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Cintica y termodinmica de trigo desgrasada reaccin enzimlisis protenas de

germen con pretratamiento ultrasnico Wenjuan Qu la , Haile Ma la , B, , Bin
Liu la , Ronghai l la , Zhongli Pan la , Ernest Ekow Abano una, do la Escuela de
Alimentos e Ingeniera Biolgica de la Universidad de Jiangsu, 301 Xuefu Road,
Zhenjiang, Jiangsu 212013, China segundo Laboratorio clave para
procesamiento fsico de los productos agrcolas, Zhenjiang, Jiangsu 212013,
China do Departamento de Ingeniera Agrcola de la Universidad de Cape
Coast, Cape Coast, Ghana articleinfo La historia del artculo: Recibido 03 de
diciembre 2012 Recibido en forma revisada 15 de abril 2013 Aceptado 29 de
abril 2013 Disponible en lnea 09 de mayo 2013 Palabras clave: Protenas de
germen de trigo Los polipptidos Ultrasonido Cintica Termodinmica abstracto
Esta investigacin explora el mecanismo de pre-tratamiento ultrasnico en
enzimlisis de germen de trigo desgrasada protena (DWGP). El enzymolysis
cintica de la reaccin y la termodinmica se estudiaron despus de
ultrasonidos pretratamientos usando un sonicador de tipo sonda y un bao de
limpieza por ultrasonidos, y los resultados fueron com- comparado con
enzimlisis tradicional. Los resultados mostraron que tanto la pre tradicional y
ultrasnica tratado enzimlisis adaptarse bien a una cintica de primer orden.
Tanto la temperatura y el ultrasonido tenan un positivo efectuar en el
enzimlisis de DWGP, con la temperatura juega un papel dominante. Bajo el
con- optimizado condiciones de concentracin DWGP de 1% (w / v), la
concentracin de Alcalase de 2.000 U / g, el tiempo de 10 min y la temperatura
peratura de 50 C, tanto la sonda y la limpieza de cubas para enzimlisis
pretratados mostr alta concentraciones de polipptido (231.019 y 231.320 l
g / ml) y de baja energa requisitos. En comparacin con enzymolysis
tradicional, estos mtodos aumentaron significativamente la constante de
velocidad de reaccin (k) por 166,7% y 144,4%, 92,9% y 85,7%, 28,0% y
28,0%, 16,1% y 12,9% a los 20, 30, 40 y 50 C, y disminucin de la energa de
activacin (E la ), Entalpa de activacin ( re H), energa libre de Gibbs de
activacin ( re G) y la entropa de la activacin ( re S) por 68.6% y 62.4%,
74.1% y 67.5%, 34.3% y 31.2%, 1.4% y 1.3%. Ello se puede concluir que el
tratamiento previo de ultrasonidos de DWGP puede mejorar notablemente la
eficiencia enzimlisis eficiencia y, en consecuencia conduce a la produccin de
un mayor rendimiento del polipptido. 2013 Elsevier Todos los derechos
reservados. 1. Introduccin El germen de trigo, rico en contenido de protenas
(30%), es un pro- potencial protena de recursos para producir polipptidos
biolgicos [1]. Tradicin cional polipptido produccin mtodos incluir autolisis,
la fermentacin y la hidrlisis enzimtica [2-4] , En la que el mtodo enzimlisis
se utiliza por lo general debido a la reaccin moderada condiciones y alta
especificidad para sustratos [5,6] . Sin embargo, enzimlisis tradicionales
ejerce algunas limitaciones en aplicacin prctica cationes tales como la baja
tasa de conversin del sustrato, bajo utiliza- la tasa de la enzima, y la baja
eficiencia enzymolysis [7] . Esta se debe principalmente a la baja frecuencia de
contacto entre enzima y sustrato Strate, y la estructura de la protena no

adecuado. Por lo tanto, hay una gran la demanda para el desarrollo de mtodos
ms eficientes a enzimlisis superar estas deficiencias. Recientemente, hay
estudios realizados sobre la enzima estructural cambios y mejoras en la
eficiencia enzimlisis usando un ultra- tecnologa de sonido [8,9]. Por ejemplo,
Ma et al. [10] han informado que el ultrasonido aumenta la actividad especfica
de la enzima debido a la Alcalase superficie cambio estructural al aumentar el
nmero de triptfano y reducir el nmero de espiral al azar. Shah y Gupta [11]
han indicado que el pretratamiento ultrasnico mejorado la actividad especfica
de la enzima y por lo tanto acelera la en- Zyme-reaccin catalizada. Estos
cambios se atribuyen a alta presiones, temperaturas y fuerzas de cizallamiento
generadas por la ultra- onda snica, que puede resultar en una mayor
frecuencia de contacto BE- sustrato interpolacin y enzimas, y ventajosamente
cambio estructura de la enzima [12-15] . En la actualidad, la tecnologa de
ultrasonido ha adoptado dos tipos de ultrasonidos: un bao limpieza y un
sonda de ultrasonido. El ultrasonido bao de limpieza se realiza en un bao de
limpieza por ultrasonidos equipado con la superior y la baja er emisores de
ultrasonido plana y muestra la ventaja de uniforme distribucin de la energa
ultrasnica en la solucin de muestra. los sonda de ultrasonidos se realiza a
travs de una sonda de ultrasonido emisor sub- fusionado por debajo de la
solucin de la muestra en un interruptor con el fin de con- concentrado de
energa ultrasnica en un solo lugar. Sin embargo, ninguna investigacin se ha
informado sobre la aplicacin terica y prctica de pretratamiento ultrasnico
en la reaccin enzymolysis de desgrasada protena de germen de trigo
(DWGP). Por lo tanto, los efectos de dos tipos de pretratamientos ultrasnicas
sobre la reaccin enzymolysis son muy importante a estudiar. 1350-4177 / $ ver front matter 2013 Elsevier Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.ultsonch.2013.04.012 Autores correspondientes.
Direccin: Escuela de Alimentos y la ingeniera biolgica, Universidad de
Jiangsu, 301 Xuefu ROADM, Zhenjiang, Jiangsu, 212013, China. Direccin de
correo electrnico: mhl@ujs.edu.cn (H. Ma). Ultrasonidos Sonochemistry 20
(2013) 1408-1413 Listas contenidos ofrecidos en SciVerse ScienceDirect
Ultrasonidos Sonochemistry revista pgina web:
www.elsevier.com/locate/ultson
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Los objetivos de esta investigacin fueron (1) estudiar los efectos de La sonda
y el bao de limpieza pretratamientos ultrasnicos en la enzi- cintica de la
reaccin molysis a diferentes temperaturas y tiempos, (2) determinar los
parmetros termodinmicos de la sonda y limpieza ing bao enzimlisis
pretratados ultrasnica a diferente temperatura turas, y (3) comparar la
cintica de reaccin y termodinmica parmetros de ultrasonidos pretrataron
enzymolysis con la de tradicin enzimlisis cional. Esta investigacin se utiliz
para explicar el meca- nismo de accin de ultrasonido en la reaccin
enzymolysis de DWGP y predecir la produccin de polipptidos, que puede
proporcionar la theoret- base ical y apoyo tecnolgico para nuevas
investigaciones en poli- la produccin de pptidos. 2. Materiales y mtodos 2.1.
Materiales y reactivos Germen de trigo desgrasado (DWG) se obtuvo de An-

yang Hombre- tianxue Food Manufacturing Co., Ltd. (Henan, China). Alcalasa
2.4LFG, con la actividad de 2.670 U / g y recomend temperatura tura de 50
C y pH 9,0 valor, se adquiri en Novozymes Co., Ltd (Tianjin, China). Albmina
de suero bovino (BSA), diastasa, so- cloruro de cido Dium (NaCl), hidrxido de
sodio (NaOH), clorhdrico (HCl), carbonato de sodio (Na 2 CO 3 ), Sulfato de
cobre pentahidratado (CuSO 4 A5H 2 O), tartrato de sodio, tungstato de sodio
(Na 2 WO 4 A2h 2 O), molibdato de sodio (Na 2 Mugir 4 A2h 2 O), cido
fosfrico (H 3 correos 4 ), Lith- sulfato de ium (Li 2 ASI QUE 4 AH 2 O), y el
bromo lquido se adquirieron de Sinopharm Agentes qumicos Co., Ltd
(Shanghai, China). Todo all- agentes fueron de grado analtico. Reactivo de
Folin-fenol A fue pre comparacin en el da de la prueba, que consta de 0,185
M Na 2 CO 3 en 0,098 M NaOH mezcla con 0,393 mM CuSO 4 A5H 2 O en 0.694
tartrato de sodio mM. Folin-fenol reactivo B se prepar de acuerdo con los
siguientes procedimientos. Una mezcla de 100 g Na 2 WO 4- A2h 2 O, 25 g Na
2 Mugir 4 A2h 2 O, 700 ml de agua DI, 50 ml 85% H 3 correos 4 y HCl 100 ml se
separ por destilacin durante 10 h en un aparato Soxhlet. Despus la adicin
de 150 g Li 2 ASI QUE 4 AH 2 O, 50 ml destilados (DI), y unos pocos gotas de
bromo lquido, la mezcla se hirvi abierto en un agua bao (SHZ-88A, Taicang
de Laboratorio Equipos de fbrica, Jiangsu, China) durante 15 min y despus se
enfri a temperatura ambiente (25 C). La solucin se diluy hasta 1000 ml
usando agua DI y centrolo fuged (Xiangyi Inc., Changsha, Hunan, China) a
temperatura ambiente a 10.000 rpm durante 5 min, y se almacenaron en un
refrigerador a 4C hasta su uso. 2.2. Mtodos El experimento se estableci de
acuerdo con el siguiente pasos: En primer lugar, la protena de germen de trigo
desgrasada (DWGP) fue pre- en comparacin con el mtodo descrito en la
Seccin 2.2.1. Segundo, la solucin DWGP se trat previamente con dos tipos
de ultrasonidos de acuerdo con el mtodo descrito en la Seccin 2.2.2 . Por
ltimo, el Soluciones DWGP con y sin tratamientos previos ultrasnicos eran
hidrolizado con Alcalase basado en el mtodo descrito en el Seccin 2.2.3.
2.2.1. Desgrasada protenas de germen de trigo (DWGP) preparacin El DWGP
fue preparado basado en un mtodo reportado [16] . LA Se ha aadido el
volumen de 1000 ml de agua DI a 100 g DWG con parti- CLE tamao de 0,15
mm y luego se mezcla con 1% (w / v) en solucin de NaCl un bao de agua a
50 C durante 30 min. A continuacin, la solucin se ajust a valor de pH 9,0
utilizando solucin 1 M de NaOH y se agit continuamente durante 30 min a 50
C. El lquido se separa del slido por una baja centrfuga de velocidad (LD510B, Pekn Laboratorio Centrfuga Co., Ltd, Beijing, China) que funciona a 5000
rpm a temperatura ambiente durante 20 min. Posteriormente, el lquido se
ajust a pH 6,5 con 1 M Solucin de HCl y luego se hace reaccionar con
diastasa aadieron a 20 U / g DWGP (contenido en protenas calculado por el
mtodo Kjeldahl) a 50 C durante 3 h. La solucin se deposita mediante el
ajuste al valor de pH 4,0 usando Solucin de HCl 1 M. El slido depositado se
separ de la li- quid por centrifugacin a 5000 rpm a temperatura ambiente
durante 20 min y luego el polvo DWGP mediante secado por pulverizacin se
almacen en un desecador para su posterior anlisis. 2.2.2. Desgrasada
protenas de germen de trigo (DWGP) pretratamientos Antes de enzymolysis
reaccin, la DWGP se trat previamente en dos tipo de tratamientos previos de

