mm

3mm

4mm

4mm

Blanco
amarillento
Amarillo
verdoso
Blanco
Blanco
grisceo
Gris
Blanco
amarillento
Blanco
amarillento
Blanco
grisceo
Blanco
grisceo

Rugosa

Ondulad

Circular

Elevada

Opaca

Rugosa

Entero

Circular
Circular

Convexa
Plana

Opaca
Mucoide

Lisa
Opaca

Entero
Entera

Circular
Circular

Plana
Plana

Opaca
Mucoide

Lisa
Opaca

Entero
Entera

Circular

Plana

Opaca

Lisa

Entera

Circular

Plana

Opaca

Lisa

Entera

Circular

Plana

Opaca

Lisa

Entera

Lugar de
donde fue
tomada la
muestra.
Carrillo

Forma de la
colonia.

Tincin de
Gram.

Forma.

Cicular

Gram
Negativo

Diplobacilo

Lagrima

Puntiforme

Gram Positivo

Estreptococo

Ex. Farngeo

Circular

Gram Positivo

Diplococo

Saliva

Convexo y
circular

Gram Positivo

Estafilococo

Figura.

Anlisis de Resultados.

Analizando los resultados encontramos que en la caja Petri 1 presento hemolisis

alfa con halos verdosos y su forma es diplobacilo en el medio de cultivo, las
peptonas, aportaron los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y
pudimos encontrar el Streptococcus mutans: Es una bacteria Gram
positiva, anaerobia facultativa que se encuentra normalmente en la cavidad bucal
humana, formando parte de la placa bacteriana o biofilm dental. Se asocia al inicio
y desarrollo de la caries dental.

En la caja 2 encontramos el Estreptococo viridans es un gran grupo

de bacterias estreptococo comensales, que producen una coloracin verdes en
las placas de agar sangre, o bien del tipo no hemoltico.

En la caja 3 no encontramos nada ya que no presento crecimiento de colonias

En la colonia 4,5 y 6 encontramos la Neisseria meningitidis: es una
bacteria hetertrofa Gram negativa, solo afecta a los seres humanos. El tamao
promedio de la Bacteria es de 1 de dimetro y son aerobios estrictos.

BIBLIOGRAFA.

Cervantes, Marta et col. Biologa general, Grupo editorial patria, cuarta

reimpresin 207.
De Robertis, E.D.P. & E.M.F. De Robertis. 1981. Biologa celular y molecular.
Buenos Aires, El Ateneo, 613 pp.
Di Fiore, M. 1975. Diagnstico histolgico. Buenos Aires, El Ateneo, 616 pp.
-Manual de microbiologa mdica, Jawetz Ernest, Editorial el manual moderno,
segunda edicin, pg. 91-640.
Dr. Nolte, William A., Microbiologa Odontolgica, Editorial Interamericana, cuarta
edicin, pg. 206-641.
Schluger, Saul. Enfermedad periodontal, Compaa Editorial Continental, primera
edicin, p.785
-Biologa bachillerato 2. Velasco Santos, Juan Manuel. Editorial Editex. .
FUENTE DE INFORMACIN.
http://www.losmicrobios.com.ar/microbios/estructura%20bacteriana.html
17/10/2011 12:43:10 a.m.