UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN

CENTRO DE ENGENHARIA E CINCIAS EXATAS

ENGENHARIA QUMICA

ESTERILIZAO DO AR EM BIOPROCESSOS

Toledo - Paran
2015

ADAIR GALLO JUNIOR

JSSICA CAROLINE ZANETTE
JULCIMARI CAROLINE SCHOSSLER DEAK

ESTERILIZAO DO AR EM BIOPROCESSOS

Trabalho sobre os tipos de

esterilizao de ar, apresentado
Universidade Estadual do Oeste do
Paran, como requisito para a
avaliao parcial da disciplina de
Engenharia Bioqumica.
Professor:
Lucena

Toledo Paran
2015

Dr.

Srgio

Luiz

de

FAZER SUMRIO

1. INTRODUO

Os bioprocessos so etapas de transformao que ocorrem por

meio de agentes biolgicos como clulas e enzimas. So conhecidos e
utilizados pelo homem h milhares de anos, porm nas ltimas
dcadas vm ganhando destaque como alternativas sustentveis e
solues inovadoras para a indstria.
Esse tipo de processo apresenta uma srie de caractersticas
prprias,

pois

frequentemente

trata-se

de

fazer

crescer

um

microrganismo ou uma dada clula, seja microbiana, animal ou

vegetal, exigindo a presena, desde o projeto da planta at sua
operao em regime, de uma mentalidade prpria e particular em
relao existente na indstria qumica no biolgica.
Nos bioprocessos faz-se uso principalmente da biotecnologia,
que a aplicao de conhecimentos qumicos e biolgicos e de novas
tecnologias nas reas da sade, de alimentos, qumica e ambiental. A
biotecnologia apontada como uma das reas de conhecimento que
mais podem trazer benefcios humanidade e tambm como uma
das reas profissionais com maior potencial de crescimento. As
aplicaes da biotecnologia na forma de produtos, processos e
servios esto presentes principalmente nas seguintes reas:

Sade:

produo

de

vacinas,

antibiticos,

probiticos,

anticorpos monoclonais, kits para diagnstico; desenvolvimento

e

pesquisa

de

novos

medicamentos

novas

molculas

bioativas.

Alimentos e bebidas: alimentos e bebidas fermentados como

queijo,

po,

vinagre,

vinho,

cerveja,

aguardente,

leite

fermentado, iogurte; alimentos funcionais; aromas e corantes

naturais; enzimas para diversas aplicaes.

Agricultura:

plantas

transgnicas,

bioinseticidas

bionematicidas, biofertilizantes, hormnios.

Energia: biocombustveis como etanol, biodiesel, biogs e biohidrognio; culturas energticas melhoradas geneticamente.

Meio-ambiente: tratamento de efluentes e biorremediao.

Na maioria dos bioprocessos o acmulo do produto desejado

depende da ao isolada do microrganismo responsvel pela sua

sntese, logo, para obter resultados bons necessriaa utilizao de
equipamentos e meios esterilizados, que possam permitir a conduo
de processos em larga escala em condies de assepsia, em especial,
a possibilidade de utilizao de grandes volumes de ar esterilizado,
componente indispensvel aos processos biolgicos aerbios.
O objetivo deste trabalho descrever as particularidades sobre
os

aerossis

microbianos,

indicar

formas

para

se

estimar

concentrao de microrganismos suspensos no ar e apresentar as

principais formas disponveis para executar a esterilizao do ar para
bioprocessos.

2. AEROSSIS MICROBIANOS
Aerossis microbianos so aqueles em que as partculas em
suspenso no ar so microrganismos vivos. Provm, geralmente, dum
aerossol lquido que apresentam um ncleo infeccioso, constitudo
pelo microrganismo.
As espcies microbianas suspensas no ar atmosfrico, assim
como

sua

concentrao,

dependendo

de

uma

podem

srie

de

ser

extremamente

fatores.

Podem-se

variveis,
encontrar

microrganismos de maiores dimenses, como bolores (fragmentos de

hifas) e leveduras, assim como espcies de menores dimenses como
bactrias ou seus esporos. Esses microrganismos so provenientes do
solo, ou de plantas, ou ainda de cursos de gua, sendo postos em
suspenso pelamovimentao do ar ambiente, sendo os de menores
dimenses frequentemente associados a partculas de poeira.
Dependendo do clima de uma dada localidade, ou mesmo de
um dia para outro em uma mesma localidade, podem-se encontrar
diferentes concentraes de microrganismos suspensos no ar, assim
como distintas espcies de microrganismos suspensos. Ao se efetuar
a contagem de microrganismos no ar em um ambiente livre de
radiaes

solares

provavelmente

com

obtm-se

umidade

relativa

concentraes

elevada,

elevadas

de

muito
clulas

vegetativas. Ao contrrio, uma determinao feita aps longa

exposio luz solar forneceria uma contagem preferencial de
espcies

mais

resistentes,

como

os

esporos

de

bactrias.

