Rsum
Guiera senegalensis J. F Gmel (Combretaceae) est une plante largement utilise en mdecine traditionnelle africaine pour ses proprits thrapeutiques.
Dans la prsente tude, nous valuons lactivit antiprolifrative sur trois lignes de cellules cancreuses
(cancer de la prostate, glioblastome et cancer du sein) et leffet antiradicalaire dextraits de feuilles et de
galles de la dite plante.
Une extraction par puisement successif des feuilles et de galles a t ralise laide de solvants de polarit
croissante.
Lactivit antiprolifrative la plus leve a t observe avec le dcoct aqueux des galles sur la ligne de
cellules de cancer du sein avec une CI50 de lordre 2,1 g/ml. Cette activit est suprieure celle de
ltoposide et comparable celle du taxol sur la mme ligne.
La prsente tude a en outre indiqu travers deux tests dvaluation de lactivit antiradicalaire (le test au
DPPH et la mthode de blanchissement de la -carotne) que nos extraits de feuilles et de galles prsentent
une activit antiradicalaire. Toutefois, cette activit est nettement infrieure celle des standards utiliss, la
quercetine et le BHT. Lextrait mthanolique de galles prsente une CI50 de lordre de 19,5 g/ml et lextrait au dichloromthane des feuilles, une activit antiradicalaire relative de 0,60.
Mots cls : Guiera senegalensis, galle, cytotoxicit, activit antiradicalaire.
The higher antiproliferative activity was observed with the decoction of galls on the breast cancer cell line
with an IC50 of 2.1 mg / ml. This antiproliferative activity is higher than which observed with etoposide and comparable to the activity of taxol on the same cancer cell line.
This study has also shown through two tests used to evaluate the antiradical activity (DPPH test and the
-carotene bleaching test) that our extracts of leaves and galls have a radical-scavenging activity.
However, this activity is significantly below the standards used, quercetin and BHT. The methanol extract
of galls present an IC50 of 19.5 g / ml and the dichloromethane extract of leaves an anti-radical
activity estimated to 0.60.
Keywords: Guiera senegalensis, gall, cytotoxicity, antioxidant.
Introduction
Le cancer est une cause majeure de dcs dans le monde. En effet, sur un total de 58 millions de
dcs enregistrs en 2005 au niveau mondial, 13 % (soit 7.6 millions) taient imputables au cancer, soit plus que la proportion de dcs causs par le VIH/SIDA, la tuberculose et le paludisme
runis (OMS, 2006). Dans les pays industrialiss, il constitue la deuxime cause de mortalit
aprs les maladies cardiovasculaires (OMS, 2006). Selon des projections de lOrganisation
Mondiale de la Sant (OMS), dici 2020 le nombre de dcs d au cancer va connatre une augmentation considrable dans les pays en dveloppement, aussi bien en Asie, en Afrique quen
Amrique Latine et ce, principalement en raison du vieillissement constant de la population
humaine et de laugmentation de la pollution (RASTOGI et al., 2004).
Au Burkina Faso, lOMS a estim environ 8 000, le nombre de cas de cancer en 2002 avec
3 % de dcs.
Dans les pays en voie de dveloppement et plus particulirement en Afrique, la mdecine traditionnelle est parfois la seule source de soins abordable et accessible, surtout pour les patients les
plus pauvres. Cette mdecine traditionnelle africaine utilise pour lessentiel des thrapies base
de plantes. Or, plusieurs molcules anti-cancreuses proviennent de plantes mdicinales (par
exemple : la vinblastine et la vincristine de Catharantus roseus, le paclitaxel de Taxus bravifolia) ont t dvelopps par de grandes firmes pharmaceutiques ; mais seulement elles demeurent
encore inaccessibles pour les populations africaines.
Aussi, pour contribuer la valorisation de la mdecine et pharmacope traditionnelles, le ministre
de la sant du Burkina Faso a-t-il initi et encourag des travaux de recherche visant valuer
dun point de vue scientifique, des recettes de mdecine traditionnelle utilises pour le traitement
de certaines maladies comme le cancer.
Nous nous proposons donc dans le prsent travail, dtudier in vitro les proprits anti-tumorales
et anti-oxydant dextraits de feuilles et de galles de Guiera senegalensis.
Caractrisation phytochimique
Pour la caractrisation et la mise en vidence des familles chimiques des extraits de feuilles et
de galles de Guiera Senegalensis, nous avons utilis la mthode dcrite par (CIULEI, 1982).
Cette mthode utilise les tests de caractrisation chimique suivants :
le test de Shibata pour lidentification des flavonodes ;
le test de Dragendorff et de Meyer pour lidentification des alcalodes bases et sels ;
le test de Leibermann-Burchard pour lidentification des aglycones triterpniques et
strodiques ;
les ractions didentification des coumarines, des saponosides et des tanins.
