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FURB FUNDAO UNIVERSIDADE DE BLUMENAU

CENTRO DE CINCIAS DA SADE


DEPARTAMENTO DE ODONTOLOGIA
Acadmico: Antnio Guarrilha Junior
Monira Pioli
Talita Grahl
Victor Henrique lucas
Disciplina: Bioquimica
Curso: Odontologia - I semestre
Professora: Ana L. B. Zeni

Relatrio de
Aulas
Prticas

SUMRIO
1. pH e indicadores................................................................pag.04
1.1 Introduo.........................................................................pag.04
1.2 Materiais e mtodos.........................................................pag.04
1.3 Resultados e discusses.................................................pag.05
1

1.4 Concluses........................................................................pag.07
2. Carboidratos.......................................................................pag.09
2.1 Introduo.........................................................................pag.09
2.2 Materiais e mtodos.........................................................pag.10
2.3 Resultados e discusses................................................pag.11
2.4 Concluses.......................................................................pag.14
3. Lipdios................................................................................pag.15
3.1 Introduo..........................................................................pag.15
3.2 Materiais e mtodos..........................................................pag.15
3.3 Resultados e discusses.................................................pag.16
3.4 Concluses........................................................................pag.18
4. Protenas.............................................................................pag.19
4.1 Introduo...........................................................................pag.19
4.2 Materiais e mtodos..........................................................pag.19
4.3
Resultados
e
discusses..................................................pag.20
4.4 Concluses.........................................................................pag.2
3
5. Aminocidos.......................................................................pag.24
5.1 Introduo..........................................................................pag.24
5.2 Materiais e mtodos..........................................................pag.25
5.3
Resultados
e
discusses..................................................pag.25
5.4 Concluses.........................................................................pag.2
6
6. Enzimas...............................................................................pag.27
6.1 Introduo..........................................................................pag.27
6.2 Materiais e mtodos..........................................................pag.27
6.3
Resultados
e
discusses..................................................pag.28
6.4 Concluses.........................................................................pag.3
0
Referncias...............................................................................pag.31

1. pH E INDICADORES
1.1.

INTRODUO

O Potencial Hidrogeninico (pH) consiste num ndice que indica a


acidez,

neutralidade

ou

alcalinidade

de

um

meio

qualquer.

As substncias em geral, podem ser caracterizadas pelo seu valor de pH,


sendo que este determinado pela concentrao de ons de Hidrognio (H +).
Quanto menor o pH de uma substncia, maior a concentrao de ons H + e
menor a concentrao de ons OH-.
o pH de uma soluo aquosa pode ser medido aproximadamente
usando-se vrios corantes indicadores como, litmus, fenolftalena e
fenol vermelho, os quais sofrem transformaes coloridas sempre que
um prton dissocia-se da molcula dos mesmos.
(LEHNINGER, NELSON E COX, 1993, pg. 69)

Na aula prtica de pH e indicadores foram realizados experimentos


como objetivo de determinar o pH de amostras mediante uso de indicadores e
produzir um indicador a partir do repolho roxo.
Relevantes observaes notadas nas experincias foram os resultados
de acidez e alcalinidade das varias substancias medidas, onde um pH acima
de 7 tido como bsico e abaixo de 7 como cido sendo que a medida 7
representa sua neutralidade.

1.2 MATERIAIS E MTODOS


Nesta determinada aula prtica foi usado diversos materiais, dos quais
sero citados a seguir:
a)

Indicadores: tornassol, fenolftalena, papel universal, pHmetro e

substrato retirado do repolho roxo.


b)
Solues: NaOH, HCl, H2O, CH3COOH, NH4OH e uma soluo
de livre escolha, entre coca cola, detergente, caf, suco de fruta, xampu, ch
e amnia, no qual optamos pelo uso da coca cola.
c)
Materiais laboratoriais: tubos de ensaio, estante, Becker, folhas de
gaze, vidro relgio, fogareiro com bico de buzo, pipeta.
Para a execuo das experincias foram

realizados

diversos

procedimentos.
Em um primeiro momento foi retirada uma pequena poro de repolho
roxo, adicionada a um Becker e fervido at liberar a cor. A soluo foi posta em
repouso por um perodo de 30 minutos aproximadamente e filtrada em um
pedao de gaze logo aps esse perodo, sendo usado como indicador de pH,
onde em solues cidas adquiri de colorao vermelha e solues bsicas
colorao de azul a verde.
Em procedimentos seguintes foram identificados cidos e bases atravs
do uso de indicadores:
I foram dispostos em vidro relgio pedaos de papel indicador
tornassol e papel universal, onde foram gotejadas com auxilio de pipetas as
solues escolhidas. Observou-se a colorao dos papeis para obteno e
registro dos resultados.
II atravs do indicador lquido fenolftalena de 2 a 5 gotas adicionadas
a 2 ml das solues em um tubo de ensaio, observou-se a colorao adquirida
pelas solues para registro dos resultado.
III usando o indicador do repolho roxo, foi repetido todo o
procedimento anterior.
IV utilizando a Coca-Cola como soluo obtivemos o resultado de pH
da mesma, atravs do uso do pHmetro.
1.3 RESULTADOS E DISCUES
Experincia - I
Soluo

Colorao
tornassol

do

papel Colorao

do

papel

universal
4

NaOH
Azul (base)
13
HCl
Vermelho (cido)
0
H2O
Vermelho (cido)
4
CH3COOH
Vermelho (cido)
5
NH4OH
Azul (base)
9
As substancias que obtiveram colorao vermelha no papel tornassol e
numerao abaixo de 7 no papel

universal (HCl, H 2O, CH3COOH), so

consideradas com pH cido por apresentarem maior concentrao de ins de


hidrognio H+. J as substancias que obtiveram colorao azul no papel
tornassol e numerao maior que 7 no papel universal (NaOH, NH 4OH), so
consideradas bases, portanto apresentam maior concentrao de OH -.
Experincia - II
SOLUCO