Analogamente, a concentrao de microrganismos suspensos no ar

drasticamente reduzida aps um perodo de chuvas e extremamente
elevada aps um perodo de ventos fortes.
Apesar das possveis variaes em uma mesma localidade, ao
se efetuar determinaes de concentrao de microrganismos por

longos perodos, obtm-se valores mdios relativamente prximos,

como encontrados em alguns estudos j realizados.
Essas informaes permitem refletir sobre o local de onde se
deve proceder captao de ar para um processo. Esse local de
captao no deve ser aleatrio, pois se pode acabar captando ar de
locais muito contaminados, como seria o caso de se localizar a
entrada de ar do sistema de compresso muito prxima do solo ou
ainda voltada para locais particulares e sujeitos a um maior nvel de
contaminao.
Quanto s dimenses dos microrganismos suspensos no ar,
podem-se considerar como representativos valores da ordem de 0,5 a
1,0 m, ou seja, dimenses de bactrias ou seus esporos. Por outro
lado, as partculas de poeira, que frequentemente transportam os
microrganismos, apresentam dimetros frequentemente superiores a
4m, sendo que os esporos normalmente no esto associados a
estas partculas de poeira.

3. AMOSTRADORES
A

determinao

da

concentrao

de

microrganismos

suspensos no ar atmosfrico realizada atravs do uso de

dispositivos designados genericamente por amostradores. Esses
instrumentos no so apenas importantes por realizarem essatarefa,
mas tambm porque so empregados para a verificao da efetiva
esterilizao do ar destinado ao processo, ou na quantificao de
eventuais contaminantes em reas ditas estreis.
De uma forma geral, todos os amostradores operam de
maneira semelhante, pois o princpio bsico deles consiste em reter,
de alguma forma, os microrganismos suspensos em um determinado
volume de ar, dando-se, a seguir, condies para que estas clulas
proliferem, de maneira a tornar possvel a contagem de colnias, para
a quantificao dos contaminantes no volume de ar amostrado.
Tendo em vista essa descrio geral, pode-se concluir que:
a)

Dependendo

da

forma

empregada

para

reter

os

microrganismos, no se pode assegurar que esta reteno seja total,

podendo-se inclusive imaginar que haja distintas eficincias de coleta
para diferentes amostradores;
b) Dependendo da forma de retenodos microrganismos,
pode-se tambm imaginar a possibilidade da ocorrncia de destruio
de certas espcies;
c) As clulas microbianas suspensas no ar podem estar
associadas a partculas de poeira, podendo ocorrer a existncia de
mais que uma clula por partcula. Por mais que se busque
desagregar estes conjuntos, sempre difcil afirmar que uma colnia
tenha tido, obrigatoriamente, origem em uma nica clula. Essa ,
inclusive, a razo pela qual os resultados so frequentemente

expressos em nmero de partculas, ou de nmero de colnias por

unidade de volume de ar amostrado;
d) A etapa final da determinao consiste em contar colnias
que se desenvolveram em um dado meio de cultura e, tendo em vista
a grande variedade de microrganismos suspensos no ar, torna-se
difcil eleger um meio no qual se possa afirmar que todas as espcies
se desenvolvam em um dado intervalo de tempo.
Uma primeira consequncia dos fatos acima apontados reside
na dificuldade em comparar resultados obtidos pelo uso de diferentes
amostradores, ou com um mesmo amostrador, porm operado de
formas distintas. Outra consequncia clara a impossibilidade de se
obter a concentrao total ou absoluta de microrganismos suspensos
no ar atmosfrico.
Uma forma de minorar esses problemas, especialmente
quando se deseja efetuar testes de efetividade de esterilizao de um
dado sistema, consiste em preparar uma suspenso de um dado
microrganismo em ar, previamente submetido esterilizao. Esse ar,
artificialmente contaminado com o microrganismo usado como
marcador,

passado

atravs

do

filtro

determinando-se

concentrao (ou o nmero) de microrganismos no ar antes e aps o

elemento filtrante, desde que tambm se conhea o volume de ar
amostrado, medindo-se a vazo de ar e o tempo do ensaio. Pode-se
assim quantificar a eficincia de reteno () do filtro em teste:
=

N 1N 2
.100
N1

Onde:
N1: concentrao de microrganismos no ar antes da passagem
pelo filtro (partculas ou colnias por unidade de volume);
N2: concentrao de microrganismos no ar aps a passagem
pelo filtro (partculas ou colnias por unidade de volume).

O fato de se conhecer o microrganismo empregado para esse

tipo de determinao significa que se conhece perfeitamente o
aspecto das colnias que se quer contar (formato, aparncia e cor),
alm de se conhecer o meio de cultura e as condies mais
adequadas para a sua proliferao.
A seguir sero apresentadas algumas caractersticas de alguns
amostradores mais frequentemente empregados.

3.1.

IMPINGER
O impinger um dos amostradores mais conhecidos e sobre o

qual

muitas

amostrador,

referncias.

sendo

um

Existem

exemplo

inmeras

tpico

verses

indicado

na

desse
Figura

1,conhecido como "all-glassimpinger" (AGI).

