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Biotecnolgicos
Mtodos de Bioseparacin
Alumna:
Contenido
Centrifugacin ..................................................................................................................................... 2
Sedimentacin..................................................................................................................................... 4
Floculacin .......................................................................................................................................... 7
Filtracin ............................................................................................................................................. 8
Microfiltracin , ultrafiltracin y nanofiltracin .................................................................................. 12
smosis inversa................................................................................................................................. 18
Separacin lquido-lquido ................................................................................................................. 21
Separacin solido-lquido................................................................................................................... 22
Cromatografa Lquida de Alta Eficiencia (HPLC) ................................................................................. 23
Ruptura Celular ................................................................................................................................. 24
Espectrometra de masas................................................................................................................... 24
Cristalizacin de protenas ................................................................................................................. 25
Cromatografa lquida y por afinidad .................................................................................................. 26
Adsorcin y absorcin........................................................................................................................ 27
Referencias........................................................................................................................................ 28
Metodos de Bioseparacio n
Centrifugacin
La separacin de sustancias de diferente densidad mediante movimiento giratorio se conoce como
centrifugacin.
La centrifugacin es una de las principales operaciones utilizada para la separacin de clulas de caldos
biolgicos, especialmente cuando los caldos no son fcilmente filtrables, o la adicin de ayudas-filtro no
es recomendable por razones de costos o de produccin excesiva de desechos contaminantes.
La centrifugacin tambin es empleada en la remocin de desechos celulares de caldos de clulas que
han sido sujetas a rompimiento, separacin de precipitados proteicos y para recuperacin de productos
insolubles como los cuerpos de inclusin. Estos ltimos debido a su tamao (de0.3 a 1 m) y alta
densidad (1.3 1.5 g/cm3) pueden ser separados de los restos celulares por centrifugacin en dos o tres
pasos, utilizando agua de lavado y detergentes para facilitar la separacin.
Cuando se utiliza la centrifugacin la diferencia entre la densidad de solidos (clulas o partculas) y el
caldo, se incrementa por la accin de las fuerzas centrfugas que se generan por las altas velocidades de
rotacin de los equipos que se emplean.
Existen diferentes tipos de centrfugas que se utilizan tanto a nivel laboratorio como a escala industrial y
su aplicacin depende de varios factores anlogos a los relacionados para la filtracin.
El estudio de las separaciones slido-lquido por centrifugacin est basado en la teora de la
sedimentacin, la cual est basada en la Ley de Stokes que establece los aspectos bsicos del
movimiento de un slido en un lquido cuando existe un gradiente de densidad. Este movimiento puede
ser causado por la fuerza gravitacional o por una fuerza centrfuga.
La tabla 6.1 enlista las densidades de diferentes sustancias biolgicas que usualmente son separadas por
centrifugacin.
La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partcula en un medio continuo sta se
acelera (F=ma), hasta que alcanza una velocidad a la cual la resistencia a su movimiento iguala a la
fuerza aplicada.
En una sedimentacin libre la fuerza que acta sobre la partcula es la de la gravedad, mientras que en
una sedimentacin centrfuga la fuerza es la del campo centrfugo.
Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partculas pueden agruparse en la fuerza de empuje
descrita por el principio de Arqumides, y la fuerza de arrastre (resistencia de forma y de friccin)
descrita por la Ley de Stokes. De acuerdo a lo anterior, el balance de fuerzas para una partcula en
equilibrio en un medio continuo se expresa de la siguiente manera:
Fuerza de aceleracin = Fuerza de flotacin + Fuerza de arrastre
Cuando macromolculas como las protenas, cidos nucleicos y carbohidratos necesitan ser separadas,
centrifugas normales no pueden ser usadas, por lo que se hace uso de dispositivos llamados
ultracentrfugas, las cuales generan un campo gravitacional artificial muy fuerte. El principio de
separacin por centrifugacin es mostrado en la figura 6.1.
El rango tipico velocidad de rotacin tpica de una centrifuga de laboratorio es de 1,000 15,000 rpm.
La magnitud del campo gravitacional inducido est medido en trminos del valor o factor G, que es una
medida relativa de la velocidad de sedimentacin de una partcula en un ampo centrfugo con respecto
a su velocidad de sedimentacin en el campo gravitacional.
G puede ser referida a un radio caracterstico el cual generalmente es el radio exterior del campo
centrfugo. Esto permite desarrollar expresiones prcticas para estimar la G como la siguiente:
G = 5.6 x 10-7 N2 D
Donde N est en rpm, el dimetro del tazn de la centrfuga (o punto de inters) D en mm y G es
adimensional.
Sedimentacin
La sedimentacin es una operacin unitaria consistente en la separacin por la accin de la gravedad de
las fases slida y lquida de una suspensin diluida para obtener una suspensin concentrada y un
lquido claro.
Se pueden distinguir dos tipos de sedimentacin, atendiendo al movimiento de las partculas que
sedimentan:
Sedimentacin libre: se produce en suspensiones de baja concentracin de slidos. La interaccin entre
partculas puede considerarse despreciable, por lo que sedimentan a su velocidad de cada libre en el
fluido.