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Le test colorimtrique MTT est un test in vitro mesurant la croissance globale dune population
cellulaire. Les trois lignes cellulaires utilises dans cette tude ont t incubes pendant 24 h
dans des plaques de 96 puits (de 10 000 40 000 cellules/ml de milieu de culture selon le type
de cellules) avant le traitement avec la substance dont on souhaite mesurer leffet sur la croissance cellulaire. Ce test dvaluation de la prolifration cellulaire est bas sur la capacit des cellules vivantes rduire le MTT, de couleur jaune, en son mtabolite le bleu de formazan (de
couleur violette). Le nombre de cellules vivantes aprs 72 h dincubation en prsence ou non des
composs tester ou de produits de rfrence est directement proportionnel lintensit de la
coloration violette mesure (figure 1), quantitativement par spectrophotomtrie en utilisant un
lecteur de microplaque ELx808 de marque Biotek une longueur donde de 570 nm (avec une
rfrence de 630 nm). Chaque condition exprimentale a t analyse en quadruplicat avec dix
huit (18) concentration, de 500 g/ml 0,0038 g/ml.
Figure 1. Illustration dune plaque de 96 puits dans laquelle un test colorimtrique MTT a t ralis. Les cellules
sont ensemences au J0 et mises en prsence dun agent cytotoxique au J1 pour une dure de 72 h. Au terme de ce
traitement, les cellules vivantes produisent partir du MTT mis en leur prsence des cristaux de formazan. Ces
cristaux dissous dans du DMSO produisent une solution violette qui est mesure par spectrophotomtrie. Son intensit est directement proportionnelle au nombre de cellules vivantes.
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Figure 2: Illustration dune plaque de 96 puits soumise au test antiradicalaire par la mthode au DPPH. Le DPPH
est un radical libre trs ractif qui, lorsque le test est positif passe de la coloration violette au jaune. Les flches verticales indiquent les puits contrles ne contenant pas dextraits.
Pour tudier lactivit anti-radicalaire des diffrents extraits, nous avons utilis le test au DPPH
selon le protocole dcrit par KIM et coll (2003). Le DPPH, radical libre de couleur violette est
rduit en un compos de couleur jaune en prsence de composs anti-radicalaires. Lintensit de
la coloration, mesure au spectrophotomtre, est inversement proportionnelle lactivit antiradicalaire des composs dont on souhaite dtermin lactivit. Les conditions exprimentales
ont t ralises en quadruplicat avec dix huit concentrations.
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b-carotne
Test de blanchissement du
Dans ce test lactivit antiradicalaire des extraits est dtermine en mesurant linhibition de la
dgradation oxydatif du -carotne (dcoloration) par les produits doxydation de lacide
linolique selon la mthode dcrite par KARTAL et coll (2007).
La cintique de dcoloration de lmulsion en prsence ou non dantioxydant (contrle ngatif dans
lequel lchantillon est remplac par 25 l de mthanol) est mesure T0, 24 h et 48 heures.
Rsultats
Le tableau I prsente les rendements dextraction obtenus aprs puisement successif de feuilles
et de galles de Guiera Senegalensis par des solvants de polarit croissante. Les extraits de
feuilles prsentent un meilleur rendement que ceux de galles. Le meilleur rendement a t obtenu
avec les dcocts aussi bien pour les feuilles que pour les galles.
Les rsultats obtenus aprs caractrisation des principales familles chimiques composant les
extraits de galles et de feuilles de Guiera Senegalensis sont consigns dans le tableau II.
Tableau I. Rendement dextraction en pourcentage par rapport la poudre de drogue
Les extraits de feuilles prsentent un meilleur rendement que ceux de galles. Le meilleur rendement a t obtenu avec les dcocts aussi bien pour les feuilles que pour les galles.
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Tableau II. Familles de composs chimiques mis en vidence dans les diffrents extraits
-: Abscence ; + : faible prsence ; ++ : abondant ; +++ : trs abondant
On note au regard de ce tableau que les tanins sont trs abondants dans les extraits de feuilles et
de galles. Les flavonodes et les alcalodes sels sont abondants aussi bien dans les extraits de
feuilles que dans les extraits de galles.
Les coumarines sont abondantes dans les feuilles et en faible teneur dans les galles. Les saponosides sont trs abondants dans le dcoct des feuilles mais en petite quantit dans celui des galles.