Colorao da fenolftalena

NaOH

Vermelho (8,0 - 10,0)

HCl

Incolor

H2O

Incolor

CH3COOH

Incolor

NH4OH

Vermelho (8,o 10,0)

Neste experimento foi usado um indicador, a fenolftalena, onde sua


caracterstica em soluo acida incolor, e em soluo bsica vermelho (8,0
10,0). Desta forma as solues HCl, H2O e CH3COOH so Bsicas, pois o
resultado foi Incolor, e as solues NaOH e NH4OH colorao vermelha,
soluo acida.
Experincia III
SOLUCO
NaOH
HCl
H2O
CH3COOH
NH4OH

Colorao do repolho roxo


Verde
Rosa forte
Roxo
Rosa
Verde
5

Nesta experincia, utilizamos como indicador o repolho roxo. Analisando


os resultados dos nveis de acidez, observa-se que as solues onde a
colorao foi verde, era bsicas, e as solues em rosa e rox,o indica um pH
mais acido.
Experincia - IV
SOLUCAO
Coca-cola

Papel Tornassol
Vermelho (Acido)

Papel Universal
2

Observamos que a Coca-cola uma substancia acida, pois a colorao


indicada no papel tornassol vermelho e no papel universal pH 2 indicaram sua
acidez.
Medimos atravs do pHmetro as solues NaOH, HCl, H2O, CH3COOH,
NH4OH.
SOLUCAO
NaOH
HCl
H2O
CH3 COOH
NH4OH

pHmetro
12.6
0
4.0
2.5
9.8

O pHmetro ou medidor de pH um aparelho usado para medio de pH,


mais preciso. Nessas solues medidas, as acidas foram HCl, H2O e
CH3COOH, sendo que o pH foi menor que 7, e as bsicas NaOH e NH4OH,
pH maior que 7.
1.4 CONCLUSO
Observando as experincia realizadas, e os resultados em cada uma
delas, podemos concluir que a medio de pH sendo atravs do papel
tornassol ou universal observando a colorao destes, ou tambm com o uso
do pHmetro para ter uma medio de forma mais precisa, assim, identificar as
solues acida ou bsicas, importante para a manuteno da vida, como
6

Lehninger, Nelson e Cox (1995), citam que,

o pH afeta a estrutura e a

atividade das macromolculas biolgicas como, por exemplo, a atividade


cataltica das enzimas.
O pH tambm usado para identificar doenas, atravs da medio dos
nveis de pH do sangue e urina.

2. COLORAO DE CARBOIDRATOS
2.1. Introduo
7

Os carboidratos so as biomolculas mais abundantes na natureza,


apresentam como frmula geral: [C(H2O)]n, da o nome "carboidrato", ou
"hidratos de carbono" e

so molculas que desempenham uma ampla

variedade de funes, entre elas: fonte de energia, reserva de energia,


estrutural e matria prima para a biossntese de outras biomolculas.
Os animais podem sintetizar alguns carboidratos a partir de
gorduras e protenas, porm a maior parte dos carboidratos animais
originam-se fundamentalmente, de plantas
(MURRAY, GRANNER, MAYES, RODWELL, 2002, pg. 149)

Os

carboidratos

podem

ser classificados em

monossacardeos,

dissacardeos, oligossacardeos e polissacardeos.


Os monossacardeos, tambm chamados de acares simples,
consistem numa s unidade cetnica. O mais abundante o acar de seis
carbonos D-glucose; o monossacardeo fundamental de onde muitos so
derivados. A D-glucose o principal combustvel para a maioria dos
organismos e o monmero primrio bsico dos polissacardeos mais
abundantes, tais como o amido e a celulose.
So carboidratos ditos glicosdeos, pois so formados a partir da ligao
de 2 monossacardeos atravs de ligaes especiais denominadas "Ligaes
glicosdicas". A ligao glicosdica ocorre entre o carbono anomrico de um
monossacardeo e qualquer outro carbono do monossacardeo seguinte,
atravs de suas hidroxilas e com a sada de uma molcula de gua.
So os carboidratos complexos, macromolculas formadas por milhares
de unidades monossacardicas ligadas entre si por ligaes glicosdicas, unidas
em longas cadeias lineares ou ramificadas. Os polissacardeos possuem duas
funes biolgicas principais, como forma armazenadora de combustvel e
como elementos estruturais.(Harper, pg,149)
Na aula prtica de colorao de carboidratos, tivemos como objetivo
identificar atravs de vrios reagentes os hidratos de carbono nas substncias,
os hidratos de carbono redutores e desvendar qual a soluo problema
proposta nas experincias.
2.2. Materiais e mtodos