Sedimentacin por zonas: se observa en la sedimentacin de suspensiones concentradas. Las
interacciones entre las partculas son importantes, alcanzndose velocidades de sedimentacin menores
que en la sedimentacin libre. La sedimentacin se encuentra retardada o impedida. Dentro del
sedimentador se desarrollan varias zonas, caracterizadas por diferente concentracin de slidos y, por lo
tanto, diferente velocidad de sedimentacin.
Dependiendo de cmo se realice la operacin, la sedimentacin puede clasificarse en los siguientes
tipos:
Sedimentacin intermitente: el flujo volumtrico total de materia fuera del sistema es nulo,
transcurre en rgimen no estacionario. Este tipo de sedimentacin es la que tiene lugar en una probeta
de laboratorio, donde la suspensin se deja reposar.
Entre la zona interfacial y la zona de compactacin se encuentra la zona de transicin (zona C). En esta
zona la velocidad de sedimentacin de los slidos disminuye debido al incremento de la viscosidad y de
la densidad de la suspensin, cambiando la concentracin de slido gradualmente entre la
correspondiente a la zona interfacial y la de la zona de compactacin.
Las zonas de compactacin e interfacial pueden llegar a encontrarse, producindose la coalescencia de
las dos interfases anteriormente citadas, en el denominado momento crtico tc, desapareciendo la zona
de transicin (figura 1c). En este momento el slido sedimentado tiene una concentracin uniforme Xc o
concentracin crtica, comenzando la compactacin y alcanzndose, posteriormente, la concentracin
final Xu (figura 1d).
La velocidad de sedimentacin en el momento tc corresponde a un valor Vc dado por la pendiente de la
tangente a la curva de sedimentacin en el punto C, tal y como se indica en la figura 2 donde V c< Vs.
Sedimentador continuo
El diseo de un sedimentador continuo puede realizarse a partir de los datos obtenidos en experimentos
discontinuos.
La sedimentacin continua se realiza industrialmente en tanques cilndricos a los que se alimenta
constantemente la suspensin inicial con un caudal inicial Q 0 y una concentracin inicial C0 (figura 3).
Por la parte inferior se extrae un lodo con un caudal Qu y una concentracin Cu, normalmente con
ayuda de rastrillos giratorios, y por la parte superior del sedimentador continuo se obtiene un lquido
claro que sobrenada las zonas de clarificacin (A), sedimentacin (B-C) y compresin (D) que pueden
distinguirse en la figura 3. En un sedimentador continuo, estas tres zonas permanecen estacionarias.
Floculacin
El objetivo principal de la floculacin es reunir las partculas desestabilizadas para formar
aglomeraciones de mayor peso y tamao que se sedimenten con mayor eficiencia.
Normalmente, la floculacin se analiza como un proceso causado por la colisin entre partculas. En
ellas intervienen, una forma secuencial, tres mecanismos de transporte:
1) Floculacin pericintica o browniana. Se debe a la energa trmica del fluido.
2) Floculacin ortocintica o gradiente de velocidad. Se produce en la masa del fluido en
movimiento.
3) Sedimentacin diferencial. Se debe a las partculas grandes, que, al precipitarse, colisionan con
las ms pequeas, que van descendiendo lentamente, y ambas se aglomeran.
Al dispersarse el coagulante en la masa de agua y desestabilizarse las partculas, se precisa de la
floculacin pericintica para que las partculas coloidales de tamao menor de un micrmetro
empiecen a aglutinarse. El movimiento browniano acta dentro de este rango de tamao de partculas
y forma el microflculo inicial. Recin cuando este alcanza el tamao de un micrmetro empieza a
actuar la floculacin ortocintica, promoviendo un desarrollo mayor del microflculo. Este mecanismo
ha sido estudiado en lugares donde la temperatura baja alrededor de cero grados, rango dentro del
cual el movimiento browniano se anula y, por consiguiente, tambin lo hace la floculacin pericintica.
En este caso, se comprob que la floculacin ortocintica es totalmente ineficiente y no tiene
importancia alguna sobre partculas tan pequeas.
Bratby encontr que si los gradientes de velocidad en el agua son ma-yores de 5 s-1 y las partculas
tienen un dimetro mayor de un micrmetro, el efecto de la floculacin pericintica es despreciable.
Por otro lado, el proceso de floculacin pericintica solo es sumamente lento. Se precisan alrededor de
200 das para reducir a la mitad un contenido de 10.000 virus/mL en una muestra de agua.
Por lo tanto, la aglomeracin de las partculas es el resultado de la actuacin de los tres mecanismos de
transporte mencionados ms arriba.
Uno de los usos principales de la floculacin es en el proceso de tratamiento de aguas residuales, donde
una vez que se ha aadido el coagulante (dentro del tratamiento secundario) y se ha realizado la
operacin de coagulacin se pasa a la formacin de flculos mayores. Puede ocurrir que el flculo
formado por la aglomeracin de varios coloides no sea lo suficientemente grande como para asentarse
con la rapidez deseada. Por ello es conveniente utilizar productos coadyuvantes de la floculacin
simplemente denominados Floculantes.
