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MICROBIOLOGA
AMBIENTAL
UNIVERSIDAD
CIENTFICA DEL
SUR
AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE
LA EDUCACIN
TEMA
MONEDAS Y PLSTICOS (PRCTICA 3) Y BACTERIAS
PATGENO (PRCTICA 4)
FACULTAD
CIENCIAS AMBIENTALES
CARRERA
INGENIERIA AMBIENTAL
CURSO
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
ALUMNO
CAMACLLANQUI HUAMANLAZO, ALEX ORESTES
CANCHARI MADUEO, FRANKLIN IGNACIO
JACAY INGA, JAIRO RONNY
MEDINA SOLANO, MARCO ANTONIO
PROFESORA
MUOZ BLANDON NURY ALEXANDRA
LIMA, 2015-I
NDICE
INTRODUCCIN.................................................................................................................... 3
MATERIALES......................................................................................................................... 5
METODOLOGA..................................................................................................................... 5
RESULTADOS DE LA SIEMBRE DEL CALDO EN AGAR...................................................6
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS......................................................................6
CONCLUSIONES................................................................................................................ 8
RESULTADOS DE AMS......................................................................................................8
ANLISIS Y DISCUSION DE RESULTADOS DE AMS.......................................................9
CONCLUSIONES DE AMS.................................................................................................9
RESULTADOS DE TCBS....................................................................................................9
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS DE TCBS....................................................10
CONCLUSIONES DE TCBS..............................................................................................11
RESULTADOS DE SS CON SALMONELLA SHIGUELLA.................................................11
ANLISIS Y DISCUCIN DE RESULTADOS DE SALMONELLA SHIGUELLA................12
CONCLUSIN DE SALMONELLA SHIGUELLA...............................................................12
RESULTADOS DE AGAR SETRIMIDE CON PSEUDOMONA AERUGINOSA..................12
ANLISIS Y DISCUCIN DE RESULTADOS....................................................................13
CONCLUSIN DE PSEUDOMONA AERUGINOSA..........................................................13
REFERENCIA BIBLIOGRFICA...........................................................................................14
INTRODUCCIN
Las monedas es uno de los objetos ms circulado en el mundo, en nuestra vida cotidiana
Recientemente unos investigadores de la Universidad de Nueva York han identificado 3.000
tipos de bacterias, muchas ms que en los estudios anteriores que examinaron los billetes
de dlar bajo microscopio. Donde adems de bacterias, haba virus, hongos, patgenos de
plantas, rastros extremadamente diminutos ntrax y difteria.
Entre las bacterias encontradas figuran las famosas Staphylococcus aureus, Escherischia
coli, Helicobacter pylori y Corynebactrium diptheriae. (RT, 2014)
La transmisin de microorganismos patgenos se puede dar por contacto indirecto a travs
de monedas, objetos inanimados contaminados (fmites). El trmino PATOGENICIDAD se
refiere a la capacidad de un organismo parsito de causarle dao al husped, mientras que
VIRULENCIA es el grado de patogenicidad. Con frecuencia se usan indistintamente los
trminos infeccin y enfermedad, sin embargo, es importante diferenciar sus significados, ya
que stos no son sinnimo
El primer paso en el cultivo de bacterias es la esterilizacin que consiste en eliminar todo
tipo de organismo, asegurando la ausencia absoluta de cualquier forma viviente. El equipo
de uso comn es la autoclave (vapor a presin) que utiliza el calor hmedo para destruir a
los microorganismos por desnaturalizacin de protenas y el horno o incineracin usan el
calor seco para eliminar a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares
(Gutirrez, 2008).
Para un estudio microbiolgico se requiere un aislamiento que separe uno o ms
microorganismos presentes en la muestra, pasando de una poblacin mixta a un cultivo
puro. A su vez esto podra permitir la formacin de una colonia que es un grupo de
microorganismos (bacterias) genticamente iguales (clon), procedentes de una unidad forma
de colonias (UFC). Entre las tcnicas de aislamiento ms utilizadas se encuentra: extensin
de diluciones de un cultivo en superficie en la placa Petri, siembra por estra cruzada en
placa Petri, siembra por extensin, etc. La siembra por estra cruzada es uno de los
mecanismos ms efectivos para obtener cepas (cultivo puro) (Aquiahuatl et al., 2012).