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 67)

Figura 1. All-glassimpinger (AGI) - (I) Entrada do ar; (2) Sada do ar

(bomba de vcuo).
Esse amostrador consta de um recipiente de vidro que contm
10

mLdo

lquido

coletor,

que

pode

ser

gua

destilada,

ou

determinadas solues como a soluo gelatina-fosfato, constituda

de gelatina (2 g.L-1) e Na2HPQ4 (4 g.L-1), qual se adiciona 0,01 mL
de leo de oliva esterilizado, a fim de evitar a formao de espuma.
Antes do incio da amostragem, todo o conjunto deve ser esterilizado.
Ao se iniciar a amostragem do ar, liga-se a abertura 2,
indicada na Figura 1, a uma bomba de vcuo, de forma a reduzir a
presso no interior do recipiente. Dessa maneira, o ar entrar no
amostrador atravs da abertura 1, borbulhando no lquido coletor
atravs do tubo de vidro, o qual capilar em sua parte final para
gerar bolhas de pequeno dimetro. Espera-se, portanto, que os
microrganismos existentes no ar fiquem retidos no lquido.
Terminada a tomada de amostra, o frasco agitado, a fim de
promover a desagregao dos eventuais aglomerados de clulas,
determinando-se, ento, a concentrao de microrganismos no
lquido coletor, atravs dos mtodos usuais de diluies e contagem
de colnias em placas.
Conhecendo-se a vazo de ar e o tempo de amostragem,
conhece-se o volume de ar amostrado, tendo-se, portanto, todos os
dados necessrios para o clculo da concentrao de microrganismos
neste ar.
Uma das vantagens desse amostrador consiste no fato de no
ser necessrio o uso de medidor de vazo de ar, uma vez executada a
calibrao do aparelho, pois o tubo capilar funciona como um "orifcio
crtico". Essa expresso significa uma condio de trabalho na qual a
relao entre as presses reinantes nas extremidades do tubo capilar
suficiente para produzir velocidade do ar igual do som. Essa
velocidade no mais ultrapassada, mesmo que a presso do lado do

vcuo diminua ou oscile abaixo desse valor crtico. Para o ar, a

relao de presses de 0,53, significando que se a amostragem for
efetuada de um ambiente presso de 1atm, a presso do lado do
vcuo dever ser inferior a 0,53 atm, podendo inclusive oscilar entre
valores abaixo deste e, mesmo assim, a vazo permanecer
constante. Assim, uma vez construdo o instrumento, ele deve ser
submetido a uma calibrao, para se conhecer a vazo de ar que ele
permite, com a devida preciso.
No caso do AGI, pode ocorrer a reteno no tubo de admisso
do ar, para demonstrar isso, empregaram aerossol contendo cristal
violeta, sendo que aps certo tempo de amostragem efetuavam uma
lavagem no tubo de admisso, determinando a concentrao daquele
corante atravs de um colorimetro. Demonstraram que no apenas
ocorre essa reteno, como tambm que ela depende do tamanho da
partcula,

observando

que

para

partculas

de

20

um

ocorre

praticamente reteno total. Tambm ocorre a destruio de clulas

vegetativas durante a amostragem.
Uma

vez

constatados

esses

problemas

com

AGI,

desenvolveram um outro tipo de amostrador, que recebeu a

designao de amostrador Shipe, indicado na Figura 2.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 69)

Figura 2 - Amostrador Shipe, (I) Orifcio crtico (entrada do ar); (2)

sada do ar (bomba de vcuo)

Esse outro tipo de instrumento consiste ern um erlenmeyer de

125 mL, sendo a entrada de ar feita atravs de um "orifcio critico".
Ele opera de forma similar ao AGI, colocando-se no erlenmeyer 25 mL
do liquido coletor e ligando-se a sada de ar a uma bomba de vcuo.
Devido a entrada do 'ar ern alta velocidade ser efetuada na
superfcie do liquido, isto provoca um movimento circular do liquido
coletor, sendo importante a localizao do orifcio de entrada, a fim
de evitar uma excessiva umidificao das paredes do frasco.
Como se pode observar,o amostrador Shipe no conta com o
tubo de entrada, e ainda lana as partculas contra a superfcie do
liquido coletor que esta em movimento. Isso evita a mencionada
reteno e tambm reduz a possibilidade de destruio de clulas
vegetativas.

3.2.

AMOSTRAGEM POR FILTRAO

Existem

vrios

amostradores

cujo

principio

bsico

da

amostragem a filtrao. Consistem em fazer passar o ar atravs de

um elemento filtrante, o qual dever reter os microrganismos
suspensos. Posteriormente, pode-se colocar esse material filtrante em
suspenso em um volume conhecido de um liquido adequado,
procedendo-se a uma agitao vigorosa, a fim de propiciar a
passagem dos microrganismos retidos para o lquido. Finalmente,
efetua-se a determinao da concentrao de microrganismos no
liquido, pelas tcnicas usuais de diluies e contagem em placas.
Conhecendo-se o volume de liquido sabe-se o nmero total de
microrganismos retidos e, novamente, conhecendo-se a vazo do ar
amostrado e o tempo de amostragem, tem-se todos os elementos
para o clculo da concentrao de clulas no ar.
Altenativamente, pode-se aps a passagem do ar atravs do
elemento filtrante dar condies para que as clulas proliferem no
pr6prio coletor, efetuando-se ento a contagem de colnias. Esse
procedimento,

quando

possvel,

evita

trabalho

adicional

de

suspender as clulas em um liquido para posterior contagem. Um

amostrador tpico dessa categoria o amostrador de algodo,
esquematizado na Figura 3.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 71)

Figura 3 Amostrador de algodo, (I) Entrada do ar; (2) Sada do ar

(bomba de vcuo).