Un floculante rene partculas en una red, formando puentes de una superficie a otra y enlazando las
partculas individuales en aglomerados. La floculacin es estimulada por un mezclado lento que junta
poco a poco los flculos. Un mezclado demasiado intenso los rompe y rara vez se vuelven a formar en su
tamao y fuerza ptimos. Una buena floculacin favorece el manejo del lodo final para su desecacin,
filtrado, etc.
Filtracin
La filtracin consiste en la separacin de un slido de un fluido por accin de un medio filtrante y un
gradiente de presin.
Normalmente en los procesos biotecnolgicos se utilizan tres tipos de mecanismos de filtracin (figura
3.1):
1. Filtracin de lecho profundo.
2. Filtracin con formacin de torta o filtracin convencional.
3. Filtracin por membranas (microfiltracin y ultrafiltracin)
En la filtracin de lecho profundo los slidos se depositan dentro del medio filtrante. En la filtracin con
formacin de torta los slidos se depositan sobre el medio filtrante formando una pasta. La filtracin
por membrana se realiza utilizando membranas especiales de tamao de poro muy pequeo, que
generalmente operan con flujo paralelo a la membrana (cruzado), de tal manera que no hay un reposito
de solidos sobre la membrana, sino una concentracin de caldo.
De los tres mecanismos de filtracin descritos, dos son de particular inters en las bioseparaciones
solido-liquido: La filtracin convencional y la filtracin con membranas.
La filtracin convencional forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Bioseparaciones SlidoLquido (BSL). Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente es necesario seleccionar entre una
operacin de filtracin y una operacin de sedimentacin (como la centrifugacin), y frecuentemente la
decisin es instrumentar una combinacin de estos dos tipos de operaciones.
Un proceso de separacin solido-liquido (Figura 3.2) consta generalmente de una o ms etapas, entre
las que destacan las siguientes:
-
Pretratamiento
Concentracin
Separacin de solidos
Postratamiento
El pretratamiento mejora las propiedades del caldo para facilitar la separacin. La concentracin de
solidos permite una separacin gruesa de solidos que disminuye el volumen a manera, y puede
disminuir los costos del proceso global de separacin slido-lquido. La mayor parte del tiempo de los
slidos es obtenida en la etapa de separacin. Los slidos recuperados pueden requerir un
postratamiento de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso.
En las operaciones de filtracin convencional se emplean sustancias slidas llamadas Ayudas-Filtro (AF).
Estas sustancias se adicionan al caldo antes de la filtracin y/o se utilizan como precubierta del filtro.
Los AF actan como adsorbentes de las partculas coloidales mejorando el tamao de partcula y
mejorando la incompresibilidad y permeabilidad de los slidos, de tal manera que se facilite su
filtracin.
Los AF ms utilizados son las tierras diatomeas y las perlitas. Las tierras diatomeas son restos de
esqueletos de pequeas plantas acuticas prehistricas que se obtienen de depsitos naturales. Las
perlitas se obtienen de vidrios volcnicos que contienen de 2 a 5% de agua, que permite romperlos por
accin trmica o de presin, formando un polvo con caractersticas apropiadas como AF.
La filtracin convencional (figura 3.4) puede ser definida como la separacin de los slidos de un lquido.
Esta se efecta haciendo pasar una suspensin a travs de un medio permeable que retiene los solidos
utilizando un gradiente de presin.
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Ultrafiltracin
La ultrafiltracin (UF) es una operacin que emplea membranas especiales de diferentes tipos de
arreglos para separar macromolculas en solucin de contaminantes ms pequeos, por medio de un
gradiente de presin.
Para describir un proceso de membrana es necesario poder establecer el movimiento relatico de los
componentes de la mezcla a travs de la membrana, debido a la fuerza originada por el gradiente de
presin. Generalmente se realiza una descripcin fenomenolgica donde la membrana se considera
como una caja negra.
La ultrafiltracin forma parte de un conjunto de operaciones de membrana empleada en diferentes
etapas de los procesos de bioseparacin.
Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana para lograr una separacin dada.
Estos procesos se pueden caracterizar en forma general en base a:
-
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De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos de membrana (tabla 10.1) se pueden
clasificar de la siguiente forma:
-
Gradiente de presin
o Ultrafiltracin (UF)
o Microfiltracin (MF)
o Osmosis Inversa (OI)
Gradiente de concentracin
o Dilisis (D)
Gradiente de voltaje
o Electrodilisis (ED)
Con el fin de reducir la serie de prdidas de carga y de limitarla a la capa activa, las membranas de
ultrafiltracin poseen, todas, una estructura asimtrica. Estn compuestas de un soporte macroporoso y
de una o varias capas segn el tipo de membrana; la ltima capa, llamada capa activa, presenta una
estructura mesoporosa. Existen actualmente dos categoras o dos tipos de membranas de ultrafiltracin
que presentan ambas una estructura asimtrica.
1) Las membranas formadas con polmeros orgnicos, cuya estructura se muestra en la figura 10 y
que fueron las primeras utilizadas. Estn constituidas de una "piel activa" soportada sobre una
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estructura macroporosa.
2) La segunda generacin de membranas de ultrafiltracin se prepara a partir de materiales
cermicos, cuya estructura asimtrica est ilustrada en la figura 11. Las capas sucesivas se
producen por un fritado de granos cermicos que generan poros residuales cuyo tamao
depende del tamao de los granos; para obtener una capa activa de ultrafiltracin es necesario
usar suspensiones coloidales de xidos que luego se depositan sobre un material macroporoso y
se fritan.