Les valeurs de CI50 (cest--dire la concentration qui inhibe de 50 % le taux de croissance de la
population cellulaire considre aprs trois jours de culture en prsence du compos dintrt) dtermines pour les extraits de feuilles et de galle de Guiera Senegalensis et des deux substances cytotoxiques de rfrence utilises pour le traitement de divers types de cancers (ltoposide et le taxol),
contre trois lignes cellulaires (U373, PC-3 et MCF-7), sont indiques dans les tableaux III et IV.
Ces rsultats indiquent que les extraits de galles induisent une meilleure activit anti-prolifrative que les extraits de feuilles. Tous les extraits de galles ont montr une activit cytotoxique sur
les cellules de cancer du sein plus leve que celle induite par ltoposide. Toutefois, leffet antiprolifratif du dcoct aqueux de galles (CI50 = 2,1 0,5 g/ml) est comparable celui du taxol
sur la mme ligne cellulaire (CI50 = 1,27 0,04 g/ml) (GNOULA et al., 2008)
Le tableau V prsente les rsultats des tests antiradicalires au DPPH. Lextrait mthanolique des
feuilles avec une CI50 denviron 39,12 g/ml a montr la meilleure activit anti-radicalaire. Lextrait
mthanolique des galles tait galement le plus actif avec une CI50 de lordre de 19,5 g/ml.
Vol. 32, ns 1 et 2 Janvier-dcembre 2009, Science et technique, Sciences de la sant
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Tableau III. Valeurs des CI50 (en g/ml) dextraits de feuilles de Guiera Senegalensis et des
molcules cytotoxiques de rfrence
Tableau IV. Valeurs des CI50 (en g/ml) dextraits de galles de Guiera Senegalensis et des
molcules cytotoxiques
Le test de blanchissement de la -carotne a rvl que lextrait le plus actif des feuilles tait lextrait au dichloromthane avec une AAR (Activit Anti-radicalaire Relative) de 0,60 et lextrait le
plus actif des galles tait lextrait mthanolique avec une AAR de 0,53. Les composs polyphnoliques (flavonodes, tanins, etc) prsentent un fort potentiel antioxydant (figures 3 et 4).
Discussion
Notre tude avait pour but dvaluer le potentiel antitumoral in vitro des feuilles et des galles de
Guiera senegalensis.
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Tableau V. Valeurs des CI50 aprs lvaluation de lactivit anti-radicalaire dextraits de feuilles et
de galles de Guiera senegalensis par la mthode au DPPH. Ces valeurs correspondent
la concentration pouvant piger 50 % des radicaux libres prsent dans la solution de
DPPH, aprs 30 minutes dincubation en prsence des composs tests.
Figure 3. Activit anti-radicalaire relative des extraits de feuilles de Guiera senegalensis. Ces valeurs reprsentent
la moyenne de quatre mesures diffrentes.
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Figure 4. Activit antiradicalaire relative des extraits de galles de Guiera senegalensis. Ces valeurs reprsentent la
moyenne de quatre mesures diffrentes.
Guiera senegalensis est une plante mdicinale couramment utilise en mdecine traditionnelle
africaine pour traiter divers maux (BOUCHET et al., 1996 ; NACOULMA, 1996 ; BOUCHET
et al., 1998 ; SILVA et GOMES, 2003).
Nous avons ainsi entrepris de mettre en vidence les activits cytotoxique et antiradicalaire des
extraits de feuilles et de galles de Guiera senegalensis.
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Hormis ces deux hypothses, il ne faut pas exclure la nature de la ligne cellulaire. Il faut comprendre par cela que selon la ligne cellulaire utilise pour les tests cytotoxiques le pouvoir cytotoxique peut varier.
La prsence de flavonodes dans les extraits au dichloromthane des galles pourrait expliquer au
moins en partie lactivit cytotoxique mise en vidence. En effet, les flavones polymthoxyles
non glycosyles ainsi que des molcules voisines obtenues par des modifications chimiques simples, montrent une trs forte capacit bloquer la prolifration des cellules humaines issues de
cancers du sein, de la prostate, du colon, du poumon et de la peau. Nous pouvons galement
souligner le fait que les galles de par leur capacit lutter contre les insectes pathognes qui les
colonisent pourraient contenir des mtabolites cytotoxiques.
Etude de lactivit-antiradicalaire
Les antioxydants font actuellement lobjet de nombreuses tudes car, en plus dun intrt certain
dans la conservation des denres comestibles, ils pourraient savrer utiles dans la prophylaxie
et le traitement des maladies dans lesquels le stress oxydant est incrimin. De nombreuses tudes
ralises sur les produits naturels ont prouv que ce sont particulirement les composs phnoliques qui sont responsables de leur activit antioxydante. Nous avons donc valu le pouvoir
antioxydant de nos extraits qui se sont montrs riches en tanins et flavonodes. Pour ce faire,
nous avons utilis deux mthodes savoir la mthode au DPPH et la mthode de blanchissement
de la -carotne.
