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BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO
Definicin: Conjuntos de normas y procedimientos para obtener una situacin carente
de riesgos o con riesgos limitados.
PRECAUCIONES UNIVERSALES:
1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas
2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cualquier
objeto de uso personal dentro del laboratorio.
3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de ltex) la
misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio. Botas y gorra en
casos de exposicin a microorganismos de alta peligrosidad.
4. Antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio asegurarse de que en la
mano no existan escoriaciones. En caso contrario cubrir las mismas de manera
adecuada.
5. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.
6. No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas
7. Evitar la formacin de aerosoles y gotas.
8. Manejo adecuados de los objetos corto punzantes. Una vez utilizados se deben
almacenar en recipientes rgidos y eliminarse luego de ser decontaminados.
9. Terminantemente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizarse
los
pipeteadores automticos.
10. Decontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo diario.Se
recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10%
11. Evitar conductas inseguras y de riesgo.
12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar tratamiento
adecuado especialmente de los infecciosos.
13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las caerias
habituales una vez que hayan sido decontaminados.
14. Lavarse las manos con abundante agua y jabn luego de haber terminado el
trabajo diario.
15. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio
TRABAJO EN CLASE:
Poner en prctica las normas anteriores durante cada sesin de laboratorio
PRACTICA No. 2
Tema: Toma de muestras de sangre (venosa y capilar)
Autora: Dra. Celia Bowen
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Objetivos:
1. Conocer la tcnica para la obtencin de muestras de sangre como medio para
mantener la integridad del profesional de salud y la del paciente
2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma
de muestras sanguneas
3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio con
respecto al manejo de lquidos biolgicos y material infeccioso
4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el laboratorio
Fundamento terico:
La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta tcnica el
principal mtodo de obtencin de sangre en los laboratorios de anlisis clnicos. A partir
de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene anticoagulante, se
obtiene plasma. Del plasma forma parte el fibringeno, sustancia de la que carece el
suero.
Materiales:
-Torniquete
-Algodn
-Alcohol antisptico (isoproplico al 70%)
-Jeringuillas
-Sistema vacutainer: capsula, tubos alvaco, agujas de toma mltiple
- Lancetas
-Tubos capilares heparinizados
-Plastilina
Tcnica de la puncin venosa:
1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exmenes corresponda
al mismo
2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efectivamente el
paciente no ha ingerido alimentos
3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que va a ser
sometido. Se debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su tensin.
4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, segn ste se encuentre sentado, o
en decbito prono, para tener acceso fcil y cmodo a la fosa antecubital.
5. Hay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de la
muestra, el torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel, las
jeringas, cuando sea necesario, la aguja estril para extraccin de sangre y
dispositivo utilizado para fijar la aguja al tubo de extraccin al vaco.
6. Se solicita al paciente que cierre el puo para que las venas resulten ms
palpables.
7. Se seleciona una vena adecuada para la puncin. Se prefieren las venas de la
fosa antecubital, en particular la cubital interna y la ceflica. Tambin pueden
utilizarse las venas de la mueca, el tobillo y la mano. Si existiera ya un catter
intravenoso en un brazo, se utilizar el otro para la extraccin de la muestra.
8. Preparar la cpsula insertando la aguja pero dejando un poco flojo la capucha de
la parte externa de la misma para retirarlo al momento de la puncin.
9. Se aplica un torniquete varios centmetros por encima de la zona de puncin
(aproximadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo). No hay que dejar
Autora: Dra. Celia Bowen
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El porcentaje Peso a Volumen es una relacin que expresa los gramos de soluto que se
hallan contenidos en cada 100 mililitros de solucin.
Materiales y reactivos:
Materiales:
- Probeta graduada de 50 ml
- Vaso de precipitacin de 50 ml
- Matraz aforado de 50 ml
- Pipetas graduadas de : 1, 2, 5 y 10 ml.