Aps a sua montagem ele deve ser submetido a esterilizao,

preferencialmente por meio de calor seco (estufa), a fim de evitar o
umedecimento das .fibras e a consequente perda de eficincia de
reteno de microrganismos. A amostragem e realizada conectandose a extremidade 2 a uma bomba de vcuo, intercalando-se um
sistema para a medida da vazo de ar. Aps o tempo de amostragem,
o chumao de algodo retirado do amostrador e assepticamente
transferido para um recipiente contendo um volume conhecido de
gua esterilizada. Procede-se, ento, a uma vigorosa agitao,
objetivando a passagem dos microrganismos retidos nas fibras para o
lquido,

efetuando-se

determinao

da

concentrao

de

microrganismos no liquido por contagem de colnias em placas.

Esse amostrador apresenta uma serie de inconvenientes,
como a dificuldade em suspender os microrganismos retidos, alem de

provocar a destruio de clulas vegetativas. Altenativamente podese empregar l de vidro, mas de qualquer maneira a obteno de
altas eficincias de coleta depende de se ter o material filtrante muito
bem compactado, de forma a se observar uma perda de carga, no
leito filtrante, relativamente elevada e da ordem de 0,5 kgf/cm.
Uma forma mais conveniente de se efetuar amostragens por
filtrao consiste no emprego de um amostrador que consiste em um
suporte em ao inoxidvel, o qual abriga membranas Millipore 47 mm
de dimetro e poros de 0,22 m ou 0,8 m, devendo ser previamente
esterilizado.
O sistema dispe de uma bomba de vcuo, que succiona o
obrigando a passar atravs da membrana e tambm atravs de um
orifcio critico, a fim de se ter uma vazo constante e conhecida.
Terminada

amostragem,

membrana

deve

ser

retirada

assepticamente e colocada sobre a superfcie de um meio de cultura

em pequenas placas de Petri. Aps tempo adequado de incubao,
contam-se as colnias que aparecem sobre a membrana, obtendo-se,
assim, a concentrao de microrganismos no ar amostrado.
Ao que tudo indica, o desenvolvimento de amostradores que
operam por filtrao atravs de membranas, teve seu inicio
empregando um sistema cujo elemento filtrante consistia em papel
filtro Whatman 40 e 42. Esse sistema original, esquematizado na
Figura 4, era constitudo de um funil de alumnio, ao qual se adapta
uma folha de papel-filtro apoiado em uma grade de ao inoxidvel.
Entre a grade e a folha de papel coloca-se uma camada de algodo
hidr6filo.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 72)

Figura 4 Amostrador de papel filtro.

Aps a esterilizao do sistema, ao se efetuar a passagem de

ar atravs da folha de papel-filtro, o que poderia ser feito acoplandose um segundo cone aps o elemento filtrante e este ligado a um
orifcio critico e a uma bomba de vcuo, os microrganismos devem
ficar retidos sobre esta folha. Terminada a amostragem, o sistema
pode ser desmontado, adicionando-se a seguir um meio de cultura ao
algodo hidrfilo, de forma a permitir, apos um certo perodo de
incubao, a contagem de colnias surgidas na superfcie do papelfiltro.

3.3.

AMOSTRADORES DE FENDA OU ORIFCIO

O principio bsico de funcionamento desses amostradores

consiste em se fazer com que o ar amostrado incida, a uma dada

velocidade, sobre a superfcie de um meio de cultura slido, havendo,
em virtude de uma brusca mudana de direo do ar, o choque das

partculas suspensas que nao acompanham as linhas de corrente,

ocasionando a reteno destas partculas nesta superfcie.
A Figura 5 mostra esquematicamente o amostrador de fenda.

FONTE: Biotecnologia Industrial Vol. 2 (pgina 73)

Figura 5 Amostrador de fenda. (1) Placa de Petri; (2) Disco

giratrio; (3) Tubo e fenda (entrada do ar); (4) Sada do ar para o
medidor de vazo e bomba de vcuo; (5) Caixa metlica.
Como se nota, consta de uma placa de Petri, contendo um
meio de cultura slido preso a um disco horizontal giratrio, estando
todo este conjunto no interior de uma caixa metlica, provida de uma
janela que permite fechamento hermtico. O ar entra por um tuba
vertical que possui, na extremidade inferior, uma fenda atravs da
qual as partculas em suspenso no ar so lanadas contra a
superfcie coletora. Uma vez esterilizado todo o conjunto, a sada de
ar e conectada a uma bomba de vcuo, intercalando-se um sistema
para a medida da vazo de ar.
Durante