Les rsultats diffrent sensiblement selon le test utilis. Cela pourrait sexpliquer par la sensibilit
propre chaque test. Lutilisation de deux tests diffrents nous a permis davoir une meilleure
lecture de lactivit anti-radicalaire de nos extraits.
Avec la mthode au DPPH, lextrait le plus actif des feuilles tait lextrait mthanolique avec une
CI50 de 39,12 g/ml. Lextrait mthanolique tait galement le plus actif des extraits de galles
avec une CI50 de 19,5 g/ml. Le test de blanchissement de la -carotne a rvl que lextrait
le plus actif des feuilles tait lextrait dichloromthane avec une AAR de 0,60 et lextrait le plus
actif des galles tait lextrait mthanolique avec une AAR de 0,53. Les composs phnoliques
prsentent un fort potentiel antioxydant, composs qui ont t mis en vidence dans les extraits
mthanolique et aqueux. BOUCHET et collaborateurs en 1998 avait galement montr lactivit
antioxydante des galles de Guiera senegalensis. Les dcocts aqueux nont montr aucune activit
anti-radicalaire contrairement aux extraits mthanoliques. Les polyphnols des dcocts ont pu
tre dtruits par la chaleur lors de lbullition. Les extraits au dichloromthane se sont rvls
inactifs et deux hypothses pourraient tre mises pour expliquer leur inactivit : soit que ces
extraits ne contiendraient pas de composs polyphnoliques du fait du caractre peu polaire du
dichloro-mthane ; soit que les polyphnols prsents ne correspondraient pas ceux possdant des
proprits cytotoxiques.
Le test de blanchissement de la -carotne nous a permis de dterminer lactivit antioxydante
relative (AAR) de nos extraits que nous avons compar celle de la BHT (contrle positif) qui
est de 100 %.
Les extraits de feuilles ont montr une meilleure activit anti-radicalaire car plus riches en
polyphnols.
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Lextrait au dichloromthane des feuilles a rvl une bonne activit anti-radicalaire. On peut
expliquer lactivit des extraits apolaires par le paradoxe des phnomnes polaires comme il est
dcrit par Frankel et ses collaborateurs en 1994. Etant donn que le test de blanchissement du
-carotne est similaire un systme dmulsion de lipides dans leau, FRANKEL et MEYER
(2000) ont propos que les antioxydants apolaires exposent des proprits antioxydantes plus
importantes car ils sont concentrs au sein de linterface lipide-eau, permettant ainsi de prvenir
la formation de radicaux lipidiques et loxydation du -carotne, alors que les antioxydants
polaires restent dilus dans la phase aqueuse et sont ainsi moins efficaces dans la protection des
lipides.
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Conclusion
La prsente tude a permis de mettre en vidence par des tests valids lactivit antiprolifrative
et anti-radicalaire dextraits de feuilles et de galles de Guiera senegalensis. Ltude phytochimique
nous a permis de mettre en vidence la prsence dalcalodes et de polyphnols (flavonodes, tanins
et coumarines) dans les feuilles et les galles ; mais galement la prsence de saponosides majoritairement dans les feuilles. Ces composs chimiques ont fait lobjet de plusieurs tudes et ont montr une bonne activit cytotoxique et anti-radicalaire. Le dcoct aqueux de galles a montr une
activit antiprolifrative bien suprieure celle de ltoposide et comparable et celle du taxol sur
la ligne MCF-7. Les feuilles aussi bien que les galles, ont montr une activit anti-radicalaire.
Nanmoins cette activit tait infrieure celle de la molcule de rfrence utilise, la quercetine.
Les activits cytotoxique et anti-radicalaire sont impliques dans la prvention et le traitement du cancer.
Ces rsultats prliminaires pourraient constituer une base scientifique pour la recherche de nouveaux composs antitumoraux.
Du fait du potentiel thrapeutique des galles, on pourrait envisager de dvelopper des phytomdicaments standardiss dont la production partir de la poudre de galles de la plante ne
ncessite pas dquipements particuliers.
Des tudes complmentaires seront ncessaires pour rendre ce travail utilisable dans le cadre de
la mise au point dun phytomdicament.
Cette tude pourrait ventuellement tre complte par un bio-guidage de nos extraits. Cela va consister fractionner le dcoct aqueux de galles sur les cellules de cancer du sein (MCF-7), purifier les fractions les plus actives et dterminer la structure chimique du compos responsable de
leffet cytotoxique.
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