Deteccin

de fitoplasmas y bacterias baciliformes en las plantas de ctricos con los

sntomas de HLB en el estado de Baja California Sur
Julio Hernndez-Gonzalez, Vladimir Lebsky, Arevik Poghosyan

CIBNOR, Programa Agricultura en Zonas Aridas. Instituto Politcnico Nacional 195, Col. Playa Palo de Santa
Rita Sur, La Paz, BCS, Mexico, 23096. Tel. 52(612)123844; e-mail: arevik04@cibnor.mx

Resumen
Multiples sntomas tipo amarillamiento, similares con los reportados en el caso de HLB, se observaron desde el 2010 en las plantas
de ctricos en distintas regiones del estado de BCS. Para determinar el posible agente causal se colectaron las muestras de ctricos
con los sntomas sospechosos para su anlisis con microscopa electrnica de barriido (MEB) y mtodos moleculares. En tejido de
floema de las plantas infectadas se detectaron tanto fitoplasmas, como bacterias baciliformes con los tamaos aproximados
2000x400 nm, muy parecidos a los reportados en el caso de RLO y liberibacter. Se supone la participacin de ambos patgenos en
el fenmeno manifestado.
Introduccion
En el estado de BCS los ctricos se producen en las
plantaciones comerciales y en cultivo de traspatio. La
presencia de HLB (greening) en el estado fue
confirmada en agosto de 2011 (3). Cabe mencionar,
que la etiologa de HLB, antes atribuida a RLO
(rickettsia like organisms), actualmente se asocia con
3
dos tipos de bacterias restringidas al floema: tres
Sintomas de amarillamientos: 1.Naranja. 2. Naranjita. 3. Limonaria.
especies de Ca. Liberibacter y dos especies de
Ca.Phytoplasma (1).
Objetivo del trabajo fue analizar la posible asociacin de fitoplasmas y otras bacterias vasculares en ctricos con los
sntomas sospechosos en BCS, aplicando MEB y tcnicas moleculares.
Materiales y mtodos Se colectaron las muestras de naranja,
limn, toronja, mandarina, naranjita, limonaria con los sntomas
tpicos de infeccin en plantaciones comerciales, parcelas
experimentales y las plantas de traspatio en distintas regiones
de BCS. Las muestras procesadas con la mtodo reportado (2)
analizaron por el MEB Hitachi S-3000N; para estudios
moleculares de fitoplasmas aplicaron PCR-anidado con los
ligos P1/P7 R16mF2/R16mR1 y R16F2n/R16R2, para
amplificar los fragmentos de ADN correspondientes. Se realizo
la clonacin en vector P-gem T-easy para enviar a secuenciar.
RESULTADOS

por
8

Fig. 8-9. Fitoplasmas(f) en mandarina (San Pedro) y limonaria

(La Paz). Al-granos de almidon, por-poros de tubos cribosos.
Electroforesis en agarosa de los productos de
PCR para seleccin de clonas

10

11

1 1kb
2 LK1
3 LK2
4 LK3
5 LK4
6 LK5
7 LA1
8 LA2
9 LA3
10 LA4
11 LA5

1550pb

PCR de ADN
plasmidico
(1550 pb) con
los fragmentos
de ADN de
fitoplasma de
limn.
Carriles 2-10:
varias clonas
Carril 1: kb plus

Fig.10
6

Fig.4-7. Fitoplasmas (f) y bacterias (bac) en las muestras de naranja de

Guerrero Negro (4, 5) y Valle de Santo Domingo (6,7).

Rerferencias
1. Bov J.M.2006. Huanglongbing: a destructive, newly-emerging,
century-old disease of ciitrus. Journal of Plant Pathology 88:7-37.
2. Lebsky V., Poghosyan A. 2007. Phytoplasma associated diseases in
tomato and pepper in the state of BCS, Mexico. Bulletin of Insectology,
8
60(2):131-132.
3. Senasica. 2012. Comunicado, notificaciones y noticias sobre HLB y
su vector. (http://senasica.gob.mx/?doc=22653

CONCLUSIN
El complejo de sntomas en ctricos y los estudios
realizados por el MEB y tcnicas moleculares hacen
constar la presencia de dos distintos patgenos en
floema de plantas infectadas: fitoplasmas y bacterias,
por su morfologa y tamao similares a liberibacter. La
identificacin molecular de fitoplasmas esta en proceso.
Los fiitoplasmas en limn con base en el anlisis de
secuencias de ADN se identificaron como miembros del
grupo 16SrI,
Ca. Phytoplasma asteris.