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Mater. Environ. Sci.

6 (4) (2015) 1111-1117


ISSN : 2028-2508
CODEN: JMESCN

Talbi et al.

Evaluation de lactivit antioxydante et la composition physico-chimique des


extraits mthanolique et aqueux de la Nigella sativa L. (Evaluation of
antioxidant activity and physico-chemical composition of methanolic and
aqueous extracts of Nigella sativa L.)
H. Talbi1, A. Boumaza2, K. El-mostafa 3, J. Talbi4, A. Hilali1,5.
1

Laboratoire Agroalimentaire et Sant, Facult des Sciences et Techniques. Universit Hassan 1er. Route de Casablanca
Km 3,5 BP 539. Settat- Maroc. hayattalbi@yahoo.fr.
3
Laboratoire de Biochimie et Neuroscience Facult des Sciences et Techniques. Universit Hassan 1er. Route de
Casablanca Km 3,5 BP 539. Settat- Maroc.
2
Dpartement De Biologie Animale Facult Des Sciences de la nature et de la vie Universit Mentouri-Constantine.
4
Laboratoire national de la Police scientifique, Casablanca-Maroc. talbija@gmail.com
5
Institut Suprieur des Sciences de la Sant. Universit Hassan 1er. Route de Casablanca Km 3,5 BP 539. Settat- Maroc.
hilalia@hotmail.com.

Received 25 Sept 2014, Revised 13 Oct 2014, Accepted 13 Oct 2014

Auteur correspondant: E-mail: hayattalbi@yahoo.fr; Tel (00212) 0667896506

Abstract
Nigella sativa L., known by the common name "black cumin" is a medicinal plant from the Ranunculaceae family, widely
used in traditional medicine across the Arab world and as a food condiment. In this work aqueous and methanolic extracts
were prepared from the seeds of this plant. The quantitative estimation of total flavonoids and phenols by the colorimetric
method showed that the extracts are rich in these compounds. Evaluation of antioxidant power was performed using the
method of DPPH free radical trapping. The result indicated that the methanol extract showed more antioxidant power
(EC50 = 0.64 0.08 mg / ml), than the ascorbic acid (EC50 = 0.13879 0.00112 mg / ml).
Keywords: Nigella Sativa L., flavonoids, antioxidant activity, polyphenols.

Rsum
Nigella Sativa L., connue sous le nom vernaculaire cumin noir est une plante mdicinale de la famille des
Ranunculaceae, largement utilise en mdecine traditionnelle lchelle du monde Arabe et comme condiment alimentaire.
Dans le prsent travail deux extraits ont t prpars, partir des graines de cette plante : lun mthanolique et lautre
aqueux. Lestimation quantitative des flavonodes et des phnols totaux par la mthode colorimtrique a montr que les
extraits sont riches en ces composs. Lvaluation du pouvoir antioxydant qui a t ralise en utilisant la mthode du
pigeage du radical libre DPPH a indiqu que lextrait mthanolique a montr une bonne efficacit antioxydante (EC50 =
0,64 0.08 mg/ml), suprieure a celle enregistre de lacide ascorbique (EC50 = 0,13879 0,00112 mg/ml).
Mots cls: Nigella Sativa L., flavonodes, activit antioxydante, Polyphnols.

1. Introduction
Lutilisation des molcules antioxydantes de synthse est actuellement remise en cause en raison des risques
toxicologiques potentiels. Dsormais, de nouvelles sources vgtales dantioxydants naturels sont recherches
[1,2]. En effet, les polyphnols sont des composs naturels largement rpandus dans le rgne vgtal qui ont une
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importance croissante notamment grce leurs effets bnfiques sur la sant [3]. Leur rle dantioxydants
naturels suscite de plus en plus dintrt pour la prvention et le traitement du cancer, des maladies
inflammatoires et cardiovasculaires [4]. Ils sont galement utiliss comme additifs en industrie agroalimentaire,
pharmaceutique et cosmtique [1]. Des recherches scientifiques ont t dveloppes pour lextraction,
lidentification et la quantification de ces composs partir des diffrentes sources telles que les cultures
agricoles et horticoles ou les plantes mdicinales [5-7].
La Nigella sativa est une plante de grande notorit, surtout lchelle du monde Arabe. Sa renomme en tant
que plante mdicinale et condimentaire dans les pays allant du Proche au Moyen Orient remonte plusieurs
sicles. Elle est maintenant cultive dans plusieurs rgions du monde surtout dans le bassin mditerranen et
en Inde [8, 9]. Au Maroc, elle est cultive ou subspontanne dans les champs et les jardins du Rif et dans les
oasis du sud. Cest une dicotyldone appartenant la famille des Ranunculaceae, utilise depuis des milliers
d'annes comme une pice pour la conservation des aliments, ainsi en tant qulment protecteur et curatif
contre plusieurs troubles, et connue pour avoir de nombreux proprits mdicamenteuses dans la mdecine
traditionnelle [10]. Cette plante a t largement tudie et de nombreuses proprits biologiques favorables ont
t signales comme antioxydant [11], antimutagene [12], hpatoprotecteurs [13], anti-corrosion [14] et les
effets anti-inflammatoires [15].
Le prsent travail sinscrit dans le cadre de la recherche et la valorisation des substances bioactives telles que les
substances naturelles doues dactivit antioxydante qui prsentent un intrt dans le domaine de la bio
pharmacologie. Lobjectif principal de ce travail est dvaluer in vitro lactivit anioxydante de lextrait
mthanolique des graines de Nigella Sativa selon la mthode de pigeage du radical libre DPPH.

