INTRODUCCIN

Desde la antigedad la humanidad ha buscado distintas formas de combatir la

enfermedad. La terapia gnica se ha desarrollado como un mtodo de acercamiento al
tratamiento de las enfermedades humanas basado en la transferencia de material
gentico a las clulas de un individuo. Habitualmente la finalidad de esta transferencia de
material gentico es restablecer una funcin celular que estaba abolida o defectuosa,
introducir una nueva funcin o bien interferir con una funcin existente. La nica
modalidad de terapia gnica en desarrollo es la dirigida a clulas somticas, no
germinales, lo que asegura que la transferencia slo afecte al individuo en tratamiento y
no a su descendencia. Las distintas estrategias de la terapia gnica se basan en la
combinacin de tres elementos clave, el material gentico a transferir, el mtodo de
transferencia y el tipo celular que incorporar dicho material gentico.
Tras el descubrimiento de la estructura del DNA por Watson y Crick, en los aos 70 se
desarroll la tecnologa del DNA recombinante, que dio lugar a unos conocimientos
bsicos y unas herramientas que permitan transferir genes al interior de las clulas.
Inicialmente esta tecnologa fue empleada en el campo de las ciencias bsicas para
investigar funciones biolgicas, tanto in vivo como in vitro, pero pronto se vio que la
transferencia gnica tena un gran potencial en el tratamiento de enfermedades humanas.
En 1990, la terapia gnica fue usada por primera vez con intencin teraputica en un
paciente que padeca una inmunodeficiencia severa por un dficit de adenosina
deaminasa. El error gentico de sus linfocitos se corrigi ex vivo por transferencia gnica
y estos linfocitos ya corregidos se le reinfundieron. A partir de este momento la terapia
gnica present un enorme desarrollo durante la dcada de los 90, con ms de 400
ensayos clnicos en todo el mundo. Aunque inicialmente la atencin se centr en el
tratamiento de las enfermedades hereditarias monognicas, posteriormente la mayor
parte de los ensayos clnicos de terapia gnica se enfocaron al tratamiento del cncer. La
trgica muerte de un joven de 18 aos que participaba en uno de estos ensayos clnicos
supuso un duro golpe que gener alarma en todo el mundo. A finales de los 90 se produjo
el primer xito teraputico: un grupo de nios con inmunodeficiencia combinada severa
(causada por la mutacin en el gen que codifica la cadena gamma comn), fueron
tratados en Francia mediante la transferencia ex vivo a clulas de su mdula sea de la
versin correcta del gen alterado. Todos los pacientes mejoraron su capacidad inmune, lo
que les permiti vivir en un ambiente normal. Poco despus se observ que el xito no
haba sido completo puesto que dos de estos nios desarrollaron leucemia aguda por la
activacin de un oncogn debido a la insercin aleatoria del material gentico teraputico
en el genoma de las clulas corregidas. Pero se haba dado un paso definitivo: la terapia
gnica humana es factible y puede ser til.

