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LABORATORIO DE BIOQUMICA

SOLUCIONES Y BUFFERES

LABORATORIO DE BIOQUMICA

PRCTICA No.0
SOLUCIONES ACUOSAS
Es pertinente que los estudiantes que van a cursar el laboratorio de bioqumica deben
manejar conceptos bsicos como lo son preparacin de soluciones y bferes. Es por ello que se ha
establecido un periodo de prcticas en donde el estudiante logre retomar estos conocimientos que
(en principio) fueron adquiridos en los primeros semestres. Se pretende que el estudiante adquiera
soltura en la resolucin de los problemas, as como desarrollo en aspectos abstractos de los
mismos. Se considera esencial el manejo de conceptos como: mol, nmero de Avogadro,
molaridad, normalidad, molalidad, % p/v, % v/v, % p/p, constante de equilibrio, pH, pKa, bferes.
A continuacin se presentan una buena cantidad de ejercicios recomendados. Cabe decir,
que con la resolucin de estos ejercicios no es suficiente para considerar el alcance de un manejo
adecuado de los conceptos, es importante que el estudiante refuerce el conocimiento con textos
que aparecen en la seccin de bibliografa.

1.- Disoluciones acuosas


1. Cuntos gramos de NaOH slido se requieren para preparar 500 ml de una disolucin 40
mM? Expresar el resultado es N, g/l y %p/v.
2. Cuntos gramos de H2O se requieren para disolver 150g de NaCl para producir una
solucin al 20% p/p?
3. Hallar el volumen de una disolucin 0,4N de H2SO4 que contiene 2,5g del cido en
cuestin.
4. Cuntos ml de una disolucin de 10M de NaOH se necesitan para preparar 5ml de una
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disolucin 2x10 pM?
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5. Explicar qu hacer para preparar 4x10 L de una disolucin de NaCl 0,2M preparando
primero una disolucin madre 1M (100ml).
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6. Se toman 2x10 nl de una disolucin KNO3 2x10 pM y se aade agua hasta 10ml, se
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agita y se vuelve a tomar 1ml y se aaden 4x10 picolitros de H2O. De esta ltima se
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toman 5x10 ml y se le agregan 9,5 ml de agua. Calcular la concentracin final.
7. Cul es la molaridad del etanol puro? La densidad del etanol es 0.789 g/ml y el PM es
46,07 g/mol. Cul es la molaridad del agua pura?.
8. Se disponen de 20 ml de una disolucin de HCl 5M, a sta se le aaden 15ml de agua
destilada, luego se toman 15 ml y se colocan en un cilindro graduado. Posteriormente a
una nueva disolucin de HCl 2M (43ml) se le aaden 100 ml de agua; de all se toman 15
ml y se vierten en el cilindro que contena la solucin anterior. Cul es la concentracin de
la disolucin resultante?
9. Una solucin contiene 15 g de CaCl2 en un volumen total de 190 ml. Expresar la
concentracin de esta solucin en (a) g / l, (b) %(p/v), (c) mg %, (d) M y (e) osmolaridad.

2.- cidos y bases pH, constante de disociacin, titulacin


1. Cul es:
a.- La concentracin de iones H+
b.- pH

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c.- concentracin de iones OHd.- pOH
de una solucin 0,001 M de HCl.
+

2. Calcular: (a) [H ], (b) [OH ], (c) pH y (d) pOH de la disolucin obtenida despus de aadir
100ml de NaOH 0,2 M a 150 ml de H2SO4 0,4 M.
3. Calcular el pH y el pOH de una disolucin obtenida por la adicin de 0.2 g de KOH slido a
1,5 l de HCl 0,02 M.
4. Cuntos ml de H2SO4 0,12 M se requieren para neutralizar exactamente la mitad de los
iones OH que hay en 500 ml de NaOH 0,18 N?.
5. El cido dbil HA, est disociado en un 2,4% en una disolucin 0,22 M. Calcular (a) la Ka,
(b) el pH, (c) la cantidad de KOH 0,1 N requerida para neutralizar 550 ml de la disolucin
del cido y el nmero de protones en 550 ml de la disolucin.
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6. El Ka de un cido dbil HA es 1,6x10 Cules son (a) el pH y (b) el grado de ionizacin


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del cido en una disolucin 10 M? (c) Calcular el pKa y el pKb.
7. Calcular los valores correspondientes y dibujar la curva de valoracin de 500 ml de un
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cido dbil HA, 0,1 M con KOH 0,1 M. Ka = 10 .
+