perodo

de

amostragem,

disco

gira

com

velocidade angular regulvel, em funo da contaminao do ar que

se esta tomando como amostra, podendo-se imaginar valores desde

0,1 rpm ate cerca de 2 rpm. Aps a amostragem, a placa de Petri
retirada do amostrador, fechada em condies de assepsia e
incubada. Decorrido um intervalo de tempo adequado, conta-se o
nmero de colnias que aparecem sobre o meio de cultura.
Conhecendo-se a velocidade de rotao da placa, a vazo de ar e o
nmero de colnias sobre o meio, ou parte de sua superfcie, tem-se
todos os elementos para quantificar a contaminao do ar amostrado.
No h como proceder a desagregao dos aglomerados de
clulas, o que tambm ocorre com os sistemas, anteriormente
descritos, nos quais se efetua a contagem diretamente sobre a
superfcie coletora. Isso significa que cuidados devem ser tomados,
especialmente quando se trabalha com aerossis de microrganismos
definidos, a fim de evitar a presena de aglomerados, que podem ser
aleatoriamente desfeitos sobre a superfcie coletora durante a
amostragem, gerando contagens igualmente aleatrias.
A eficincia de reteno de aerossis depende da vazo do ar,
assim como da distncia da fenda ao meio de cultura. Determina-se
um valor Maximo de 95% de reteno, quando empregavam vazes
superiores a 28 L/min e 2 mm de distncia da fenda ao meio. Essa
reteno diminui sensivelmente quando se reduz a vazo do ar,
sendo que obtem-se retenes inferiores a 70%, operando com uma
vazo da ordem de 56 L/min e uma distancia de 6 mm entre a fenda e
o meio solido.
Para amostragens muito prolongadas pode ocorrer ainda o
inconveniente da perda de gua do meio de cultura slido, com a
consequente abertura de fendas no meio, o que inutilizaria o ensaio
efetuado.
Apesar dos inconvenientes e cuidados apontados no que se
refere a esse tipo de amostrador, ele apresenta certas vantagens
sobre os demais. De fato, pode-se imaginar a realizao de teste de

um determinado sistema para a esterilizao do ar, como por

exemplo o teste de um determinado material filtrante, determinando
de forma contnua a eficincia de esterilizao ao longo do tempo de
operao do sistema. Pelo emprego de uma suspenso de um dado
microrganismo conhecido, marca-se no meio de cultura a posio da
fenda no instante inicial. Aps a incubao, pode-se proceder a
contagem do nmero de colnias existentes em determinados setores
da placa, os quais correspondero a certos intervalos de tempo
conhecidos, desde que se conhea a velocidade de rotao da placa.
Como se conhece a vazo, sabe-se o volume de ar amostrado ern
cada setor da placa e, portanto, a correspondente concentrao de
microrganismos no ar que passou pelo elemento filtrante ern teste.
Pode-se, assim, determinar a variao da eficincia de reteno ern
funo do tempo de amostragem, ou de operao do sistema de
esterilizao. evidente que outros amostradores tambm permitem
esse tipo de determinao, porm executada de forma intermitente,
pois a cada amostragem h a necessidade de substituio do sistema
de coleta do amostrador, para a realizao da contagem de
partculas. No caso do amostrador em questo, isso no necessrio,
bastando providenciar a substituio da placa, apos um giro
completo, por outra esterilizada. Na verdade, esses testes de
sistemas

de

esterilizao

de

ar,

destinados

processos

fermentativos, so de grande importncia, tendo ern vista a

necessidade de alta confiabilidade.

4. MTODOS PARA ESTERILIZAO DO AR

A esterilizao do ar geralmente realizada atravs de meios
filtrantes por questes de convenincia. Porm, pode ser feita
tambm por outros mtodos como por radiaes ou aquecimento.
4.1.

ESTERILIZAO POR AQUECIMENTO

Microorganismos geralmente so mais resistentes ao calor seco

do que ao calor umido. Por isso, quando se realiza esterilizaes por
calor seco, as temperaturas devem ser mais elevadas e o tempo de
permanncia tambm deve ser maior em relao ao calor mido.
Alm disso, materiais particulados presentes no ar podem fornecer
algum tipo de proteo trmica para o microorganismo, dificultando
ainda mais a esterilizao.
Em termos de esterilizao de ar para uso industrial, o mtodo
por aquecimento leva grande desvantagem. A necessidade de
grandes quantidades de ar faz com que o aquecimento seja muito
dispendioso de energia, alm de se necessitar de tubulaes muito
longas para se obter os tempos de residncia necessrios. Portanto, a
esterilizao por aquecimento restringe-se a pequenas escalas, como
laboratorail ou escala piloto, devido a tais problemas.
Decker et al. determinaram a relao entre a temperatura e o
tempo necessrios para eliminar 99,9999% dos esporos do Bacillus
globigii usando um esterilizador por resistncia eltrica. Os resultados
esto apresentados na figura X.

f(x) = 5554.34 exp( -0.03 x )

R = 0.99

Percebe-se que o tempo necessrio para esterilizao cresce

exponencialmente com o decrescimo da temperatura, mostrando o
quo invivel este mtodo para escalas industriais.
Um modelo de esterilizador por aquecimento de ar
apresentado na figura X. Neste modelo o ar de entrada previamente
aquecido em uma antecamara pelo ar de sada a fim de reaproveitar
parte da energia.