TERAPIA GNICA
Definicin
El concepto de terapia gnica resulta de la observacin de que ciertas enfermedades,
entre ellas particularmente el cncer, resultan de daos genticos especficos. En
principio, las patologas causadas por defectos monogenticos podran ser curadas
mediante la insercin y expresin de una copia normal del gen daado.
La terapia gnica se sustenta en la tradicin frmaco-quirrgica de la medicina y se define
como la aplicacin de principios genticos para el tratamiento de enfermedades humanas.
Concretamente el trmino terapia gnica unifica los principios de la farmacologa con los
de la gentica, pues implica tcitamente el empleo de cidos nucleicos como el agente
farmacolgico para el tratamiento de estados patolgicos, con esto la terapia gnica
persigue modificar el genoma de las clulas somticas transfiriendo copias normales de
genes para que produzcan cantidades adecuadas del producto gnico normal,
cuya accin corregira la enfermedad gentica.
La estrategia general que se utiliza para la terapia gnica no es ms que una extensin de
la tcnica de seleccin clonal por complementacin funcional. Primero, la funcin ausente
en el organismo recipiente como consecuencia de la presencia de un gen defectuoso se
introduce en un vector; luego, este vector se inserta en uno de los cromosomas
recipientes y genera un organismo transgnico que se ha "curado" genticamente. Esta
tcnica tiene un enorme potencial en los seres humanos porque nos ofrece la esperanza
de corregir los desrdenes genticos.
Terapia en clulas somticas
La terapia gnica en clulas somtica, que ha sido el ncleo central de la investigacin de
terapia gnica en seres humanos, consiste en la introduccin de genes normales en
clulas somticas humanas para tratar un trastorno especifico. Las clulas del paciente
pueden extraerse y manipularse fuera del cuerpo (terapia ex vivo) o, en algunos casos,
las clulas pueden tratarse mientras permanecen en el cuerpo (terapia in vivo).
Algunos tipos de clulas somticas son ms apropiadas para la terapia gnica que otros.
Los buenos candidatos deben ser fcilmente accesibles y tener una vida media
prolongada en el organismo. En algunos sistemas de cesin gentica son preferibles las
clulas en proliferacin ya que, en este caso, el vector portador del gen puede integrarse
en el interior del DNA de la clula.
No todos los tipos de enfermedades son apropiadas para la terapia gnica. Es probable
que muchas enfermedades dominantes, en especial las causadas por mutaciones
dominantes negativas, sean difciles de tratar porque requeriran de un bloqueo del efecto
del gen. La terapia gnica alcanza sus objetivos con ms facilidad en las enfermedades
recesivas que implican la presencia de un producto gentico defectuoso o perdido. En
este caso, la insercin de un gen normal sustituira al producto perdido.
Muchos trastornos recesivos de deficiencia enzimtica pueden corregirse, en potencia,
cuando se produce alrededor de 10% del nivel enzimtico normal.

Existen muchos posibles mtodos de introduccin de genes en las clulas, incluyendo

la fusin celular, la coprecipitacin de fosfato clcico (el compuesto qumico altera la
membrana celular, facilitando la introduccin del DNA extrao), las microinyecciones y la
fusin de liposomas. Los dos sistemas de cesin ms utilizados son: los retrovirus y los
adenovirus.
TERAPIA GNICA DE SUSTITUCIN
Vectores de terapia gnica
La gran diversidad de situaciones en las que podra aplicarse la terapia gnica hace
imposible la existencia de un solo tipo de vector adecuado. Sin embargo, pueden definirse
las siguientes caractersticas para un "vector ideal" y adaptarlas luego a situaciones
concretas:

Que sea reproducible.

Que sea estable.

Que permita la insercin de material gentico sin lmite de tamao.

Que permita la transduccin tanto en clulas en divisin como en aquellas que no

estn proliferando.
Que posibilite la integracin del gen teraputico en un sitio especfico del genoma.

Que se integre una vez por clula, para poder controlar la dosis.

Que reconozca y acte sobre clulas especficas.

Que la expresin del gen teraputico pueda ser regulada.

Que carezca de elementos que induzcan una respuesta inmune.

Que pueda ser caracterizado completamente.

Que sea inocuo o que sus posibles efectos secundarios sean mnimos.

Que sea fcil de producir y almacenar.

Que todo el proceso de su desarrollo tenga un coste razonable.

Los vectores van a contener los elementos que queramos introducir al paciente, que no
van a ser slo los genes funcionales, sino tambin elementos necesarios para su
expresin y regulacin, como pueden ser promotores, potenciadores o secuencias
especficas que permitan su control bajo ciertas condiciones.
Podemos distinguir dos categoras principales en vectores usados en terapia gnica:
virales y no virales.
a. Mtodos virales
Todos los virus son capaces de introducir su material gentico en la clula husped como
parte de su ciclo de replicacin. Gracias a ello, pueden producir ms copias de s mismos,
e infectar a otras clulas.
Algunos tipos de virus insertan sus genes fsicamente en el genoma del husped, otros
pasan por varios orgnulos celulares en su ciclo de infeccin y otros se replican