ultrasonidos utilizando un tipo de sonda de ultrasonidos y un bao de limpieza

por ultrasonidos. Un volumen de 10 L de 2% (w / v) de solucin DWGP se puso
en un 15 L cubas para limpieza equipado con el superior y el inferior emisores
de ultrasonido planas (distancia de 7 cm). Esta limpieza ultrasnica bao, que
fue fabricado por la Universidad de Jiangsu, tiene funcin modos de operacin
frecuencia de barrido y el funcionamiento por impulsos. por ejemplo, la
operacin de frecuencia de barrido se refiere al barrido cuencia ciclo cuencia
de aumentar periodo del 22 al 26 kHz y decreciente ing del 26 al 22 kHz con la
misma velocidad lineal en el forma de un tringulo issceles. Por lo tanto la
frecuencia de barrido es re- portado como 24 2 kHz y un perodo de aumento
de ms una disminucin perodo se define como un tiempo de ciclo de la
frecuencia de barrido en este re- buscar. La operacin pulsada denota que el
ultrasonido se genera ado en un modo pulsado con un tiempo de encendido y
un tiempo fuera. El DWGP solucin se someti a ultrasonidos a 20 C durante
30 min bajo las siguientes condiciones: potencia de 1200 W, frecuencia
combinacin de 24 2 kHz y 68 kHz 2, tiempo de ciclo de la frecuencia de
barrido de 100 s, y pulsado a tiempo y fuera de tiempo de 500 y 10 s. A 1.667
ml de volumen de solucin DWGP 2% se puso en un ml 2000 interruptor y la
solucin de muestra se sometieron a ultrasonidos en un tipo de sonda
ultrasonidos (GA92-II DB, Shanghai Biotecnologa Co., Wuxi, China) con un
emisor de ultrasonidos de sonda (dimetro de 2 cm) sumergido 2 cm por
debajo de la solucin de muestra en el interruptor. La solucin de la muestra
cin se trat a 20 C durante 10 min en las condiciones: Potencia de 600 W,
frecuencia fija de 20 kHz, y se pulsan a tiempo y off- tiempo de 2 y 2 s. El
control fue sometido al mismo proceso y actu en las mismas condiciones pero
sin ultrasonidos pretratamiento. 2.2.3. Desgrasada protenas de germen de
trigo (DWGP) reaccin enzimlisis Tanto las soluciones DWGP 2% con y sin pre
ultrasnica tratamientos se diluyeron hasta 1% de soluciones antes de la
reaccin enzymolysis cin. Luego 1% soluciones de muestra se sometieron a la
sonda y limpieza pretratamientos de ultrasonidos de bao se ajustaron por
separado para va- pH Lue 9,0 utilizando solucin 1 M de NaOH y se hizo
reaccionar con Alcalase aadi a 2000 U / g DWGP en un bao de agua a 20,
30, 40, y 50 C durante 2, 4, 6, 8, y 10 min, respectivamente. La solucin en el
proceso de enzi- molysis se control a pH 9,0. Despus de la hidrlisis, el
enzima en hidrolizado se inactiv con el mismo volumen de 6% de cido
tricloroactico y luego se hierven en un bao de agua para 10 minutos. A
continuacin, el hidrolizado se enfri a 40 C, centrolo fuged desde el slido a
10.000 rpm a temperatura ambiente durante 15 min, y se analizaron. Se
realiz el enzymolysis tradicional utilizando el mismo procedimiento con
enzymolysis pretratado ultrasnica de la solucin de control como el sustrato.
2.2.4. Cintica de la reaccin enzymolysis El modelo de primer orden cintica
informado por Takahashi et al. [17] se aplic en el estudio de la cintica de
enzymolysis DWGP. El ki- modelo ntico fue escrito como: corriente continua t
dt de un KC t 1 donde k es la constante de velocidad de reaccin total que
involucra la tasa de con- stants de ultrasonido k u y la temperatura k do (Ec.
(4) ), Y C t es el W. Qu et al. / Ultrasonidos Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413
1.409

Pgina 3
DWGP concentracin en solucin de reaccin en un momento dado t min ( l
gramo/ ml). . Despus de integrar la ecuacin (1), modelo cintico se expres
como: En C t kt En C 0 2 donde C 0 es la concentracin inicial en
DWGP solucin de reaccin ( l gramo/ ml). Como es difcil para medir la
disminucin de DWGP, la reaccin la tasa puede ser determinado por el
aumento de la cantidad de polipptidos marea publicado por DWGP. El modelo
cintico de primer orden en el marco del condiciones de reaccin t = 0-1, C t =
Q 1 Q t Y C 0 = Q 1 fue escrito como: LND Q 1 Q t kt ln Q 1 3
donde Q 1 es la concentracin de polipptido ltimo en la reaccin de solucin
( l g / ml), y Q t es la concentracin del polipptido en el solucin de reaccin
en un momento dado t min ( l g / ml). El K y Q 1 Los valores pueden
determinarse experimentalmente a partir de la pendiente y la interseccin
trazando ln (Q 1 Q t ) En contra de t. En comparacin con enzymolysis
tradicional, el pre ultrasnica enzymolysis reaccin tratada puede ser
influenciada por el ultrasonido efectuar adems del efecto trmico. Por lo tanto,
la k en ultra- sonic enzymolysis pretratada se expres como: k k do k u 4
donde k do es la constante de velocidad de reaccin inducida por efecto
trmico en enzymolysis tradicional, y k u se induce la constante de velocidad
de reaccin por efecto del ultrasonido en enzymolysis pretratado ultrasnica.
2.2.5. Termodinmica enzimlisis Ecuacin de Arrhenius se aplic en la
descripcin de la relacin entre k constante de velocidad de reaccin y la
temperatura T, que era escrita como [18]: k Ae Ea RT 5 donde A es el
factor pre-exponencial o de colisin (1 / min), E la es el energa de activacin
(J / mol), R es la constante universal de los gases (8,314 J / mol K), y T es la
temperatura absoluta (K). La trama de ln k frente a 1 / T se utiliz para el
clculo de E la . Eyring teora del estado de transicin (TST) se utiliz para
entender la efecto de la temperatura sobre enzymolysis y tambin el
macroscpica cambios observados en este estudio [10]. La ecuacin TST fue
escrito como: k k segundo T marido exp re GRAMO RT k segundo T
marido exp re MARIDO RT re S R 6 donde k segundo es la constante de
Boltzmann (1.38 a 10 A23 J / K), h es la Constante de Planck (6,6256 10 A34 J
/ s), re G es la energa libre de Gibbs de la activacin (J / mol), re H es la
entalpa de activacin (J / mol), y re S es la entropa de activacin (J / mol K).
Despus de la transformacin logaritmo, la ecuacin TST se expres como: ln k
T re MARIDO R LA 1 T re S R ln marido k segundo 7 La trama de ln (K
/ T) frente a 1 / T se utiliz para los clculos de re G, re H, y re S. 2.2.6.
Determinacin de la concentracin de polipptido La concentracin de
polipptido, l g / ml, se determin utilizando un informaron Folin-fenol mtodo
colorimtrico [19]. Inicialmente, un volumen 4 ml de reactivo de Folin-fenol A
se mezcl con 0,5 ml de muestra en una tubo de vidrio. La solucin se incub
durante 10 min a tempe- habitacin ratura, despus de lo cual 0,5 ml de
reactivo de Folin-fenol B se aadi a cada tubo de vidrio, y la absorbancia se
ley a 500 nm en un espectrofotmetro fotmetro (Unic 7200, Unocal
Corporation, Shanghai, China) despus 30 min de incubacin. Un espacio en
blanco se prepar usando agua DI en lugar de la muestra. Normas de 0-50 l g /
ml de BSA se ensayaron 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 5.0 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 20 o