Vrios materiais foram utilizados nestes experimentos:


a) reagentes: soluo de hidratos de carbono, reagentes de Molisch
(naftol 5% em lcool), cido sulfrico concentrado, reagentes de Lugol (5g de
iodo + 10g de iodeto de potssio em 10ml de agua), reagente de Benedict e
reativos de Barfoed.
b) solues: gua, glicose, sacarose, amido, frutose, lactose, matose e
uma soluo problema.
c) vidrarias e instrumentais: tubos de ensaio, estante, fogareiro com bico
de buzo, pipetas, conta gotas.
Cada experincia teve seus prprios passos e mtodos:
I. No primeiro momento foi realizada experincia usando-se o reagente
de Molisch. Foram preparados 5 tubos com solues diferentes e
acrescentados 2 gotas de reativo de Molisch. No passo seguinte foi agitado os
tubos e adicionado 2ml de cido sulfrico concentrado em cada tubo, para
observar e interpretar os resultados obtidos.
II. No segundo experimento foi utilizado o reagente de Lugol. Foram
preparados 6 tubos com solues de agua, glicose, sacarose, amido, pequena
frao de algodo com agua e a soluo problema, e acrescentado 2 gotas de
reagente de Lugol. Foi observado, aquecido, resfriado e novamente observado
para podermos obter os resultados positivos nas solues que continham
amido.
III. Identificao de hidratos de carbono redutores foi nosso passo
seguinte, onde foram preparados 7 tubos de ensaio com gua, glicose, frutose,
sacarose, amido, lactose e a soluo problema. Adicionados aos tubos o
reagente de Benedict. Aquecidos por mais ou menos 5 minutos em banhomaria fervente, foram observados e analisados os resultados para carboidratos
redutores.
IV. Agora fazendo uma reao com Barfoed, para monossacardeos
redutores, foram utilizados 5 tubos com glicose, maltose, amido, gua destilada
e a soluo problema. A 2,5ml do reativo de Barfoed foi adicionado 1ml de cada
soluo a ser testada. Fervendo durante 1 minuto em banho maria, todas as
solues foram comparadas com a do tubo branco que continha gua
destilada. Os resultados revelaram os monossacardeos redutores.
9

V. Em um ltimo experimento fizemos a inverso da sacarose. Em um


tubo de ensaio foi pipetado 5ml de soluo de sacarose e acrescentado 0,5ml
de HCl. Fervido por 2 minutos deixamos reservado. O HCl rompe a ligao
glicosdica, assim separamos a glicose e a frutose.
Para termos a certeza do rompimento das molculas em outro tubo de
ensaio pipetamos 2ml do reativo de Benedict. Adicionando 0,5ml da sacarose
j invertida, fervemos e observamos o aparecimento de um precipitado
vermelho-tijolo.( Roteiro de aulas prticas).
2.3 Resultados e discusses
Experimento I:
Para a reao com o reagente e Molisch tivemos os seguintes resultado:
a) Para I ml de gua o resultado foi negativo.
b) Para I ml de glicose 0,I M, o resultado foi positivo.
c) Para I ml de sacarose 0,I M, o resultado foi positivo.
d) Para I ml de amido 0,I %, o resultado foi positivo.
e) Na soluo problema o resultado final tambm foi positivo.
Os cidos concentrados causa a desidratao de monossacardeos. As
pentoses do como produto final o furfural, e as hexoses o hidroximetilfurfural.
Estes derivados se condensam com o alfa-naftol,

originando produtos

coloridos. Se um oligossacardeo ou polissacardeo estiver presente, ele


primeiro hidrolisado em seus monossacardeos constituintes, que so ento
desidratados. Essa reao considerada geral para os carboidratos, e no
especfica pois se processa com outras substncias.
O surgimento de um anel de colorao lils estvel indica que houve
formao de furfurais, revelando a presena de acares na amostra. Assim
nas solues onde o resultado foi positivo obteve-se este anel revelando estes
aucares.(roteiro de aulas prticas).
Experimento II
10

Resultados para reao com Lugol:


a) I ml de agua, resultado negativo.
b) I ml de glicose 0,I M, resultado negativo.
c) I ml de sacarose 0,I M, resultado negativo.
d) I ml de amido 0,I %, resultado positivo (colorao azul)
e) Soluo problema, resultado negativo.
f) pequena frao de algodo com I ml de gua, resultado negativo.
Como o Lugol no reage com monossacardeos, dissacardeos e
celuloses, nas reaes com agua, glicose, sacarose, e tambm na soluo os
resultados foram negativos. Na presena do amido a colorao se tornou azul,
dando um resultado positivo, sabendo-se que este reagente que a base de
iodo reage com polissacardeos.
Desta maneira obtivemos a primeira resposta para nossa soluo
problema, onde descobrimos que ao grupo de polissacardeos ela no
pertencia.(roteiro de aulas prticas)
Experimento III
Resultados na identificao de hidratos de carbono redutores com
reagente de Benedict:
a) I ml de gua, resultado negativo (colorao azul).
b) I ml de glicose 0,I M, resultado positivo (colorao telha).
c) I ml de frutose 0,I M, resultado positivo (colorao telha).
d) I ml de sacarose 0,I M, resultado negativo (colorao azul).
e) I ml de amido 0,I%, resultado negativo (colorao azul).
f) I ml de lactose 0,I M, resultado positivo ( colorao telha).
g) soluo problema 1ml, resultado positivo ( colorao telha).
Os carboidratos redutores possuem grupos aldedos ou cetonas livres ou
potencialmente livres, sofrendo oxidao em soluo alcalina de ons metlicos
11

como o cobre. Os ons cpricos (Cu++) so reduzidos pela carbonila dos


carboidratos a ons cuprosos(Cu+) formando o xido cuproso, que tem cor
vermelho tijolo. (intermed99.vilabol.uol.com.br/bioquimica2.html).
O carboidratos redutores so monossacardeos e somente alguns
dissacardeos. A sacarose que um dissacardeo, no sofre oxidao porque
possui dois carbonos anomricos envolvidos na ligao glicosdica.
Obtivemos a nossa segunda descoberta referente a soluo problema,
pois como o resultado foi positivo para a reao dando a colorao telha, agora
sabemos que ou ela um monossacardeo ou um .(roteiro de aulas praticas).
Experimento IV
Reao de Barfoed, resultados:
a) soluo de glicose I%, resultado positivo ( monossacardeo redutor).
b) soluo de maltose I%, resultado negativo.
c) soluo de amido I%, resultado negativo.
d) gua destilada, resultado negativo.
e) soluo problema, resultado positivo (monossacardeo redutor).
Este teste foi parecido com o teste anterior. A diferena que, como o
reagente de Barfoed fracamente cido apenas os monossacardeos
obtiveram o resultado positivo para aucares redutores.
Com esse teste descobrimos o resultado final para nossa soluo
problema, a qual tendo o resultado positivo ficou claro que ela pertence ao
grupo de monossacardeos redutores. Para adiantar nossa experincia nos foi
dito qual era a soluo. Assim ficamos sabendo que a soluo era de frutose.
(roteiro de aulas praticas).
Experimento V
Inverso da sacarose, resultados:

12

a) quando adicionamos HCl a sacarose obtivemos o rompimento da


ligao glicosdica. Assim a glicose e a frutose ficaram separadas.
b) no segundo passo, adicionamos soluo de sacarose j invertida o
reagente de Benedict, o qual obtivemos resultado positivo para aucares
redutores, pois a frutose e a glicose separadas so monossacardeos, assim
nossa colorao com o reagente de Benedict fico cor telha.
A sacarose por si s no um acar redutor, pois possui dois carbonos
anomricos em sua ligao glicosdica. Quando atravs do HCl, rompemos
essa ligao, obtivemos a glicose e a frutose separadas as quais, desta forma
so aucares redutores.
2.4 Concluses
Ao trmino de todas nossas experincias, podemos concluir que
obtivemos os resultados desejados no incio.
Conseguimos atravs do Molisch identificar a presena de carboidratos
nas substncias, com o Lugol identificar a presena de amido, com o Benedict
os aucares redutores (mono e dissacardeos), com o Barfoed os
monossacardeos redutores, e ao final obtivemos a inverso da sacarose
atravs da adio de HCl na mesma.
Esta aula prtica facilitou em grande escala o entendimento sobre
monossacardeos, dissacardeos e polissacardeos, seus tipos de ligao, e as
redues oxidativas nos aucares.
Todos os experimentos ocorreram de uma forma tranquila, sem grandes
problemas, onde conseguimos fazer os testes uma vez s, sem repeties.
3 LIPDIOS
3.1 Introduo
Os lipdios, tambm chamados de gorduras, so biomolculas orgnicas
compostas, principalmente, por molculas de hidrognio, oxignio, carbono.
Fazem parte ainda da composio dos lipdios outros elementos como, por
13

exemplo, o fsforo. Os lipdios possuem a caracterstica de serem insolveis na


gua. Porm, so solveis nos solventes orgnicos (lcool, ter, benzina, etc).
Os lipdios so constituintes importantes da dieta no s pelos seus
elevados valores energticos mas tambm pelas vitaminas
lipossolveis e cidos graxos essenciais contidos na gordura dos
alimentos naturais.
(MURRAY, GRANNER, MAYES, RODWELL, 2002, pg. 160)

Os lipdios possuem vrias funes como isolantes eltricos, valores


energticos, composio de algumas membranas celulares, isolantes trmicos
e facilitao de algumas reaes qumicas no organismo como: hormnios
sexuais, vitaminas lipossolveis (vitaminas A, K, D e E) e as prostaglandinas.
Segundo Mayes (ibid, pg. 160), os lipdios so classificados em simples,
que seriam as gorduras e as ceras, e os complexos, que so os fosfolipdios,
glicolipdios, sulfolipdios e os aminolipdios.
A aula prtica de lipdios teve como objetivo, observar a solubilidade dos
lipdios, observar a formao de sabes e por ltimo, observar mtodos
qualitativos de caracterizao de lipdios importantes para os organismos vivos.
3.2 Materiais e mtodos
Os materiais usados nos testes foram:
a) reagentes: lecitina, clorofrmio, gua, reativo de Hbl, etanol e NaOh
b) solues: cido olico, cido esterico.
c) vidrarias e instrumentais: tubos de ensaio, esptula, conta gotas,
fogareiro com bico de buzo e algodo.
Mtodos utilizados:
I. no teste de solubilidade foram adicionados a 2 tubos de ensaio uma
ponta de esptula de lecitina. No tubo n 1 foi adicionado gua e no tubo n 2
adicionamos clorofrmio. Observando e analisando os tubos anotamos a
solubilidade ou no de cada substncia testada.
II. no segundo teste, fizemos a diferenciao entre cidos graxos
saturados e insaturados onde distribumos os reagentes em 4 tubos. Um tubo
com clorofrmio, outro com cido olico, outro com cido esterico e outro com
lecitina e clorofrmio. A seguir, adicionamos aos 4 tubos, uma gota de reativo
de Hbl, onde agitamos e observamos as reaes, assim prosseguimos
14

adicionando sempre uma gota at que chegasse a marca de 5 gotas, onde


obtivemos os resultados de saturaes e insaturaes.
III. no ltimo teste fizemos a saponificao de cidos graxos. Em um
tubo de ensaio que j continha 1 esptula de lipdio, acrescentamos 2 ml de
NaOH 10N, e 10 ml de etanol absoluto. Fechamos o tubo com algodo e
misturamos bem as solues.
O prximo passo foi botar em banho maria, fervente onde agitamos
ocasionalmente at a formao de uma pasta. Depois de todo este processo
obtivemos o produto desejado da saponificao.(Roteiro de aulas prticas)
3.3 Resultados e discusses
Experimento I
Reagente

TUBO 1

TUBO 2

Lecitina

1 ponta de esptula

1 ponta de esptula

Clorofrmio

----

2 ml

gua

2 ml

----

a) no teste com o tubo n1, a lecitina no solubilizou com a gua.