En algunos casos son membranas de microfiltracin (material macroporoso) que se utilizan como
soporte para depositar una capa suplementaria activa en ultrafiltracin.
Las prestaciones de las membranas de ultrafiltracin se evalan a partir de dos parmetros:
La permeabilidad al solvente puro o a la solucin a tratar en el caso de una aplicacin bien
precisa.
El punto de corte (mnimo tamao rechazado) respecto a solutos modelos o a los solutos
contenidos en el lquido a tratar.
En general la permeabilidad al solvente puro y el punto de corte respecto a solutos modelos se indican
como parte de las especificaciones suministradas por el fabricante de la membrana; por tanto el usuario
deber extrapolar esos datos para resolver los problemas de caracterizacin de los fluidos que tiene que
tratar.
Microfiltracin
La microfiltracin tangencial es una tcnica semejante a las otras tcnicas de filtracin con membranas
como la smosis inversa y la ultrafiltracin. Es la respuesta a varios tipos de problemas en los cuales los
aparatos existentes de separacin lquido-slido convencional no tienen una prestacin suficiente. Es en
particular el caso cuando las partculas que se quieren separar tienen un tamao inferior a la micra, en
cuyo caso se requiere aparatos tcnicamente muy avanzadas como ultracentrfugas o elutriadores de
gran velocidad, o con un flujo de filtracin muy limitado y un cambio muy frecuente del medio filtrante.
La microfiltracin tangencial se caracteriza como la tcnica en la cual existe en la vecindad del medio
filtrante y paralelamente a este medio, un campo de cizallamiento, que esencialmente impide la
deposicin de las partculas a separar. Este movimiento se obtiene al impulsar una velocidad relativa de
la suspensin, bien sea en movimiento lineal, bien sea en movimiento rotativo respecto a la superficie
del medio filtrante.
Esta definicin se puede complementar indicando que la microfiltracin tangencial puede considerarse
como una tcnica de separacin de fase, es decir entre una fase dispersada y una fase dispersante de un
medio polifsico; no es el caso de la ultrafiltracin y de la smosis inversa, cuyo objetivo es la separacin
de constituyentes (molculas o iones) disueltos en una sola fase.
Se puede tambin aadir que estas tcnicas tratan partculas de algunas micras o algunos dcimos de
micras, partculas que se sitan en el campo de transicin en el cual el movimiento browniano empieza
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a tornarse significativo, y donde las fuerzas superficiales empiezan a dominar las fuerzas que tienen que
ver con la masa o el volumen (Van der Waals).
La eliminacin de partculas contaminantes de dimensin inferior a la micra presentes en los lquidos, se
ha vuelto posible mediante el desarrollo de membranas microporosas, las cuales pueden clasificarse de
acuerdo a la naturaleza de su estructura en cuatro grandes familias:
Las Membranas polimricas: Esas membranas estn principalmente constituidas de nitrato o de acetato
de celulosa o de steres mixtos de celulosa. Se puede tambin utilizar algunos otros materiales que
posean una mejor resistencia qumica, y que pueden ser reutilizados tales como los copolmeros
acrlicos o el polipropileno.
Esta membranas se presentan a menudo bajo la forma de pelculas delgadas de espesor de un centenar
de micras, y por tanto necesitan un soporte mecnico asociado: fieltro (tejido o no) que le da entonces
una estructura simtrica, o trama de filamentos de poliamidas unidos dentro de un copolmero. Su
poder de filtracin no puede en general ser inferior a 0,2 micras.
Las Membranas Termoplsticas: Estas membranas estn constituidas de polvo ms o menos calibrado
cuyos granos se pegan o sinterizan por calentamiento o se ligan con agentes de tipo pega.
Los principales materiales que entran la fabricacin de los materiales porosos son el PVC, el polietileno,
el polipropileno, el poliestireno y las poliaminas.
El proceso de fabricacin permite obtener la forma deseada (placa, tubo, etc.) y un control de las
caractersticas de las membranas, a saber: su porosidad, su espesor, y su distribucin de tamao de
poro. La resistencia mecnica de este tipo de membrana permite adems de operar sin soporte. El
poder de separacin puede bajar a 0,1 m.
Las Membranas tipo Tamz: Las membranas en policarbonato tiene un espesor de 10 m, y poseen
poros de tamao perfectamente controlado. Se obtienen por fragilizacin mediante una irradiacin
nuclear. Cada haz de irradiacin produce un poro cilndrico rectilneo. El hecho de que la pelcula de
policarbonato es muy delgada confiere a esa membrana una muy baja resistencia mecnica.
Las Membranas Fritadas: El material de base puede ser fibroso o granulado. Solo el fritado de pequeos
granos permite actualmente llegar a un corte de filtracin inferior a la micra. Las membranas en
cermica fritada tienen una estructura simtrica, estn formadas por la justaposicin de capas; cuando
ms delgada la capa ms bajo el dimetro de grano. La matriz-soporte tiene algunos centenares de
micras de espesor; est constituida por granos de unas decenas de micras; despus de la matriz, se
deposita en la superficie una capa de algunas decenas de micras de espesor compuestos por granos ms
finos, que pueden permitir separar partculas de 0,1 micras. El uso de cermica le da a esa membrana,
generalmente fabricada en forma tubular, una excelente resistencia qumica, trmica y mecnica.
