ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

CURSO:
BIOTECNOLOGA AMBIENTAL
DOCENTE:
PALOMINO CADENAS EDWIN
TTULO DEL INFORME:
DEGRADACIN DE HIDROCARBUROS MEDIANTE
ACTINOMICETOS APLICANDO BIOSOLVE
ALUMNOS:
-

ACUA PALACIOS BEATRIZ

DEXTRE COCHACHIN JHOSSELIN
OBISPO PADILLA YENY
OROPEZA CAMONES KELY
CHIROQUE HUAMN ALEXANDER

2014

DEGRADACIN DE HIDROCARBUROS MEDIANTE ACTINOMICETOS

APLICANDO BIOSOLE
I. INTRODUCCIN
En el siguiente informe explicaremos acerca del proceso microbiano de degradacin de
hidrocarburos en el suelo, y los factores que lo condicionan. Para ello, tomamos como
referencia un proyecto de investigacin donde se utiliz a los actinomicetos como
microorganismos degradadores.
Actualmente este proceso se viene llevando a cabo en 6 terrarios de madera con capacidad
para 100 kg de suelo, los cuales se encuentran instalados dentro de un invernadero. En primer
lugar, se forr la parte interna de los terrarios con plstico negro y luego se puso 5 cm grava en
sus bases. Despus se deposit en cada terrario, 100 kg de suelo mezclado con arena en
presencia de actinomicetos, y para mejorar la eficiencia de degradacin se aplic un
biosolvente. El proceso de degradacin es aerbico.
El principal objetivo de este proceso es lograr biorremediar en el ms corto tiempo, el
hidrocarburo presente en el suelo (aproximadamente 5 meses). Como ya se conoce, en toda
degradacin de hidrocarburos se libera como productos finales, CO2 y H2O.
No obstante, esperamos que este trabajo sirva de apoyo para comprender y valorar la
biorremediacin de suelos contaminados por hidrocarburos, y ms adelante poder aplicarlos
en nuestras experiencias profesionales.

II. OBJETIVOS

Identificar el microorganismo esencial en la Biorremediacin de hidrocarburos.

Identificar el prototipo a usar en la Biorremediacin de hidrocarburos.
Identificar los procesos y factores de la Biorremediacin de hidrocarburos.
Reconocer la importancia del Biosolve en el proceso de Biorremediacin de
hidrocarburos.

III. MARCO TERICO

3.1. BIODEGRADACIN DE HIDROCARBUROS
Numerosos microorganismos distribuidos en la naturaleza poseen la capacidad de utilizar
hidrocarburos como nica fuente de energa y carbono (alimento), por lo que la
utilizacin microbiana de hidrocarburos podra ser un mtodo vlido para la eliminacin de
los mismos en el ecosistema afectado (biorremediacin).

Ciertas especies de bacterias, hongos, actinomicetos y protozoos son los microorganismos

que tienen la capacidad degradativa, obteniendo los nutrientes por digestin, y la
importancia relativa de cada uno depende de las condiciones del medio.
Estos secretan enzimas digestivas, las cuales degradan molculas especficas,
desdoblndolas en compuestos simples y solubles que entran en las vas metablicas
normales de cada organismo.
La descomposicin es completa cuando los compuestos orgnicos son retornados al
ambiente en forma inorgnica o mineral, algunos de estos compuestos son degradados a
dixido de carbono (CO2) y agua, y otros son tomados por otros saprtrofos.
La biodegradacin de petrleo en los ecosistemas es compleja. Depende de las
caractersticas de la mezcla de hidrocarburos, de los factores ambientales que regulan la
actividad biolgica y de la naturaleza de la comunidad microbiana. Se ha visto que la tasa
de descomposicin es mayor para los hidrocarburos saturados, seguido por los aromticos
livianos, mientras que los aromticos de alto peso molecular exhiben tasas muy bajas de
descomposicin. No obstante este esquema no es universal.
Los efectos ecotxicos de un producto petrolfero (combustibles, aceites lubricantes, fluidos
hidrulicos, ceras, asfaltos, etc.), pueden ser muy graves por actuar en todos los niveles de
organizacin biolgica: desde los componentes subcelulares hasta los niveles superiores del
ecosistema.
La descomposicin enzimtica de algunos productos naturales como lignina, celulosa y
diferentes lpidos, es similar a la de ciertos contaminantes naturales o sintticos. Es en este
hecho en que est basada la importancia para la eliminacin de los contaminantes.
En ciertos hongos superiores se ha comprobado que el complejo enzimtico de las
ligninasas es eficiente en la degradacin de hidrocarburos aromticos y otros
contaminantes producidos por el hombre.