do 30 o do 40 o do 50 o do ln (V -Vermont) (a) el tiempo enzimlisis (min) 0 1 2

3 4 5 6 7 8 9 10 11 5.0 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 20 o do 30 o do 40 o do 50 o do ln (V
-Vermont) (b) el tiempo enzimlisis (min) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 5.0 5.1 5.2
5.3 5.4 5.5 20 o do 30 o do 40 o do 50 o do ln (V -Vermont) (c) enzymolysis
tiempo (min) Fig. 1. Los ln (Q 1 Q t ) Frente a veces en valores tradicionales
(a), la sonda (b) y limpieza bao (c) enzymolysis pretratado ultrasnica a
diferentes temperaturas. La regresin coeficientes de las curvas obtenidas a
los 20, 30, 40 y 50 C son 0,96, 0,95, 0,98 y 0,95 en (a), 0.96, 0.96, 0.96 y
0.99 en (b), y 0,96, 0,96, 0,96 y 0,99 en (c), respectivamente.
14simultneamente con los ensayos por triplicado de las muestras con el fin de
calcular las concentraciones de polipptido de muestras. 2.3. El anlisis
estadstico Todos los experimentos se realizaron en muestras por triplicado. Los
datos se presentan como media. Se realiz anlisis de varianza (ANOVA) para
comparar el efecto de los ultrasonidos bajo el nivel de significacin de p <0,05.
Todos los grficos y el clculo se preformados con el Origen Pro 7.5SR1 y
Microsoft Office Excel 2003, respectivamente. 3. Resultados y discusin 3.1.
Efecto del pretratamiento ultrasnico sobre la cintica de reaccin enzymolysis
El valor de la constante de velocidad es un parmetro importante de la cintica
de la reaccin qumica, que es independiente sobre el sustrato concentracin.
El cambio de enzimlisis de DWGP inducida por pretratamiento ultrasnico
dar como resultado el cambio de la constante de velocidad. Fig. 1 muestra las
parcelas de ln (Q 1 Q t ) Versus t en el tradicional, la sonda y bao de
limpieza por ultrasonidos pretratado enzimlisis a diferentes temperaturas. Se
puede observar a partir de la Fig. 1 (a) que los ln (Q 1 Q t ) tenido una buena
relacin lineal con el tiempo a diversas temperaturas, como re- revelado por el
coeficientes de correlacin superior a 0,95. Este resultado representa que el
proceso tradicional de DWGP enzymolysis obedecida cintica de primer orden.
Debido a que los coeficientes de correlacin en la figura. 1 (b) y (c) fueron
mayores que 0,96, el bao y la limpieza de sonda de ultra- snica pretratado
enzimlisis tambin encaja bien con la cintica de primer orden. En tanto el
enzymol- pretratados tradicional y ultrasonidos generales analysis obedeci
cintica de primer orden dentro del rango de temperatura BORNE IED. Los
parmetros cinticos de reaccin k y Q 1 se determinaron de la pendiente y la
interseccin trazando ln (Q 1 Q t ) Contra t, usando Origen Pro 7.5SR1, y se
enumeran en la Tabla 1. Se puede observar a partir de la Tabla 1 que el valor k
fue la ms alta, seguido por k t y k u a todas las temperaturas probadas. El
mayor que k k t a cualquier temperatura indicado que el tipo de ultrasonido si
el bao de sonda y limpieza no result significativamente mejorado prob la
velocidad de reaccin de DWGP enzimlisis compara con tra- enzimlisis
condicional. Del mismo modo, Jia et al. [20] han encontrado que la
pretratamiento ultrasnico con una potencia de 0 a 1800 W y hora de 20 min
puede facilitar la hidrlisis enzimtica de DWGP y pro- Mote la liberacin de
polipptidos de DWGP. Esto es porque el intensas presiones altas, las
temperaturas y las fuerzas de corte generadas por ecografa eficacias de
cavitacin pueden cambiar el DWGP y Alca- estructuras lase [21] . La
exposicin del centro activo causada por la ultra- sonido hara que la enzima se
combinan fcilmente con DWGP y exposiciones mayor capacidad de reaccin

[22,23] . Liu et al. [24] han confirmado que Estructura DWGP fue cambiado por
tratamiento ultrasnico con poder de 600 W y tiempo de 10 min determinados
por FTIR y fluorescencia espectros, y sus cambios estructurales fueron
beneficiosas para promover hidrlisis enzimtica de alta eficiencia. Jia et al.
[25,26] tiene tambin encontr que la estructura DWGP fue alterada por los
tratamientos de ultrasonido utilizando sulfhidrilo y disulfuro contenidos de
bonos gratis, ultravioleta espec- trum, y espectros de fluorescencia y por lo
tanto su fisicoqumica propiedades cambian. Por otra parte, Ma et al. [10] han
informado de que la estructura Alcalase determinado por espectroscopia de
fluorescencia y espectroscopa de dicrosmo circular (CD) mejor como
resultado de aplicacin de ultrasonido, que afect positivamente su actividad.
En Adems, la mayor k t que k u a todas las temperaturas que se indica la
temperatura juega un papel preponderante tanto en la sonda y limpieza bao
ultrasnico enzimlisis pretratados aunque la constante de velocidad se mejor
mediante la aplicacin de ultrasonidos. Tambin se observ que tanto kyk t
aumentado a medida que la temperatura aument de 20 C a 50 C. Por lo
tanto, se puede concluir que el efecto trmico dominado e influenciado
positivamente la reaccin enzimlisis de DWGP. Esta es debido a la capacidad
de aumento de la temperatura para aumentar la en- la actividad y de la
colisin enzima de frecuencia entre enzima y sustrato haciendo la reaccin
Strate, enzima ms rpido [27] . Esta confirmado el informe de KYLA-Puhju et
al. [28] que hay una lineal positiva correlacin entre la actividad enzimtica y
la temperatura. Comparado con enzimlisis tradicional, las crecientes tasas de
k en la sonda ultrasnica pretratado enzymolysis a los 20, 30, 40 y 50 C eran
166,7%, 92,9%, 28,0% y 16,1%, respectivamente, con los correspondientes
aumento de las tasas de k en el bao de limpieza por ultrasonido como
144,4%, 85,7%, 28,0% y 12,9%, respectivamente. Por otra parte, la k u
disminucin con el aumento de la temperatura enzymolysis, que estaba
enfrente a k y k t . Esto indic que los efectos de la sonda de ultrasonido y
limpieza tipos de bao contribuyeron en gran medida a la constante de
velocidad a temperaturas ms bajas pero muy poco a temperaturas ms altas.
los disminucin de k u se debe a la disminucin de la solubilidad del gas en el
grueso de fluido y el aumento de la presin de vapor de equilibrio de la ma
TEM como la temperatura aument [29]. La variacin de la tasa de conconstante k u con la temperatura estaba de acuerdo con el resultado de
reportado por Kadkhodaee y Povey [30]. Los resultados mostraron que
aplicacin de ultrasonidos a baja temperatura afect ms impor- tant ventaja
de que a altas temperaturas. Se puede observar a partir de Tabla 1 que el Q 1
valor no fue influenciada significativamente por la pretratamiento ultrasnico
cuando se compara con enzymol- tradicional analysis. Al tener en cuenta la
eficiencia enzimlisis y el polipptido la produccin, el mtodo recomendado
debe ser el ultrasnica enzymolysis pretratado con independencia del tipo de
ultrasonido para la concentracin DWGP de 1% (w / v), la concentracin de
Alcalase 2000 U / g, el tiempo de 10 min, y la temperatura de 50 C, lo que dio
una alta concentracin de polipptido de 231.019 l g / ml o 231.320 l gramo/
ml para la sonda o la limpieza de ultrasonido bao. 3.2. Efecto del tratamiento
previo de ultrasonidos en la termodinmica enzimlisis Los parmetros

termodinmicos E la , y re G, re H y re S eran determinado a partir de las pistas

y intercepta trazando ln k frente Mesa 1 Las constantes de velocidad de
reaccin en tradicional, sonda y de limpieza bao de ultrasonidos pretrataron
enzymolysis a diferentes temperaturas. Escribe Temperatura ( C) k (1 / min) k
do (1 minuto) k u (1 minuto) Q 1 ( l g / mL) Enzimlisis Tradicional 20 0,009
0,009 0 243.935 30 0,014 0,014 0 243.861 40 0,025 0,025 0 238.245 50 0,031
0,031 0 245.746 Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados 20 0.024 (166,7%)
la 0,009 0,015 247.176 30 0.027 (92,9%) 0,014 0,013 244.057 40 0.032
(28,0%) 0,025 0,007 225.721 50 0.036 (16,1%) 0,031 0,005 231.019 Cubas
para limpieza enzimlisis pretratados 20 0.022 (144,4%) 0,009 0,013 249.236
30 0.026 (85,7%) 0,014 0,012 245.550 40 0.032 (28,0%) 0,025 0,008 225.270
50 0.035 (12,9%) 0,031 0,004 231.320 la Los valores entre parntesis son las
crecientes tasas de velocidad constante en enzimlisis pretratados ultrasonidos
en comparacin con enzimlisis tradicional reaccin. W. Qu et al. / Ultrasonidos
Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413 1,411
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1 / T de la figura. 2 y ln (k / T) frente a 1 / T de la Fig. 3, respectivamente y se
muestran en la Tabla 2. Por lo general, E la , La cantidad de energa re- rido
formar molculas no de activacin en molculas de activacin, refleja la
rapidez de las reacciones qumicas, lo que representa un ayuno velocidad de
reaccin cuando es baja y una velocidad lenta cuando la alta [31] . El E la los
valores de la mayora de las reacciones varan de 40 kJ / mol a 400 kJ / mol. Si
el valor es inferior a 40 kJ / mol, la reaccin se com- plete muy rpidamente.
Cuanto menor E la (<40 kJ / mol) tanto de la tradicin cional y enzimlisis
pretratados ultrasnica implicaban que menos se necesita energa para la
reaccin enzymolysis y una reaccin ms rpida tasa de entre el DWGP y
Alcalase. Adems, se observ que E la valores de reaccin enzymolysis con la
sonda y limpieza pretratamientos ultrasnicos bao ing disminuyeron
significativamente en com- comparacin con la tradicional y las tasas
decrecientes eran tan alto como 68,6% y 62,4%. Este resultado certificada ms
lejos de la mecanismo que el ultrasonido disminuy significativamente la
energa requiere barrera para la reaccin enzymolysis. Por lo tanto, ultrasnica
enzimlisis pretratados corri ms rpidamente que los clsicos, que era
consistente con el fenmeno observado en el experimentar. los re H, re G, y re
Valores S, que muestran una tendencia similar con E la , Fueron,
respectivamente, reducido en un 74,1% y 67,5%, 34,3% y 31,2% y 1,4% y
1,3% para la sonda y bao de limpieza ultra- sonidos, que tambin se puede
explicar con ms detalle que la reaccin enzymolysis la catalizada por el
pretratamiento ultrasnico puede ocurrir muy rpidamente. Un informe similar
ha mostrado que los parmetros termodinmicos (E la , re H, re G, y re S) de
Alcalase puede ser reducido por ultrasonido tratamiento y, en consecuencia
lleva a un aumento en la enzima actividad [10]. La gran disminucin en el
parmetro termodinmico tros se pueden atribuir a la rotura por ultrasonidos
inducida de enlaces de hidrgeno, la interrupcin del ncleo hidrofbico
interno, oxidacin tiva modificacin de residuos de aminocidos, la iniciacin
de cross-varillaje cin, y la agregacin de protenas [10]. Adems, se encontr

