Determinacin

de

vitamina

por

el

mtodo

fotomtrico

con

de

2,4

dinitrofenilhidrazina.
Introduccin
El anlisis de compuestos naturales es importante tanto desde la perspectiva

de la

calidad del alimento (diferencias en relacin a variedades, zonas geogrficas, cambios

durante el procesamiento y almacenamiento, etc.) como para conocer sus caractersticas
nutricionales. El cido ascrbico es considerado un factor de control de calidad en los
alimentos, puesto que es una sustancia inestable bajo diferentes condiciones ambientales
(intensidad luminosa, temperatura, etc.) y su disponibilidad en un determinado alimento es
ndice de vida til dentro de un proceso de almacenamiento o tratamiento (1)
La determinacin de cido ascrbico es importante no solo desde el punto de vista
nutricional y de calidad, sino tambin como ndice de la eficiencia de la tcnica del
procesamiento en productos, tales como: jugos de frutas, pur, pasta de tomates, etc., en
los cuales, este compuesto se considera suficientemente resistente a los procesos
trmicos normales de coccin o esterilizacin y relativamente estable durante la
conservacin de productos elaborados en condiciones tcnicas apropiadas (temperaturas
reducidas, envases hermticos, etc.); ya que esta vitamina es muy sensible a diversas
formas de degradacin. Entre los numerosos factores que pueden influir en los
mecanismos degradativos se pueden citar la temperatura, la concentracin de azcar, el
pH, el oxgeno, las enzimas, los catalizadores metlicos, la concentracin inicial de cido
y la relacin cido ascrbico cido dehidroascrbico (su forma oxidada). Todos estos
factores estn relacionados con las tcnicas de proceso y con la composicin del
producto que se procese (2).
En esta prctica el mtodo utilizado para la determinacin de la vitamina C es
el mtodo fotomtrico con 2,4 dinitrofenilhidrazina el cual es de aplicacin
general siempre que la solucin problema contenga como mnimo 2g de
vitamina C por mililitro. La muestra problema utilizada fue jugo HIT de naranja
y a continuacin se describir paso a paso lo realizado en la prctica.

Materiales y mtodos
Equipo
Espectrofotmetro.
Reactivos y materiales.
Solucin de 2,6 diclorofenol -indofenol sdico
Solucin de cido oxlico 0.5%
Solucin de tiourea
Etanol absoluto
ter etlico
cido sulfrico al 85%
Solucin de 2,4 dinitrifenilhidrazina
cido ascrbico p.a
Balones volumtricos de 50ml, 25ml
Bao de hielo
Bao de mara.
Jugo de HIT de naranja
Descripcin del mtodo.
Se midi la cantidad de muestra cuya cantidad de vitamina C al final de la
determinacin este comprendida entre 25 g en 5 ml. Se llev a un baln
aforado de 50mm y se complet el volumen con cido oxlico.
Luego se procedi a realizar la oxidacin en la cual se tom una alcuota de
25ml de la muestra preparada anteriormente y se llev al embudo de
separacin en el cual se le agrego la Solucin de 2,4 dinitrifenilhidrazina has
oxidacin total (hasta que la solucin en el embudo se tornara de color
rosado). Se esper que pasaran dos minutos y luego se extrajo el exceso de 2,4
dinitrifenilhidrazina agregando 23ml de ter di-etlico, la fase acuosa que se
extrajo se pas a un baln de 50ml la fase que quedo en el embudo se lav dos
veces con 5 y 7.5 ml de cido oxlico luego se complet en volumen de la fase
extrada con cido oxlico has 50ml.
De las muestra prepara da se extrajeron 10ml de estas para el anlisis de la
muestra y 10 ml de estas para el anlisis del blando de la muestra a los cuales