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in-vitro de las bacterias, para
contar con material en cantidad suficiente y posibilitar un mejor estudio de sus propiedades
bioqumicas e, inmunolgicas. Los medios de cultivo se clasifican por su finalidad,
bsicamente en medios de enriquecimiento, que buscan aumentar la cantidad de bacterias y
medios de aislamiento que buscan obtener una colonia o clon (un grupo de bacterias que
procedan de una sola) (Altamiranda & Welsh, 2010).
El cultivo de bacterias puede realizarse por siembra (en un medio slido) o inoculacin (en
un medio lquido), dependiendo del tipo de poblacin que se desea obtener. Un medio slido
puede ser un mecanismo enriquecimiento o de aislamiento. La mayor parte de
microorganismos son sembrados en agar nutritivo, el cual tambin sirve como base para la
preparacin de otros medios enriquecidos y selectivos. Est compuesto por agar, extracto
de carne, peptona, NaCl, y agua destilada (Tortora et al., 2007). Entre tanto, existen otros
medios destinados a favorecer el crecimiento de un determinado tipo de bacteria e inhibir el
desarrollo de otra, como el agar BCYE (agar tamponado con extracto de levadura y carbn),
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agar BHI (infusin cerebro-corazn), agar CCF (fructosa, cicloserina, cefoxitina), etc.
(Tortora et al, 2007).
El agar, hidrocoloide derivado de las algas rojas, es el agente glido ms utilizado en el
cultivo de bacterias en medios slidos o semislidos, debido a sus propiedades fsicas
nicas (se funde a 100 grados y se vuelve gel a 40 grados). Adems no puede ser
metabolizado por la mayora de bacterias por lo que mantiene los nutrientes que se
encuentran en la solucin acuosa (Todar, 2000).
Por otro lado, el caldo nutritivo es un medio lquido que contiene 0,5% de peptona que es
un digerido enzimtico de carne; 0,3% de extracto de carne, un concentrado de los
componentes hidrosolubles de la carne, y 0,8% de NaCl para proporcionar
aproximadamente la misma concentracin salina que existe en los tejidos (Stanier, 1992).
Asimismo existen diferentes caldos para cultivo, entre los que se utilizan suero, sangre,
agua destilada, etc. de acuerdo al cultivo que se desea.
El siguiente paso luego del cultivo de bacterias es realizar una identificacin primaria de las
diferentes colonias bacterianas en base al reconocimiento de sus caractersticas
morfolgicas como forma, pigmento, borde, etc. Es necesario tambin la clasificacin en
Gram positivas y Gram negativas mediante el uso de la tincin diferencial de Gram que
indica las diferencias fundamentales entre la pared celular de las bacterias, bsicamente el
contenido de peptidoglicano. Cuando existe un mayor ndice de peptidoglicano la muestra se
tie de violeta y se conoce como Gram positiva, caso contrario se tie de rosado indicando
ser Gram negativa (Gutirrez, 2008). Reconocer esta diferencia es fundamental ya que la
presencia de peptidoglicano determina la resistencia de las bacterias.
En base a lo anterior, en el presente informe se busca en primer lugar, estudiar las tcnicas
de cultivo de bacterias en medios slidos y lquidos, usando la siembra por estra cruzada en
agar como tcnica de aislamiento y en segundo lugar realizar la tincin de Gram para
clasificar las bacterias de acuerdo a su pared celular.
Los objetivos son identificar las diferentes tcnicas de siembra y aislamiento de bacterias,
reconocer sus caractersticas morfolgicas y clasificar las bacterias como Gram positivas y
Gram negativas. Analizar los efectos que causan en el crecimiento microbiano tanto el
plstico como las monedas. Observar y sealar los puntos ms relevantes en el desarrollo
de colonias especificas en el caldo de cultivo
MATERIALES
Equipos
Microscopio ptico
Mechero Bunsen
Asa metlica
Placas portaobjetos
Reactivos
4 Cultivos bacterianos de agua
de pantano en medio slido (agar
nutritivo)
2 Cultivos bacterianos de agua
de pantano en medio lquido
(caldo nutritivo)
Aceite de inmersin
Cepas de Pseudomonas,
Estafilococos, Vibrio cholerae y
Salmonella
Agar Cetrimide
Agar manitol sal (AMS)
Agar tiosulfato citrato bilis
sacarosa (TCBs)
Agar Salmonella Shiguella (Ss)
Monedas
Plstico
Cristal violeta
Lugol
Alcohol
Safranina
METODOLOGA
La metodologa consisti en sembrar microorganismos
en A.N utilizando monedas y
plsticos, para ello se utiliz dos placas de A.N donde en una de ellas se coloc trozos de
plsticos lavados con alcohol y no lavados. En el otra placa Petri que contiene agar
colocamos monedas limpiadas con alcohol para eliminar todas las impurezas tambin se
coloc monedas no lavadas.