2. Matriel utilis
2.1. Les graines de Nigella sativa L.
Les graines constituent la partie utilise de cette plante dans cette tude. Elles ont t cultives dans la rgion dArfoud
(Maroc). Les graines ont t broyes dans un mixeur pour lobtention dune poudre qui est par la suite conserve jusquau
moment dutilisation.

2.2. Ractifs chimiques


Les ractifs utiliss sont: DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl), le ractif de Folin-Ciocalteu, lacide ascorbique, lacide
gallique, AlCl3 (trichlorure daluminium), la querctine, ces produits Proviennent tous de Sigma, le solvant utilis tant le
mthanol.

3. Methods
3.1. Prparation de lextrait methanolique
Les graines de Nigella sativa pralablement nettoyes et broyes sont mises macrer dans un mlange mthanol/eau (7 :3
V/V) un rapport de 1/10 (P/V), sous agitation douce pendant une nuit temprature ambiante. Lextrait hydro-alcoolique
est rcupr aprs filtration du mlange laide dun papier filtre, le mthanol est limin du filtrat par vaporation sous
pression rduite dans un rota-vapeur (BCHI). Permettant ainsi dobtenir un extrait caractris par une couleur brune
fonce, qui est considr comme tant lextrait brut.
3.2. Prparation de lextrait aqueux:
Une quantit de 5mg de la poudre des graines de Nigella sativa est mise macrer dans 10 ml dE.D un rapport de 1/2
(P/V), pendant 10 min temprature ambiante. Lextrait aqueux est rcupr dans un premier temps aprs filtration du
mlange laide dun papier filtre. Permettant ainsi dobtenir un extrait caractris par une couleur gristre, qui est
considr comme tant lextrait brut.

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3.3. Dosage des phnols Totaux:


1 ml de ractif de Folin (10 fois dilu) est ajout 200 l dchantillon ou standard (prpars dans le mthanol) avec des
dilutions convenables. Aprs 4 min, 800 l dune solution de carbonate de sodium (75 mg/ml) sont additionns au milieu
ractionnel. Aprs 2 h dincubation temprature ambiante labsorbance est mesure 760 nm. La concentration des
polyphnols totaux est calcule partir de lquation de rgression de la gamme dtalonnage tablie avec lacide gallique
et elle est exprime en g dquivalent dacide gallique par milligramme dextrait (g EAG/mg dextrait).
3.4. Dosage des flavonodes
La mthode du trichlorure daluminium [16] est utilise pour quantifier les flavonodes dans les extraits de Nigella sativa.
1 ml dchantillon ou standard (prpars dans le mthanol) est ajout 1 ml de la solution dAlCl 3 (2% dans le mthanol).
Aprs 10 minutes de raction, labsorbance est lue 415 nm. La concentration des flavonodes est dduite partir dune
gamme dtalonnage tablie avec la querctine et est exprime en microgramme dquivalent de querctine par
milligramme dextrait (g EQ/mg dextrait).
3.5. Tests, in vitro, de lactivit antioxydante de lextrait de la Nigella sativa., par leffet scavenger du radical DPPH.
Pour tudier lactivit antiradicalaire des diffrents extraits, nous avons opt pour la mthode qui utilise le DPPH (diphnyl
picryl-hydrazyl) comme un radical libre relativement stable, selon le protocole dcrit par Mansouri, A., et al (2005) [17].
Dans ce test les antioxydants rduisent le diphnyl picryl-hydrazyl ayant une couleur violette en un compos jaune, dont
l'intensit de la couleur est inversement proportionnelle la capacit des antioxydants prsents dans le milieu donner des
protons [18]. Brivement, 100 l des solutions dextraits ont t ajouts 1300 l DPPH (0.004% prpare dans du
methanol). Paralllement, un contrle ngatif est prpar en mlangeant 100 l de mthanol avec 1300l de la solution
mthanolique de DPPH. La lecture de labsorbance est faite contre un blanc prpar pour chaque concentration 517nm
aprs 30 min dincubation lobscurit et temprature ambiante. Le contrle positif est reprsent par une solution dun
antioxydant standard ; lacide ascorbique dont labsorbance a t mesur dans les mmes conditions que les chantillons et
pour chaque concentration, le test est rpt 3fois. Lactivit antiradicalaire est estime selon lquation ci-dessous :
%dactivit antiradicalaire = [(Abs contrle Abs chantillon) / Abs contrle] x 100
Les valeurs de lEC50 ont t dtermines graphiquement par la rgression linaire.