8. Cul es la concentracin final de H y el pH de una disolucin obtenida al mezclar 250 ml


de cido ctrico 0,1 M con 300 ml de KOH 0,1 M? Los pKa son 3,06; 4,74 y 5,40.
9. El H2SO4 concentrado tiene un 96 % de H2SO4 en peso y una densidad de 1,84 g / ml.
Calcular el volumen del cido concentrado requerido para preparar (a) 750 ml de H2SO4 1
N, (b) 600 ml de H2SO4 1 M, (c) 1000 g de una solucin de H2SO4 diluido del 12 % p/p, (d)
una solucin de un litro que tenga 6,5 equivalentes por litro y (e) una solucin diluida de
H2SO4 de pH 3,8.
10. El HCI concentrado tiene un 37,5 % de HCI en peso y una densidad de 1,19 g / ml. (a)
Calcular la molaridad del cido concentrado.
11. Calcular la molalidad del NaOH slido. PM 40 g/mol.

3.- Soluciones bufferes


1. A 100 ml de cido actico 0,3 M cuyo pKa es 4,74 se le aaden 15 milimoles de NaOH.
Determnese el pH final. Considerara usted esta mezcla un buffer?. A que pH esta
mezcla presentara su capacidad mxima de tamponamiento?
2. HEPES (N-2-hidroxietilpiperazin-N`-2-etanosulfonico) es un buffer orgnico zwitterinico,
se utiliza ampliamente en cultivos celulares, en gran parte porque es uno de los mejores
bferes para mantener el pH fisiolgico, a pesar de los cambios de concentracin de
dixido de carbono (producido por la respiracin celular) en comparacin con los bferes
de bicarbonato, que tambin son utilizados en cultivos celulares. La disociacin del agua
disminuye con la cada de la temperatura, pero las constantes de disociacin (pKa) de
muchos otros bferes no cambian mucho con la temperatura. HEPES es como el agua que
en su disociacin disminuye a medida que la temperatura disminuye. Esto hace del HEPES
un agente ms eficaz para mantener la estructura y la funcin de enzimas a bajas
temperaturas.

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Dicho esto prepare 800 ml de una solucin tampn pH 7,3; 200 mM a partir de la sal
HEPES (PM 238,51 g/mol y pKa 7,5) y NaOH (PM 40 g/mol).
3. Preparar un litro de una solucin buffer actico-acetato 0,2 M de pH 4 a partir de una
solucin de acetato de sodio 0,5 M y una solucin de cido actico 1 M pKa 4,7.
4. Se tiene 100 ml de una solucin 0,1 M de Tris-HCl pH 8,1. Cul sera el pH resultante si a
dicha solucin se le agregase 3 ml de HCl 0,5 M?. Cul sera el pH de la misma solucin
si se le agregase 3 mg de NaOH? PM 40 g/mol.
5. Cuando se mezclaron 100 ml de cido actico 0,1 M con 50 ml de acetato de sodio 0,1 M
se obtuvo una solucin cuyo pH fue de 4,44. Se desea calcular la constante de disociacin
de este cido.
6. Tris es el nombre abreviado del compuesto orgnico conocido como tris (hidroximetil)
aminometano, de frmula (HOCH2)3CNH2. Es una amina primaria, con la reactividad tpica,
por ejemplo la condensacin con aldehdos y el establecimiento de un equilibrio cido-base
(responsable de su capacidad tamponante). El Tris tiene un pKa de 8,06, lo que le aporta
capacidad tamponante efectiva en un intervalo de pH entre 7,0 y 9,2.
La forma de uso ms frecuente se llama Tris base (es la forma bsica, no ionizada, de la
amina); en ocasiones se utiliza tambin la forma cida o hidrocloruro (Tris-HCl). Para
ajustar el buffer a un pH especfico se puede usar OH- para Tris-HCl o H+ para Tris base, o
bien mezclar dos disoluciones de Tris-HCl y Tris base hasta que el pH sea el deseado. El
resultado es equivalente en los 3 casos, pero para conseguir la concentracin esperada de
buffer debe tenerse en cuenta que las masas moleculares de las formas bsica y cida
(hidrocloruro) son diferentes.