- Peras de seguridad
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Balanza
- Varilla de vidrio
Reactivos:
- Safranina en polvo
- Cloruro de sodio en polvo
- Agua destilada
Procedimiento:
1. Mtodo para preparar soluciones:
Unidades de medidas:
p/v = peso de soluto sobre volumen de solvente expresado en gr/ 100ml
v/v = volumen de soluto sobre volumen de solvente expresado en ml/100 ml.
Ejemplo de soluciones p/v:
Preparar 50 ml. de solucin de NaCl (cloruro de sodio) al 0.85% en agua destilada
Datos
V1= 50 ml.
V2= 100 ml
Concentrac. Solucin= 0.85% (pesar 0.85 gramos de NaCl y aforar con agua
destilada hasta obtener 100 ml de solucin)
0.85 gr. NaCl
100 ml agua destilada
X
50 ml agua destilada
X= 0.425 gr. de NaCl disolver en agua destilada hasta
obtener 50 ml de solucin
Ejemplo de soluciones v/v:
Preparar 40 ml. de solucin de Etanol al 70% en agua destilada
Datos
V1= 40 ml.
V2= 100 ml
Concentrac. Solucin= 70% (70 ml de etanol puro diluidos en 100 ml de agua
destilada)
70 ml de etanol
100 ml agua destilada
X
40 ml agua destilada
Autora: Dra. Celia Bowen
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Volumen mayor
=
Volumen menor (alcuota)
50 =
2,5
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PRACTICA No. 4
Tema: Elemental y microscpico de orina
Objetivos:
1. Analizar la orina realizando exmenes macrscopico, qumicos y microscpicos
en la misma
2. Correlacionar los parmetros analizados con enfermedades renales o del tracto
urinario
Definicin de examen rutinario de orina: Es un examen fsico y/o qumico de la
orina y comprende una serie de pruebas qumicas y microscpicas para evaluar
infecciones del tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de otros rganos
que provocan la aparicin de metabolitos anormales (productos de descomposicin) en
la orina.
El examen elemental y microscpico de orina consta de tres partes:
1) Macroscpico: color, aspecto
2) Qumico (tira reactiva): pH, leucocitos, protenas, glucosa, urobilingeno,
bilirrubina, cuerpos cetnicos, sangre
3) Microscpico: leucocitos, eritrocitos, clulas bajas, clulas altas (se reporta
numero por campo en 10 camposcon lente de 40x), moco, bacterias, cristales,
parsitos, hongos (se reporta por cruces en 10 campos con lente de 40 x) y
cilindros se reporta nmero por placa (con lente de 10x).
1. Instrucciones para recoger una muestra parcial de orina
a. El frasco tiene que ser suministrado por el Laboratorio, o adquirir en la farmacia
uno estril apropiado para la recoleccin de orina.
Autora: Dra. Celia Bowen
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e.
f.
g.
h.
i.
j.
k.
OBSERVACIN: Para el siguiente literal por favor revisar el atlas para segundo
nivel ubicado en el internet cuya pgina es ftp.puce.edu.ec
3.1.
Elementos que se observan en el examen microscpico:
TAREA EN CLASE:
Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las instrucciones anteriores,
realizar el anlisis clnico durante la prctica y realizar el reporte de la misma para
archivar en la carpeta.
PRACTICA No. 6
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2. Fundamento terico:
La glucosa es la principal fuente de energa de las clulas en el organismo. La glucosa
es un monosacrido con una concentracin postpandrial de 90 mg/dl en la sangre y sirve
como una fuente de energa indispensable para la funcin celular.
El diagnstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se apoya en
parte en la medicin de la glucosa plasmtica, ya sea en ayuna o tras estimulacin o
pruebas de supresin.
Los resultados de la glucosa plasmtica pueden clasificarse como hiperglucmicos
(como la diabetes mellitus) o hipoglucmicos.
Principio de la reaccin:
La prueba utilizada se determina mediante el mtodo enzimtico colorimtrico, basado
en la reaccin de Trinder.
