BIOQUIMICA

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS 1
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE MEDICINA
E.A.P.TECNOLOGA MDICA-RADIOLOGA
TEMA: INFORME DE PRCTICA N1 FOTOCOLORIMETRA

CURSO: BIOQUMICA Y NUTRICIN
ALUMNOS:
15010453 GAMARRA YURIVILCA, JOS ANTONIO
15010454 GIL RODRIGUEZ, SILVANA MERCEDES
LIMA-PER
2015
INTRODUCCIN
La fotocolorimetra es un mtodo ptico de anlisis que mide la cantidad de luz
absorbida o transmitida por una sustancia coloreada, ya sea que se trate de
sustancias naturalmente coloreadas o que se han hecho de tal calidad
mediante reacciones qumicas adecuadas.
Si consideramos que cada molcula absorbe una determinada cantidad de luz,
la intensidad de la luz transmitida por una solucin disminuir en relacin con el
a aumento del nmero de molculas que se interpongan entre la fuente
luminosa y el observador. Este nmero vara de acuerdo a la concentracin del
soluto y al espesor del recipiente que contiene la solucin.
Se fundamenta en las leyes de Lambert y Beer:
La ley de Lambert dice: "Cuando un rayo de luz monocromtico (de una nica
longitud de onda) pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad
disminuye exponencialmente al aumentar la longitud del medio absorbente:
I = .l.c
La ley de Beer dice: "Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de

un medio absorbente su intensidad disminuye exponencialmente a medida que
aumenta la concentracin:
I = 2-Log %T
La unin de ambas leyes nos da la ley de Beer-Lambert:
El fotocolormetro lo que determina es la absorbancia o densidad ptica, que

es:
A = Log(Io/It)= .l.c = A = D.O. =2-Log %T
OBJETIVOS
Realizar anlisis cuantitativos utilizando la fotocolorimetra como
mtodo, as como la metodologa propia de esta tcnica.
Entender la ley de Lambert-Beer como mtodo para determinar la
absorbancia en funcin a la longitud que atraviesa el haz de luz y la
concentracin de la solucin coloreada.
Resaltar
la
importancia
de
esta
tcnica
para
calcular
la
concentracin de ciertas muestras.

Construir e interpretar la curva de calibraciny el factor de calibracin
en la determinacin de la concentracin.
Determinar la longitud de onda de mxima absorcin o lambda

mximo para soluciones coloreadas.
Representar las concentraciones y absorbancias en un papel
milimetrado y realizar la cuantificacin decla concentracin por
medio de dos mtodos: Mtodo de la curva estndar y el mtodo del
factor de calibracin.
PARTE EXPERIMENTAL
1.- Preparar la siguiente batera de tubos.
Solucin stock: Permanganato de potasio (KMnO 4) 10 mg%.
Tubos N
ml KMnO4
0,5
1.0
1.5
ml Aguanto destilada
Concentracin mg%
csp 5ml
4,5
3,5
1mg%
2mg%
3mg%
4mg%
mos la Concentracin mg%:

C1.V1 = Cf.Vf
TUBO N1
TUBO N2
C1.V1 = Cf.Vf
C1.V1 = Cf.Vf
10mg
TUBO
N3
%.0,5ml=Cf.5ml
10mg
TUBO
N4
%.1ml=Cf.5ml
UNIVERSIDAD
NACIONAL MAYOR
DE =
SAN
C1.V1 = Cf.Vf
C1.V1
Cf.VfMARCOS 5
10mg
%.1.5ml=Cf.5ml
10mg
%.2ml=Cf.5ml
a
ll
a
Leemos las absorbancias de los 4 tubos a las siguientes longitudes de

onda () 410 nm, 525 nm y 650 nm en el espectrofotmetro.
TABLA EXPERIMENTAL:
Tubos N
ml KMnO4
0,5
1.0
1.5
ml Aguanto destilada
Concentracin mg%
A410
csp 5ml
4,5
3,5
1mg%
2mg%
3mg%
4mg%
0,03
0,055
0,058
0,097
A525
0,139
0,260
0,405
0,556
A650
0,015
0,027
0,024
0,037
Fc[ ]
7,194
7,692
7,407
7,194
KMnO4(10mg%)
0.6
0.5
0.4
Curva de calibracin
0.3
0.2
0.1
0
0.5
2.
1.5
2.5
3.5
4.5
Con los datos obtenidos: Construir en un papel milimetrado las grficas de
absorbancias versus concentracin de KMnO 4 en las 3 longitudes de onda.
0.6
0.5
0.4
Tubo1
Tubo2
0.3
Tubo3
Tubo4
0.2
0.1
0
350
3.
400
450
500
550
600
650
700
Con las grficas elegir la longitud de onda ptima para el KMnO4
4.
En la grfica para el optimo representar la curva de calibracin.

