Universidad Nacional Autnoma de

Mxico

Facultad de Qumica

Biofarmacia Grupo: 3

PROTOCOLO ESTUDIO DE
BIOEQUIVALENCIA
GLIMEPIRIDA.

EQUIPO

Sarmiento Ziga Dalila Edith

Torres Orozco Yair Ibsan
Escalante Ramrez Juan Fernando

NDICE
1. INTRODUCCIN..
........3
2. OBJETIVO
..............3
3. MTODO
...............3
4. FORMULACIONES
.4
5. PROCEDIMIENTO
..4
6. TRATAMIENTO DE LAS
MUESTRAS...........5
7. FARMACOCINTICA Y ANLISIS
ESTADSTICO.....5
8. REFERENCIA DE ESTUDIO
.....................8
9. REFERENCIAS.

..8

1.- INTRODUCCIN.
Las enfermedades crnicas degenerativas constituyen una de las primeras
causas de muerte a nivel mundial. Entre este tipo de padecimientos se
encuentra la Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM2) con tendencia a presentarse cada
vez ms en personas jvenes. En Mxico es la tercera causa de muerte, y
especficamente en el grupo de 55 a 64 aos ocupa el primer lugar como
motivo de defuncin.
La Diabetes Mellitus tipo 2 es un sndrome cuya caracterstica principal es una
elevacin de las concentraciones de la glucosa plasmtica. Esta elevacin
obedece a diferentes etiologas, las cuales deben determinarse. Es importante
tener esto en consideracin, ya que el diagnstico de Diabetes Mellitus en un
paciente implica que simultneamente otros padecimientos pueden ser la
causa o la consecuencia del desajuste metablico.
En la era actual, la integracin del conocimiento ha revolucionado tanto el
concepto de la Diabetes Mellitus Tipo 2 (DMT2) que este padecimiento se
define as: La DMT-2 es un grupo de enfermedades metablicas, caracterizadas
por hiperglucemia, resultado de los defectos en la secrecin de insulina
(disfuncin de la clula ), accin de la insulina (resistencia a la insulina), o
ambas.
La glimepirida es un medicamento que pertenece al grupo de las sulfonilureas.
Glimepirida se caracteriza por la estimulacin de la secrecin de insulina
mediante la unin a un receptor especfico en la clula B, que determina el
cierre de los canales de potasio dependientes de ATP, lo que resulta en la
despolarizacin de la clula. La entrada de calcio secundaria a causas
despolarizacin liberacin de insulina, lo que mejora la accin de la insulina en
el tejido muscular, adiposo y el hgado, la reduccin de la produccin de
glucosa heptica.
2.- OBJETIVO.

El objetivo de esta prueba es comparar la biodisponibilidad relativa de dos

tabletas de glimepirida de 4 mg en 10 voluntarios sanos de ambos sexos
despus de tomar una tableta en ayunas.
3.- METODO
Se realizara una prueba cruzada y aleatoria con dos tratamientos y dos
periodos en el que los voluntarios sanos recibirn una tableta de referencia o
prueba con un intervalo de 14 das entre un tratamiento y otro para permitir
que el frmaco se halla eliminado completamente del organismo de los
voluntarios (periodo de lavado)
Para el anlisis farmacocintico se tomaran muestras de plasma de los
voluntarios para trabajar con ellos y poder conocer la biodisponibilidad entre
los dos frmacos.
Antes de la administracin de los frmacos se debern revisar los signos vitales
de los voluntarios por cuestiones de seguridad ya que este frmaco puede
presentar diversos efectos adversos
4.- FORMULACIONES
Se usaran las siguientes formulaciones para el anlisis de biodisponibilidad:
tableta Amaryl 4mg fabricado por los laboratorios Aventis Pharma como
frmaco de referencia y Glimepirida 4mg fabricado por los laboratorios AMSA
como medicamento de prueba de la cual se desea determinar su
biodisponibilidad.
5.- PROCEDIMIENTO
Los voluntarios fueron seleccionados en base a la evidencia de su validez
mediante la consulta clnica, la sumisin a electrocardiograma y pruebas de
laboratorio.
Despus de probar la solidez, todos los voluntarios firmaron un formulario de
consentimiento informado afirmando que son conscientes de sus derechos y
deberes en relacin con la investigacin.
En la noche del confinamiento de cada perodo, se le ofreci un men de cena
voluntarios preestablecidos. Cumplen una comida rpida al menos 10 horas de
ayuno, y un lquido durante al menos 6 horas antes de la administracin del
frmaco.
La administracin de medicamentos se iniciar a las 7:00 am de la maana
siguiente a la reclusin. Cada medicamento ingerido por los voluntarios deber
ser ingerido con 200 mL de agua mineral sin gas y a temperatura
ambiente. Despus de la ingestin, se deber de mantener un ayuno de 4

horas. El desayuno, el almuerzo, la merienda y la cena se estandarizaran y

debern de consistir en: una dieta baja en grasas y azucares previamente
estandarizada, despus de aproximadamente 4, 6, 8 y 11 horas de la
administracin del frmaco, respectivamente. Los voluntarios debern
permanecer sin ingerir alimentos durante el perodo de reclusin. La ingesta de
lquidos en base a la siguiente escala: 200 mL de agua despus de 2 horas de
la administracin de la medicacin, y despus de comer, beber agua a las
necesidades de cada voluntario. Los voluntarios debern mantenerse en
confinamiento durante un periodo total de 24 horas para poder controlar de
manera ms adecuada las variables que pudieran afectar los resultados.
La presin arterial sistlica y diastlica (medida de forma no invasiva con un
esfigmomanmetro), la frecuencia cardaca y la temperatura se debern
registrar antes y a intervalos predeterminados despus de la administracin de
las formulaciones para seguridad de los voluntarios.
Las muestras de sangre debern ser tomadas a las siguientes horas despus
de la administracin del frmaco (hh: mm): 00:00, 00:15 00:30 00:45 01:00,
01:30, 02:00, 02: 30, 03:00, 04:00, 05:00, 06:00, 08:00, 10:00, 24:00, 00:00,
48:00.
Todos los procedimientos y alimentos debern ser los mismos para ambos
periodos.