b) no teste com o tubo n2, a lecitina solubilizou com o clorofrmio.
Os lipdios devido a sua natureza apolar so geralmente insolveis em
gua solveis em solventes apolares. Neste experimente podemos concluir
esta afirmao com os resultados obtidos acima.(roteiro de aula prtica).
Experimento II
SOLUES
Padro

de

TUBO 1

TUBO 2

TUBO 3

TUBO 4

RESULTADOS

2ml

----

----

1,5 ml

Saturado

----

2ml

----

----

Insaturado

cor
(clorofrmio)
Sol.

cido

15

olico
Sol.

cido

----

----

2ml

----

Saturado

----

----

----

0,5ml

Insaturado

esterico
Lecitina

Os cidos graxos insaturados adicionam o iodo as ligaes duplas


tornando-se saturados. O vermelho rseo que se observa no tubo que contm
somente clorofrmio a cor caracterstica das solues em que o iodo se
encontra na forma livre.
Na experincia notamos que as solues onde se perde a cor e o tom de
rosa fica cada vez mais fraco, so as solues ditas insaturadas, que foi o caso
do cido olico e da lecitina. No cido esterico e no clorofrmio por manter a
cor forte, determinou-se solues saturadas. Este teste foi feito com o reativo
de Hbl, que tem por caracterstica tons de rosa forte para saturados e tons
fracos para insaturados.( Roteiro de aulas prticas)
Experimento III
Neste experimento obtivemos os seguintes resultados:
Com os lipdios complexos hidrolisados em meio alcalino no processo de
saponificao obtivemos a separao do glicerol do cido graxo, onde o
glicerol a parte liquida e o cido graxo a pasta de sabo obtida.
3.4 Concluses
Podemos concluir no final dos testes que os cidos graxos na sua
maioria so insolveis em gua, e podem ser saturados ou no. No final
descobrimos o que acontece no mistrio da saponificao, onde nossos avs
faziam e ns olhvamos e no entendamos o que acontecia. Hoje temos a
explicao cientifica deste processo que se chama hidrolise de lipdeos
complexos em meio alcalino.
16

Os resultados que obtivemos foram os esperados e tudo ocorreu de


forma tranquila. Foram experimentos rpidos, realizados em uma hora mais ou
menos. Conclumos que os lipdios so muito importantes para a energia das
nossas clulas entre outras funes, e tambm que so eles os grandes
responsveis por as pessoas engordarem, sendo armazenados em nosso
tecido adiposo.

4. CARACTERIZAO DE PROTENAS
4.1 INTRODUO
As so compostos orgnicos de alto peso molecular, formadas pelo
encadeamento de aminocidos. Representam cerca do 70% do peso seco da
clula sendo, portanto, o composto orgnico mais abundante de matria viva.
Tem papel tambm na nossa informao gentica, expressa como
protenas.
Para cada protena existe um segmento de DNA (um gene) que
guarda a informao, especificando sua sequncia de aminocidos
(LEHNINGER, NELSON, COX , 1995, pg. 99)

O Objetivo da aula prtica de caracterizao de protenas, foi o de


realizar diversos experimentos com a finalidade de se observar a desnaturao
das protenas atravs de diversos mtodos, sendo eles por ao do calor, por

17

ao de cidos e lcalis fortes, por reao com metais pesados, por reao
com reagentes alcalides ou por ao de solventes orgnicos.
4.2 MATERIAIS E MTODOS
Na execuo destes experimentos foram usados os seguintes materiais:
d) Protena: albumina bovina.
e) Solues reagentes: HCl (cido clordrico) concentrado, NaOH 12N
(hidrxo de sdio), soluo diluda de CuSO 4(sulfato de cobre) a
0,5%, soluo diluda de FeCl3(percloreto frrico) a 0,5%, soluo
diluda de acetato de chumbo a 1%, soluo diluda de cido pcrico
a 0,25%, soluo de cido tricloroactico a 10%, acetona e butanol.
f) Materiais laboratoriais: tubos de ensaio, estante, pipeta, bico de
Bunsen.
O mtodo aplicado para a obteno dos devidos resultados se deu por
meio de atividades prticas.
A primeira atividade organizada foi a de observao da desnaturao de
2 ml da soluo da protena pela ao do calor, aquecendo-a diretamente na
chama.
A segunda, por reao de cidos e lcalis fortes, foi realizada com a
adio de 2 ml de soluo de albumina bovina, cuidadosamente, em um tubo
de ensaio contendo HCl concentrado e em um segundo tudo contendo NaOH
12N.
Em uma terceira prtica, por reao de metais pesados, foram
preparados 3 tubos de ensaio contendo 2 ml de soluo de albumina bovina
em cada um. No primeiro tubo, foi gotejado soluo diluda de CuSO 4(sulfato
de cobre) a 0,5% at ocorrer a precipitao. No segundo tubo, foi realizado o
mesmo procedimento, porm, com a soluo diluda de

FeCl 3(percloreto

frrico) a 0,5%. E no terceiro tubo o procedimento se deu da mesma maneira


anterior, no entanto, com a soluo diluda de acetato de chumbo a 1%.
Na quarta prtica a desnaturo foi dada por reagentes alcalides, com
o preparo de 2 tubos de ensaio contendo 2 ml de soluo de albumina bovina.
Adicionando ao primeiro tubo, por meio de gotejamento lento, soluo de
cido pprico a 0,25%, e ao segundo tubo, foi realizado de mesma maneira, no
entanto, com a soluo de cido tricloroactico a 10%, ambos at que um
excesso de reagente seja adicionado.
18