La denominacin Tris-HCl, que se usa habitualmente para los bferes, no indica que el
buffer se haya preparado con el hidrocloruro de Tris, sino que se puede haber preparado
con Tris base y la cantidad precisa de cido clorhdrico para ajustar el pH al valor deseado.
Como alternativa, por ejemplo, un buffer Tris-Gly est preparado con Tris base y glicina
suficiente para ajustar el pH (el contrain en este caso, en lugar de cloruro, ser la forma
aninica de la glicina).
Prepare 300 ml de un buffer Tris-HCl 50 mM, pH 9, a partir de la sal Tris base (121, 14
g/mol) empleando adems una solucin de HCl 1 M.
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7. A 200 ml de CH3COOH 0,25 M cuya Ka es 1,82x10 M se le aaden 150 ml de una


solucin de NaOH 0,2 M. Determine el pH de esta solucin.
8. Un buffer contiene cido actico 0,1 M y acetato de sodio 0,1 M. Calclese el pH despus
de la adicin de 3 ml de HCl 25 mM a 10 ml de esta solucin.

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9. A partir de una solucin 200 mM de cido actico y acetato de sodio 0,2 M cunto
debera agregar de uno y otro para preparar 100 ml de un buffer actico acetato 0,2 M pH
4, pH 5, pH 5,6? Cunto debera pesar de acetato de sodio para preparar la solucin
indicada inicialmente? Frmula: C2H3O2Na.
10. Se pesan 27,8 g de fosfato de sodio monobsico (NaH2PO4) y se mezclan con 1000 ml de
agua. Posteriormente se pesan 53,65 g de fosfato de sodio dibsico (Na2HPO4) en 1000
ml. Qu cantidad debera agregar de una solucin y de otra para obtener 200 ml de un
buffer 200 mM pH 6,8? Cul sera el pH de la solucin si mezclo 33 ml de NaH2PO4 y 67
ml de Na2HPO4? pKa1 2,12; pKa2 7,2; pKa3 12,32.
11. MOPS es el nombre comn para el compuesto 2-N-morfolino propanosulfnico, un buffer
cido introducido por Bueno et al. en la dcada de los 60. Es un anlogo estructural de
MES. Su estructura qumica contiene un anillo de morfolina. Con un pKa de 7.2, MOPS es
un excelente buffer para muchos sistemas biolgicos prximo a pH neutro

Ahora bien, prepare un buffer 20 mM 500 ml pH 7 partiendo de una solucin de 1 M del


mismo compuesto y 500 ml de una solucin 0,5 M de NaOH. PM. 190,15 g/mol.
12. Describir la preparacin de 3 l de buffer acetato 0,2 M pH 5 partiendo de CH3COO
+
Na 3H2O slido y una disolucin de 1M de cido actico.

13. Describir la preparacin de 40 litros de buffer fosfato 0,02 M, pH 6,9; partiendo de (a) una
disolucin de H3PO4 2M y una de KOH 1M; (b) una disolucin de H3PO4 0,8M y NaOH
slido; (c) una disolucin comercial concentrada (14,8M) de H3PO4 y KOH 1M; (d)
disoluciones 1M de KH2PO4 y Na2HPO4; (e) KH2PO4 y K2HPO4 slidos.
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14. Considerando un buffer que contiene HA 10 M y A 10 M a un pH = pKa = 5.


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+
Supongamos que se aaden 5x10 moles de H a 1 litro de buffer. Calcular: (a) las
concentraciones exactas de A y de HA y el pH de la disolucin despus de aadir el HCl.
(b) La concentracin de A y HA y el pH de la disolucin suponiendo que el incremento en
+
la cantidad de HA (y la disminucin de A-) es igual a la cantidad de H aadido.
15. Una reaccin catalizada enzimticamente, se analiz en un buffer Tris 0,2 M pH 7,8. Como
producto de la reaccin, se formaron 0,03 moles/litro de protones. (a) Cul era la
+
proporcin de Tris /Tris (cido conjugado/base conjugada) al principio de la reaccin? (b)
+
Cules eran las concentraciones de Tris y Tris al principio de la reaccin? (c) Cules
+
fueron las concentraciones de Tris y Tris al final de la reaccin? (d) Cul fue el pH final
de la reaccin? (e) Cul sera el pH final si no hubiese habido buffer? El pKa del Tris es
8,1.
16. Se tiene 1l de disolucin de fosfato potsico KH2PO4 0,5 M pH 7 qu volumen de cido o
base ser necesario para llevarlo a pH 13?. Se dispone de HCl 2N, NaOH 6N y NaOH 3N.

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BIBLIOGRAFA:

Segel, Irwin. 1982. Clculos de Bioqumica. Editorial Acribia.

Bohinski, Robert. 1994. Bioqumica. 5ta edicin. Editorial Addison Wesley.

Voet & Voet. 2004. Bioqumica. Tercera edicin. Editorial Mdica


Panamericana.

Cox, M. y Nelson, D. 2005. Principios de bioqumica (Lehninger).Cuarta


edicin. Editorial Omega.