que los descensos, tanto en el re H y re S eran beneficiosos para el re G

descenso, mientras que el cambio en la re H tuvo mucha ms influencia en re
G debido a la mayor tasa decreciente de re H de re S. En ge- ral, los resultados
obtenidos demostraron claramente que por ultrasonidos pretratamiento con
independencia del tipo era beneficioso para el enzi- molysis reaccin de DWGP
porque de sus bajo energa requisitos. 4. Conclusiones Los resultados
mostraron que tanto la pre tradicional y ultrasnica tratado enzimlisis
adaptarse bien a una cintica de primer orden. Ultrasonido seal
significativamente promovido la velocidad de reaccin de DWGP enzimlisis en
diversas temperaturas especialmente a una temperatura baja, pero no seal
efecto sobre la concentracin de sig- polipptido final. Comparado con
enzymolysis tradicional, las constantes de velocidad de la sonda y Bao de
limpieza por ultrasonidos enzimlisis pretratados fueron respectivamente
aument en 166,7% y 144,4%, 92,9% y 85,7%, 28,0% y 28,0%, 16,1% y 12,9%
a los 20, 30, 40 y 50 C. El efecto trmico jug un papel dominante tanto en la
sonda y la limpieza de bao de pre ultrasnica enzymolysis tratados en
comparacin con el efecto de ultrasonido. Ambos sonda y del bao de limpieza
ultrasonidos mostraron significativa positiva efectos sobre la termodinmica de
DWGP enzimlisis cuando com- comparacin con enzymolysis tradicional, en la
que el E la , re H, re G, y re S fueron respectivamente redujeron en 68,6% y
62,4%, 74,1% y 67,5%, 34,3% y 31,2%, 1,4% y 1,3%. En general, tanto la
sonda y la limpieza de bao ultrasnico enzimlisis pretratados era eficiente
mtodos para producir polipptidos de DWGP. Bajo el reco- concentracin recoDWGP de 1% (w / v), Alcalase concentracin cin de 2000 U / g, el tiempo de
10 min y la temperatura de 50 C, estos mtodos mostraron altas
concentraciones de polipptido (231.019 y 231.320 l g / ml) y de baja energa
requisitos. 3.0 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 -9,5 -9.0 -8,5 -8,0 -7,5 -7,0 -sesenta y cinco
Enzimlisis Tradicional Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados Cubas para
limpieza enzimlisis pretratados ln k (1 / s) 1 / T 10 -3 (1 / K) Fig. 2. La
relacin entre ln k y 1 / T en el tradicional, la sonda y el bao de limpieza
ultrasonidos pretratado enzimlisis. Los coeficientes de regresin de las curvas
son 0,98, 0,99 y 0,98, respectivamente. 3.0 3.1 3.2 3.3 3.4 3.5 -15.0 -14.5
-14.0 -13.5 -13.0 -12.5 Emzymolysis Tradicional Sonda ultrasnica enzimlisis
pretratados Cubas para limpieza enzimlisis pretratados ln ( k / T ) (1 / s . K )
1 / T 10 -3 (1 / K) Fig. 3. La relacin entre ln (k / T) y 1 / T en el tradicional,
sonda y limpieza bao ultrasnico pretratado enzimlisis. Los coeficientes de
regresin de las curvas son 0,97, 0,99 y 0,96, respectivamente. Tabla 2
Parmetros termodinmicos en la tradicional, la sonda y el bao de limpieza
ultrasnico enzymolysis pretratada. Escribe mi la (A10 3 J / mol) D H (A10 3 J /
mol) D S (J / mol K) D G (A10 3 J / mol) Enzimlisis Tradicional 34.256 31.699
209.9 96.379 Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados 10.762 (68,6%) la
8.205 (74,1%) 281.916 (34,3%) 95,077 (1,4%) Cubas para limpieza
enzimlisis pretratados 12.865 (62,4%) 10.309 (67,5%) 275.358 (31,2%)
95,160 (1,3%) la Los valores entre parntesis son las tasas decrecientes de
parmetros termodinmicos en enzimlisis pretratados ultrasonidos en
comparacin con enzimlisis tradicional. 1412 W. Qu et al. / Ultrasonidos
Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413

Pgina 6
Expresiones de gratitud Los autores desean extender su agradecimiento a la
Nacional Fundacin de Ciencias Naturales China (31071502), el Pub- Nacional
lic Bienestar Industria (Agricultura) Ciencia y Tecnologa Especial China
(201303071), la Fundacin de Ciencias Naturales de Jiangsu Provincia
(BK2012708) y la prioridad del Programa Acadmico rrollo rrollo (DPPA) de
Jiangsu Instituciones de Educacin Superior para su apoyo financiero hacia el
estudio. Referencias [1] R. Amado, E. Arrigoni, Int. Food Ingredients 4 (1992)
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99 (2010) 16-23 .

Pgina 4

simultneamente con los ensayos por triplicado de las muestras con el fin de
calcular las concentraciones de polipptido de muestras.
2.3. El anlisis estadstico
Todos los experimentos se realizaron en muestras por triplicado. Los datos se
presentan como media. Se realiz anlisis de varianza (ANOVA)
para comparar el efecto de los ultrasonidos bajo el nivel de significacin
de p <0,05. Todos los grficos y el clculo se preformados con el
Origen Pro 7.5SR1 y Microsoft Office Excel 2003, respectivamente.
3. Resultados y discusin
3.1. Efecto del pretratamiento ultrasnico sobre la cintica de reaccin
enzymolysis
El valor de la constante de velocidad es un parmetro importante de la
cintica de la reaccin qumica, que es independiente sobre el sustrato
concentracin. El cambio de enzimlisis de DWGP inducida por
pretratamiento ultrasnico dar como resultado el cambio de la constante de
velocidad.
Fig. 1 muestralasparcelasdeln(Q
1
Q
t
) Versus t en el tradicional, la sonda
y bao de limpieza por ultrasonidos pretratado enzimlisis a diferentes
temperaturas. Se puede observar a partir de laFig. 1 (a) que los ln (Q
1
Q
t
) tenido
una buena relacin lineal con el tiempo a diversas temperaturas, como rerevelado por el coeficientes de correlacin superior a 0,95. Este resultado
representa que el proceso tradicional de DWGP enzymolysis obedecida
cintica de primer orden. Debido a que los coeficientes de correlacin en la
figura. 1 (b)
y (c) fueron mayores que 0,96, el bao y la limpieza de sonda de ultrasnica pretratado enzimlisis tambin encaja bien con la cintica de primer
orden.
En tanto el enzymol- pretratados tradicional y ultrasonidos generales

analysis obedeci cintica de primer orden dentro del rango de temperatura

BORNE
IED. Los parmetros cinticos de reaccin k y Q
1
se determinaron
de la pendiente y la interseccin trazando ln (Q
1
Q
t
) Contra t, usando
Origen Pro 7.5SR1, y se enumeran en laTabla1.
Se puede observar a partir de laTabla1 que el valor k fue la ms alta,
seguido por k
t
yk
u
a todas las temperaturas probadas. El mayor que k
k
t
a cualquier temperatura indicado que el tipo de ultrasonido
si el bao de sonda y limpieza no result significativamente mejorado
prob la velocidad de reaccin de DWGP enzimlisis compara con traenzimlisis condicional. Del mismo modo, Jia et al. [20] han encontrado que la
pretratamiento ultrasnico con una potencia de 0 a 1800 W y hora de
20 min puede facilitar la hidrlisis enzimtica de DWGP y proMote la liberacin de polipptidos de DWGP. Esto es porque el
intensas presiones altas, las temperaturas y las fuerzas de corte generadas
por ecografa eficacias de cavitacin pueden cambiar el DWGP y Alcaestructuras lase [21] . La exposicin del centro activo causada por la ultrasonido hara que la enzima se combinan fcilmente con DWGP y exposiciones
mayor capacidad de reaccin [22,23] . Liu et al. [24] han confirmado que
Estructura DWGP fue cambiado por tratamiento ultrasnico con poder
de 600 W y tiempo de 10 min determinados por FTIR y fluorescencia
espectros, y sus cambios estructurales fueron beneficiosas para promover
hidrlisis enzimtica de alta eficiencia. Jia et al. [25,26] tiene tambin
encontr que la estructura DWGP fue alterada por los tratamientos de ultrasonido
utilizando sulfhidrilo y disulfuro contenidos de bonos gratis, ultravioleta espectrum, y espectros de fluorescencia y por lo tanto su fisicoqumica
propiedades cambian. Por otra parte, Ma et al. [10] han informado de que
la estructura Alcalase determinado por espectroscopia de fluorescencia
y espectroscopa de dicrosmo circular (CD) mejor como resultado de

aplicacin de ultrasonido, que afect positivamente su actividad. En

Adems, la mayor k
t
que k
u
a todas las temperaturas que se indica
la temperatura juega un papel preponderante tanto en la sonda y limpieza
bao ultrasnico enzimlisis pretratados aunque la constante de velocidad
se mejor mediante la aplicacin de ultrasonidos. Tambin se observ que
tanto kyk
t
aumentado a medida que la temperatura aument de 20 C a
50 C. Por lo tanto, se puede concluir que el efecto trmico dominado
e influenciado positivamente la reaccin enzimlisis de DWGP. Esta
es debido a la capacidad de aumento de la temperatura para aumentar la enla actividad y de la colisin enzima de frecuencia entre enzima y sustrato
haciendo la reaccin Strate, enzima ms rpido [27] . Esta confirmado
el informe de KYLA-Puhju et al. [28] que hay una lineal positiva
correlacin entre la actividad enzimtica y la temperatura. Comparado
con enzimlisis tradicional, las crecientes tasas de k en la sonda
ultrasnica pretratado enzymolysis a los 20, 30, 40 y 50 C eran
166,7%, 92,9%, 28,0% y 16,1%, respectivamente, con los correspondientes
aumento de las tasas de k en el bao de limpieza por ultrasonido como 144,4%,
85,7%, 28,0% y 12,9%, respectivamente. Por otra parte, la k
u
disminucin
con el aumento de la temperatura enzymolysis, que estaba enfrente
akyk
t
. Esto indic que los efectos de la sonda de ultrasonido
y limpieza tipos de bao contribuyeron en gran medida a la constante de
velocidad
a temperaturas ms bajas pero muy poco a temperaturas ms altas. los
disminucin de k
u
se debe a la disminucin de la solubilidad del gas en el grueso
de fluido y el aumento de la presin de vapor de equilibrio de la ma
TEM como la temperatura aument [29]. La variacin de la tasa de conconstante k
u
con la temperatura estaba de acuerdo con el resultado de

reportado por Kadkhodaee y Povey [30]. Los resultados mostraron que

aplicacin de ultrasonidos a baja temperatura afect ms important ventaja de que a altas temperaturas. Se puede observar a partir de
Tabla 1 queelQ
1
valor no fue influenciada significativamente por la
pretratamiento ultrasnico cuando se compara con enzymol- tradicional
analysis. Al tener en cuenta la eficiencia enzimlisis y el polipptido
la produccin, el mtodo recomendado debe ser el ultrasnica
enzymolysis pretratado con independencia del tipo de ultrasonido para
la concentracin DWGP de 1% (w / v), la concentracin de Alcalase
2000 U / g, el tiempo de 10 min, y la temperatura de 50 C, lo que dio una
alta concentracin de polipptido de 231.019
l
g / ml o 231.320
l
gramo/
ml para la sonda o la limpieza de ultrasonido bao.
3.2. Efecto del tratamiento previo de ultrasonidos en la termodinmica
enzimlisis
Los parmetros termodinmicos E
la
,y
re
G,
re
Hy
re
S eran
determinado a partir de las pistas y intercepta trazando ln k frente
Mesa 1
Las constantes de velocidad de reaccin en tradicional, sonda y de limpieza bao
de ultrasonidos pretrataron enzymolysis a diferentes temperaturas.
Escribe
Temperatura ( C)
k (1 / min)
k
do
(1 minuto)
k
u