El PTFE (politetrafluoroetileno) puede fritarse como un metal para obtener membranas hidrofbicas que
permiten detener partculas tan pequeas como 0,1 micra.
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La escogencia de la membrana depende de muchos parmetros; entre ellos uno de los ms importantes
es la dimensin de los poros. Cualquiera sean las otras caractersticas, la membrana deber primero
detener las partculas indeseables, tales como los microorganismos en la esterilizacin en fro de
lquidos farmacuticos y o alimenticios, o las micropartculas en la produccin de agua ultrapura en la
industria de componentes electrnicos.
Nanofiltracin
La Nanofiltracin es una tcnica membranaria que llega actualmente a su madurez.
Los esfuerzos realizados por los fabricantes de membranas para desarrollar materiales
membranarios especficos a esa tcnica demuestran el inters cada vez creciente de los usuarios en ese
campo.
Sin embargo, se debe reconocer que la nanofiltracin se inici en una forma relativamente confusa;
primero se clasific en el campo de la smosis inversa, llamndola hiperfiltracin, ya que algunos
autores vean simplemente en este el caso de membranas en las cuales la
selectividad era inferior a las membranas de smosis inversa. Esas membranas presentaban fugas de
retencin de iones y por lo tanto al principio tuvieron un inters limitado.
En realidad el trmino nanofiltracin ha sustituido al trmino hiperfiltracin al mismo tiempo que se
definieron caractersticas especficas diferentes de aquellas de las membranas de smosis inversa y de
ultrafiltracin. La nanofiltracin puede por tanto clasificarse como un proceso intermedio entre la
smosis inversa y la ultrafiltracin en base a dos caractersticas propias:
1.
2.
Cuando se examinan en forma muy detallada esos mecanismos de transporte, es posible darse
cuenta que estas membranas presentan igualmente un desempeo bien especfico tal como una
selectividad de separacin entre iones monovalentes y iones multivalentes, as como tambin entre
molculas del mismo tamao pero presentando carga elctrica o no.
Actualmente se est comercializando la primera generacin de membranas orgnicas que se
desarrollaron de acuerdo a los criterios anteriormente definidos.
Se han instalado aparatos industriales en prcticamente todos los campos de aplicacin de las
membranas. Pueden citarse especficamente algunos sectores como la biotecnologa, el
agroalimentario, la produccin de agua potable, y el campo de la ciencias ambientales que constituye
hoy en da el mercado potencial ms importante para este tipo de membranas.
Sin embargo, el crecimiento del mercado de nanofiltracin todava est ligado a la puesta en
prctica de nuevas membranas con mejores prestaciones, en particular los nanofiltros de cermica que
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deben poder trabajar en condicin de utilizacin muy severas (temperaturas elevadas, solventes
orgnicos).
La tabla No. 1 da una idea de las principales caractersticas de las membranas orgnicas de
nanofiltracin que estn actualmente disponibles a nivel comercial.
Esta lista no es exhaustiva y existen algunas otras membranas que estn en desarrollo, en particular las
membranas mixtas orgnicas e inorgnicas, o las membranas puramente inorgnicas.
La organizacin estructural de las membranas de nanofiltracin, tanto las orgnicas como las
inorgnicas, se fundamenta sobre el mismo principio. Se trata de la estructura asimtrica que tiene 3
niveles.
Un soporte macroporoso que ofrece una buena resistencia mecnica que permite un flujo elevado de
solventes.
Una capa intermedia mesoporosa, como enlace entre el soporte y la capa activa.
Una capa final activa en nanofiltracin, cuyas caractersticas principales son de un lado un espesor
muy bajo, inferior a la micra, y de otra parte un dimetro de poro del orden del nanmetro, con
una distribucin de tamao muy estrecha con el fin de asegurar a la vez un flujo elevado y una
buena separacin con los solutos de masa molecular inferior a 1000.
Los mdulos actualmente propuestos son de tipo tubular o espiral. La escogencia de la geometra de
los mdulos para una utilizacin precisa se hace en funcin del lquido a tratar. Por ejemplo en el caso
de un fluido que contiene muchos materiales en suspensin, los mdulos en espiral necesitan un
pretratamiento, que requiere instalaciones a veces tan importantes como el proceso membranario en si
mismo.
Tabla 1: Caractersticas de utilizacin de las principales membranas
de nanofiltracin actualmente en el mercado
Membrana
Fabricante
DRC-1000
Desal 5
HC 50
NF 45
NF 70
SU 600
SU 200HF
NTR 7410
NTR 7450
NF-PES-10/PP60
NF-CA-50/PET100
MPT-10
MPT-30
MPT-20*
Celfa
Desalination
DDS
Filmtec
Filmtec
Toray
Toray
Nitto
Nitto
Kalle
Kalle
MPW
MPW
MPW
MPT-40**
MPW
Caractersticas de utilizacin
P mx (MPa)
pH
T mx (C)
4,0
4,2
6,0
4,1
1,7
1,0
1,5
3,0
3,0
6,0
4,0
4,0
4,0
3,0
3-8
2-11
2-10
2-10
3-9
3-8
3-10
1-13
1-13
1-14
2-8
3-13
0,5-12
2-10
40
50
60
45
35
35
40
80
80
90
40
60
70
50
0,5-11
70
Estas membranas poseen una buena (*) o excelente (**) resistencia a los solventes orgnicos.
