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NDICE DE MATERIAS
1. INTRODUCCIN ................................................................................. 2
1.1. Objetivo general................................................................................. 4
1.2. Objetivos especficos ......................................................................... 4
2. REVISIN BIBLIOGRFICA ................................................................ 5
2.1. Descripcin botnica.......................................................................... 5
2.2. Distribucin geogrfica ...................................................................... 6
2.3. Citogentica del gnero Leucocoryne................................................ 7
2.4. Poliploida en la mejora vegetal ......................................................... 8
2.4.1. Caractersticas de la colchicina...................................................... 11
2.4.2. Mtodos para determinar ploidia.................................................... 14
2.4.2.1. Determinacin por caracteres citolgicos ................................... 14
2.4.2.2. Determinacin por su morfologa y desarrollo............................. 14
2.4.2.3. Cariologa.................................................................................... 14
2.4.2.4. Citometra de flujo....................................................................... 15
3. MATERIALES Y MTODOS................................................................
3.1. Material .............................................................................................
3.1.1. Ubicacin del ensayo .....................................................................
3.1.2. Material vegetal..............................................................................
3.1.3. Equipos de invernadero .................................................................
3.1.4. Equipos de laboratorio ...................................................................
3.2. Mtodo ..............................................................................................
3.2.1. Aplicacin de colchicina .................................................................
3.2.2. Polinizacin....................................................................................
3.2.3. Germinacin de semillas................................................................
3.2.4. Determinacin de ploidia................................................................
16
16
16
16
17
17
18
18
19
20
21
24
24
25
26
32
5. CONCLUSIONES ................................................................................ 40
6. RESUMEN ........................................................................................... 41
7. ABSTRACT.......................................................................................... 42
8. LITERATURA CITADA ........................................................................ 43
1. INTRODUCCIN
1.1.
Objetivo general:
1.2.
Objetivos especficos:
2. REVISIN BIBLIOGRFICA
2.1.
Descripcin botnica:
MANSUR et. al. (2004) determin que muchas especies del gnero
Leucocoryne, tiende claramente hacia la polinizacin cruzada y a la
autoincompatibilidad, lo que podra explicar su alto nivel de variabilidad
gentica.
2.2.
Distribucin geogrfica:
ms
favorables,
se
presenta
la
mayor
abundancia
2.3.
la
stos en una
2.4.
Los diploides son 2x, los triploides 3x, los tetraploides 4x, los pentaploides 5x
y as sucesivamente. Los miembros que se encuentran en un nivel superior
a los diploides, son llamados poliploides en conjunto (ELLIOT, 1964).
Alopoliploides
segmentales
(AsAsAtAt),
respectivamente
10
Los
diversos
tipos
de
plantas
cultivadas
muestran
diferencias
de
11
12
En concentraciones
relativamente bajas pueden ser soportadas por muchas plantas sin resultar
txica (BRAUER, 1969).
13
14
15
2.4.2.1.
2.4.2.2.
2.4.2.3.
Cariologa
16
2.4.2.4.
Citometra de flujo.
17
3. MATERIALES Y MTODOS
3.1. Material:
18
CUADRO 1.
Material Vegetal
Nmero
Nmero total
Nmero de plantas
cromosmico
plantas
tratadas
2n = 18
306
154
L. purpurea
2n = 10
230
67
Contenedores de polietileno de 1 l.
Herramientas de jardinera.
Agua destilada.
Pinzas y bistur.
Placas Petri.
Balanza analtica.
Pipeta.
Esptula.
Guantes quirrgicos.
Mascarilla.
19
3.2.
Mtodo:
CAVE (1939) seala que aparentemente la reduccin de las clulas del polen
ocurre cuando el tallo floral an no emerge del bulbo. Pero las observaciones
cariolgicas desarrolladas en Laboratorio de Fitogentica de la Facultad de
Agronoma de la Pontificia Universidad Catlica de Valparaso, indican que
fenolgicamente la emergencia a ras de suelo del escapo floral coincide
fisiolgicamente a la ocurrencia de meiosis.
20
3.2.2. Polinizacin
21
floral, para extraer las anteras o bien introduciendo las pinzas por la boca del
tubo para tomar las anteras y jalando hacia arriba suavemente para
extraerlas, procedimiento que se realiza usando estados avanzados del
desarrollo floral para asegurar madurez de las anteras y la dehiscencia.