(1 minuto)
Q
1
(
l
g / mL)
Enzimlisis Tradicional
20
0,009
0,009
0
243.935
30
0,014
0,014
0
243.861
40
0,025
0,025
0
238.245
50
0,031
0,031
0
245.746
Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados
20
0.024 (166,7%)
la
0,009
0,015
247.176
30
0.027 (92,9%)
0,014
0,013
244.057
40
0.032 (28,0%)

0,025
0,007
225.721
50
0.036 (16,1%)
0,031
0,005
231.019
Cubas para limpieza enzimlisis pretratados
20
0.022 (144,4%)
0,009
0,013
249.236
30
0.026 (85,7%)
0,014
0,012
245.550
40
0.032 (28,0%)
0,025
0,008
225.270
50
0.035 (12,9%)
0,031
0,004
231.320
la
Los valores entre parntesis son las crecientes tasas de velocidad constante en
enzimlisis pretratados ultrasonidos en comparacin con enzimlisis tradicional
reaccin

Pgina 1

Cintica y termodinmica de trigo desgrasada reaccin enzimlisis

protenas de germen con pretratamiento ultrasnico
Wenjuan Qu
la
, Haile Ma

la ,B,

, Bin Liu
la
, Ronghai l
la
, Zhongli Pan
la
, Ernest Ekow Abano
una, do
la
Escuela de Alimentos e Ingeniera Biolgica de la Universidad de Jiangsu, 301
Xuefu Road, Zhenjiang, Jiangsu 212013, China
segundo
Laboratorio clave para procesamiento fsico de los productos agrcolas,
Zhenjiang, Jiangsu 212013, China
do
Departamento de Ingeniera Agrcola de la Universidad de Cape Coast, Cape
Coast, Ghana
articleinfo
La historia del artculo:
Recibido 03 de diciembre 2012
Recibido en forma revisada 15 de abril 2013
Aceptado 29 de abril 2013
Disponible en lnea 09 de mayo 2013
Palabras clave:
Protenas de germen de trigo
Los polipptidos
Ultrasonido
Cintica
Termodinmica
abstracto
Esta investigacin explora el mecanismo de pre-tratamiento ultrasnico en
enzimlisis de germen de trigo desgrasada
protena (DWGP). El enzymolysis cintica de la reaccin y la termodinmica se
estudiaron despus de ultrasonidos
pretratamientos usando un sonicador de tipo sonda y un bao de limpieza por
ultrasonidos, y los resultados fueron comcomparado con enzimlisis tradicional. Los resultados mostraron que tanto la pre
tradicional y ultrasnica

tratado enzimlisis adaptarse bien a una cintica de primer orden. Tanto la

temperatura y el ultrasonido tenan un positivo
efectuar en el enzimlisis de DWGP, con la temperatura juega un papel
dominante. Bajo el con- optimizado
condiciones de concentracin DWGP de 1% (w / v), la concentracin de Alcalase
de 2.000 U / g, el tiempo de 10 min y la temperatura
peratura de 50 C, tanto la sonda y la limpieza de cubas para enzimlisis
pretratados mostr alta
concentraciones de polipptido (231.019 y 231.320
l
g / ml) y de baja energa requisitos. En comparacin
con enzymolysis tradicional, estos mtodos aumentaron significativamente la
constante de velocidad de reaccin (k) por
166,7% y 144,4%, 92,9% y 85,7%, 28,0% y 28,0%, 16,1% y 12,9% a los 20, 30,
40 y 50 C, y
disminucin de la energa de activacin (E
la
), Entalpa de activacin (
re
H), energa libre de Gibbs de activacin (
re
G)
y la entropa de la activacin (
re
S) por 68.6% y 62.4%, 74.1% y 67.5%, 34.3% y 31.2%, 1.4% y 1.3%. Ello
se puede concluir que el tratamiento previo de ultrasonidos de DWGP puede
mejorar notablemente la eficiencia enzimlisis
eficiencia y, en consecuencia conduce a la produccin de un mayor rendimiento
del polipptido.
2013 Elsevier Todos los derechos reservados.
1. Introduccin
El germen de trigo, rico en contenido de protenas (30%), es un pro- potencial
protena de recursos para producir polipptidos biolgicos [1]. Tradicin
cional
polipptido
produccin
mtodos
incluir
autolisis,
la fermentacin y la hidrlisis enzimtica [24] , En la que el
mtodo enzimlisis se utiliza por lo general debido a la reaccin moderada

condiciones y alta especificidad para sustratos [5,6] . Sin embargo,

enzimlisis tradicionales ejerce algunas limitaciones en aplicacin prctica
cationes tales como la baja tasa de conversin del sustrato, bajo utilizala tasa de la enzima, y la baja eficiencia enzymolysis [7] . Esta
se debe principalmente a la baja frecuencia de contacto entre enzima y sustrato
Strate, y la estructura de la protena no adecuado. Por lo tanto, hay una gran
la demanda para el desarrollo de mtodos ms eficientes a enzimlisis
superar estas deficiencias.
Recientemente, hay estudios realizados sobre la enzima estructural
cambios y mejoras en la eficiencia enzimlisis usando un ultratecnologa de sonido [8,9]. Por ejemplo, Ma et al. [10] han informado
que el ultrasonido aumenta la actividad especfica de la enzima debido a la
Alcalase superficie cambio estructural al aumentar el nmero de
triptfano y reducir el nmero de espiral al azar. Shah y
Gupta [11] han indicado que el pretratamiento ultrasnico mejorado
la actividad especfica de la enzima y por lo tanto acelera la enZyme-reaccin catalizada. Estos cambios se atribuyen a alta
presiones, temperaturas y fuerzas de cizallamiento generadas por la ultraonda snica, que puede resultar en una mayor frecuencia de contacto BEsustrato interpolacin y enzimas, y ventajosamente cambio
estructura de la enzima [1215] . En la actualidad, la tecnologa de ultrasonido
ha adoptado dos tipos de ultrasonidos: un bao limpieza y un
sonda de ultrasonido. El ultrasonido bao de limpieza se realiza en
un bao de limpieza por ultrasonidos equipado con la superior y la baja
er emisores de ultrasonido plana y muestra la ventaja de uniforme
distribucin de la energa ultrasnica en la solucin de muestra. los
sonda de ultrasonidos se realiza a travs de una sonda de ultrasonido emisor subfusionado por debajo de la solucin de la muestra en un interruptor con el fin de
conconcentrado de energa ultrasnica en un solo lugar. Sin embargo, ninguna
investigacin
se ha informado sobre la aplicacin terica y prctica de
pretratamiento ultrasnico en la reaccin enzymolysis de desgrasada
protena de germen de trigo (DWGP). Por lo tanto, los efectos de dos tipos
de pretratamientos ultrasnicas sobre la reaccin enzymolysis son muy
importante a estudiar.
1350-4177 / $ - ver front matter 2013 Elsevier Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.ultsonch.2013.04.012

Autores correspondientes. Direccin: Escuela de Alimentos y la ingeniera

biolgica,

Universidad de Jiangsu, 301 Xuefu ROADM, Zhenjiang, Jiangsu, 212013,

China.
Direccin de correo electrnico: mhl@ujs.edu.cn (H. Ma).
Ultrasonidos Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413
Listas contenidos ofrecidos en SciVerseScienceDirect
Ultrasonidos Sonochemistry
revista pgina web: www.elsevier.com/locate/ultson
Pgina 2

Los objetivos de esta investigacin fueron (1) estudiar los efectos de

La sonda y el bao de limpieza pretratamientos ultrasnicos en la enzicintica de la reaccin molysis a diferentes temperaturas y tiempos, (2)
determinar los parmetros termodinmicos de la sonda y limpieza
ing bao enzimlisis pretratados ultrasnica a diferente temperatura
turas, y (3) comparar la cintica de reaccin y termodinmica
parmetros de ultrasonidos pretrataron enzymolysis con la de tradicin
enzimlisis cional. Esta investigacin se utiliz para explicar el mecanismo de accin de ultrasonido en la reaccin enzymolysis de DWGP y
predecir la produccin de polipptidos, que puede proporcionar la theoretbase ical y apoyo tecnolgico para nuevas investigaciones en polila produccin de pptidos.
2. Materiales y mtodos
2.1. Materiales y reactivos
Germen de trigo desgrasado (DWG) se obtuvo de An-yang Hombretianxue Food Manufacturing Co., Ltd. (Henan, China). Alcalasa
2.4LFG, con la actividad de 2.670 U / g y recomend temperatura
tura de 50 C y pH 9,0 valor, se adquiri en Novozymes Co.,
Ltd (Tianjin, China). Albmina de suero bovino (BSA), diastasa, socloruro de cido Dium (NaCl), hidrxido de sodio (NaOH), clorhdrico
(HCl), carbonato de sodio (Na
2
CO
3
), Sulfato de cobre pentahidratado
(CuSO
4
A5H
2
O), tartrato de sodio, tungstato de sodio (Na
2
WO
4

A2h
2
O),
molibdato de sodio (Na
2
Mugir
4
A2h
2
O), cido fosfrico (H
3
correos
4
), Lithsulfato de ium (Li
2
ASI QUE
4
AH
2
O), y el bromo lquido se adquirieron de
Sinopharm Agentes qumicos Co., Ltd (Shanghai, China). Todo allagentes fueron de grado analtico. Reactivo de Folin-fenol A fue pre
comparacin en el da de la prueba, que consta de 0,185 M Na
2
CO
3
en 0,098 M NaOH mezcla con 0,393 mM CuSO
4
A5H
2
O en
0.694 tartrato de sodio mM. Folin-fenol reactivo B se prepar
de acuerdo con los siguientes procedimientos. Una mezcla de 100 g Na
2
WO
4A2h
2
O, 25 g Na
2