A quinta e ltima atividade foi realizada para a observao da


desnaturao por ao de solventes orgnicos, onde foi adicionado a um
primeiro tubo 2 ml de acetona, e a outro tudo 2 ml de butanol e logo aps
acrescentado 2 ml de soluo de albumina bovina e homogenizado cada um
dos tubos, observando a intensidade de precipitao de cada tubo.
4.3 RESULTADOS E DISCUSSES
Experincia I
Com a experincia obtivemos a formao de um cogulo branco no
fundo do tubo de ensaio, formado por protena desnaturada.
Essa desnaturao se d pela quebra das diversas ligaes que existem
na protena, podendo ser das ligaes inicas, pontes de hidrognio dentre
outras existentes nas estruturas secundrias, tercirias ou quaternrias.
As

protenas

possuem

uma

estrutura

tridimensional

(conformao) bem definida, da qual dependem fundamentalmente


suas propriedades fsicas, qumicas e biolgicas. Essa estrutura
relativamente sensvel ao do calor, que causa desorganizao
das cadeias peptdicas, com conseqente alterao conformacional.
Esse fenmeno recebe o nome de desnaturao, e altera as
estruturas quaternria, terciria e secundria da protena sem afetar
sua estrutura primria.
(FREITAS
DIAS,

AUGUSTO

NEVES,

Site:

http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/pre
cipitacao_proteinas.htm, acesso: 13 de novembro de 2011, as 18:28)

Experincia II
Durante este procedimento, obtivemos 2 resultados destintos, nos quais
foi observado uma mudana considervel de consistncia e de cor.
No primeiro tubo, contendo HCl, foi observado, alm da mudana de
consistncia e cor, o surgimento de um solvente e um soluto ao fundo do tubo.
J no segundo tubo, contendo NaOH 12N, a protena aps o
procedimento apresentou solidificao total alm da mudana de colorao.
Experincia III
Neste experimento foi possvel observar que a albumina bovina ao entrar
em contato com a soluo de CuSO 4 a 0,5% se solidifica e apresenta uma
mudana de cor (esbranquiada), enquanto no segundo tubo com uma soluo
19

de FeCl3 a 0,5% ocorreu a presena de soluto em pouca quantidade e solvente


em grande quantidade; e em um terceiro tubo com acetato de chumbo foi
observado apenas uma mudana na colorao da mistura, de incolor para
branca.
Isso por que os cations de metais pesados formam um precipitado
insolvel, com isso a carga lquida sobre a protena negativa, favorecendo a
interao dos ctions provenientes do sal.
Esse precipitado se torna mais intenso quando o pH esta acima do pI
(ponto isoeltrico), ou seja, no primeiro tubo o pH estava bem acima do pI, no
segundo tubo j estava mais a baixo do que no primeiro e no terceiro tubo o pH
se encontrava mais baixo que o pI.
Experincia IV
Com este experimento foi possvel observar que ao gotejar cido pcrico
a 0,25% em uma soluo de albumina bovina, a mistura apresenta uma
mudana de colorao com presena de partculas de soluto e mudana de
consistncia.
Enquanto que em um segundo tubo, ao adicionar o cido tricloroactico
a 10% o preparado muda sua colorao de incolor para levemente
esbranquiado e muda tambm sua consistncia.
Quando comparada com a experincia III, ocorre a precipitao abaixo
do

ponto

isoeltrico.

Segundo

Augusto

Neves

(http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/precipitacao
_proteinas.htm) a precipitao ocorre abaixo do pI da protena por que a carga
lquida da molcula positiva, fazendo com que os nions provenientes dos
cidos interajam com maior facilidade com a molcula de protena.
Experincia V
No seguinte experimento obtivemos resultados semelhante, com
mudanas de cor e consistncia em ambos os tubos, porm no tubo que
continha acetona, observamos leve mudana de cor e consistncia, enquanto
que no tubo contendo butanol foi de facil percepo uma mudana mais
acentuada de colorao do que de consistncia.
Essa reao ocorre devido ao baixo valor de constante dieltrica dos
solventes orgnicos utilizados, fazendo com que a interao protena-protena
20

tenha maior aproveitamento do que o poder de solvatao da gua, fazendo


com que a protena precipite-se.
4.4 CONCLUSO
Vimos que em nosso cotidiano realizamos desnaturao de protenas
sem nos darmos conta, como no simples ato de cozinhar um ovo, fazendo com
que a clara do ovo se torne uma substncia branca e slida.
Concluimos por meio das realizaes que so varias as maneiras de
promover a precipitao de protenas, podendo ser atingindo seu ponto
isoeltrico, como no caso de metais pesados. Dentre outras maneiras que
influenciam na propriedade fsica da protena a temperatura que diminui a
solubilidade da protena e a ao de cidos, bases, sais e solventes orgnicos
com os quais foram realizados os experimentos.
Foi possvel compreender tambm que a desnaturao pode ser
reversvel ou irreversvel, onde solues desnaturadas por ao de extremos
de pH, calor ou reagentes desnaturantes podem recuperar no s a sua forma
nativa como tambm sua atividade biolgica, atavs do processo de
desnaturao, separando a soluo de protena e os reagentes desnaturantes,
fazendo com que a soluo proteica retorne as condies iniciais.