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smosis inversa
El fenmeno de la smosis inversa se caracteriza por un flujo de solvente (la mayora de las veces
agua) a travs de una membrana bajo la accin de un gradiente de concentracin, figura 21. Si se
consideran dos compartimientos separados por una membrana permeselectiva y que contienen dos
soluciones de concentraciones diferentes, habr un flujo de solvente del compartimiento de menor
concentracin hacia el compartimiento de mayor concentracin.
Solucin
diluida
Membrana
semi-permiable
Solucin
concentrada
Presin
Osmotica
Presin >
Agua
Pura
Agua
Pura
Osmosis
Equilibrio Osmotico
Osmosis Inversa
= 8,35 atm.
= 0,71 atm
Son las primeras membranas utilizadas en smosis inversa. Este tipo de polmero se obtiene al sustituir a
los grupos OH de la celulosa por grupos acetato. El grado de sustitucin es generalmente de 2,75.
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Los principales suplidores de estas membranas son: ABCOR, DOW, KALLE, OSMONICS, PCI, MILLIPORE,
WAFILIN.
Membranas en poliamida.
Estas membranas se desarrollaron con el objeto de superar las dificultades de las membranas de
acetato de celulosa. Ellas presentan un funcionamiento mejorado con las ventajas siguientes:
- Una mejor estabilidad qumica.
- Mejor estabilidad trmica
- Mejor estabilidad mecnica.
De todas formas, estas membranas presentan un desarrollo limitado debido a los inconvenientes
siguientes:
- Son muy sensibles a los oxidantes.
- Baja permeabilidad.
- Problemas de adsorcin.
Los principales fabricantes de estas membranas son: BERGHOF, DUPONT DE NEUMORS, KALLE, NITO,
OSMONICS,SEPAREM.
Membranas de polisulfona.
Las primeras membranas de polisulfona aparecieron en los aos 70. Ellas se caracterizan porque
contienen al grupo -SO3- relativamente estable. Presentan ventajas con respecto a las membranas
descritas anteriormente:
- Estabilidad trmica hasta los 75 C.
-
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Los principales fabricantes son: KALLE, MILLIPORE, OSMONICS, TEIJIN, DAICEL, WAFILIN.
Tabla 10. Principales membranas de smosis inversa.
Tipo
Nombre
Comercial
Mdulo
Acetato de
UOP (USA)
Osmonics (USA)
Envirogenics (USA)
Roga
Sepa
----
Espiral
Espiral
Espiral
celulosa
Nitto (Japn)
1500
Tubular
----
Fibras Huecas
Dowex
---Hollosep
C-A
Fibras Huecas
Espiral
Fibras Huecas
Plano
WFR
Tubular
Poliamida
Du Pont (USA)
Permasep
Fibras Huecas
aromatica
DDS (Dinamarca)
HMX
plano
Polibencimidazol
Celanese/Osmonice USA
----
----
Polibencimidazolona
Teijin (Japn)
----
Tubular
Compuesta,
Poliamida
Filmtec (USA)
FT 30
Espiral
soporte de
polisulfona en
casi todos los
Poliamida
Polifurano/Cianurato
UOP (US)
Toray (Japn)
PA 300
PEC 1000
---Espiral
casos
Polieter
UOP (USA)
RC100
----
Compuesta
Otras
Desalinacin (USA)
Hydranauties (USA)
Nitto (Japn)
----
----
Dinmica,
soporte Inox
Poliacrilamida/Zirconio
Carre (USA)
Zopa
Tubular
Asimtrica un
slo polimero
Material
Di/triacetato
de
celulosa
Fabricante
Poliurea
Membranas compuestas.
Son membranas asimtricas en donde el espesor de la capa activa es muy inferior al de las
membranas precedentes (10 veces menos, aproximadamente). Para ello las membranas se preparan en
dos etapas. Las ventajas son:
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Separacin lquido-lquido
En la extraccin lquido-lquido se separa un componente de una mezcla lquida, con ayuda de un
disolvente, que preferentemente lo disuelve. Campos de aplicacin son, por ejemplo, la separacin de
vitaminas de soluciones acuosas o la separacin de aromticos de fracciones de petrleo.
En el caso ms sencillo participan tres componentes:
El Soluto A
El disolvente B
El lquido portador C
El soluto A forma parte de la mezcla de partida junto con el lquido portador C. Si la mezcla de partida y
el disolvente B se mezclan entre s, el soluto A pasa al disolvente B. Ha de cumplirse la condicin de que
la solubilidad del componente A en el disolvente B sea mayor que la del lquido portador C. A su vez, el
lquido portados C debera ser prcticamente insoluble en el disolvente B.