Mugir
4
A2h
2
O, 700 ml de agua DI, 50 ml 85% H
3
correos
4
y HCl 100 ml se separ por destilacin durante 10 h en un aparato
Soxhlet. Despus
la adicin de 150 g Li
2
ASI QUE
4
AH
2
O, 50 ml destilados (DI), y unos pocos
gotas de bromo lquido, la mezcla se hirvi abierto en un agua
bao (SHZ-88A, Taicang de Laboratorio Equipos de fbrica, Jiangsu,
China) durante 15 min y despus se enfri a temperatura ambiente (25 C).
La solucin se diluy hasta 1000 ml usando agua DI y centrolo
fuged (Xiangyi Inc., Changsha, Hunan, China) a temperatura ambiente
a 10.000 rpm durante 5 min, y se almacenaron en un refrigerador a 4C hasta su
uso.
2.2. Mtodos
El experimento se estableci de acuerdo con el siguiente
pasos: En primer lugar, la protena de germen de trigo desgrasada (DWGP) fue
preen comparacin con el mtodo descrito en la Seccin 2.2.1. Segundo,
la solucin DWGP se trat previamente con dos tipos de ultrasonidos
de acuerdo con el mtodo descrito en la Seccin 2.2.2 . Por ltimo, el
Soluciones DWGP con y sin tratamientos previos ultrasnicos eran
hidrolizado con Alcalase basado en el mtodo descrito en el
Seccin 2.2.3.
2.2.1. Desgrasada protenas de germen de trigo (DWGP) preparacin
El DWGP fue preparado basado en un mtodo reportado [16] . LA
Se ha aadido el volumen de 1000 ml de agua DI a 100 g DWG con partiCLE tamao de 0,15 mm y luego se mezcla con 1% (w / v) en solucin de NaCl
un bao de agua a 50 C durante 30 min. A continuacin, la solucin se ajust a
valor de pH 9,0 utilizando solucin 1 M de NaOH y se agit continuamente
durante

30 min a 50 C. El lquido se separa del slido por una baja

centrfuga de velocidad (LD5-10B, Pekn Laboratorio Centrfuga Co., Ltd,
Beijing,
China) que funciona a 5000 rpm a temperatura ambiente durante 20 min.
Posteriormente, el lquido se ajust a pH 6,5 con 1 M
Solucin de HCl y luego se hace reaccionar con diastasa aadieron a 20 U / g
DWGP
(contenido en protenas calculado por el mtodo Kjeldahl) a 50 C durante 3 h.
La solucin se deposita mediante el ajuste al valor de pH 4,0 usando
Solucin de HCl 1 M. El slido depositado se separ de la liquid por centrifugacin a 5000 rpm a temperatura ambiente durante
20 min y luego el polvo DWGP mediante secado por pulverizacin se almacen
en un desecador para su posterior anlisis.
2.2.2. Desgrasada protenas de germen de trigo (DWGP) pretratamientos
Antes de enzymolysis reaccin, la DWGP se trat previamente en dos
tipo de tratamientos previos de ultrasonidos utilizando un tipo de sonda de
ultrasonidos y
un bao de limpieza por ultrasonidos.
Un volumen de 10 L de 2% (w / v) de solucin DWGP se puso en un 15 L
cubas para limpieza equipado con el superior y el inferior
emisores de ultrasonido planas (distancia de 7 cm). Esta limpieza ultrasnica
bao, que fue fabricado por la Universidad de Jiangsu, tiene funcin
modos de operacin frecuencia de barrido y el funcionamiento por impulsos. por
ejemplo, la operacin de frecuencia de barrido se refiere al barrido cuencia
ciclo cuencia de aumentar periodo del 22 al 26 kHz y decreciente
ing del 26 al 22 kHz con la misma velocidad lineal en el
forma de un tringulo issceles. Por lo tanto la frecuencia de barrido es reportado como 24 2 kHz y un perodo de aumento de ms una disminucin
perodo se define como un tiempo de ciclo de la frecuencia de barrido en este rebuscar. La operacin pulsada denota que el ultrasonido se genera
ado en un modo pulsado con un tiempo de encendido y un tiempo fuera. El
DWGP
solucin se someti a ultrasonidos a 20 C durante 30 min bajo las siguientes
condiciones: potencia de 1200 W, frecuencia combinacin de
24 2 kHz y 68 kHz 2, tiempo de ciclo de la frecuencia de barrido de
100 s, y pulsado a tiempo y fuera de tiempo de 500 y 10 s.
A 1.667 ml de volumen de solucin DWGP 2% se puso en un ml 2000
interruptor y la solucin de muestra se sometieron a ultrasonidos en un tipo de
sonda
ultrasonidos (GA92-II DB, Shanghai Biotecnologa Co., Wuxi, China)
con un emisor de ultrasonidos de sonda (dimetro de 2 cm) sumergido

2 cm por debajo de la solucin de muestra en el interruptor. La solucin de la

muestra
cin se trat a 20 C durante 10 min en las condiciones: Potencia
de 600 W, frecuencia fija de 20 kHz, y se pulsan a tiempo y offtiempo de 2 y 2 s. El control fue sometido al mismo proceso
y actu en las mismas condiciones pero sin ultrasonidos
pretratamiento.
2.2.3. Desgrasada protenas de germen de trigo (DWGP) reaccin enzimlisis
Tanto las soluciones DWGP 2% con y sin pre ultrasnica
tratamientos se diluyeron hasta 1% de soluciones antes de la reaccin
enzymolysis
cin. Luego 1% soluciones de muestra se sometieron a la sonda y limpieza
pretratamientos de ultrasonidos de bao se ajustaron por separado para va- pH
Lue 9,0 utilizando solucin 1 M de NaOH y se hizo reaccionar con Alcalase
aadi
a 2000 U / g DWGP en un bao de agua a 20, 30, 40, y 50 C durante 2,
4, 6, 8, y 10 min, respectivamente. La solucin en el proceso de enzimolysis se control a pH 9,0. Despus de la hidrlisis, el
enzima en hidrolizado se inactiv con el mismo volumen de
6% de cido tricloroactico y luego se hierven en un bao de agua para
10 minutos. A continuacin, el hidrolizado se enfri a 40 C, centrolo
fuged desde el slido a 10.000 rpm a temperatura ambiente durante
15 min, y se analizaron. Se realiz el enzymolysis tradicional
utilizando el mismo procedimiento con enzymolysis pretratado ultrasnica
de la solucin de control como el sustrato.
2.2.4. Cintica de la reaccin enzymolysis
El modelo de primer orden cintica informado por Takahashi et al. [17]
se aplic en el estudio de la cintica de enzymolysis DWGP. El kimodelo ntico fue escrito como:
corriente continua
t
dt
de un KC
t
1
donde k es la constante de velocidad de reaccin total que involucra la tasa de
constants de ultrasonido k
u
y la temperatura k
do

(Ec. (4) ), Y C
t
es el
W. Qu et al. / Ultrasonidos Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413
1.409
Pgina 3

DWGP concentracin en solucin de reaccin en un momento dado t min (

l
gramo/
ml).
. Despus de integrar la ecuacin (1), modelo cintico se expres como:
En C
t
kt En C
0
2
donde C
0
es la concentracin inicial en DWGP solucin de reaccin (
l
gramo/
ml).
Como es difcil para medir la disminucin de DWGP, la reaccin
la tasa puede ser determinado por el aumento de la cantidad de polipptidos
marea publicado por DWGP. El modelo cintico de primer orden en el marco del
condiciones de reaccin t = 0-1, C
t
=Q
1
Q
t
YC
0
=Q
1
fue escrito
como:
LND Q
1
Q
t

 kt ln Q
1
3
donde Q
1
es la concentracin de polipptido ltimo en la reaccin de
solucin (
l
g / ml), y Q
t
es la concentracin del polipptido en el
solucin de reaccin en un momento dado t min (
l
g / ml).
El K y Q
1
Los valores pueden determinarse experimentalmente a partir de
la pendiente y la interseccin trazando ln (Q
1
Q
t
) En contra de t.
En comparacin con enzymolysis tradicional, el pre ultrasnica
enzymolysis reaccin tratada puede ser influenciada por el ultrasonido
efectuar adems del efecto trmico. Por lo tanto, la k en ultrasonic enzymolysis pretratada se expres como:
kk
do
k
u
4
donde k
do
es la constante de velocidad de reaccin inducida por efecto trmico en
enzymolysis tradicional, y k
u
se induce la constante de velocidad de reaccin
por efecto del ultrasonido en enzymolysis pretratado ultrasnica.
2.2.5. Termodinmica enzimlisis
Ecuacin de Arrhenius se aplic en la descripcin de la relacin
entre k constante de velocidad de reaccin y la temperatura T, que era

escrita como [18]:

k Ae
Ea
RT
5
donde A es el factor pre-exponencial o de colisin (1 / min), E
la
es el
energa de activacin (J / mol), R es la constante universal de los gases (8,314 J /
mol K), y T es la temperatura absoluta (K).
La trama de ln k frente a 1 / T se utiliz para el clculo de E
la
.
Eyring teora del estado de transicin (TST) se utiliz para entender la
efecto de la temperatura sobre enzymolysis y tambin el macroscpica
cambios observados en este estudio [10]. La ecuacin TST fue escrito
como:
k
k
segundo
T
marido
exp
re
GRAMO
RT

k
segundo
T
marido
exp
re
MARIDO
RT

re
S
R
6
donde k

segundo
es la constante de Boltzmann (1.38 a 10
A23
J / K), h es la
Constante de Planck (6,6256 10
A34
J / s),
re
G es la energa libre de Gibbs
de la activacin (J / mol),
re
H es la entalpa de activacin (J / mol), y
re
S es la entropa de activacin (J / mol K).
Despus de la transformacin logaritmo, la ecuacin TST se expres como:
ln
k
T

re
MARIDO
R
LA
1
T

re
S
R
ln
marido
k
segundo
7
La trama de ln (K / T) frente a 1 / T se utiliz para los clculos de
re
G,
re
H, y
re
S.