Glucosa + O2 + H2O
POD (peroxidasa)
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Blanco de reactivo
STD muestra
STD muestra
5 ul
Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
1. Clculo de la concentracin de la glucosa
C (mg/dl)= 100 x A muestra
A Estndar
Autora: Dra. Celia Bowen
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PRCTICA No 7
LPIDOS: Determinacin de colesterol en sangre
1. Objetivos:
3. Conocer la tcnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre
4. Diferenciar pacientes con hipo e hipercolesteremia
2. Fundamento terico:
Los principales lpidos del plasma humano son el colesterol, los steres del colesterol,
los triglicridos, los fosfolpidos y los cidos grasos no esterificados. El colesterol es un
importante componente estructural de las membranas celulares y un precursor para la
biosntesis de los cidos biliares y las hormonas esteroideas.
El riesgo cardiovascular es una funcin continua de la concentracin de colesterol y que
los individuos situados en el lmite superior del margen normal tienen un riesgo mayor
que los que estn situados en el lmite inferior.
La prueba utilizada para determinar colesterol es mediante el mtodo enzimtico
colorimtrico del siguiente modo:
Principio de la reaccin:
Esteres de colesterol + H2O
Colesterol + O2
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Blanco de reactivo
STD muestra
STD muestra
5 ul
Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
2. Clculo de la concentracin de colesterol
C (mg/dl)= 200 x A muestra
A Estndar
Valores de referencia: hasta 200 mg/dl
Autora: Dra. Celia Bowen
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TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de colesterol en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en
la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
CONSULTA:
Criterios de la OMS para:
- Sndromes metablicos
- Factores de riesgo cardiovascular
Nota: Archivar en la carpeta y estudiar para la evaluacin parcial
PRCTICA No. 8
TEMA: Mtodo para electroforesis de protenas en suero
Objetivo:
Aplicar la tcnica de electroforesis para separar las diversas fracciones protecas del
suero humano
Fundamento terico:
La electroforesis es una tcnica basada en los movimientos de molculas cargadas en un
campo elctrico, cada molcula se mueve hacia el electrodo de carga opuesta (ctodo y
nodo), este movimiento denominado electroforesis da nombre a la tcnica. En el
transporte electrofortico, a la fuerza del campo elctrico se opone la resistencia viscosa
del medio, producindose, cuando se igualan una velocidad constante de
desplazamiento de las partculas.
En resumen, puede decirse que cuando una molcula cargada se coloca en un campo
elctrico se mover hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su carga elctrica, 2)
su tamao, 3) la intensidad del campo elctrico y 4) la temperatura del medio.
La electroforesis se aplica en el campo de la Bioqumica a la separacin de compuestos
que poseen grupos ionizables (aminocidos, pptidos, protenas, cidos nucleicos)
teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del pH del medio en
que se encuentren. Si la molcula tiene carga positiva migrar hacia el ctodo, si tiene
carga negativa hacia el nodo. La fuerza inica de la solucin tampn tiene una
importancia fundamental en la electroforesis, puesto que cuando es baja, permite
velocidades de migracin de los solutos ms rpidas y con menor desprendimiento de
calor.
Las protenas estn compuestas de aminocidos que poseen grupos ionizables
(principalmente -COO- y NH+ 3), pueden encontrarse cargadas positiva o
negativamente, o bien de permanecer elctricamente neutras segn la proporcin de los
diversos grupos ionizados a un determinado pH. En su punto isoelctrico (pI o pH I), la
Autora: Dra. Celia Bowen
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protena tiene carga neta cero. Por debajo de pI las protenas estarn cargadas
positivamente y por encima del pI negativamente.
El porcentaje normal de estas protenas en el suero humano es:
-Albmina54-62%
--globulinas9-15%
--globulinas14-19%
--globulinas14-19%
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PRCTICA No. 9
TEMA: Determinacin de urea (Mtodo enzimtico-colorimtrico)
Fundamento terico:
La urea es el principal compuesto nitrogenado no proteico ms imporatnte en la mayora
de los lquidos biolgicos. En el hombre es el principal producto final del metabolismo
proteco. Se produce en el hgado y es excretada en la orina a travs de los riones.