directamente en el citoplasma, por lo que en funcin de la terapia a realizar nos puede

interesar uno u otro.
Algo comn a la mayora de estrategias con virus es la necesidad de usar lneas celulares
"empaquetadoras" o virus helpers, que porten los genes que les eliminamos a nuestros
vectores y que permiten la infeccin.
Retrovirus
El genoma de los retrovirus est constituido por ARN de cadena sencilla, en el cual se
distinguen tres zonas claramente definidas: una intermedia con genes estructurales, y dos
flanqueantes con genes y estructuras reguladoras. Cuando un retrovirus infecta a una
clula husped, introduce su ARN junto con algunas enzimas que se encuentran en la
matriz, concretamente una proteasa, una transcriptasa inversa y una integrasa.
La accin de la retrotranscriptasa permite la sntesis del ADN genmico del virus a partir
del ARN. A continuacin, la integrasa introduce este ADN en el genoma del husped. A
partir de este punto, el virus puede permanecer latente o puede activar la replicacin
masivamente.
Para usar los retrovirus como vectores vricos para terapia gnica inicialmente se
eliminaron los genes responsables de su replicacin y se reemplazaron estas regiones
por el gen a introducir seguido de un gen marcador.
Del genoma vrico quedaban las secuencias LTR; y los elementos necesarios para
producir los vectores a gran escala y para transformar las clulas son aportados desde
otros vectores, bien plasmdicos o bien en lneas celulares especficas. En el caso de usar
vectores plasmdicos, estrategias como cotransformar con varios plsmidos distintos que
codifiquen para las protenas del retrovirus, y que la transcripcin de sus secuencias est
sometida a promotores eucariotas puede contribuir a minimizar el riesgo de que por
recombinacin se generen virus recombinantes.1
Actualmente se buscan estrategias como la anterior para conseguir una mayor seguridad
en el proceso. La adicin de colas de poliadenina al transgn para evitar la transcripcin
de la segunda secuencia LTR es un ejemplo de esto
Los retrovirus como vector en terapia gnica presentan un inconveniente considerable, y
es que la enzima integrasa puede insertar el material gentico en cualquier zona del
genoma del husped, pudiendo causar efectos deletreos como la modificacin en el
patrn de la expresin (efecto posicional) o la mutagnesis de un gen silvestre por
insercin.
Ensayos de terapia gnica utilizando vectores retrovirales para tratar la inmunodeficiencia
combinada grave ligada al cromosoma X (X-SCID) representan la aplicacin ms exitosa
de la terapia hasta la fecha. As, ms de veinte pacientes han sido tratado
en Francia y Gran Bretaa, con una alta tasa de reconstitucin del sistema inmunitario.
Sin embargo, ensayos similares fueron restringidos en los Estados Unidos cuando se

inform de la aparicin de leucemia en pacientes. Hasta hoy se conocen cuatro casos de