Para la prctica bacterias patgenos I la metodologa fue casi similar, sembramos bacteria
en su diferente medio correspondiente como: las pseudomonas en centrimede, los vidrio en
TSBC, los entrococos en AMS y por ltimo la salmonella en SS. Para finalizar la prctica se
coloc las monedas y plsticos en cada una de ellas.
(Figura 1)
CONCLUSIONES
RESULTADOS DE AMS
En el agar Mannitol Salt Agar (AMS) se desarroll estafilococos en mayor parte del agar, su
conteo no se realiz porque haba varias colonias que estaban unidas de forma continua,
pero la morfologa de las colonias fue de forma circular, elevacin convexa y borde entero.
Pero en una seccin se observ colonias de color anaranjado y para confirmar que bacteria
son, se llev al microscopio. Obtenindose bacterias gram negativas como tambin gram
positivas, tal como se muestra en la figura 1.
CONCLUSIONES DE AMS
RESULTADOS DE TCBS
En la placa Petri, despus de una semana de sembrado en el agar TCBS (Tiosulfato-Citratobilis-sacarosa) que es exclusivamente para el crecimiento de Vibrio.
Las colonias se observan ligeramente amarillas, pero solo se han desarrollado por debajo
del plstico; presentando las siguientes caractersticas morfolgicas: Hay 8 colonias de
Vibrio color amarillo con forma circular, elevacin convexa y borde entero. La morfologa
celular de las bacterias observadas en las colonias que estn por debajo del plstico son
cocos en racimos.
Cocos en racimos
Figura 2. Agar TCBS (Tiosulfato-Citrato-bilis-sacarosa) con siembra de Vibrio y dividido en
tres secciones (Vibrio ms moneda limpia, Vibrio ms plstico y solo Vibrio).
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CONCLUSIONES DE TCBS
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REFERENCIA BIBLIOGRFICA
Mxico:
Universidad Autnoma
Metropolitana.
Garca, M; Almodvar, M.; Rivero, A. & Cisneros, J. 2010. Clera y otras infecciones del
Vibrio.
Gutirrez, S. 2008. Mtodos de esterilizacin. Caracas: Laboratorio de Microbiologa.
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Martinez, M. 2007. Pseudomonas aureginosa: Aportacin al conocimiento de su
estructura
los
mecanismos
que
contribuyen
las
resistencias
de
antimicrobianos.http://actualidad.rt.com/ciencias/view/125889-bacterias-dolar
enfermedades-eeuu-genes
Stanier R.; Ingraham J.; Wheelis M. & Painter P. 1992. Microbiologa. Barcelona: Ed.
Revert.
Rivadeneira,M. (2014). E. coli y Vibrio cholerae (Diapositivas de power point).
Recuperado de: http://es.slideshare.net/Mark2396/caso-clnico-e-coli-v-cholerae
BD Diagnostic Systems, (2003). INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA
LISTOS PARA USAR. Disponible en:
https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/HB/CE/PA/ES-PA-254432.pdf
Giovanetti, M. (2011). Familia Vibrionacea (Diapositivas de power point). Recuperado de:
http://es.slideshare.net/maceya/familia-vibrionacea
Orgtega, (2012). Estreptococos (Diapositivas power point). Recuperado de:
http://es.slideshare.net/M_M_CxJ/enterococcus-spp?related=1
Becton Dickinson GmbH, (2013). INSTRUCCIONES DE USO MEDIOS EN PLACA
LISTOS PARA USAR : BD Mannitol Salt Agar. Disponible en:
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8771
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