Medir la absorbancia de
la
muestra problema haciendo la dilucin
apropiada para la muestra.

5. Obtener el Factor de calibracin (Fc) promedio de las soluciones estndares
de la curva de calibracin.
a)
Tubos N
Fc[ ]
a)
7,194
7,692
7,407
7,194
a)
Primero hallamos el factor de calibracin de cada uno de los tubos:

1 mg
Fc1=
= 7.194
0.139
2mg
Fc2=
= 7.692
0.260
3 mg
Fc3=
= 7.407
0.405
4 mg
Fc4=
= 7.194
0.556
b) Luego se utilizan los datos anteriores para hallar el factor de

calibracin promedio:
Fc=
7.194 +7.692+ 7.407+7.194

4
Fc= 7.375
6.
Calcular la concentracin de la muestra problema por los mtodos:

a) Grficamente, interpolando la absorbancia en la curva de calibracin.
b) Analticamente, multiplicando la absorbancia por el Fc promedio y el
factor de dilucin.
7.
Comparar ambas medidas y analizar los resultados.
RESULTADOS
El primer resultado que obtenemos es el de la Concentracin en mg%:

Tubos N
Concentracin mg%
2
1mg%
3
2mg%
4
3mg%
4mg%
Se obtuvo el Factor de calibracin de cada uno de los tubos:

Tubos N
1
2
3
4
Fc[ ]
7,194
7,692
7,407
7,194
Luego se establece el Factor de calibracin promedio:

7.194 +7.692+ 7.407+7.194
4
Fc= 7.375
Fc=
De la grfica de la curva de calibracin se obtuvo la longitud de mxima
absorcin o longitud de onda ptima = 525 nm.

Se determin la concentracin de la muestra problema mediante los dos
mtodos:
Mtodo Grfico: 39 mg%
Mtodo Analtico: 35.40 mg%
DISCUSIN DE RESULTADOS
El conocer el adecuado uso de los instrumentos del laboratorio, como

las pipetas, permiti conocer resultados dentro de lo esperado.
Los resultados de la concentracin de la muestra problema obetenidos

muestras un pequeo margen de error por defecto.
0
CONCLUSIONES
La fotocolorimetra es importante como mtodo procedimental
para hallar concentracin de soluciones coloreadas.
A mayor concentracin, menor transmitancia
mayor
absorbancia; A menor concentracin, mayor transmitancia y

menor absorbancia.
Se determin la longitud de onda ptima para el KMnO 4 es de
525nm.
CUESTIONARIO
1.- Hallar la longitud optima de lectura.

1
0.6
0.5
0.4
Tubo1
Tubo2
0.3
Tubo3
Tubo4
0.2
0.1
0
350
400
450
500
550
600
650
700
En la grfica de Absorbancia vs. Concentracin se observa que la longitud

ptima de lectura es 525nm., ya que la curva presenta una mayor elevacin en
comparacin con las otras.
2.-
Mencione la concentracin de la MP
por ambos mtodos (grfico y
analtico), Porqu son diferentes, explique.

MTODO ANALTICO
1. Absorvancia de la Muestra Problema (MP): 0.048.
2. Se busca determinar el factor de calibracin promedio:
a) Primero hallamos el factor de calibracin de cada uno de los
tubos:
1 mg
0.139
2mg
Fc2=
0.260
3 mg
Fc3=
0.405
4 mg
Fc4=
0.556
Fc1=
= 7.194
= 7.692
= 7.407
= 7.194

2
Tubos N
Fc[ ]
7,194
7,692
7,407
7,194
b)
b)
b)
Luego se utilizan los datos anteriores para hallar el factor de

calibracin promedio:
Fc=
7.194 +7.692+ 7.407+7.194

4
Fc= 7.375
[MP]=Fc.AbsMP.Fd
3. Se
aplica
la
siguiente frmula:
[MP]=Fc.AbsMP.Fd
[MP]= 7.375.0.048.100
[MP]= 35.40mg%
MTODO GRFICO
Este mtodo consiste en utilizar varios Standares de concentraciones

conocidas y progresivas para luego construir un grfico en un sistema de
coordenadas en el que se colocan las lecturas en las ordenadas (Eje Y)
y las concentraciones en las abscisas (Eje X).

En la recta obtenida (Funcin Lineal), se puede extrapolar la
Absorbancia o Densidad ptica de la muestra problema, hallando la
concentracin de la misma en el eje de las abscisas.
* Ubicaremos los datos en el grfico:
A525MP= 0.048
[MP]= X
3
KMnO4(10mg%)
Curva de calibracin
Al trazar la grfica ubicaremos a la [MP] en el punto 0.39.