nios franceses y uno britnico que han desarrollado leucemia como resultado de
mutagnesis por insercin de los vectores retrovirales, y todos menos uno de estos nios
respondieron bien al tratamiento convencional contra la leucemia. En la actualidad, la
terapia gnica para tratar SCID contina siendo exitosa en Estados Unidos, Gran
Bretaa, Italia y Japn.
Adenovirus
Los adenovirus presentan un genoma de ADN bicatenario, y no integran su genoma
cuando infectan a la clula husped, sino que la molcula de ADN permanece libre en
elncleo celular y se transcribe de forma independiente. Esto supone que el efecto
posicional o la mutagnesis por insercin no se dan en estos vectores, lo cual no quiere
decir que no tengan otros inconvenientes. Adems, debido al hecho de que en su ciclo
natural se introducen en el ncleo de la clula, pueden infectar tanto clulas en divisin
como clulas quiescentes.
A los vectores de primera generacin se les elimin parte del gen E1, bsica para la
replicacin, y a los de 2, se les eliminaron otros genes tempranos en el ciclo del virus. En
ambos casos, cuando se realiza una infeccin con una concentracin elevada de virus, se
produce la expresin de otros genes que provocan una respuesta inmune considerable.
Por ello, los ltimos vectores basados en adenovirus prcticamente han sido desprovistos
de la mayor parte de sus genes, con la excepcin de las regiones ITR (regiones repetidas
de forma invertida), y la zona necesaria para la encapsidacin.
Virus Adenoasociados (AAV)
Los AAV son virus pequeos con un genoma de ADN monocatenario. Pueden integrarse
especficamente en el cromosoma 19 con una alta probabilidad. Sin embargo, el
VAArecombinante que se usa como vector y que no contiene ningn gen viral, solo el gen
teraputico, no se integra en el genoma. En su lugar, el genoma vrico recombinante
fusiona sus extremos a travs del ITR (repeticiones terminales invertidas), apareciendo
recombinacin de la forma circular y episomal que se predice que pueden ser la causa de
la expresin gnica a largo plazo.
Las desventajes de los sistemas basados en AAV radican principalmente en la limitacin
del tamao de DNA recombinante que podemos usar, que es muy poco, dado el tamao
del virus. Tambin el proceso de produccin e infeccin resultan bastante complejos. No
obstante, como se trata de un virus no patgeno en la mayora de los pacientes tratados
no aparecen respuestas inmunes para eliminar el virus ni las clulas con las que han sido
tratados.
Muchos ensayos con VAA estn en curso o en preparacin, principalmente en el
tratamiento de msculos y enfermedades oculares, los dos tejidos donde el virus parece

ser particularmente til. Sin embargo, se estn comenzando a realizar pruebas clnicas,
donde vectores basados en el VAA son utilizados para introducir los genes en el cerebro.
Esto es posible porque VAA pueden infectar clulas que no estn en estado de divisin,
tales como las neuronas.
Herpes virus
Los herpes virus son virus de ADN capaces de establecer latencia en sus clulas
husped. Son complejos genticamente hablando, pero para su uso como vectores tienen
la ventaja de poder incorporar fragmentos de DNA exgeno de gran tamao (hasta unas
30 kb). Adems, aunque su ciclo ltico lo realizan en el lugar de infeccin, establecen la
latencia en neuronas, las cuales estn implicadas en numerosas enfermedades del
sistema nervioso, y son por ello dianas de gran inters.
Los vectores herpes vricos puestos en marcha han usado dos estrategias principales:
- La recombinacin homloga entre el genoma del virus completo y el contenido en un
plsmido que llevaba el transgn en la zona que codifica para genes no esenciales en lo
que se refiere a replicacin e infeccin.
- El uso de vectores con orgenes de replicacin del virus as como las correspondientes
secuencias de empaquetamiento, y su introduccin en estirpes celulares bien
coinfectadas con virus silvestres o bien portadoras del resto de genes del mismo
implicados en la encapsidacin y replicacin, para permitir la formacin de partculas
virales recombinantes con las que realizar el tratamiento.
No obstante, el uso de vectores basados en el HSV (virus del herpes simple), slo puede
llevarse a cabo en pacientes que no hayan sido infectados previamente por l, pues
puede presentar inmunidad.
Protena "pseudotyping" de vectores virales
Los vectores virales descritos anteriormente tienen poblaciones naturales de clulas
husped que ellos infectan de manera eficiente. Sin embargo, algunos tipos celulares no
son sensibles a la infeccin por estos virus.
La entrada del virus a la clula est mediada por protenas de su superficie externa (que
pueden formar parte de una cpside o de una membrana). Estas protenas interaccionan
con receptores celulares que pueden inducir cambios estructurales en el virus y contribuir
a su entrada en la clula por endocitosis.
En cualquier caso, la entrada en las clulas husped requiere una interaccin favorable
entre una protena de la superficie del virus, y una protena de la superficie de la clula.
Segn la finalidad de una determinada terapia gnica, se podra limitar o expandir el
rango de clulas susceptibles a la infeccin por un vector. Por ello, se han desarrollado