Figura X Modelo de Esterilizador de ar por aquecimento

O ar necessrio para processos industrias, como fermentao
por exemplo, deve ser introduzido no reator sob certa presso a fim
de superar as resistncias impostas por filtros e a prpria coluna de
lquido. Um compressor estacionrio do tipo helicoidal que opera
numa vazo de 170 m3/min e descarga de 3kg/cm2 aumenta a
temperatura do ar de 20 para 180. Este aumento no
desprezvel e pode ser utilizado para eliminar clulas vegetativas do
ar. A fim de se obter ar esterilizado e aumentar a eficincia do uso de
energia, pode-se instalar um sistema de esterilizao por
aquecimento na sada do crompressor. Assim, a energia necessria
para elevar a temperatura mais alguns graus reduzida.
importante mencionar que o ar deve ser resfriado antes de
entrar nos reatores. O no resfriamento do ar implica em dificuldade
no controle de temperatura no reator, alm de formao de
gradientes de temperatura ao longo da coluna de lquido.

4.2.

ESTERILIZAO POR RADIAES

Quando se considera o uso de radiaes para esterilizar o ar,

deve-se levar em conta diversos fatores como o tipo de radiao, a
eficincia na destruio de microorganismos, o custo da mesma, a
periculosidade e os efeitos colaterais que pode causar. Portanto, a
maioria das radiaes excluda automaticamente por serem muito
perigosas ou custosas.
As radiaes ultraviolentas (UV) so as nicas que apresentam
aplicaes prticas para esterilizao do ar. Porm, por possuirem um
baixo poder de penetrao, a esterilizao por este tipo de radiao
necessita de tempos relativamente longos. Isso um problema para o
uso industrial, pois h a necessidade de se esterilizar grandes
volumes de ar.
A principal aplicao prtica deste mtodo de esterilizao em
salas asspticas para a esterilizao do ar contdo e de superfcies. O
ar que fornecido a estas salas sofre um processo de esterilizao
por filtrao prvia.

4.3.

ESTERILIZAO POR FILTRAO

A esterilizao por filtao a tcnica mais empregada

atualmente para esterilizao do ar, tanto em instalaes industriais
como em pequena escala. uma tcnica que possui grande
confiabilidade e tem a capacidade de fornecer grandes vazes de ar a
um custo relativamente baixo.
Os mais diversos tipos de materias j foram usados para
filtrao, tais como carvo, algodo e papel. Posteriormente surgiram
os filtros de materiais fibrosos como a l de vidro, materiais
sinterizados como o vidro, metais, materiais cermicos, membranas,
materiais polimricos, como o naylon, o teflon e os steres de
celulose. Com o passar do tempo, as membranas polimricas porosas
acabaram dominando a operao e substituram gradualmente os
filtros de l de vidro.
Em instalaes industriais, recomenda-se desenvolver um
sistema de filtrao para cada etapa que necessite de ar esterilizado
e no desenvolver um sistema central que fornea ar esterilizado

para toda a instao. Os benefcios econmicos que um sistema

central traz, no compensam os riscos de haver uma falha no sistema
de filtrao e comprometer todas as operaes que so dependentes
do ar esterilizado.

4.3.1. Filtros de materiais fibrosos

Estes filtros no tem mais tanta popularidade para uso
industrial quanto antigamente. Porm, ainda so encontrados em
algumas instaes. O principal material utilizado a l de vidro. Nesta
operao o ar passa atravs do espao entre as fibras, e o material
particulado, como microorganismos, fica retido ao longo das fibras.
Um esquema de um filtro de l de vidro apresentado na figura X.

Figura X Esquema de um filtro de l de vidro industrial

Como pode ser observado, um esquema bem simples. Possui
altura de aproximadamente 2 a 3 metros, e dimetro de 1 a 1,5
metro. Na parte inferior a entrada de ar, que passa atravez da l de
vidro e sai pela parte superior.
A l de vidro sustentada por uma grande na parte inferior e
superior do filtro. importante ressaltar que a instalao da l de