Tipos de degradacin de hidrocarburos

Degradacin aerbica
Degradacin de hidrocarburos alifticos en presencia de oxgeno:
Los hidrocarburos alifticos los podemos clasificar en alcanos, alquenos y alquilos
dependiendo de lo saturados que estn sus enlaces. Como norma general decir que
como ms insaturado sea una cadena carbonatada (ms dobles y triples enlaces) ms
difcil o lenta ser su degradacin. De igual manera los alcanos de cadena larga son ms
resistentes a la biodegradacin a medida que la longitud de su cadena aumenta. Cuando
alcanzan un peso molecular superior a 500 dejan de servir como fuente de carbono para
el crecimiento microbiano. En general tambin la presencia de ramificaciones reduce la
tasa de biodegradacin porque los tomos de carbono terciario y cuaternario interfieren
con los mecanismos de degradacin o lo bloquean totalmente.

Los microorganismos que utilizan hidrocarburos como sustrato deben de tener enzimas
denominada monooxigenasas que son dependientes de oxgeno. La mayora de los
microorganismos en teora si son capaces de sobrevivir en ese ambiente pueden
degradar sin ms problemas hidrocarburos de cadena larga.
Para que sea de fcil comprensin y sin entrar en demasiados detalles metablicos
podemos decir que para que los microorganismos puedan degradar alcanos primero
deben de oxidar con oxgeno el ltimo carbono de la molcula gracias al complejo
multienzimtico que no hacen ms que incorporar esta molcula de oxgeno. As se
obtiene un hidrocarburo con un grupo alcohol siendo as una molcula ms reactiva.
Mediante otras enzimas este grupo alcohol se oxida ms hasta grupo aldehdo y
finalmente carboxlico. As se obtiene una molcula similar a un cido graso y puede ser
degradado a acetil-CoA por b-oxidacin. Este proceso de oxidacin tambin puede darse
en carbonos no terminales dando lugar a dos cidos grasos que se procesarn por boxidacin. Todo este proceso se puede ver representado esquematizado en la imagen
de la izquierda.
Pero como deca aunque la mayora de microorganismos en teora sean capaces de
utilizar este mecanismo pocos pueden vivir en esas condiciones. Para hacerlo deben ser
capaces de vivir en un medio muy hidrfobo como es el petrleo. Por lo tanto para
colonizar las interfaces petrleo-agua tienen que variar sustentablemente la membrana.
Adems para introducir los hidrocarburos en la clula lo hacen va vescula. Por lo tanto
si hablamos de requerimientos genticos no solo es necesario el sistema monooxigenasa
sino otros genes que permitan variar la envoltura y formacin de esas vesculas. Por esta
razn son pocos las especias que puedan realizar esta biodegradacin. Sin duda la
especie con ms posibilidades y la ms estudiada en el campo es la pseudomona.

Degradacin de hidrocarburos aromticos en presencia de oxgeno:

En el caso de los hidrocarburos aromticos, el principal problema para degradarlos es
romper este anillo aromtico que pueden ser muy variados. Los microorganismos que
utilizan estos compuestos aromticos como fuente de carbono ,lo que hacen es que en
lugar de utilizar una enzima monooxigenasa especfica para cada molcula diferente,
utilizan unas vas bioqumicas llamadas vas altas o perifricas que consisten en
modificar los diferentes anillos aromticos absorbidos en protocatechuate y catechol. Es
decir, la gran variedad de compuestos aromticos que se pueden encontrar son
modificados y convertidos a estas dos molculas. A partir de estas dos molculas que
convergen todos los compuestos, ya se puede llevar a cabo el rompimiento del anillo
mediante enzimas especficas. Esta segunda fase en la degradacin seria lo que se
conocera como vas bajas. La imagen de la derecha ilustra la ruta metablica de estas
vas bajas.
A nivel gnico decir que los genes que intervienen en las vas bajas suelen encontrarse a
nivel cromosmico. Sin embargo los genes que intervienen en las vas altas debido a su
gran variedad, suelen codificarse en plsmidos, aumentando as la probabilidad de
adquirir nuevas vas por transferencia gnica horizontal. Por ejemplo, el plsmido TOL
(pWWO) contiene los genes implicados en transformar el tolueno a protocatechuate o
catechol (En el apartado de regulacin gnica se hace un esmento especial).

Degradacin anaerbica
El hecho que en todos los ambientes donde los hidrocarburos naturales se forman el
oxgeno no est presente, ha hecho pensar a la comunidad cientfica que los
hidrocarburos no podran ser degradados anaerbicamente. Pero a finales de 1980s se
descubrieron algunos microorganismos que si tenan cierta actividad degradadora bajo
condiciones totalmente estrictas.
Este conocimiento es tan reciente que an no se comentan ni en los libros de textos
ms especializados en el tema ni siquiera la posibilidad. Actualmente se est trabajando
mucho en este inslito campo por la importancia que tiene y las aplicaciones potenciales
que pueda tener en la biorremediacin. Hay que tener en cuenta que en la mayora de
los lugares contaminados donde se quiere aplicar estas tcnicas de biorremediacin hay
condiciones anoxignicas o de seguida se consume el oxgeno. Lo que se haca hasta
ahora en estas situaciones es insuflar aire en estos ambientes mediante una bomba para
favorecer la degradacin aerbica. Evidentemente esta tcnica hace encarecer el
proceso aparte que a veces la difusin de oxgeno no puede ser posible.
Los pocos estudios realizados hasta ahora han desvelado que los mecanismos de
degradacin en estas condiciones son totalmente diferentes a los utilizados en presencia
de oxigeno excepto la b-oxidacin que tambin se da en condiciones anxicas. En
general se dan procesos de reduccin o condensacin con otras molculas para activar
primero los compuestos.

3.2. FACTORES QUE

HIDROCARBUROS

CONDICIONAN

LA

BIODEGRADACIN

DE

Existen tres grupos de factores que condicionan la biodegradacin microbiana de

hidrocarburos, los relacionados con las caractersticas del producto petrolfero, los
relacionados con el medio y los relacionados con los microorganismos presentes en el
emplazamiento. Si bien los microorganismos pueden degradar una parte importante de un
crudo de petrleo, tienen preferencias por algunos hidrocarburos. Recordemos que los
crudos de petrleo estn formados por cuatro familias de compuestos o fracciones: los
hidrocarburos alifticos, los hidrocarburos aromticos, las resinas y los asfaltenos. Los
microorganismos degradan con facilidad los hidrocarburos lineales de la fraccin aliftica,
especialmente los que contienen menos de 28 carbonos, aunque se han llegado a describir
biodegradaciones de hidrocarburos de hasta 44 carbonos. Los isoprenoides, y los
hidrocarburos cclicos o naftnicos son degradados ms lentamente que los lineales.
Respecto a los hidrocarburos aromticos, a medida que aumenta el nmero de anillos y los
substituyentes alquilo, por tanto, su peso molecular, aumenta su resistencia a la
biodegradacin. Otro aspecto importante relacionado con las caractersticas de los
productos petrolferos son su hidrofobicidad y su facilidad para adsorberse en partculas del
suelo como las arcillas o absorberse o en la materia orgnica. Estos fenmenos, as como la
difusin en microporos dan lugar a una disminucin de su biodisponibilidad hacia los
microorganismos que deben degradarlos.