2.2.6. Determinacin de la concentracin de polipptido

La concentracin de polipptido,
l
g / ml, se determin utilizando un
informaron Folin-fenol mtodo colorimtrico [19]. Inicialmente, un volumen
4 ml de reactivo de Folin-fenol A se mezcl con 0,5 ml de muestra en una
tubo de vidrio. La solucin se incub durante 10 min a tempe- habitacin
ratura, despus de lo cual 0,5 ml de reactivo de Folin-fenol B se aadi a cada
tubo de vidrio, y la absorbancia se ley a 500 nm en un espectrofotmetro
fotmetro (Unic 7200, Unocal Corporation, Shanghai, China) despus
30 min de incubacin. Un espacio en blanco se prepar usando agua DI en
lugar de la muestra. Normas de 0-50
l
g / ml de BSA se ensayaron
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
20
o
do
30
o
do
40
o
do

50
o
do
ln (V
-Vermont)
(a) el tiempo enzimlisis (min)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
20
o
do
30
o
do
40
o
do
50
o
do
ln
(V
-Vermont)
(b) el tiempo enzimlisis (min)
0

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
20
o
do
30
o
do
40
o
do
50
o
do
ln (V
-Vermont)
(c) enzymolysis tiempo (min)
Fig. 1. Los ln (Q
1
Q
t
) Frente a veces en valores tradicionales (a), la sonda (b) y limpieza
bao (c) enzymolysis pretratado ultrasnica a diferentes temperaturas. La
regresin
coeficientes de las curvas obtenidas a los 20, 30, 40 y 50 C son 0,96, 0,95, 0,98
y

0,95 en (a), 0.96, 0.96, 0.96 y 0.99 en (b), y 0,96, 0,96, 0,96 y 0,99 en (c),
respectivamente.
1410
W. Qu et al. / Ultrasonidos Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413
Pgina 4

simultneamente con los ensayos por triplicado de las muestras con el fin de
calcular las concentraciones de polipptido de muestras.
2.3. El anlisis estadstico
Todos los experimentos se realizaron en muestras por triplicado. Los datos se
presentan como media. Se realiz anlisis de varianza (ANOVA)
para comparar el efecto de los ultrasonidos bajo el nivel de significacin
de p <0,05. Todos los grficos y el clculo se preformados con el
Origen Pro 7.5SR1 y Microsoft Office Excel 2003, respectivamente.
3. Resultados y discusin
3.1. Efecto del pretratamiento ultrasnico sobre la cintica de reaccin
enzymolysis
El valor de la constante de velocidad es un parmetro importante de la
cintica de la reaccin qumica, que es independiente sobre el sustrato
concentracin. El cambio de enzimlisis de DWGP inducida por
pretratamiento ultrasnico dar como resultado el cambio de la constante de
velocidad.
Fig. 1 muestralasparcelasdeln(Q
1
Q
t
) Versus t en el tradicional, la sonda
y bao de limpieza por ultrasonidos pretratado enzimlisis a diferentes
temperaturas. Se puede observar a partir de laFig. 1 (a) que los ln (Q
1
Q
t
) tenido
una buena relacin lineal con el tiempo a diversas temperaturas, como rerevelado por el coeficientes de correlacin superior a 0,95. Este resultado
representa que el proceso tradicional de DWGP enzymolysis obedecida
cintica de primer orden. Debido a que los coeficientes de correlacin en la
figura. 1 (b)
y (c) fueron mayores que 0,96, el bao y la limpieza de sonda de ultrasnica pretratado enzimlisis tambin encaja bien con la cintica de primer
orden.

En tanto el enzymol- pretratados tradicional y ultrasonidos generales

analysis obedeci cintica de primer orden dentro del rango de temperatura
BORNE
IED. Los parmetros cinticos de reaccin k y Q
1
se determinaron
de la pendiente y la interseccin trazando ln (Q
1
Q
t
) Contra t, usando
Origen Pro 7.5SR1, y se enumeran en laTabla1.
Se puede observar a partir de laTabla1 que el valor k fue la ms alta,
seguido por k
t
yk
u
a todas las temperaturas probadas. El mayor que k
k
t
a cualquier temperatura indicado que el tipo de ultrasonido
si el bao de sonda y limpieza no result significativamente mejorado
prob la velocidad de reaccin de DWGP enzimlisis compara con traenzimlisis condicional. Del mismo modo, Jia et al. [20] han encontrado que la
pretratamiento ultrasnico con una potencia de 0 a 1800 W y hora de
20 min puede facilitar la hidrlisis enzimtica de DWGP y proMote la liberacin de polipptidos de DWGP. Esto es porque el
intensas presiones altas, las temperaturas y las fuerzas de corte generadas
por ecografa eficacias de cavitacin pueden cambiar el DWGP y Alcaestructuras lase [21] . La exposicin del centro activo causada por la ultrasonido hara que la enzima se combinan fcilmente con DWGP y exposiciones
mayor capacidad de reaccin [22,23] . Liu et al. [24] han confirmado que
Estructura DWGP fue cambiado por tratamiento ultrasnico con poder
de 600 W y tiempo de 10 min determinados por FTIR y fluorescencia
espectros, y sus cambios estructurales fueron beneficiosas para promover
hidrlisis enzimtica de alta eficiencia. Jia et al. [25,26] tiene tambin
encontr que la estructura DWGP fue alterada por los tratamientos de ultrasonido
utilizando sulfhidrilo y disulfuro contenidos de bonos gratis, ultravioleta espectrum, y espectros de fluorescencia y por lo tanto su fisicoqumica
propiedades cambian. Por otra parte, Ma et al. [10] han informado de que
la estructura Alcalase determinado por espectroscopia de fluorescencia

y espectroscopa de dicrosmo circular (CD) mejor como resultado de

aplicacin de ultrasonido, que afect positivamente su actividad. En
Adems, la mayor k
t
que k
u
a todas las temperaturas que se indica
la temperatura juega un papel preponderante tanto en la sonda y limpieza
bao ultrasnico enzimlisis pretratados aunque la constante de velocidad
se mejor mediante la aplicacin de ultrasonidos. Tambin se observ que
tanto kyk
t
aumentado a medida que la temperatura aument de 20 C a
50 C. Por lo tanto, se puede concluir que el efecto trmico dominado
e influenciado positivamente la reaccin enzimlisis de DWGP. Esta
es debido a la capacidad de aumento de la temperatura para aumentar la enla actividad y de la colisin enzima de frecuencia entre enzima y sustrato
haciendo la reaccin Strate, enzima ms rpido [27] . Esta confirmado
el informe de KYLA-Puhju et al. [28] que hay una lineal positiva
correlacin entre la actividad enzimtica y la temperatura. Comparado
con enzimlisis tradicional, las crecientes tasas de k en la sonda
ultrasnica pretratado enzymolysis a los 20, 30, 40 y 50 C eran
166,7%, 92,9%, 28,0% y 16,1%, respectivamente, con los correspondientes
aumento de las tasas de k en el bao de limpieza por ultrasonido como 144,4%,
85,7%, 28,0% y 12,9%, respectivamente. Por otra parte, la k
u
disminucin
con el aumento de la temperatura enzymolysis, que estaba enfrente
akyk
t
. Esto indic que los efectos de la sonda de ultrasonido
y limpieza tipos de bao contribuyeron en gran medida a la constante de
velocidad
a temperaturas ms bajas pero muy poco a temperaturas ms altas. los
disminucin de k
u
se debe a la disminucin de la solubilidad del gas en el grueso
de fluido y el aumento de la presin de vapor de equilibrio de la ma
TEM como la temperatura aument [29]. La variacin de la tasa de conconstante k
u

con la temperatura estaba de acuerdo con el resultado de

reportado por Kadkhodaee y Povey [30]. Los resultados mostraron que
aplicacin de ultrasonidos a baja temperatura afect ms important ventaja de que a altas temperaturas. Se puede observar a partir de
Tabla 1 queelQ
1
valor no fue influenciada significativamente por la
pretratamiento ultrasnico cuando se compara con enzymol- tradicional
analysis. Al tener en cuenta la eficiencia enzimlisis y el polipptido
la produccin, el mtodo recomendado debe ser el ultrasnica
enzymolysis pretratado con independencia del tipo de ultrasonido para
la concentracin DWGP de 1% (w / v), la concentracin de Alcalase
2000 U / g, el tiempo de 10 min, y la temperatura de 50 C, lo que dio una
alta concentracin de polipptido de 231.019
l
g / ml o 231.320
l
gramo/
ml para la sonda o la limpieza de ultrasonido bao.
3.2. Efecto del tratamiento previo de ultrasonidos en la termodinmica
enzimlisis
Los parmetros termodinmicos E
la
,y
re
G,
re
Hy
re
S eran
determinado a partir de las pistas y intercepta trazando ln k frente
Mesa 1
Las constantes de velocidad de reaccin en tradicional, sonda y de limpieza bao
de ultrasonidos pretrataron enzymolysis a diferentes temperaturas.
Escribe
Temperatura ( C)
k (1 / min)
k
do
(1 minuto)
k

u
(1 minuto)
Q
1
(
l
g / mL)
Enzimlisis Tradicional
20
0,009
0,009
0
243.935
30
0,014
0,014
0
243.861
40
0,025
0,025
0
238.245
50
0,031
0,031
0
245.746
Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados
20
0.024 (166,7%)
la
0,009
0,015
247.176
30
0.027 (92,9%)
0,014
0,013
244.057
40

0.032 (28,0%)
0,025
0,007
225.721
50
0.036 (16,1%)
0,031
0,005
231.019
Cubas para limpieza enzimlisis pretratados
20
0.022 (144,4%)
0,009
0,013
249.236
30
0.026 (85,7%)
0,014
0,012
245.550
40
0.032 (28,0%)
0,025
0,008
225.270
50
0.035 (12,9%)
0,031
0,004
231.320
la
Los valores entre parntesis son las crecientes tasas de velocidad constante en
enzimlisis pretratados ultrasonidos en comparacin con enzimlisis tradicional
reaccin.
W. Qu et al. / Ultrasonidos Sonochemistry 20 (2013) 1408-1413
1,411
Pgina 5