vectores conocidos como "pseudotyped", en los cuales la cubierta vrica de protenas

silvestre ha sido remplazada por pptidos de otros virus, o por protenas quimricas, que
constan de las partes de la protena vrica necesarias para su incorporacin en el virin,
as como las secuencias que supuestamente a interaccionar con receptores especficos
de protenas celulares.
Por ejemplo, el vector retrovrico ms popular para el uso en pruebas de terapia gnica ha
sido el virus de la inmunodeficiencia en simios revestido con la cubierta de protenas G del
virus de la estomatitis vesicular. Este vector se conoce como VSV y puede infectar a casi
todas las clulas, gracias a la protena G con la cual este vector es revestido.
Se ha intentado en numerosas ocasiones limitar el tropismo (capacidad de infectar a
muchas clulas) de los vectores virales.Este avance podra permitir la administracin
sistemtica de una cantidad relativamente pequea del vector. La mayora de los intentos
han utilizado protenas quimricas para la envuelta, las cuales incluan fragmentos
de anticuerpos.
b. Mtodos no virales
Estos mtodos presentan ciertas ventajas sobre los mtodos virales, tales como
facilidades de produccin a gran escala y baja inmunogenicidad. Anteriormente, los bajos
niveles de transfeccin y expresin del gen mantenan a los mtodos no virales en una
situacin menos ventajosa; sin embargo, los recientes avances en la tecnologa de
vectores han producido molculas y tcnicas de transfeccin con eficiencias similares a
las de los virus.
ADN desnudo
ste es el mtodo ms simple de la transfeccin no viral. Consiste en la aplicacin
localizada de, por ejemplo, un plsmido con ADN desnudo. Varios de estos ensayos
dieron resultados exitosos. Sin embargo, la expresin ha sido muy baja en comparacin
con otros mtodos de transformacin. Adems de los ensayos con plsmidos, se han
realizado ensayos con productos de PCR, y se ha obtenido un xito similar o superior.
Este logro, sin embargo, no supera a otros mtodos, lo que ha llevado a una investigacin
con mtodos ms eficientes de transformacin, tales como la electroporacin,
la sonicacin, o el uso de la biobalstica, que consiste en disparar partculas
de ororecubiertas de ADN hacia las clulas utilizando altas presiones de gas.
Oligonucletidos
El uso de oligonucletidos sintticos en la terapia gnica tiene como objetivo la
inactivacin de los genes implicados en el proceso de la enfermedad.
Existen varias estrategias para el tratamiento con oligonucletidos

Una estrategia, la terapia "antisentido" utiliza oligonucletidos con la secuencia