El medio donde se encuentra el contaminante debe proporcionar las mejores condiciones

a los microorganismos para que su actividad metablica sea la adecuada para degradar los
hidrocarburos. En el caso de los hidrocarburos, aunque existen microorganismos que
pueden degradarlos anaerbicamente, sabemos que el metabolismo ms eficaz es el
aerbico por lo que la presencia de oxgeno ser un requisito imprescindible. En el caso de
la zona no saturada del suelo, una variable muy importante es la humedad que deber
encontrar un valor ptimo entre aquel que requieren los microorganismos para su
metabolismo y el que permita una buena aireacin.
La transformacin ideal de los hidrocarburos por parte de los microorganismos es la
mineralizacin, que supone que el microorganismo utiliza el contaminante como substrato
de crecimiento. Pensemos que los hidrocarburos slo contienen carbono (C) e hidrgeno
(H), mientras que una clula microbiana contiene C, nitrgeno (N), fsforo (P), adems de
otros micronutrientes, en unas proporciones determinadas. Para que el microorganismo
pueda crecer a expensas de los hidrocarburos deber disponer en el medio de las
proporciones necesarias de N y de P adems del C y H. Es por ello que en medios pobres en
N y P se necesitar suplementar con nutrientes o fertilizantes.
Por lo que respecta a los factores relacionados con los microorganismos, se define el
perodo de aclimatacin como aquel tiempo que requieren las poblaciones microbianas
presentes en un emplazamiento para empezar a degradar los contaminantes. En este
sentido, se conocen distintos factores que pueden disminuir o aumentar este tiempo pero
en trminos generales estn relacionados con el historial de contaminacin del
emplazamiento. Si la contaminacin es remota los microorganismos estn muy adaptados a
la presencia de los contaminantes y pueden dar una respuesta rpida a una bioestimulacin
sin prcticamente un perodo de aclimatacin. En el caso de contaminaciones accidentales,
este perodo podra alargarse. Sin embargo, cabe sealar que en el caso de la
contaminacin por hidrocarburos, al tratarse de unos contaminantes prcticamente
omnipresentes, pensemos en su presencia en la atmsfera, se ha podido constatar que se
encuentran microorganismos degradadores de hidrocarburos en prcticamente cualquier
emplazamiento.

3.3. LOS ACTINOMICETOS EN LA DEGRADACIN DE HIDROCARBUROS

3.3.1.

Caractersticas de los actinomicetos

Los actinomicetos son un grupo de microorganismos unicelulares, muy abundantes en el

suelo, aguas estancadas, estircoles y, en general en lugares donde los restos vegetales se
descomponen aerbicamente. Son un grupo de bacterias filamentosas, que tienen similitud
con los hongos, por su morfologa, tipo de reproduccin y crecimiento en medios de cultivo
slido y lquidos. Son bacterias gram positivas (que tienen en su pared celular
peptidoglicano), resistentes a la penicilina, lo que constituye la principal diferencia con los
hongos filamentosos. Pese a que etimolgicamente actinomiceto significa hongo en forma
de rayo de sol, actualmente se les engloba dentro del grupo de los Esquizomicetos, donde
constituyen el orden de los Actinomicetales. La principal caracterstica de los
Actinomicetales es su capacidad para formar filamentos delgados ramificados o un micelio

ramificado similar a los hongos (aunque de menor dimetro). Adems, al igual que los
hongos, producen esporas.
Es interesante destacar que las condiciones climticas controlan su nmero y variedad
poblacional. La mayora son seres aerobios estrictos, que crecen bien a temperaturas del
orden de los 25C, son por tanto, microorganismos mesfilos; y a pH alcalino (pH 9). En
estas condiciones pueden alcanzarse densidades de poblacin entre 108 y 1011 UFC/g de
suelo. Actualmente, los actinomicetos se clasifican en diferentes familias. Las ms
importantes por su abundancia son:
Streptomycetes: constituyen el 95% de los Actinomicetales. Tienen hifas no
fragmentadas, un micelio areo extenso, esporas o conidias en cadena. Los gneros
representativos son: Streptomyces, Microeliobosporia y Sporichthya.
Actinomycetes del tipo Nocardia: constituyen el 1,98% de los Actinomicetales. Poseen
hifas fragmentadas con pequeas estructuras redondeadas. Los gneros ms
representativos son: Pseudonocardia, Nocardioides y Terrabacter.
Estos microorganismos son un grupo muy importante desde el punto de vista
biotecnolgico debido a que producen vitaminas (principalmente del grupo B), antibiticos
y pigmentos de gran inters industrial.