5. TITULAO DE AMINOCIDO

21

5.1 INTRODUO

Um aminocido uma molcula orgnica formada por tomos de


carbono, hidrognio, oxignio, e nitrognio unidos entre si de maneira
caracterstica. Os aminocidos so divididos em quatro partes: o grupo amina
(NH2), grupo carboxlico (COOH), hidrognio, carbono alfa (todas essas partes
se ligam a ele), e um radical caracterstico de cada aminocido. Os
aminocidos se unem atravs de ligaes peptdicas, formando as protenas.
Para que as clulas possam produzir suas protenas, elas precisam de
aminocidos, que podem ser obtidos a partir da alimentao ou serem
fabricados pelo prprio organismo.
Uma soluo tampo, soluo tamponada ou simplesmente tampo
aquela soluo capaz de manter aproximadamente constante o valor do seu
pH quando adicionado ela um cido ou base ou quando uma diluio
ocorre, atravs da doao de prtons, e os aminocidos possuem esta funo
tampo.
As enzimas que catalisam as reaes celulares e muitas das
molculas sobre as quais elas agempossuem grupos ionizveis com
valores de pKa caractersticos. Os grupos aminoprotonados ( - NH3) e
os grupos carboxila dos aminocidos e os grupos fosfatos dos
nucleotdeos, por exemplo, funcionam como cidos fracos;[...] A
constncia do pH conseguida primariamente atravs da existncia
de tampes biolgicos: estes so misturas de cidosfracos e suas
bases conjugadas
(LEHNINGER, NELSON, COX, 1995, pg. 71)

A titulao simplesmente a adio ou remoo gradual de prtons de


uma determinada substncia e nesta aula prtica foi utilizado este
procedimento com o objetivo de mudar o pH da soluo de glicina com o intuito
de observar as curvas de titulao da glicina, atravs da perda de prtons do
grupo carboxlico (COOH), como relatam Lehninger, Nelson e Cox (1995) onde
cada molcula de base que adicionada na soluo de glicina, resulta na
perda de um prton deste aminocido.
22

5.2 MATERIAIS E MTODOS

Para a execuo do referido procedimento foram utilizados os seguintes


materiais:
a) aminocido: glicina
b) soluo reagente: NaOH
c) materiais laboratoriais: bureta, bquer, pHmetro e pipeta.

O mtodo utilizado atravs desta atividade prtica foi pipetar 10 ml de


soluo de glicina em um bquer e medir seu pH e anot-lo e logo aps, por
intermdio da bureta, acrescentar 0,5 ml de soluo de NaOH e aferir o pH e
novamente e anot-lo, repetindo o procedimento quantas vezes fossem
necessiro, com fins de acompanhar a mudana de pH e observar a curva de
titulao da soluo de glicina e poder aferir sua constante de dissociao (pK)
e assim poder calcular o ponto isoeltrico (pI) da soluo.
Devido a glicina apresentar funo de tampo, ou seja, possuir um grupo
cido capaz de doar prtons quando em contato com a base, que no nosso
caso foi o NaOH, fez com que o processo se extendesse por um tempo maior.

5.3 RESULTADOS E DISCUSSES

23

pK1 = 2.17 pI = 9,99 pK2 = 12,17


Como podemos observar, na literatura o pK 1 da glicina 2,3 enquanto
que o pK2 9,6 , no entanto na nossa atividade os pKs no foram exatos com
os da literatura. Isso pode ocorrer por que a glicina possui dois grupos
ionizveis com capacidade tamponante: -COOH/-COO - em pH cido e -NH3+/NH2 em pH alcalino e duas zonas de tamponamento entre os pHs 1,3 e 3,3
(dependente do grupo carboxila) e entre os pHs 8,6 e 10,6 (dependente do
grupamento amino).

5.4 CONCLUSO

Atravs

da

experincia

realizada

foi

possvel

concluirmos

que

dependendo do meio em que se encontram, os aminocidos podem receber ou


doar eltrons atuando assim como cidos (na forma protonado, podendo doar
prtons), neutros (com a forma protonada e a forma receptora de prtons em
equilbrio) e base (base conjugada do cido correspondente, ou seja, perdeu
prtons e agora receptora deles).

24

6.ENZIMAS Amilase e Invertase


6.1 INTRODUO
Enzimas so protenas, estimulam reaes qumicas essenciais para a
vida. Catalisam centenas de reaes que ocorrem no metabolismo, sendo a
catalise essencial para o funcionamento dos organismos em tempo apropriado .
Sem catalise as reaes qumicas necessrias para digerir alimentos,
contrao de msculos ou enviar impulsos nervosos no ocorreria em
velocidade util. A sua principal caracterstica a especialidade com o substrato,
cada substrato possui uma enzima especifica, que associados se encaixam
como chave e fechadura.
A maioria das enzimas so protenas, com exceo de um
pequeno grupo de molculas de RNA com propriedades catalticas,
todas as enzimas so protenas. A sua atividade cataltica depende da
integridade da sua conformao protica nativa. Essa atividade
cataltica geralmente se perde caso uma enzima seja desnaturada ou
dissociada em subunidades. Assim as estruturas preoteicas primaria,
secundaria, terciria e quaternria das enzimas so essenciais para o
exerccio da atividade cataltica.
(LEHNINGER, NELSON, COX, 1995, pg. 99)

Na aula pratica de enzimas, amilase salivar, o principal objetivo era


observar atravs dos experimentos, as reaes e resultados verificando a
presena de acar redutor e amido.

6.2 MATERIAIS E MTODOS


Neste experimento, Especificidade Enzimtica, utilizamos os seguintes
materiais:Materiais laboratoriais: Tubos de ensaio, proveta, pipetas, bquer,
clice, funil, tela de amianto, gase e bico de bunsen.
Solues: 2 ml de saliva (alunos), invertase, sacarose, amido, maltoses,
glicose e frutose.
25

a)

Reagentes: reagente Benedict e reagente Lugol.

Iniciando o experimento, 2ml de saliva foi diluda na poro de 1:10.