1 / T de lafigura. 2 y ln (k / T) frente a 1 / T de laFig. 3, respectivamente

y se muestran en laTabla2. Por lo general, E
la
, La cantidad de energa re-

rido formar molculas no de activacin en molculas de activacin,

refleja la rapidez de las reacciones qumicas, lo que representa un ayuno
velocidad de reaccin cuando es baja y una velocidad lenta cuando la alta [31] .
El E
la
los valores de la mayora de las reacciones varan de 40 kJ / mol a 400 kJ /
mol. Si el valor es inferior a 40 kJ / mol, la reaccin se complete muy rpidamente. Cuanto menor E
la
(<40 kJ / mol) tanto de la tradicin
cional y enzimlisis pretratados ultrasnica implicaban que menos
se necesita energa para la reaccin enzymolysis y una reaccin ms rpida
tasa de entre el DWGP y Alcalase. Adems, se observ
que E
la
valores de reaccin enzymolysis con la sonda y limpieza
pretratamientos ultrasnicos bao ing disminuyeron significativamente en comcomparacin con la tradicional y las tasas decrecientes eran tan
alto como 68,6% y 62,4%. Este resultado certificada ms lejos de la
mecanismo que el ultrasonido disminuy significativamente la energa
requiere barrera para la reaccin enzymolysis. Por lo tanto, ultrasnica
enzimlisis pretratados corri ms rpidamente que los clsicos,
que era consistente con el fenmeno observado en el
experimentar. los
re
H,
re
G, y
re
Valores S, que muestran una tendencia similar
con E
la
, Fueron, respectivamente, reducido en un 74,1% y 67,5%, 34,3% y
31,2% y 1,4% y 1,3% para la sonda y bao de limpieza ultrasonidos, que tambin se puede explicar con ms detalle que la reaccin
enzymolysis
la catalizada por el pretratamiento ultrasnico puede ocurrir muy rpidamente.
Un informe similar ha mostrado que los parmetros termodinmicos
(E
la
,

re
H,
re
G, y
re
S) de Alcalase puede ser reducido por ultrasonido
tratamiento y, en consecuencia lleva a un aumento en la enzima
actividad [10]. La gran disminucin en el parmetro termodinmico
tros se pueden atribuir a la rotura por ultrasonidos inducida de
enlaces de hidrgeno, la interrupcin del ncleo hidrofbico interno, oxidacin
tiva modificacin de residuos de aminocidos, la iniciacin de cross-varillaje
cin, y la agregacin de protenas [10]. Adems, se encontr
que los descensos, tanto en el
re
Hy
re
S eran beneficiosos para el
re
G descenso, mientras que el cambio en la
re
H tuvo mucha ms influencia
en
re
G debido a la mayor tasa decreciente de
re
H de
re
S. En geral, los resultados obtenidos demostraron claramente que por ultrasonidos
pretratamiento con independencia del tipo era beneficioso para el enzimolysis
reaccin
de
DWGP
porque
de
sus
bajo
energa
requisitos.
4. Conclusiones

Los resultados mostraron que tanto la pre tradicional y ultrasnica

tratado enzimlisis adaptarse bien a una cintica de primer orden. Ultrasonido
seal
significativamente promovido la velocidad de reaccin de DWGP enzimlisis en
diversas temperaturas especialmente a una temperatura baja, pero no seal
efecto sobre la concentracin de sig- polipptido final. Comparado
con enzymolysis tradicional, las constantes de velocidad de la sonda y
Bao de limpieza por ultrasonidos enzimlisis pretratados fueron
respectivamente
aument en 166,7% y 144,4%, 92,9% y 85,7%, 28,0% y 28,0%,
16,1% y 12,9% a los 20, 30, 40 y 50 C. El efecto trmico jug un
papel dominante tanto en la sonda y la limpieza de bao de pre ultrasnica
enzymolysis tratados en comparacin con el efecto de ultrasonido. Ambos
sonda y del bao de limpieza ultrasonidos mostraron significativa positiva
efectos sobre la termodinmica de DWGP enzimlisis cuando comcomparacin con enzymolysis tradicional, en la que el E
la
,
re
H,
re
G, y
re
S fueron respectivamente redujeron en 68,6% y 62,4%, 74,1% y
67,5%, 34,3% y 31,2%, 1,4% y 1,3%. En general, tanto la sonda
y la limpieza de bao ultrasnico enzimlisis pretratados era eficiente
mtodos para producir polipptidos de DWGP. Bajo el recoconcentracin reco- DWGP de 1% (w / v), Alcalase concentracin
cin de 2000 U / g, el tiempo de 10 min y la temperatura de 50 C, estos
mtodos mostraron altas concentraciones de polipptido (231.019 y
231.320
l
g / ml) y de baja energa requisitos.
3.0
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
-9,5
-9.0

-8,5
-8,0
-7,5
-7,0
-sesenta y cinco
Enzimlisis Tradicional
Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados
Cubas para limpieza enzimlisis pretratados
ln
k
(1 / s)
1 / T 10
-3
(1 / K)
Fig. 2. La relacin entre ln k y 1 / T en el tradicional, la sonda y el bao de
limpieza
ultrasonidos pretratado enzimlisis. Los coeficientes de regresin de las curvas
son
0,98, 0,99 y 0,98, respectivamente.
3.0
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
-15.0
-14.5
-14.0
-13.5
-13.0
-12.5
Emzymolysis Tradicional
Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados
Cubas para limpieza enzimlisis pretratados
ln
(
k/
T
) (1 /
s
.

K
)
1 / T 10
-3
(1 / K)
Fig. 3. La relacin entre ln (k / T) y 1 / T en el tradicional, sonda y limpieza
bao ultrasnico pretratado enzimlisis. Los coeficientes de regresin de las
curvas son
0,97, 0,99 y 0,96, respectivamente.
Tabla 2
Parmetros termodinmicos en la tradicional, la sonda y el bao de limpieza
ultrasnico enzymolysis pretratada.
Escribe
mi
la
(A10
3
J / mol)
D H (A10
3
J / mol)
D S (J / mol K)
D G (A10
3
J / mol)
Enzimlisis Tradicional
34.256
31.699
209.9
96.379
Sonda ultrasnica enzimlisis pretratados
10.762 (68,6%)
la
8.205 (74,1%)
281.916 (34,3%)
95,077 (1,4%)
Cubas para limpieza enzimlisis pretratados
12.865 (62,4%)
10.309 (67,5%)
275.358 (31,2%)
95,160 (1,3%)

la
Los valores entre parntesis son las tasas decrecientes de parmetros
termodinmicos en enzimlisis pretratados ultrasonidos en comparacin con
enzimlisis tradicional.

Pgina 3

DWGP concentracin en solucin de reaccin en un momento dado t min (

l
gramo/
ml).
. Despus de integrar la ecuacin (1), modelo cintico se expres como:
En C
t
kt En C
0
2
donde C
0
es la concentracin inicial en DWGP solucin de reaccin (
l
gramo/
ml).
Como es difcil para medir la disminucin de DWGP, la reaccin
la tasa puede ser determinado por el aumento de la cantidad de polipptidos
marea publicado por DWGP. El modelo cintico de primer orden en el marco del
condiciones de reaccin t = 0-1, C
t
=Q
1
Q
t
YC
0
=Q
1
fue escrito
como:

LND Q
1
Q
t
kt ln Q
1
3
donde Q
1
es la concentracin de polipptido ltimo en la reaccin de
solucin (
l
g / ml), y Q
t
es la concentracin del polipptido en el
solucin de reaccin en un momento dado t min (
l
g / ml).
El K y Q
1
Los valores pueden determinarse experimentalmente a partir de
la pendiente y la interseccin trazando ln (Q
1
Q
t
) En contra de t.
En comparacin con enzymolysis tradicional, el pre ultrasnica
enzymolysis reaccin tratada puede ser influenciada por el ultrasonido
efectuar adems del efecto trmico. Por lo tanto, la k en ultrasonic enzymolysis pretratada se expres como:
kk
do
k
u
4
donde k
do
es la constante de velocidad de reaccin inducida por efecto trmico en
enzymolysis tradicional, y k
u
se induce la constante de velocidad de reaccin

por efecto del ultrasonido en enzymolysis pretratado ultrasnica.

2.2.5. Termodinmica enzimlisis
Ecuacin de Arrhenius se aplic en la descripcin de la relacin
entre k constante de velocidad de reaccin y la temperatura T, que era
escrita como [18]:
k Ae
Ea
RT
5
donde A es el factor pre-exponencial o de colisin (1 / min), E
la
es el
energa de activacin (J / mol), R es la constante universal de los gases (8,314 J /
mol K), y T es la temperatura absoluta (K).
La trama de ln k frente a 1 / T se utiliz para el clculo de E
la
.
Eyring teora del estado de transicin (TST) se utiliz para entender la
efecto de la temperatura sobre enzymolysis y tambin el macroscpica
cambios observados en este estudio [10]. La ecuacin TST fue escrito
como:
k
k
segundo
T
marido
exp
re
GRAMO
RT

k
segundo
T
marido
exp
re
MARIDO
RT

re

S
R
6
donde k
segundo
es la constante de Boltzmann (1.38 a 10
A23
J / K), h es la
Constante de Planck (6,6256 10
A34
J / s),
re
G es la energa libre de Gibbs
de la activacin (J / mol),
re
H es la entalpa de activacin (J / mol), y
re
S es la entropa de activacin (J / mol K).
Despus de la transformacin logaritmo, la ecuacin TST se expres como:
ln
k
T

re
MARIDO
R
LA
1
T

re
S
R
ln
marido
k
segundo
7
La trama de ln (K / T) frente a 1 / T se utiliz para los clculos de
re
G,

re
H, y
re
S.
2.2.6. Determinacin de la concentracin de polipptido
La concentracin de polipptido,
l
g / ml, se determin utilizando un
informaron Folin-fenol mtodo colorimtrico [19]. Inicialmente, un volumen
4 ml de reactivo de Folin-fenol A se mezcl con 0,5 ml de muestra en una
tubo de vidrio. La solucin se incub durante 10 min a tempe- habitacin
ratura, despus de lo cual 0,5 ml de reactivo de Folin-fenol B se aadi a cada
tubo de vidrio, y la absorbancia se ley a 500 nm en un espectrofotmetro
fotmetro (Unic 7200, Unocal Corporation, Shanghai, China) despus
30 min de incubacin. Un espacio en blanco se prepar usando agua DI en
lugar de la muestra. Normas de 0-50
l
g / ml de BSA se ensayaron
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
20
o
do
30
o

do
40
o
do
50
o
do
ln (V
-Vermont)
(a) el tiempo enzimlisis (min)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
20
o
do
30
o
do
40
o
do
50
o
do
ln

(V
-Vermont)
(b) el tiempo enzimlisis (min)
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
5.0
5.1
5.2
5.3
5.4
5.5
20
o
do
30
o
do
40
o
do
50
o
do
ln (V
-Vermont)
(c) enzymolysis tiempo (min)
Fig. 1. Los ln (Q
1
Q
t
) Frente a veces en valores tradicionales (a), la sonda (b) y limpieza

bao (c) enzymolysis pretratado ultrasnica a diferentes temperaturas. La

regresin
coeficientes de las curvas obtenidas a los 20, 30, 40 y 50 C son 0,96, 0,95, 0,98
y
0,95 en (a), 0.96, 0.96, 0.96 y 0.99 en (b), y 0,96, 0,96, 0,96 y 0,99 en (c)