Las semillas se pusieron a germinar sobre placas Petri cubiertas con papel
absorbente empapados con agua destilada. Las placas se almacenaron en
una cmara sin luz y con temperatura constante de 15C, las perdidas por
evaporacin fueron repuestas cada dos das, una semilla se considera
germinada cuando emerge la radcula, los conteos de semillas germinadas
se realizaron cada dos das, y la germinacin de toda la poblacin se asumi
cuando ninguna de las semillas germin luego de seis das consecutivos.
Test de germinacin.
22
23
se
cosecharon
se
mantuvieron
en
cmara
segn
las
En la segunda etapa, en el anlisis se utiliz hojas obtenidas de plantas postjuvenil obtenidas de bulbos plantados en maceteros individuales crecidas en
invernadero. Este anlisis se realiz solo para la especie Leucocoryne
purpurea, ya que se obtuvieron mayor nmero de bulbos y los resultados de
duplicacin fueron mejores.
Las plntulas fueron cosechadas vaciando los maceteros sobre una serie de
harneros de diferente tamiz, para separar los bulbos de la parte area. Los
bulbos fueron almacenados en sobres de papel y llevados a cmara a 20C.
24
por
cuatro
meses.
Posteriormente
fueron
plantados
en
maceteros
25
4.1.
CUADRO 2.
Genotipo
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. purpurea
L. purpurea
L. purpurea
Cruzamientos Porcentaje de
Dosis
Total
Colchicina Cruzamientos
exitosos
xito
(%)
0.05
19
12
63%
0,1
18
4
22%
Testigo
20
12
60%
0,05
7
6
86%
0,1
11
10
91%
Testigo
20
17
85%
Genotipo
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. purpurea
L. purpurea
L. purpurea
Dosis
Nmero
Colchicina de frutos
(%)
0,05
12
0,1
4
Testigo
12
0,05
6
0,1
10
Testigo
17
Nmero total
de semillas
Nmero promedio
de semillas/fruto
83
29
211
345
554
966
6,9
7,3
17,6
57,5
55,4
56,8
26
Los valores promedio de semillas por fruto, al igual que los porcentajes de
xito muestran alto valores para la especie Leucocoryne purpurea,
respondiendo esta especie mejor a la polinizacin intraespecfica.
4.2.
CUADRO 4.
Genotipo
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. purpurea
L. purpurea
L. purpurea
Dosis
Colchicina
(%)
0,05
0,1
Testigo
0,05
0,1
Testigo
Nmero
de frutos
Nmero total
de semillas
Nmero promedio
de semillas/fruto
108
63
178
53
46
156
1216
200
2749
639
792
4774
11,3
3,2
15,4
12,1
17,2
30.6
En
27
4.3.
Genotipo
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. spp. (Alcones)
L. purpurea
L. purpurea
L. purpurea
L. purpurea
L. purpurea
Tratamiento
0,05% colchicina + polinizacin dirigida
0,05% colchicina + polinizacin libre
0,1% colchicina + polinizacin dirigida
0,1% colchicina + polinizacin libre
Testigo
0,05% colchicina + polinizacin dirigida
0,05% colchicina + polinizacin libre
0,1% colchicina + polinizacin dirigida
0,1% colchicina + polinizacin libre
Testigo
R2
0,96
0,99
0,96
0,98
0,97
0,93
0,99
1
0,99
0,93
28
Tratamiento
0,05% colchicina +
polinizacin dirigida
0,05% colchicina +
polinizacin libre
0,1% colchicina +
polinizacin dirigida
0,1% colchicina +
polinizacin libre
Testigo
Total de
semillas
A(%)1
to 2
K2
1/tA/2 2
22 b
5,29 a
0,20 ab
0,11 a
24 b
6,51 a
0,21 a
0,10 a
30 ab
7,07 a
0,20 ab
0,10 a
30 ab
6,01 a
0,16 b
0,10 a
62 a
7,64 a
0,26 a
0,10 a
28 c
5,91 a
0,25 ab
0,11 a
33 bc
4,13 a
0,28 a
0,15 a
36 bc
4,90 a
0,26 a
0,13 a
38 b
4,84 a
0,17 b
0,11 a
83
1216
29
346
200
0,05% colchicina +
polinizacin dirigida
0,05% colchicina +
polinizacin libre
0,1% colchicina +
polinizacin dirigida
0,1% colchicina +
polinizacin libre
Testigo
345
639
554
792
88 a
5,23 a
0,30 a
0,13 a
L. purpurea
200
1
Valores seguidos con letras iguales no presentan diferencias significativas con P<0.05
segn Test de diferencia entre dos proporciones.