6.- TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS.

Las muestras de sangre se centrifugaron a 2000 g durante 10 min a
temperatura ambiente y el plasma separados y almacenados a -20 C hasta
que se evalu frente a los contenidos de glimepirida. Glimepirida y tolazamida,
usado como patrn interno en la cuantificacin de la glimepirida, se extrajeron
a partir del plasma de los voluntarios por extraccin lquido-lquido.
Para 300 mL de cada muestra de plasma se aadieron estndar interno 25
tolazamida (2 mg/mL), 500 L de una solucin saturada de cloruro de sodio y
1,000 L de acetato de etilo. Despus de agitar durante 5 min, se centrifugaron
los tubos (5 min a 14000 rpm) y 800 L del sobrenadante se transfiri a otro
tubo limpio. El disolvente que queda en el sobrenadante se transfiri despus
se evapor con una corriente de aire a 37 C y el residuo se disolvi en 300 l
de acetonitrilo. 250 L de esta solucin fueron luego transferidos a insertos de
vidrio desechable y 8 L alcuotas se inyectaron en el sistema cromatogrfico.
Se midieron las concentraciones plasmticas de glimepirida utilizando un
mtodo sensible de cromatografa lquida de alto rendimiento acoplada a
5

espectrometra de masas (HPLC MS / MS). El espectrmetro de masas utilizado

fue un Micromass Quattro Micro equipada con un autoinyector Shimadzu SIL 10
ADVP. El software utilizado fue una misa Micromass Lynx 3.5.
Glimepirida se extrajo a partir del plasma de los voluntarios por extraccin
lquido-lquido. Los compuestos se eluyeron en un pequeo volumen de fase
mvil, la tasa de que se analiz mediante el uso de la ionizacin positivo y
seguimiento de iones seleccionados (MRM).
El patrn interno utilizado para la cuantificacin de la glimepirida fue
tolazamide.
Los clculos se basan en una funcin de la curva de calibracin construida por
el medicamento analizado utilizando patrones de calibracin previamente
establecidos. Estas proporciones se calcularon utilizando la relacin entre las
reas de los picos de la glimepirida estndar interno y tolazamida. Las
mediciones se obtienen para las relaciones de las reas de los picos
glimepirida / tolazamida. Las concentraciones de las muestras se obtuvieron a
partir de la ecuacin lineal de la lnea obtenida con la curva estndar
(concentracin de glimepirida dependiendo de la zona).

7.- FARMACOCINTICA Y ANLISIS ESTADSTICO

El anlisis farmacocintico se realiz con el apoyo del software Microsoft Excel
versin 7.0 y SAS (Statistical Analysis System versin 8.2). Los parmetros
determinados fueron AUC (0-t) , AUC (0 - ) (calculado por el mtodo trapezoidal),
K y , T 1/2 , C mx y T max .
La concentracin plasmtica mxima observada (C max ) y el tiempo para
alcanzar esta concentracin (T max ) se obtuvieron directamente de las
curvas. El rea bajo la curva (AUC) de la concentracin plasmtica frente a
glimepirida. Tiempo 0 al 48 h (AUC 0-t) se calcul mediante la aplicacin de la
regla trapezoidal lineal. La extrapolacin de esta zona hasta el infinito (AUC 0 - )
se realiz mediante la adicin del valor C 0-t / K , y BSA al0-t calculado. Los
anlisis estadsticos se llevaron a cabo despus de la transformacin
logartmica basada en el modelo aditivo para todos los valores de AUC y
C max . La constante de velocidad de primer orden de eliminacin terminal (K y )
se calcula por la pendiente de la recta de regresin calculada por el mtodo de
mnimos
cuadrados,
el
logaritmo
natural
de
la
concentracin
vs tiempo. OT medio se obtuvo usando la ecuacin (T 1/2 = ls (2) / K y ).Se utiliz el
anlisis de varianza (ANOVA) de modelo para dos periodos cruz. El criterio para
la biodisponibilidad relativa equivalencia basndose en el intervalo de
confianza fue del 90% de la relacin de las medias geomtricas entra ASC (con
respecto a la extensin de la absorcin) y C mx s (con respecto a la velocidad

de absorcin) en relacin el frmaco dentro de la gama de 80-125% (11). Para

establecer la bioequivalencia se utiliz un promedio de bioequivalencia.

8.- REFERENCIA DE ESTUDIO.

9.- REFERENCIAS

http://www.cinfainternational.com/wpcontent/uploads/2013/03/BIO_glimepirida.pdf

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/druginfo/meds/a696016es.html
www.cofepris.gob.mx/.../Protocolos%20de%20Investigacion/.../Gua%2