Una elevacin de la concentracin srica de urea, se interpreta generalmente como una
posible disfuncin renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los
valores sricos de urea se encuentran ntimamente relacionados con la dieta y el
metabolismo proteico, por lo que cualquier alteracin en estas variables se traducir en
un cambio de la concentracin de urea en suero.
Fundamento del mtodo:
La urea se hidroliza por accin de la ureasa en presencia de agua para producir
amonaco y dixido de carbono. En una reaccin de berthelot modificada los iones
amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato produciendo un complejo verde llamado
indofenol que se determina colorimtricamente.
ureasa
NH2 CO NH2 + H2O
(NH4+)2 + CO2
Nitroprusiato (no es enzima)
(NH4+)+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato
Indofenol (verde)
Parte experimental:
1.Procedimiento (en suero o plasma):
1.1. En cuatro tubos de ensayo marcados como B (blanco), S (Standard), M1 (muestra
1) y M2 (muestra 2) agregar:
B
S
M1
M2
Standard
10 ul
Suero o plasma
10 ul
10 ul
Reactivo 1
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Enzima ureasa
5 ul
5 ul
5 ul
5 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 3 minutos a 37C
Reactivo 2
1000 ul
1000 ul
1000 ul
1000 ul
Mezclar por agitacin suave e incubar 10 minutos a 20-25 C o por 5 minutos a 37C.
Leer la absorbancia de la muestra (A muestra) y del estndar (A Estndar) en
espectrofotmetro a Hg 578 nm frente a un blanco reactivo antes de 60 minutos
Clculos de concentracin de urea:
C (mg/dl)= A_muestra x 80
A estandar
Valores de referencia en suero: 10 50 mg/dl
Parmetros a considerar:
- El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de realizar las lecturas de
las muestras
Autora: Dra. Celia Bowen
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2.Materiales y reactivos:
2.1. Materiales:
-Gradilla
-Cuatro tubos de ensayo
-Espectrofotmetro
-Pipetas automticas
-Puntas de plstico para pipeta automtica
-Cubetas de plstico para espectrofotmetro
-Reloj
2.2.Reactivos:
-Reactivo 1: Buffer fosfatos (pH 7.0), Salicilato de sodio, Nitroprusiato de sodio,
EDTA
-Reactivo 2: Buffer fosfato (pH 13), hipoclorito
-Standard: solucin de urea 80 mg/dl
-Ureasa (enzima): Solucin estabilizada y tamponada de alta potencia
-Suero sanguneo
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de urea en un suero sanguneo y luego reportar los clculos en la
carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
PRCTICA No. 10
TEMA: Determinacin de transaminasas : TGO y TGP
Las transaminasas son unas enzimas, principalmente localizadas en el hgado. Las ms
importantes son:
- TGO: Transaminasa glutmicooxalactica. Est presente en casi todos los
rganos, dentro de las clulas y que cuando se encuentran en sangre en niveles
muy elevados significa que ha habido destruccin celular.
- TGP: Transaminasa glutmicopirvica. Se localiza principalmente en el hgado y
su misin es la fabricacin de glucosa.
Se utilizan en la clnica para la confirmacin diagnstica del infarto agudo de miocardio
y para el estudio de enfermedades hepticas o musculares.
Para realizar el examen en sangre, previamente es necesario que el paciente, unos das
antes, haga una dieta en la que no sobrecargue el hgado, no tomando alcohol, escasas
protenas y grasas y tambin es necasrio no realizar esfuerzos fsicos importantes
Parte experimental:
1.Procedimiento (en suero o plasma) tanto para TGO como para TGP:
Longitud de onda: Hg 334 nm
Temperatura: 25 C
Cubeta: 1 cm paso de luz
Ajuste cero: contra el aire
Autora: Dra. Celia Bowen
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Reactivo de trabajo
Muestra
PRCTICA No. 11
TEMA: Determinacin de bilirrubina total y directa
El 80-85% de la bilirrubina se origina de la degradacin de la hemoglobina con un 1520% que es derivada del citocromo, mioglobina y catalasas. La bilirrubina no
conjugada, la cal se liga a la albmina del plasma, es producida en el curso de la
degradacin en el sistema reticuloendotelial, clulas Kupffer del hgado, bazo y mdula
Autora: Dra. Celia Bowen
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sea. Los ensayo de bilirrubina son posible para evaluar el grado de severidadad de los
sntomas clnicos de la ictericia as como para evaluar la funcin y el estado del hgado.
