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I.
1. Objetivo:
Construo da curva padro de acar redutor (glicose) para
determinar a
concentrao de glicose produzida pela reao da invertase.
2. Introduo:
As reaes qumicas conduzidas pelos organismos vivos so, na
sua maioria, catalisadas por enzimas, tornando a velocidade das
mesmas compatveis com as exigncias metablicas.
Para esse estudo, utilizaremos a invertase da levedura que
catalisa a hidrlise da sacarose para produzir glicose e frutose.
Conhecendo-se por colorimetria a quantidade de acar redutor
formado por clculo estequiomtrico, pode-se determinar a
quantidade correspondente de sacarose hidrolisada.
Podemos determinar a afinidade de determinada enzima pelo
substrato da reao catasilada atravs de seu Km (concentrao de
substrato necessria para atingir metade da velocidade mxima da
reao catalisada pela enzima em questo).
A unio da enzima com o substrato forma o complexo enzimasubstrato, reao reversvel, podendo voltar a liberar a enzima e o
substrato ou liberando a enzima na mesma proporo em que foi
utilizada mais o produto.
Michaelis e Menten, desenvolveram ento a expresso:
Metodologia:
Indentificar os tubos; o primeiro com a letra B, o segundo com o
nmero 1, o terceiro com nmero 2, e assim por diante at o nmero
5. Adicionar gua aos tubos de ensaio. No tubo B foi adicionado 1ml
de gua, no tubo 1 foi adicionado 0,8ml, no tubo seguinte 0,6ml, o
tubo 3 adicionou-se 0,4ml, no tubo 4 foi adicionado 0,2ml, e no ultimo
tubo no foi adicionada a gua.
Em seguida, adicionou-se glicose em cada um dos tubos, com
exceo do tubo de ensaio B. No tubo 1 foi adicionado 0,2ml, no 2 foi
0,4ml, no 3 foi 0,6ml, no 4 foi 0,8ml, e no tubo 5 foi adicionado 1ml
de glicose. Logo depois foi adicionado 1ml de reativo de Somoggy em
todos os tubos. Aps essa parte da prtica, os tubos foram agitados e
levados ao banho-maria fervente (100C) por 10 minutos.
Aps o banho-maria, foi adicionado 1ml de reativo de nelson em
todos os tubos de ensaio, e depois, 7ml de gua em cada um dos
tubos de ensaio.
Depois foi medida a absorbncia dos tubos no comprimento de onda
de 530nm. Foram encontrados os seguintes valores de absorbncia,
comeando pelo tubo B, 0,04; no tubo 1 foi 0,107; no tubo 2 foi
0,122; no tubo 3, 0,138; no tubo 4, 0,178; no tubo 5 foi 0,294.
Tubos
H2O
(ml)
Glicose
0,2mg\
ml (ml)
Reativ
o de
Somog
gy
1,0
1,0
0,8
0,2
1,0
0,6
0,4
1,0
0,4
0,6
1,0
Agitar
bem e
levar
ao
banho
-maria
ferven
te
(100
C) por
10
min.
Reati
vo de
Nelso
n
H2O
(ml)
Glico
se
(mg)
ABS
(530
nm)
1,0
7,0
0,04
1,0
7,0
0,10
7
1,0
7,0
0,12
2
1,0
7,0
0,13
8
4
0,2
0,8
1,0
1,0
7,0
0,17
8
1,0
1,0
1,0
7,0
0,29
4
5. Resultados:
II.
Objetivo:
Material:
Os mesmos utilizados nos experimentos anteriores.
3.
Metodologia:
Sacaro
se
0,4M
(ml)
Enzi
ma
(ml)
Agitar
bem e
levar
ao
banho
-maria
por 15
minut
os a
37C.
Reativ
o de
Somog
gy (ml)
B1
2,3
0,2
Reati
vo de
Nelso
n (ml)
H20
(ml)
1,0
5,5
1,8
0,2
0,5
1,0
5,5
B2
2,1
0,4
1,0
5,5
1,6
0.4
0,5
1,0
1,0
5,5
B3
1,7
0,8
1,0
1,0
5,5
1,2
0,8
0,5
1,0
1,0
5,5
B4
0,9
1,6
1,0
1,0
5,5
0,4
1,6
0,5
1,0
1,0
5,5
B5
0,5
2,0
1,0
2,0
0,5
1,0
1,0
1,0
1,0
Agitar
bem e
levar
ao
banhomaria
ferven
te
(100C
) por
10
minuto
s.
ABS
a
530
nm
0,32
2
0,40
4
0,44
1
0,50
2
0,55
7
4. Resultados:
1.
Tubo
[sacarose]
Atividade (ml\min)
0,008
0,0018
0,016
0,0024
0,032
0,0026
0,064
0,0030
0,080
0,0034