complementaria al RNAm del gen diana, lo que activa un mecanismo de silenciamiento
gnico. Tambin se puede usar para alterar la transcripcin del gen defectuoso,
modificando por ejemplo su patrn de edicin de intrones y exones.
Tambin se hace uso de molculas pequeas de RNAi para activar un mecanismo de
silenciamiento gnico similar al de la terapia antisentido
Otra posibilidad es utilizar oligodesoxinucletidos como un seuelo para los factores que
se requieren en la activacin de la transcripcin de los genes diana. Los factores de
transcripcin se unen a los seuelos en lugar de al promotor del gen defectuoso, lo que
reduce expresin de los genes diana. Adems, oligonucletidos de ADN monocatenario
han sido utilizados para dirigir el cambio de una nica base dentro de la secuencia de
un gen mutante.
Al igual que los mtodos de ADN desnudo, requieren de tcnicas de transformacin para
introducirse en la clula.
TERAPIA DE BLOQUEO GNICO
La expresin de un gene mutante o defectuoso puede anularse por la administracin de
un pequeo trozo de RNA, que se une a ese gene especfico y con ello se inhibe la
sntesis tambin de una protena especfica defectuosa. Con ello se pueden curar muchas
enfermedades gentica e incluso varias formas de cncer o por ultimo fabricar nuevas
drogas.
Cmo funciona el sistema?
En el ncleo de cada clula, como en un verdadero ultra computador, con su respectivo
cdigo (cdigo gentico) est contenida toda la informacin necesaria para el normal
funcionamiento de ella: para que desarrolle todos sus procesos bioqumicos necesarios
para la vida, para que cumpla sus funciones, se desarrolle, para que madure, para que
envejezca y por ltimo tambin para que se muera.
Toda esa informacin est contenida en una larga molcula, llamada Acido
desoxirribonucleico (DNA). Es esta misma molcula la que transmite la informacin
cuando una clula se divide o cuando un espermio fecunda a un vulo para dar inicio a un
nuevo ser. En este ltimo caso tanto el espermio como el vulo aportan su propia
informacin en su propia molcula de DNA. El DNA guarda la informacin mediante un
cdigo, que ya fue descifrado en el ao 1953 por Watson y Crick. La molcula de DNA se
concibe como una estructura espacial, que se asemeja a una escalera de cuerdas
torcidas en espiral, en que las cadenas laterales estn formadas por un azcar (ribosa o
desoxirribosa), con una unin fosfrica entre ellas. Las barras que unen las dos cadenas
laterales, a modo de peldaos de la escalera, estn constituidas por cuatro bases
(nucletidos): dos purinas (Adenina y Guanina) y dos pirimidinas (Citocina y Timina). Su
estructura qumica es tal, que siempre frente a la Timina (T) estar la Adenina (A) y frente
a la Guanina (G), la Citocina (C).

Estas cuatro bases, dispuestas en diferente forma, permiten guardar toda la informacin
necesaria para ordenar los procesos vitales de la clula, tal como lo hace un computador
con el cdigo binario, pero que en este caso tiene mucha mayor capacidad por tener
cuatro bases en lugar de dos como el cdigo binario de un computador. La informacin
que contiene el DNA se implementa luego de iniciar la sntesis de una protena. Es decir,
el DNA tiene la informacin como un computador, y en base a ella se sintetiza una
protena especfica que debe cumplir la funcin tambin especfica. Todas las funciones
en el interior de una clula son realizadas siempre por protenas especficas para cada
una, cuya sntesis es comandada por el DNA.
La funcin de una protena determinada est definida por la secuencia de los aminocidos
que la constituyen, que a su vez est controlada por el DNA. El trozo de DNA, que
codifica una protena especfica se llama un ""gene"". En la clula humana, hay
aproximadamente 80.000 genes, que codifican 80.000 protenas diferentes.
La transferencia de la informacin del gene a la protena se realiza en un proceso de dos
etapas. La primera de ellas es la transcripcin de la informacin del DNA a un mensajero,
constituido por el cido ribonucleico o RNA. Este es una copia exacta del DNA, con la
diferencia que el nucletido Timina es reemplazado por uno nuevo, el Uracilo, que
tambin se parea con la adenina. Porque este RNA lleva el mensaje para ser descifrado
en otro lugar de la clula, se ha denominado ""RNA mensajero"" o mRNA. Este proceso
se realiza en el interior del ncleo de la clula. Ms tarde el mRNA, sale del ncleo,
llevando el mensaje hacia el citoplasma de la clula (por eso se llama RNA mensajero), y
por l viaja hasta unos pequeos organismos llamados ribosomas. Es en este lugar donde
se realiza la segunda etapa, que consiste en que la informacin llevada por el mRNA se
traduce en la secuencia de aminocidos que constituyen la protena.
Lo esencial en este proceso de transcripcin es la secuencia de nucletidos, que de
acuerdo a ello van estructurando la cadena de aminocidos que formarn la protena.
Todo el mecanismo de la transcripcin de la informacin, que muestra cmo la primera
etapa de la informacin dada por la secuencia de nucletidos se transcribe desde el DNA
al mRNA. Luego viene la segunda etapa, en que la secuencia de nucletidos del mRNA
se traduce en una secuencia de aminocidos, que finalmente constituyen la protena.
Si por ejemplo el gene est daado por causa de una mutacin, que puede ser provocada
por una sustancia cancergena, por los rayos X o por la luz ultravioleta, el error o dao va
a pasar al mRNA durante la etapa de transcripcin y a su vez la traduccin de este
mensaje errado va a terminar en la sntesis de una protena tambin errada, con un
aminocido en una posicin que no corresponde. Esta alteracin de la protena, puede
alterar su funcin, lo que en definitiva se va a traducir en la interferencia de algn proceso
metablico, lo que se exterioriza por una enfermedad.
El concepto de antisentido
Durante los ltimos aos se ha podido ir descifrando la secuencia de nucletidos del DNA,
tanto de clulas humanas como tambin de diferentes bacterias y virus, conocimiento que
est permitiendo la posibilidad de intervenir en este cdigo gentico, ya sea
reemplazando un gene anmalo por uno normal o inhibiendo la expresin de otro gene
anmalo. Todo este procedimiento que ha experimentado enormes avances durante los