La ilustracin representada como ejemplo parte del planeamiento ideal en el que el soluto A es
absorbido en su totalidad por el disolvente. En realidad queda siempre un resto del soluto en el lquido
portador. Adems se admite la insolubilidad total del lquido portador en el disolvente. En la prctica
siempre se encontrarn partes de cada una de las sustancias en la otra fase.
El resultado es que en el proceso de separacin real se forman dos fases despus de la decantacin:
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Separacin solido-lquido
Con la extraccin slido-lquido se puede extraer componentes solubles de solidos con ayuda de un
disolvente. Campos de aplicacin de esta operacin bsica son, por ejemplo, la obtencin de aceite de
frutos oleaginosos o la lixiviacin de minerales.
Un ejemplo de la vida cotidiana es la separacin de la infusin de caf. En este proceso, la sustancia
aromtica del caf (soluto) se extrae con agua (disolvente) del caf molido (material de extraccin,
formado por la fase portadora slida y el soluto). En el caso ideal se obtiene la infusin de caf
(disolvente con la sustancia aromtica disuelta) y en el filtro de la cafetera queda el caf molido
totalmente lixiviado (fase portadora slida).
En la prctica, al trmino de la extraccin, la fase portadora slida siempre contendr todava una parte
del soluto en el slido. Adems, una parte del disolvente permanecer tambin ligada de forma
adsorbato a la fase portadora slida.
Para conseguir una extraccin lo ms rpida y completa posible del slido, se tiene que ofrecer al
disolvente superficies de intercambio grandes y recorridos de difusin cortos. Esto se puede lograr
triturando el slido a extraer.
En la forma ms sencilla de esta operacin bsica se mezclan bien el material de extraccin y el
disolvente. A continuacin se separa y se regenera el disolvente junto con el soluto disuelto.
El material de extraccin puede estar presente tambin como lecho fijo, que es atravesado por el
disolvente. En otra forma de aplicacin, el material de extraccin percola a travs del disolvente.
La regeneracin del disolvente consiste, generalmente, en un proceso de evaporacin/destilacin. En l
se elimina parte del disolvente y queda una solucin concentrada de extracto como producto. El
disolvente se condensa y se puede reutilizar.
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Tipo de muestras
Aguas, suelos, alimentos, extractos.etc (para cualquier tipo de matriz contactar con el laboratorio).
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Ruptura Celular
Una gran variedad de tcnicas de rompimiento celular son usadas en el laboratorio, pero solo algunas de
ellas a escala industrial. Los mtodos de rompimiento celular (tabla 5.2) pueden ser divididos en
mtodos qumicos y mtodos mecnicos. Dentro de los primeros se encuentra el choque osmtico, la
disolucin lipdica, la digestin enzimtica y el tratamiento alcalino. Dentro de los segundos se
encuentra la agitacin con abrasivos y la homogenizacin.
Espectrometra de masas
La espectrometra de masas es una tcnica analtica de gran potencial que nos permite elucidar
estructuras qumicas, se basa en la medicin de la relacin masa/carga de especies moleculares. Las
determinaciones requieren de la generacin de especies cargadas elctricamente, lo cual se logra por
diferentes metodologas como pueden ser el impacto electrnico, el bombardeo de tomos rpidos
(FAB), el anlisis directo en tiempo real (DART) y la generacin de iones enlazados. La medicin de la
relacin masa/carga nos permite tambin saber el peso molecular exacto de la molcula.
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Aplicaciones
Esta tcnica analtica es imprescindible para varias ramas de la industria qumica como: petroqumica,
farmacutica, cosmetolgica, de alimentos, entre otras. Entre algunas aplicaciones podemos mencionar
el anlisis de muestras de: productos organometlicos, productos naturales, productos de sntesis,
contaminantes ambientales, productos del rea bioqumica, polmeros, biomolculas pequeas, etc.
Cabe mencionar que con el uso de la cromatografa de gases acoplada a masas se pueden separar
mezclas y elucidar cada uno de los componentes de sta.
Cristalizacin de protenas
La ciencia que se dedica a intentar conocer cmo es la estructura de estos cristales se denomina
cristalografa. Los cristalgrafos tratan de comprender la forma que adoptan diferentes tipos de
molculas, minerales, y su funcin. Para ello, el requisito fundamental ser obtener un cristal.
Las protenas se consideran el motor de la vida, ya que estn implicadas en todas las acciones celulares
necesarias para la vida. Existen un total de 20 aminocidos que son las unidades elementales que
componen las protenas. Debido a la multitud de combinaciones distintas que pueden formar estos
aminocidos, nos encontramos con que existen muchas protenas diferentes. Gracias a esta gran
variabilidad en su estructura son capaces de realizar funciones muy diversas. Son las encargadas de
regular las hormonas en el organismo, de luchar contra agentes infecciosos, estn involucradas en la
divisin celular, transportan el oxgeno por la sangre para que llegue a todas las partes del cuerpo
humano, son las responsables de que nuestros msculos se contraigan y un sinfn ms de funciones.
Conocer la forma que adopta una protena nos ayuda a saber ms acerca de su funcin y sus
implicaciones en los mecanismos reguladores de la vida. Por ello se ha creado el proyecto proteoma
humano, que pretende descifrar la estructura y el funcionamiento de cada una de las protenas
existentes. En la actualidad est descrita la estructura de 78628 protenas, segn datos del Protein Data
Bank, que es la base mundial donde se registran las protenas que han sido estudiadas.