vidro dentro do filtro deve ser feita de maneira cuidadosa a fim de

garantir camadas bem compactas e homogneas. Isso ir impedir a
formao de caminhos preferenciais de escoamento de ar, que
causam a diminuio na eficincia do sistema. Quando a camada de
l de vidro for muito espessa, pode-se instalar grades intermedirias
para sustentao. Alm disso, para evitar o arraste das fibras, podese empregar mantas de l de vidro compactadas embebidas em
resinas (cerca de 0,5 cm). Essas mantas tornam o leito filtrante
menos espesso e mais regular.
Na operao do filtro, deve-se procurar operar com
temperaturas de ar superiores ambiente para evitar a formao de
condensado no leito. Um leito umedecido perde muito a sua eficincia
na reteno de aerosis. Geralmente aps a compresso do ar que
aumenta sua temperatura, deixa-se esfriar at uma temperatura em
torno de 50 a 60 para ento passar pelo filtro.
Antes de se iniciar a operao ou aps a troca da l de vidro
deve-se esterelizar completamente o filtro. Faz-se isso deixando-se
passar ar quente de 180 a 200 por 2 horas ou, o que mais
comum, faz-se a esterilizao por vapor saturado. Com presso de 1
kg/cm2 por 2 horas ou a 3 kg/cm 2 por 1 hora. Como pode ser visto na
figura X, abre-se a vlvula do vapor e deixa-se sair completamente o
ar e o condensado pela sada na parte inferior. Aps a isso, fecha-se a
vlvula e de maneira a aumentar a presso. Aps a esterilizao por
vapor, importante abrir o equipamento e verificar se no ouve a
compactao da l de vidro. Se ouve, preenche-se os espaos em que
ouve compactao e repete-se o procedimento de esterilizao. Antes
de iniciar a operao, importante passar ar quente at que o leito
esteja completamente seco.
Devido esterilizao por vapor, a l de vidro se degrada
rapidamente, perdendo sua eficincia e aumentando a resistncia ao
escoamento com o passar do tempo. Em geral, faz-se a esterilizao
do filtro antes de cada fermentao na indstria, em mdia uma vez
por semana. Com essa frequncia de esterilizao, o leito de l de
vidro deve ser trocado em mdia a cada 4 meses. Por
ser
um
material de dificil operao e que exige grande frequncia de trocas,
este tipo de filtro perdeu muito espao para os filtros de membrana
polimrica porosa.

4.3.2. Filtros de membranas

Os filtros de membranas geralmente so elaborados a partir de

materiais polmericos, principalmente o politetrafluoretileno (PFFE ou
Teflon). Possuem caractersticas hidrofbicas e apresentam poros na
ordem de 0,2 a 0,45 m, menor que os microorganismos que so
retirados. Por isso so tambm chamados de filtros absolutos.
O uso de materiais hidrofbicos de grande importncia para
tais filtros, pois eles permitem que ar em condies normais de
temperatura seja filtrado, sem se preocupar com a umidade que ir
se formar por condesao. Essa umidade no ficar aderida
superfcie do filtro e escoar para o fundo, de modo a evitar o
crescimento de microbiano. Alm de evitar o bloqueio dos poros e
consequente aumento na perda de carga.
Geralmente, para uso industrial, os filtros so apresentados na
forma de cartuchos como pode ser visto na figura X.

Figura X Cartuchos para filtro polimrico

Estes cartuchos so instalados no interior de um recipiente,
geralmente de inox, que abriga vrios cartuchos. O ar entra pela
parte externa do cartucho e passa atravs do meio filtrante, saindo
pela parte interna do cilindro.
Por se tratar de filtros absolutos, a filtrao independe da
velocidade de entrada do ar, ao contrrio dos filtros de fibra. Porm,
grandes velocidades de ar acarretam aumento exessivo na perda de
carga, alm de gerar vibraes que podem comprometer o sistema
de vedao dos cartuchos (anis de vedao que podem ser vistos na
figura X).

Para o dimensionamento deste sistema de filtrao, sabendo a

vazo de ar requerida, basta escolher uma rea de filtrao adequada
para que a velocidade superficial no seja to elevada, causando
excessiva perda de carga. A equao que relaciona essa variveis a
seguinte:
Q=v . A

Onde, Q a vazo de ar, v a velocidade superficial e A a

rea do filtro.
As figuras X e X apresentam alguns dados da perda de carga
em funo da vazo de ar empregada para dois tipos de cartuchos.

Figura X Perda de carga em funo da vazo de ar (N: condies

normais) para o filtro cartucho de 10 polegadas da Millipore Co.

Figura X Perda de carga em funo da vazo de ar (N: condies

normais) para o filtro cartucho de 40 polegadas da Millipore Co.
Tais dados, geralmente so dados pelos fabricantes dos filtros, e
podem ser utilizados para se determinar um ponto timo de
operao, com o nmero certo de cartuchos a fim de se operar com
uma vazo baixa por cartucho.
interessante notar que o aumento no comprimento do
cartucho, aumenta a rea e por consequncia diminui a perda de
carga. Alm disso, a variao na perda de carta em funo da presso
de entrada se d devido ao aumento da densidade do ar com a
presso. Assim, uma maior quantidade de ar escoa e a perda de
carga reduzida.
Indica-se ainda a instalo de filtros mais simples previamente
aos filtros de membrana para retirar o particulado mais grosso. Isso
aumenta a vida til dos filtros de membrana.
A operao de esterilizao do filtro semelhante dos filtros
de fibras. Basicamente, introduz-se vapor, previamente filtrado, pela
parte inferior do filtro, deixando a vlvula 1, apresentada na figura X,
aberta para expulso do ar. Aps a expulso do ar, fecha-se a vlvula
e deixa-se esterilizar pelo tempo necessrio. Este tempo em mdia
de 30 minutos a 145. A vida til de um filtro de membrana pode
variar de 1 a 3 anos, considerando-se uma esterilizao por semana.

Figura X Esquema de instalao de um filtro de membrana

polimrica
Aps a instalao dos filtros, recomendada que sejam feitos
testes de vedao, alm dos testes com o ar filtrado, utilizando
amostradores, a fim de garantir a eficincia do filtro. Geralmente
estes testes so realizados pela prpria empresa que fornece os
filtros.