ltimos aos, es lo que se ha llamado "terapia gnica".

Dentro de esta terapia gnica, en este artculo analizaremos los avances logrados
respecto a esta ltima posibilidad, es decir, la inhibicin de la expresin de un gene
mediante la estrategia que se ha denominado "estrategia antisentido. Ella tiene por objeto
impedir la transcripcin del mensaje, interfiriendo a nivel del mRNA. Esto se consigue
utilizando un principio biolgico general que permite el normal" modus operandi` del DNA:
siempre, por razones de enlaces qumicos, el nucletido Timina se une al nucletido
Adenina, mientras que el nucletido Citocina se une al nucletido Guanina. De modo que
si se conoce la secuencia de nucletidos de un determinado gene anmalo, no deseado,
se puede fabricar su contrapartida complementaria, que si se consigue que entre al
ncleo de la clula, automticamente se va a unir a la secuencia respectiva del mRNA y
all se va a detener la transcripcin.
Cada gene tiene muchos nucletidos, pero no es necesario fabricar la contrapartida total
del gene. Basta solo una pequea porcin de l (oligonucletido) que se va a unir a una
pequea porcin del mRNA, segn sea el caso, para bloquearlo y no pueda transmitir el
mensaje. De all que a este oligonucletido, que tiene la secuencia de nucletidos
complementaria, se le llame "antisentido", ya que la operacin normal, es la que tiene
sentido.
Inhibicin de la traduccin del mRNA
Para llegar a bloquear un determinado mRNA con un oligonucletido, debe lograrse que
este ltimo se introduzca al ncleo de la clula, la que se hace por medio de un
transportador. Lo cual no es fcil, ya que en la sangre existen normalmente enzimas que
degradan el RNA a DNA, cortando las uniones de fosfato que une las cadenas de esta
molcula. Para impedir la accin de estas enzimas, el oligonucletido que se prepara, se
fabrica reemplazando la unin de fosfato normal por una unin de fosforotionato, que la
enzima sangunea tiene dificultades para cortar.
Pero hay un segundo problema que resolver, y l se refiere a lograr que el oligonucletido
entre a la clula o el ncleo. Para una alta eficiencia en esta etapa se estn ensayando
diferentes transportadores, que formando un complejo con los oligonucletidos permiten
la introduccin de ste a la clula y luego al ncleo. Importantes avances en este sentido
ya se han realizado.
Pero an queda un tercer problema: cmo lograr que el oligonucletido alcance el
compartimiento relevante dentro de la clula, donde se pueda unir a su respectivo mRNA.
Con las metodologas actuales, sucede que una gran proporcin del oligonucletido es
atrapado en un compartimiento intracelular llamado endosoma, donde queda no
disponible para unirse al mRNA. En este sentido se estn investigando varias
aproximaciones, ya sea para engaar al endosoma o acelerar su liberacin, cuando ste
capta al oligonucletido. Se ha avanzado, pero la realidad es que an no se sabe qu
porcentaje del oligonucletido alcanza realmente el ncleo y qu porcentaje se queda en
el citosoma. Mientras ms oligonucletidos alcanzan al ncleo, ms efectiva es la accin
antisentido.
Aparecieron los ribosomas