Principales funciones de los actinomicetos

Las principales funciones que presentan los actinomicetos son las siguientes:
Actan en la descomposicin de residuos animales y vegetales liberando amonaco y
cidos orgnicos. Estos ltimos son capaces de formar complejos muy importantes en
edafognesis (proceso de formacin y evolucin de un suelo) y en la nutricin vegetal,
ya que tienen una gran movilidad y capacidad quelante para ceder a las races el
nutriente que se requiera.
Mineralizacin del humus con la consiguiente liberacin de principios tiles para la
nutricin de las plantas.
Participan activamente en los procesos de humificacin, particularmente en la
formacin de sustancias melnicas.
Su micelio presenta una parte interesante de la materia prima para la sntesis de
compuestos hmicos, adems posee unas protenas (hidrofobinas) que tienen capacidad
para que el micelio resista a la falta de agua. Estas protenas han adquirido una
importancia ya que uno de sus componentes, rico en cistenas (SC3), est relacionado
con el Alzheimer.
Secrecin de sustancias antibiticas como la estreptomicina, tetraciclina, etc., con el fin
de producir equilibrios genricos o antagnicos especficos hacia los componentes de la
microflora bacteriana. Incluso son capaces de producir una accin fitopatognica
ejercida por algunas especies sobre plantas de inters agrcola.

Es interesante estudiar ms en detalle cmo se lleva a cabo la produccin de

antibiticos, como la estreptomicina, por parte de estas bacterias.
La estreptomicina es un antibitico aminoglucsido producido por Streptomyces griseus.
Este antibitico se transporta de forma activa a travs de la membrana bacteriana, y una
vez en el interior celular se une de forma irreversible a protenas receptoras especficas
de la subunidad 30S de los ribosomas bacterianos. As, interfieren en el complejo de
iniciacin de la traduccin dando lugar a la produccin de protenas no funcionales.
Todo esto genera un transporte acelerado de aminoglucsidos aumentando la ruptura
de las membranas citoplasmticas de las bacterias y por tanto su muerte (por tanto, es
bactericida).
Otro ejemplo de la importancia de los actinomicetos en la industria biotecnolgica, es la
aplicacin de estas bacterias para mejorar cultivos con el fin de establecer un nuevo tipo
de Agricultura Sostenible.
Una de las cualidades que se observan en estas bacterias es su presencia en la rizsfera
(zona del suelo afectada por el desarrollo de las races), por ello se les denominan
rizobacterias. Debido a esta particular localizacin, los diferentes gneros resultan muy
beneficiosos para las plantas, ya que favorecen su crecimiento, controlan la aparicin de
hongos no deseables y ayudan a la asimilacin de hierro, fsforo y nitrgeno. Esto
permite llevar a cabo el proceso de biofertilizacin.
La biofertilizacin consiste en el aumento del nmero de microorganismos en un suelo
para acelerar los procesos microbianos y aumentar la cantidad de nutrientes asimilables
por la planta.
Este tipo de tratamiento de la planta con actinomicetos presenta numerosas ventajas:
disminuye el uso intensivo de fertilizantes, disminuye los costes de produccin de
muchos alimentos, y aumenta la competitividad en el mercado. Una buena
biofertilizacin reduce el uso de energa de la planta a la hora de absorber los distintos
nutrientes, disminuye la degradacin del agro-ecosistema y reduce la prdida de
nutrientes del suelo por lixiviados, sobre todo de nitrgeno.

3.3.2. Degradacin de hidrocarburos por actinomicetos

La degradacin de hidrocarburos por actinomicetos es un proceso aerbico que
consiste en la remocin de compuestos aromticos. Los actinomicetos contienen
mono o di-oxigenasas, utilizando el oxgeno para la activacin y ruptura del anillo
aromtico o cadenas. El oxgeno sirve tambin como aceptor final de electrones
para la oxidacin completa de estos compuestos. Sin embargo, la disminucin del
oxgeno disuelto de los sitios contaminados limita la biodegradacin del benceno,
tolueno, etilbenceno y xileno (BTEX).