4.3.3. Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air)

So filtros feitos a partir de placas de acetato de celulose ou de
fibra de vidro, portante no deixam de ser um tipo de filtro de fibras.
Geralmente so instalados em salas asspticas, reas limpas ou
capelas. A eficincia de remoo de partculas para os filtros feitos
com acetato de celulose de 99,97% para partculas de dimetro
mdio de 0,3 m, e para os de fibra de vidro supeior a 99,97% para
partculas superiores a 0,5 m. As fibras de vidro apresentam
dimetros entre 0,5 e 2 m e o espao entre as fibras muito maior
que 0,3 m. Porm, ainda assim, tais filtros so eficientes para
remover tais partculas.
importante ressaltar que os filtros HEPA so projetados para
reter com eficincia partculas muito finas, mas eles no filtram gases
e molculas odorferas. Sendo necessrio um sistema com carvo
ativado para tal finalidade.
Os filtros HEPA apresentam uma baixa perda de carga devido
grande rea superficial que possuem. Isso possibilita o uso de

ventiladores ao invs de compressores para a sua operao. Os

fatores mais importantes a considerar num filtro HEPA so o dimetro
das fibras, a espessura do filtro e a velocidade das partculas.
As partculas so retidas no filtro por uma combinao de 3
mecanismos:

Impacto: Onde as partculas de grandes dimenses no so

capazes de evitar as fibras enquanto seguem um fluxo de ar e
so levadas a um impacto direto com uma delas. Este efeito
aumenta com a diminuio da separao entre as fibras e com
o aumento da velocidade do fluxo de ar. (predomina em
partculas de mais de 0,4 m).
Interceptao: Onde as partculas que seguem um fluxo de ar
entram em contato com uma fibra e aderem a ela.
Difuso: Um mecanismo adicional, que resultado da coliso
de molculas de gs com as partculas menores, especialmente
aquelas com menos de 0,1 m, o que impede e retarda sua
passagem atravs do filtro. Este comportamento semelhante
ao movimento browniano e aumenta a probabilidade de que
uma partcula seja detida por um dos dois mecanismos
anteriores. o mecanismo dominante quando o fluxo de ar
lento. (predomina em partculas inferiores a 0,1 m)

A difuso predomina em partculas inferiores a 0,1 m,

enquanto que a interceptao e o impacto predominam em partculas
de mais de 0,4 m. Quando a partcula tem dimetro prximo ao
tamanho de partcula mais penetrante (Most Penetrating Particle Size
ou MPPS), 0,3 m, a difuso e a interceptao so comparativamente
ineficientes. Como este o ponto mais fraco do desempenho do filtro,
as especificaes HEPA utilizam a reteno destas partculas para
classificar o filtro. Um esquema de um filtro HEPA pode ser visto na
figura Y.

Figura Y Esquema de um filtro HEPA

A figura X apresenta um esquema de capela que opera com
fluxo laminar de ar em que um filtro HEPA est instalado.

Figura X Modelo de capela com fluxo de ar laminar e filtro HEPA

O ar desce atravs da capela em fluxo laminar com velocidade
em torno de 50 cm/s. importante notar que para garantir a
esterilizao da capela, geralmente deixa-se uma luz UV ligada por

um tempo antes de iniciar os trabalhos. O mesmo esquema pode ser

usado em uma sala assptica em uma indstria ou hospital.

5. CONCLUSO
A esterilizao do ar para processos fermentativos exige uma
rigorosa conduo em condies de assepsia e o mtodo mais
adequado o dos filtros de membranas polimricas hidrofbicas. No
entanto,

esses

filtros

devem

ser

adequadamente

projetados,

evitando-se o emprego de velocidades excessivas de ar atravs da

membrana esterilizante, a fim de se contar com baixas perdas de
presso.
Igualmente, deve-se haver todo o cuidado com a instalao,
buscando uma efetiva vedao do sistema, para que no ocorra
contato entre o ar esterilizado e o ar atmosfrico. Uma soluo o
emprego de pr-filtros, os quais podem ser substitudos com uma
maior frequncia, a fim de ampliar o tempo de operao da
membrana esterilizante. Tanto os pr-filtros como os filtros devem ser
substitudos, portanto necessrio um fcil acesso ao sistema, a fim
de que esta operao possa ser rpida e efetuada com segurana.
No caso dos processos fermentativos contnuos, nos quais se
espera uma operao ininterrupta por vrias semanas, interessante
a instalao de dois filtros em paralelo para cada reator. Dessa forma,
pode-se providenciar a esterilizao de um filtro aps certo tempo de
operao sem interromper o processo.

6. REFERNCIAS
BORZANI,

W.; AQUARONE, E.; LIMA, U. A.; SCHMIDELL,

W.;Biotecnologia Industrial. Volume 2, Editora Edgard Blcher

LTDA.
MELLO, M. T.; Aerossis Microbianos Proteo contra
Aerossis Infectantes em Tcnicas Bacteriolgicas. Seo de
Bacteriologia, Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil.
http://www.eolss.net/sample-chapters/c17/e6-58-04-02.pdf