4
[MP]0.39 mg
%.100
[MP]= 39 mg%
Son diferentes porque siempre se habla de un margen de error, adems

de que un mtodo puede ser ms preciso que otro.
3.- Hallar los %T cuando se conoce las absorbancias: A1 = 0.01
A2 = 0.1,
Hallar la Absorbancia cuando se conoce el % T siguientes: 1% T, 10 %T.

Hallar los %T:
*Cuando A1=0.01
* Frmula a utilizar: A1=2-Log
%T
Resolucin:
A1=2-Log %T
0.01=2-Log %T
*Cuando A2=0.1
%T
%T=97.7237221
Resolucin:
A2=2-Log %T
0.1=2-Log %T
Hallar la Absorbancia:
*Cuando %T= 1%T
%T= 79.43282347
Resolucin:
*Frmula a utilizar: A1=2-Log
A1=2-Log %T
%T
A1=2-Log 1%
A1=-Log(0.01)
A1=2
5
*Cuando %T= 10%T
Resolucin:
A2=2-Log %T
%T
A2=2-Log 10%
A2=-Log(0.1)
A2=1
4.-
Una solucin coloreada presenta una
Absorbancia de 0.450 en una cubeta de 2 cm, hallar la Absorbancia cuando

la sustancia se ha diluido 4 veces y se lee en una cubeta de 1 cm.
Frmula: Abs= .l.c

Primero hallamos el
coeficiente de
extincin molar:
Entonces, para la
nueva sustancia se
reemplaza el
coeficiente de
extincin molar:
Resolucin:
Abs= .l.c
0.0450= .2.1
= 0.225
A1=0.225.1.1/4
A1= 0.05625

6
BIBLIOGRAFA
1. http://es.slideshare.net/noheding/fotocolorimetria-42075186
2. http://roble.pntic.mec.es/~mbedmar/iesao/quimica/puntodel.htm
3. http://www.optek.com/es/Lambert_Beer_Law.asp
4. http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biolmol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf
5. http://www.buenastareas.com/ensayos/Practica-DeFotocolorimetria-Unmsm/232724.html

7

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Se fundamenta en las leyes de Lambert y Beer:

La ley de Beer dice: "Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS 3

La unin de ambas leyes nos da la ley de Beer-Lambert:

El fotocolormetro lo que determina es la absorbancia o densidad ptica, que

A = Log(Io/It)= .l.c = A = D.O. =2-Log %T

concentracin de ciertas muestras.

Determinar la longitud de onda de mxima absorcin o lambda

mos la Concentracin mg%:

Leemos las absorbancias de los 4 tubos a las siguientes longitudes de

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Con los datos obtenidos: Construir en un papel milimetrado las grficas de

absorbancias versus concentracin de KMnO 4 en las 3 longitudes de onda.

Con las grficas elegir la longitud de onda ptima para el KMnO4

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En la grfica para el optimo representar la curva de calibracin.

muestra problema haciendo la dilucin

apropiada para la muestra.

Primero hallamos el factor de calibracin de cada uno de los tubos:

b) Luego se utilizan los datos anteriores para hallar el factor de

7.194 +7.692+ 7.407+7.194

Calcular la concentracin de la muestra problema por los mtodos:

Comparar ambas medidas y analizar los resultados.

El primer resultado que obtenemos es el de la Concentracin en mg%:

Se obtuvo el Factor de calibracin de cada uno de los tubos:

Luego se establece el Factor de calibracin promedio:

De la grfica de la curva de calibracin se obtuvo la longitud de mxima

absorcin o longitud de onda ptima = 525 nm.

El conocer el adecuado uso de los instrumentos del laboratorio, como

Los resultados de la concentracin de la muestra problema obetenidos

absorbancia; A menor concentracin, mayor transmitancia y

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En la grfica de Absorbancia vs. Concentracin se observa que la longitud

por ambos mtodos (grfico y

analtico), Porqu son diferentes, explique.

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Luego se utilizan los datos anteriores para hallar el factor de

7.194 +7.692+ 7.407+7.194

Este mtodo consiste en utilizar varios Standares de concentraciones

y las concentraciones en las abscisas (Eje X).

Al trazar la grfica ubicaremos a la [MP] en el punto 0.39.

Son diferentes porque siempre se habla de un margen de error, adems

3.- Hallar los %T cuando se conoce las absorbancias: A1 = 0.01

Hallar la Absorbancia cuando se conoce el % T siguientes: 1% T, 10 %T.

*Cuando %T= 1%T

*Frmula a utilizar: A1=2-Log

*Cuando %T= 10%T

* Frmula a utilizar: A2=2-Log

Una solucin coloreada presenta una

Absorbancia de 0.450 en una cubeta de 2 cm, hallar la Absorbancia cuando

Frmula: Abs= .l.c

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