3.4. USO DE BIOSOLVE EN LA DEGRACIN DE HIDROCARBUROS

El uso de biosolventes como agente de limpieza para remover vertidos de petrleo crudo
o sus derivados es una de las tcnicas ms usadas y aceptadas en la actualidad debido a
ser una sustancia biodegradable con un alto rendimiento de limpieza. El biosolvente acta
principalmente por dos mecanismos:
-

Remocin fsica del petrleo por afinidad.

Estimulacin de la biodegradacin del petrleo por microorganismos locales.

IV. METODOLOGA
Se forrar la caja de madera con un plstico negro; el cual sirve para proteger la
infraestructura de la caja.
Se puso una capa de 5 centmetros de grava muy granular en el fondo de la caja, para
asegurar un buen drenaje y aireacin.
Se coloc la mezcla de 50 kilogramos de tierra contaminada con hidrocarburos y 50
kilogramos de arena combinada con tierra agrcola.
Se encuentran presente en todos los terrarios las bacterias actinomicetos la cual es la
encargada del proceso de biodegradacin.
El riego se hace con la mezcla de 100ml de orina con 400ml de agua en proporcin 1 en 5
lo cual genera una humedad del 30%; dicho riego se realiza por goteo para no ocasionar
lixiviado dentro del terrario.

 Se coloc seis terrarios como muestra de degradacin los cuales fueron repartidos en 3
terrarios de control y 3 terrarios con BIOSOLVE
Se pusieron seis terrarios dentro del invernadero para mantener la temperatura ya que
podra afectar al proceso los cambios bruscos de temperatura
Se tiene que remover la tierra de vez en cuando para que se d mejor el proceso de
biorremediacin.

V. CONCLUSIONES

Se identific a la bacteria actinomiceto como el microorganismo esencial para llevar

acabo la Biorremediacin de hidrocarburos.
Se identific al prototipo Terrario como uno de los ms eficientes para la degradacin
de hidrocarburos.
Colocamos 5 centmetros de grava muy granular en la base del terrario para asegurar
buen drenaje y aireacin. Los factores indispensables son las temperaturas que varan
mucho entre el da y la noche, para poder mantener en equilibrio necesitamos un
invernadero, aislar la LUZ.
El biosolve es importante porque es un compuesto para tratar derrames de petrleo.
Dado que los productos petrolferos son mezclas complejas de hidrocarburos y derivados,
la biodegradacin es selectiva ya que los microorganismos no degradan por igual las
distintas familias de hidrocarburos. Despus de una biorremediacin pueden quedar

concentraciones residuales de algunos hidrocarburos. Se describen nuevas estrategias

para disminuir estas concentraciones y se plantea la necesidad de revisar que la
concentracin de estos hidrocarburos residuales no sea el nico criterio para establecer
su descontaminacin.

VI. RECOMENDACIONES
Se recomienda mantener la temperatura , para lo cual se debe tener un invernadero bien
estructurado
El riego se debe realizar cada cierto tiempo teniendo en cuenta la humedad de la tierra.
Se recomienda tener bien forrado los terrarios para evitar deterioros de los mismos.
Es necesario remover constantemente la tierra para un mejor trabajo de las bacterias.
El riego se debe realizar por goteo para que no ocasione el lixiviado.
Evitar el traslado de los terrarios de un lugar a otro.

VII. BIBLIOGRAFA

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hidrocarburos
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del
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Actinomicetos
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Degradacin
de
hidrocarburos.
Recuperado
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http://bioinformatica.uab.es/biocomputacio/treballs0203/rburgos/dades/degradaci%C3%B3n_de_hidrocarburos.htm

VIII. ANEXOS
Muestra de suelo contaminado por hidrocarburos en su estado primario

Los 6 terrarios dentro del invernadero

Nombre completo del proyecto

Muestra de las seis terrarios; tres con biosolve y tres de control

Riego de los terrarios por dispersin

Se removi la tierra con un pequeo rastrillo

Se procedi a verificar si an se persive el olor caracterstico de los hidrocarburos