se le adiciono un 5 gotas de de la solucin de tiourea, luego se le adiciono

2,5ml de solucin de (DNPH) pero solo al tubo que contiene los 10ml para el
anlisis de la muestra, al blanco de esta no, de aqu ambos se llevaron al bao
de mara (T=37C) por 3 horas, pasada las tres horas se sumergieron en bao
de hielo por 10 minutos, pasado estos al tubo que contiene la solucin del
blanco de la muestra se la agregaron 2,5ml de solucin de (DNPH), por ultimo
ambas soluciones se llevaron a un baln aforado e 25ml completando el
volumen con cido sulfrico al 25% y seguidamente hacer la lectura en el
espectrofotmetro.
Para la preparacin de la solucin patrn se realiz un procedimiento similar
pero este procedimiento no fue realizado por nuestro grupo as que solo de
este se tomaron los datos de las lecturas en el espectrofotmetro.
Clculos y resultados.
Clculos para la determinacin del volumen que se debe tomar de da la
muestra problema (HIT de naranja) para preparar la solucin a la cual se la va
a hacer la oxidacin.
Como el jugo HIT que tomamos para analizar tiene una concentracin de
naranjo del 1%, quiere decir que tiene 1mg por cada 10ml /100ml que es igual
a una concentracin de 0.01mg/ml y se quiere que quede en una
concentracin de 25g/10ml o lo que es lo mismo 2.5x10 -3mg/ml, y como la
queremos llevar a un volumen de 50ml:
Entonces tenemos que:
CONCENTACION #1 (C1) = 0.01mg/ml
Concentracin #2 (C2) = 2.5x10-3
Volumen # 2 (V2) = 50ml
Volumen #1 (V1)=?

V1= (2.25x10-3)x(50ml)/(0.01mg/ml)=12.5ml este es el volumen que se deba

tomar de jugo Hit para preparar la solucin que se va a realizar la oxidacin.
Miligramos de vitamina C
AM=absorbancia de la muestra.
AMBL=absorbancia del blanco de la muestra
AP= absorbancia del patrn

APBL= Absorbancia del Blanco patrn

R=g de vitamina C en los ml de la solucin patrn usados para la
concentracin.
AM=0.242
AMBL=0.046
AP= 0.080
APBL=0.023
R=26000g estos son los microgramos de vitamina C presentes en la solucin
patrn
g Vit. C =

AM AMBL
0.2420.046
xR=
x 26000 g=63102 g
AP APBL
0.0800.023

o lo que es igual

63.102mg de Vit C por cada 50ml de solucin.

Ahora como en la naranja hay 53.02mg de Vit. C por cada 100g de naranja y el
jugo hit solo tiene un porcentaje de naranja del 1% es decir que el jugo hit solo
contiene un 0.00053mg de Vit. C por cada 1ml de jugo.
ANALISIS DE RESULTADOS.
Se puede observar en los resultados obtenidos que el contenido de vitamina C
en la muestra analizada fue de 63.102mg por cada 50ml de solucin de la
muestra en este caso jugo HIT. Cabe resaltar que segn la etiquete del
producto el contenido de vitamina C es de un 0% por lo que podemos decir que
los resultados no fueron los esperados ya que la concentracin de naranja
utilizada en muy baja por ende la cantidad de vitamina C mucho ms baja.
Adems lo solucin patrn no fue realizada por nuestro grupo y de vital
importancia su preparacin ya que esta influya a la hora de realizar el clculo
de los g de Vit. C.

Conclusin.
Se logr llevar a cabo el procedimiento correctamente con un poco de
descontento a la hora de realizar el clculo, ya que la cantidad de Vit. C que
nos dio el valor fue bastante alto y mientras que la etiqueta del producto nos
dice que el valor es bastante bajo, por lo que no podemos decir si el mtodo es
confiable o no o tal vez, se cometieron mltiples errores a la hora de realizar el
procedimiento ms que todo en la parte de la preparacin de las diluciones,

pero si se logr aprender el fundamento de esta prctica y su importancia a la

hora de realizarle el anlisis a una determinada muestra de alimentos.

BIBLIOGRAFA
Skoog D. Holler j. Nieman T. Principios de Anlisis Instrumental, quinta edicin.
Mc Graw Hill. Espaa. 2001.
Rubinson K. Rubinson J. Anlisis Instrumental. Pearson educacin, S.A. 2001