En solucin las protenas presentan mucha movilidad, por ello
se debe tratar de inmovilizarlas intentando que formen un
cristal. Esto no siempre es tarea fcil. Lo primero que se
necesita es que la protena se encuentre aislada y libre de
cualquier contaminante que pueda influir, lo que se consigue
mediante diferentes tcnicas de purificacin. Una vez obtenida
la protena pura se necesitar que est lo suficientemente
concentrada como para poder cristalizar.
Los experimentos de cristalizacin se basan en intentar
encontrar una condicin en la que la protena pueda cristalizar.
Para ello existen diferentes mtodos. Por ejemplo, el mtodo
de la gota colgante consiste en un pocillo donde estar el
reservorio, que es la solucin donde se intentar cristalizar la
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protena. En un portaobjetos especialmente diseado para ello, se pondr una gota de nuestra muestra
de protena (en un volumen de microlitros) y se le aadir una gota de esta solucin del reservorio (ver
imagen a la derecha). Posteriormente, este portaobjetos se pondr encima del pocillo y se sellar pero
sin que entre en contacto con el lquido contenido en el pocillo. Lo que ocurre dentro se denomina
equilibrio de vapor que consiste en que ambas soluciones deben alcanzar la misma concentracin final.
Como la gota donde se encuentran reservorio y protena est menos concentrada, comenzar a perder
agua mediante una reaccin qumica de evaporacin que llevar esta agua hasta el pocillo, provocando
que el reservorio est ms diluido y la gota ms concentrada. Si las condiciones son favorables, resultar
un cristal microscpico.
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Cromatografa de Afinidad.
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de
unin a un determinado ligando. En este caso, las protenas que se retienen en la columna son aquellas
que se unen especficamente a un ligando que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de
la columna. Despus de que las protenas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de la
columna, la protena de inters que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el
empleo de una solucin que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la interaccin
entre el ligando y la protena.
Adsorcin y absorcin
El fenmeno de adsorcin es el proceso por el cual tomos o molculas de una sustancia que se
encuentra en determinada fase, son retenidas en la superficie de otra sustancia, que se encuentra en
otra fase. Como resultado de este proceso, se forma una capa de lquido o gas en la superficie de una
sustancia slida o lquida.
Si consideramos una superficie de un material en contacto con aire, los enlaces del material presentan
discontinuidades, las cuales tendern espontneamente a formar enlaces con la atmsfera que lo rodea,
siempre que el proceso sea energticamente favorable. Dicho de otra manera, si tenemos una superficie
slida con nanoporos, estos poros sern capaces de retener gas de la atmsfera que lo rodea, gracias al
fenmeno de adsorcin. Los nanoporos son los llamados centros activos del adsorbente, que tienen
fuerzas de enlace entre sus tomos que no estn saturadas, de manera que admiten la adsorcin de
tomos o molculas del gas que lo rodea.
El mecanismo exacto del proceso de adsorcin depende de qu sustancias estn involucradas.
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La cantidad de material adsorbido depende de las tasas de adsorcin y desorcin de la sustancia, y del
punto en el cual se alcance el equilibrio entre ambas. Cuanto mayor sea la adsorcin y menor se la
desorcin, hallaremos mayor cantidad de material adsorbido en equilibrio.
La absorcin es una operacin qumica que trata la separacin de los componentes que conforman una
mezcla gaseosa, ayudndose de un solvente en estado lquido, con el que conseguir formar una
solucin. El proceso incluye una difusin molecular o un paso de masa del soluto a travs del gas.
Para calcular la concentracin de un soluto de dos fases que se encuentren en equilibrio se necesitan
una serie de datos experimentales del equilibrio. Tambin hay que decir, que si ambas fases no se
encuentran en equilibrio, la velocidad de traspaso de la masa es proporcional a la fuerza que las
impulsa, la cual es la desviacin que respecta con el equilibrio. Las variables que son de importancia y
que afectan al equilibrio en un soluto son la temperatura, la concentracin y tambin la presin. El
equilibrio que tiene lugar entre dos fases se rige por la regla de fases, dada por la igualdad: F= C P + 2,
de donde la P hace referencia al nmero de fases que se encuentran en equilibrio, la C es igual al
nmero de componentes que hay en las dos fases en total, y la F, sera el nmero de variantes del
sistema. En un equilibrio entre un lquido y un gas, existirn 2 componentes, as como tambin dos
fases, por lo cual al sustituir los valores en la igualdad nos dara: F= 2-2+2= 2. As se dice que el equilibrio
tiene 2 grados de libertad.
Es importante una buena eleccin del disolvente que participar en la absorcin. Si con la absorcin
queremos obtener una solucin especfica, el disolvente que debemos utilizar viene indicado por la
naturaleza del producto. Si en cambio el propsito principal es eliminar alguno de los componentes que
constituyen el gas, por lo general existir una amplia eleccin. Claramente el agua es el disolvente con
menor precio y tambin el ms completo.
Referencias
-
http://www.gunt.de/download/extraction_spanish.pdf
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