2
Valores seguidos con letras iguales no presentas diferencias significativas con P<0.05
segn Intervalo de confianza.
Para
29
En
tetraploides
inducidos
por
colchicina
en
Eustoma
grandiflorum
El parmetro k
30
Los efectos sobre la tasa de desarrollo han sido descritos por (HANCOCK,
1997) y seala que existe una disminucin de la velocidad de crecimiento
como consecuencia de un aumento en la duracin del ciclo celular. Esto no
parece ser universal, pues en otras especies con distintos niveles de ploidia,
los tiempos de ciclo no varan significativamente (REES, 1972).
31
0,7
0,6
Germinacin, p (%)
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0
10
15
20
25
30
Tiempo, t (das)
Testigo
FIGURA 2.
32
1
0,9
0,8
Germinacin, p (%)
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0
10
15
20
25
30
Tiempo, t (das)
Testigo
FIGURA 3.
33
4.4.
Anlisis de ploidia:
34
35
Por otro lado (GRANT, 1989) seala que los poliploides contienen mucha
duplicacin de material gentico en los ncleos, pueden tolerar, a menudo, la
prdida de uno o ms pares de cromosomas. Esto lleva a series poliploides
modificadas que terminan con lo que se ha denominado como reduccin de
la poliploidia, lo que puede explicar que solo se logra encontrar individuos
mixaploides.
36
La
intensidad
de
la
fluorescencia
esta
correlacionada
37
38
200
RN1
RN2
160
counts
120
80
40
0
0
200
400
600
800
1000
FL 2 DAPI
50
RN1
40
counts
30
20
10
0
0
200
400
600
800
1000
FL 2 DAPI
39
Lo que nos indica que las plantas duplicadas exitosamente, se puede haber
debido a un proceso de autopolinizacion. Sin embargo, esto contrastara con
la tendencia de la especie a la autoimcompatibilidad, que presenta la
especie. (MANSUR et al., 2004).
40
41
5.
CONCLUSIONES
42
6.
RESUMEN
43
7. ABSTRACT
44
8.
LITERATURA CITADA
45
Mxico,
46
GRAU, J. 1992. Eine neue Art der Gattung Leucocoryne (Alliaceae) aus
Mittelchile. Mitt. Bot. Staatssamml 30: 431 437.
GRIESBACH, R. J.; BHAT, R. N. 1990. Colchicine-induced polyploidy in
Eustoma grandiflorum. HortScience 25(10): 1284-1286.
HALINAR, J. C. 1990. Polyploidy and unreduced gametes. The Daylily
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Reunin Nacional de Botnica. Santiago, del 16 al 19 de octubre de
1991. Chile. pp 85.
47
48
ANEXOS
49
50
51
52
Genotipo
Dosis de
colchicina
Tipo de
polinizacin
Numero
total de
semillas
Plantas
obtenidas
L. spp.
(Alcones)
0.05
Dirigida
83
L. spp.
(Alcones)
0.05
Libre
1216
13
L. spp.
(Alcones)
0.1
Dirigida
29
L. spp.
(Alcones)
0.1
Libre
346
L. spp.
(Alcones)
Testigo
Libre
L. purpurea
0.05
L. purpurea
Plantas
analizadas
Plantas
diploides 2n
5 (100%)
50
16
14 (87,5%)
200
36
5 (100%)
Dirigida
345
19
2 (66,7%)
0.05
Libre
639
103
3 (50%)
L. purpurea
0.1
Dirigida
554
111
66
46 (69,7%)
L. purpurea
0.1
Libre
792
131
33
18 (54,5%)
L. purpurea
Testigo
Libre
200
21
5 (100%)
Plantas
Tetraploides
4n
3 (50%)
2 (6%)
53
CUADRO 8.
Genotipo
Dosis de
colchicina
Tipo de
polinizacin
Plantas
Plantas
Plan
Numero
Plantas
Triploides Tetraploides hexap
total de Plantas
4n
bulbos analizadas diploides 2n 3n
6n
L. purpurea
0.05
Dirigida
18
10
10 (100%)
L. purpurea
0.05
Libre
61
50
46 (92%)
L. purpurea
0.1
Dirigida
32
21
21 (100%)
L. purpurea
0.1
Libre
48
39
35 (89,7%)
L. purpurea
Testigo
Libre
17
5 (100%)
1 (2%)
1 (2%)
2 (5,15%)
1(