Significado de los resultados anormales
La ictericia es la coloracin amarillenta de la piel y de la esclertica del ojo, que ocurre
cuando la bilirrubina se acumula en la sangre a un nivel mayor a 2.5 mg/dL
aproximadamente. La ictericia se presenta porque los glbulos rojos se estn
descomponiendo demasiado rpido para que el hgado los procese, lo cual podra
suceder debido a una enfermedad heptica o a una obstruccin de las vas biliares.
Si hay una obstruccin de las vas biliares, la bilirrubina directa se acumular, escapar
del hgado y terminar en la sangre. Si los niveles son lo suficientemente altos, una
parte de ella aparecer en la orina. Slo la bilirrubina directa aparece en la orina. El
aumento de la bilirrubina directa generalmente significa que las vas biliares (secrecin
heptica) estn obstruidas.
El aumento de la bilirrubina indirecta o bilirrubina total pueden ser un signo de:
Sndrome de Crigler-Najjar
Eritoblastosis fetal
Enfermedad de Gilbert
Cicatrizacin de un hematoma grande (moretn o sangrado bajo la piel)
Anemia hemoltica
Enfermedad hemoltica del recin nacido
Hepatitis
Ictericia fisiolgica (normal en los recin nacidos)
Anemia drepanoctica
Reaccin a una transfusin
Anemia perniciosa
En presencia del acelerador cafena, la bilirrubina total se acopla con el cido sulfnico
para formar un complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es proporcional a
la concentracin de la bilirrubina. La determinacin de la bilirrubina directa es
desarrollada sin aditivo de cafena. La adicin de tartrato alcalino causa una
transformacin del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturas
de las absorvancias son entre 546-578 nm.
Bilirrubina total:
Acido sulfanlico + NaNO2
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cafena
azobilirrubina (rojo)
complejo verde
1. Esquema de pipeteo:
Bilirrubina total
Microdeterminacin
Pipetear en las cubetas
Blanco de reactivo
Muestra
Reactivo 1
100 ul
100 ul
Reactivo 2
------
25 ul
Reactivo 3
500 ul
500 ul
Muestra
100 ul
100 ul
500 ul
500 ul
Blanco de reactivo
Muestra
Reactivo 1
100 ul
100 ul
Reactivo 2
------
25 ul
1000 ul
1000 ul
Muestra
100 ul
100 ul
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3. Materiales y reactivos:
Materiales
Reactivos
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Gradilla
Pipetas automtica
Puntas de plstico para pipetas automt..
Reloj
Cubetas de plstico para espectrofot.
Nota: El espectrofotmetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las
absorbancias.
Valores de referencia:
Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dl
Bilirrubina directa: hasta 0.25 mg/dl
TRABAJO EN CLASE:
Realizar el anlisis de las bilirrubinas en un suero sanguneo y luego reportar los
clculos en la carpeta con la respectiva interpretacin del resultado
BIBLIOGRAFIA:
ngel M., G. y M. ngel R., Interpretacin Clnica del Laboratorio, 6. edicin, Editorial
Mdica Panamericana, Bogot, 2.001
Henry, J. B., Diagnstico y Tratamiento Clnicos por el Laboratorio, 9. Edicin, Editorial
Salvat Mdica, Mxico, 1.993
Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica, O. M. S., Ginebra, 1.992
Morn Villaroto, Obtencin de Muestras Sanguneas de Calidad Analtica, Editorial Mdica
Panamericana, Mxico, 2.001
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