Aps, em quatro tubos de ensaio, identificados em tudo A, B, C e D, foram
adicionados as seguintes solues:
I.

2ml de Invertase + 2ml de Sacarose 0,1M;

II.

2ml de Invertase + 2ml de Amido 0,1%

III.

2ml de Amilase Salivar + 2ml de Sacarose 0,1M

IV.

2ml de Amilase Salivar + 2ml de Amido 0,1%

Em seguida, 15 minutos de incubao a 40 OC, foi dividido o volume dos


tubos B e D em duas pores: B1/B2 e D1/D2. Verificou-se a presena de
Amido nas amostras B1 e D1 usando 3 gotas de Lugol, aps resfriamento.
Entao verificamos a presena de Acucar Redutor nas amostras B2, D2, A e C,
adicionando 1ml de reagente Benedict aquecimento.

6.3RESULTADOS E DISCUSSES

ENZIMA

SUBSTRATO

PRODUTORES

Reao

Invertase

Sacarose

Gli/Fru (Benedict)

(Positivo) Telha

B1

Invertase

Amido

(Lugol)

(Negativo) Turvo

B2

Invertase

Amido

(Benedict)

(Negativo)

Amilase

Sacarose

(Benedict)

(Negativo) Azul

D1

Amilase

Amido

Maltoses (Lugol)

(Negativo)

D2

Amilase

Amido

Maltoses

(Negativo)

(Benedict)

Diferente

Azul positivo para o reagente Lugol e Telha positivo para o reagente


Benedict. Com o reagente Lugol verifica-se a presena de Amido e com
reagente Benedict presena de acar redutor.
26

No tubo A, observamos os seguintes resultados: a Invertase (Enzima)


quebra a Sacarose (Substrato) e forma o produto, acar redutor, adicionando
Benedict, observamos a presena de acares. Invertase + Sacarose = Glicose
+ Frutose. Resultado positivo, cor telha.
No tubo B1, Invertase no hidrolisa amido, usando Lugol, foi detectado a
presena de Amido. Invertase + Amido = Amido. Resultado positivo, turvo.
No tubo B2, Invertase e Amido com reagente Benedict, o Amido no se
transformou em acar redutor. Invertase + Amido = Amido. Resultado
negativo, sem a presena de amido.
No tubo C, Amilase e Sacarose com reagente Benedict, a amilase salivar
no hidrolisa a Sacarose, desta forma no ocorreu a quebra da Sacarose em
acar redutor. Amilase + Sacarose = Sacarose. Resultado negativo, cor azul.
No tubo D1, Amilase e Amido com reagente Lugol, formao do produto
Maltose, a amilase salivar quebrou o amido, e no foi identificada a presena
do amido. Amilase + Amido = Maltose. Resultado negativo.
No tubo D2, Amilase e amido com o reagente Benedict, formando
maltose como produto, o resultado esperado seria negativo, pois o amido no
se transforma em acar redutor. Porem em nossa soluo, o resultado obtido
foi diferente do esperado, positivo, no degradou todo o amido. Podem ter
ocorrido diversos fatores que influenciaram no resultado. O pH, agitao, pouco
amilase como j citado, pouca enzima ou desnaturao.
A atividade enzimtica afetada pelo valor do Ph. As
enzimas tem um pH timo ou uma regio de pH timo no qual sua
atividade mxima; em valores de pH maiores ou menores sua
atividade diminui.
(LEHNINGER, NELSON, COX, 1995, pg. 163)

Apesar de a amilase salivar degradar amido em maltoses (fato


observado no teste de Lugol) a quantidade de maltoses produzidas, no foi
capaz de efetuar um resultado negativo com Benedict.
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A especificidade enzimtica uma caracterstica importante, cada


enzima atua e se encaixa no substrato de modo que os centros ativos
coincidem perfeitamente.
Especificidade a habilidade da enzima, de discriminar
entre dois substratos competidores. Se o sitio ativo de uma enzima
tem grupos funcionais arranjados de forma tima para formar uma
variedade de interaes fracas com um dado substrato no estado de
transio, a enzima no seria capaz de interagir to bem com
qualquer outro substrato.
(LEHNINGER, NELSON, COX , 1995, pg. 153)

6.4CONCLUSO
Com os experimentos realizados nesta aula pratica, observamos as
reaes e seus resultados, onde a Amilase degrada o amido em maltose, a
invertase degrada a sacarose em acar redutor.
Ao colocarmos a amilase em contato com a sacarose e a invertase em
contato com o amido elas no foram degradadas, ou seja, a enzima no era
especifica sobre o substrato. As reaes que o resultado foi positivo, as
enzimas atuaram com o substrato.
Em um caso especifico no tubo D2 obtivemos um resultado diferente do
esperado, que era positivo. H diversos fatores que poderiam ter influenciado
na reao como o pH, agitao, pouca amilase, pouca enzima ou
desnaturao.

Referncias

Lehninger, A.L.; Nelson, D. L.; Cox, M. M. Princpios de bioqumica.


So Paulo: Sarvier, 1995.
28

Universidade Federal de Santa Catarina. Departamento de qumica. O


mundo das protenas. Disponvel em:
www.qmc.ufsc.br/qmcweb/artigos/protenas.html . Acesso em 14/11/ 2011 as
14:30.
Universidade Estadual Paulista. Departamento de cincias
farmacuticas. Experimentos de bioqumica. Disponvel em:
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/precipitacao_
proteinas.htm . Acesso em 14/11/2011 as 10:25.
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2003/con
st_microorg/carboidratos.htm.
http://intermed99.vilabol.uol.com.br/bioquimica2.html.
http://www.todabiologia.com/dicionario/lipidios.htm.

29