Recientemente se descubri por primera vez, que trozos de RNA tenan acciones
catalticas (enzimticas), y podan cortar otras secuencias de DNA. Por esta accin, estos
trozos de RNA se han llamado ribosimas. Aprovechando esta propiedad, ellas se han
agregado por medio de la tecnologa oligonucletidos antisentido, logrando un efecto ms
definitivo.
Segn su estructura qumica y forma se han descrito dos tipos de ribosoma, que se han
llamado ribosomas "cabeza de martillo" y "puerco espn". Los prototipos de estas
ribosomas se encuentran en la naturaleza, especialmente en los viroides de plantas,
como los que producen la mancha de los paltos y la mancha de la planta del tabaco.
Estas ribosomas contienen secuencias de RNA, que tienen esta posibilidad de cortar
otras cadenas RNA, en secuencias de nucletidos bien determinadas.
Estas ribosomas se han agregado al oligonucletido, que se unen por dos brazos. Una
vez agregadas, estas ribosomas son capaces de cortar el mRNA en un lugar preciso,
inactivndolo definitivamente.
En resumen, se ha abierto un mecanismo que permite actuar sobre genes especficos e
inhibir su expresin. Ello tiene enormes posibilidades tanto en medicina como tambin en
la agricultura. Sin embargo, es obvio que an queda mucho camino por recorrer, pero en
todo caso es muy promisorio.
TERAPIA GNICA PARA ENFERMEDADES HEREDITARIAS
La mayora de las enfermedades metablicas debidas a mutaciones inactivantes en
genes que codifican protenas con actividad biolgica (un enzima, un factor de
coagulacin, una hormona, etc) pueden abordarse mediante una estrategia de
suplementacin gnica que restaure los niveles de la protena deficiente. Por ejemplo, se
ha utilizado la transferencia gnica al msculo para conseguir la produccin local de
distrofina en casos de distrofia muscular de Duchenne. De manera similar, se han
transferido genes al msculo o al hgado para que estos rganos secreten al torrente
circulatorio un factor que est ausente. En este sentido, ha tenido especial resonancia el
xito alcanzado con la transferencia mediada por virus adenoasociados del gen del factor
IX de la coagulacin al msculo esqueltico, para producir niveles plasmticos de este
factor que puedan corregir los defectos en la coagulacin que sufren animales
hemoflicos. En los ltimos aos, hemos asistido a importantes avances en este campo,
como la curacin de dos nios con adrenoleucodistrofia, la restauracin de la visin
tricromtica en monos daltnicos, la curacin de un paciente adulto con talasemia, la
reparacin de una mutacin causante de hemofilia mediante nucleasas de dedos de zinc,
o la curacin de 13 nios burbuja.
Inmunizacin frente a enfermedades infecciosas mediante transferencia gnica, con el
fin de que las clulas sinteticen pptidos inmunognicos y estimulen al sistema inmune
hasta eliminar el agente patgeno. Se estn ensayando inmunizaciones gnicas frente a
virus (virus B y virus C de la hepatitis, virus de la gripe) u otros agentes, como el parsito
de la malaria. Es bastante eficaz la inyeccin directa de un plsmido en msculo o la
transferencia intradrmica mediante pistola gnica. En general, la eficacia de estos
tratamientos reside en la capacidad de producir localmente una protena que sea liberada

y capturada por macrfagos y otras clulas presentadoras de antgenos, que procesan

esas protenas a pequeos pptidos y los presentan con molculas de clase II del sistema
mayor de histocompatibilidad (MHC) para estimular las clulas CD4+ (linfocitos T helper).
Adems, si las clulas transfectadas expresan molculas de clase I del MHC tambin
podrn presentar los pptidos recin sintetizados y estimular clulas CD8+ (linfocitos T
citotxicos).