4. Rsultats et Discussion
4.1. Teneurs en phenols totaux.
La dtermination de la teneur en phnols totaux dans les deux extraits de Nigella Sativa L. est estime par la
mthode de Folin- Ciocalteu [19] qui est base sur la rduction en milieu alcalin de la mixture
phosphotungstique (WO42-) phosphomolybdique ( MoO42-) du ractif de Folin par les groupements oxydables
des composs phnoliques, conduisant la formation de produits de rduction de couleur bleue. Ces derniers
prsentent un maximum dabsorption 760 nm dont lintensit est proportionnelle la quantit de polyphnols
prsents dans lchantillon [20]. Les teneurs ont t rapportes en g quivalent dacide gallique/mg dextrait du
matriel vgtal. Les rsultats montrent que la teneur moyenne en phnols totaux de lextrait aqueux est de
(163,3310,26 g/mg) alors que celle de lextrait mthanolique est de (163,333,05 g/mg) (Tableau 1). Les
rsultats de la courbe dtalonnage dacide gallique sont reprsents dans la Figure 1.
Tableau 1: Dosage des polyphnols totaux dans les extrais des graines de Nigella sativa.
Extraits
Teneur en phnols Totaux a
Mthanolique
163,333,05
Aqueux
163,3210,26
a

g dquivalent dacide gallique par milligramme dextrait.


Les valeurs reprsentent la moyenne de 3 mesures SD.

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Les valeurs des phnols totaux dans les deux extraits sont plus leves que les teneurs trouves par [21]
(27,07 0,58 g/mg) et par [22] (23,81 2,67 g/mg) dans lextrait aqueux de la nigelle. De mme la valeur du
dosage des polyphnols de lextrait methanolique sont beaucoup plus leve que celle trouve par [21] (33,64
0,34 g EAG/mg). Cependant les valeurs notes dans la prsente tude sont inferieures que les teneurs
enregistres par [22] (191,06 23,34 g/mg) dans lextrait du chloroforme de la Nigelle Sativa L.,

4.2. Teneurs en flavonodes


La teneur en flavonodes dtermine par la mthode au trichlorure dalumiunm (AlCl 3) pour chaque extrait a t
rapporte en g quivalent de quercetine /mg dextrait. Les rsultats de la courbe dtalonnage dacide gallique
sont reprsents dans la Figure 2.
Absorbance 760 nm

3
2.5
Y = 8,4884x + 0,0525
R = 0,9973

2
1.5
1
0.5
0
0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

[C] de l'acide gallique (mg/ml)

Figure 1: La courbe dtalonnage de lacide gallique.

Absorbance 415 nm

2.5
2

Y = 5,996x + 0,1844
R = 0,9309

1.5
1
0.5
0
0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

[C] de la quercetine (mg/ml)

Figure 2: La courbe dtalonnage de la quercetine .


Les rsultats de dosage des flavovnoides rvlent pour les deux extraits mthanolique et aqueux les valeures
suivants 26643,4g/mg et 169,265,78g/mg (Tableau 2). A partir de ces donnes, on peut dduire que les
flavonodes reprsentent la fraction majoritaire par rapport aux phnols totaux dans les deux extrait
mthanolique et aqueux. Ceci concorde avec les resultats trouv par [21] et [22], qui ont trouv galement que
les teneurs en composs phnoliques et en flavonodes sont plus leves dans lextrait methanolique que
lextrait aqueux. De mme, le taux des flavonodes dans les deux tudes est relativement comparable pour les
extraits (lextrait methanolique, lextrait Hexanique et lextrait aqueux).
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Tableau 2: Dosage des flavonoides dans les extrais des graines de Nigella sativa.
Extraits
Teneur en flavonodes b
Mthanolique
26643,4
Aqueux
169,265,78
b

g dquivalent de quercetine par milligramme dextrait.


Les valeurs reprsentent la moyenne de 3 mesures SD.

4.3. Activit antioxydante


Test de pigeage du radical libre DPPH : Lactivit antioxydante de lextraits mthanoliques aqueux de Nigella
Sativa L. et de lantioxydant standard (acide ascorbique) vis--vis du radical DPPH t value laide dun
spectrophotomtre en suivant la rduction de ce radical qui saccompagne par son passage de la couleur violette
(DPPH) la couleur jaune (DPPH-H) mesurable 517nm (Figure 3). Cette capacit de rduction est
dtermine par une diminution de labsorbance induite par des substances antiradicalaires [23].

N
+ Antioxydant -OH
NH

N
NO2

NO2

NO2

+ Antioxydant-O
NO2

DPPHH (Jaune)

DPPH (Violet)

Figure 3. Raction dun antioxydant avec le radical DPPH


Les rsultats prsents dans la Figure 4 de lactivit antiradicalaire de lextraits mthanolique des graines de
Nigella Sativa L., montrent un IC50% (Concentration inhibant 50% de la raction) = 0,64 0.08mg/ml, qui est
plus leve que celle enregistre pour lacide ascorbique qui est de: IC50% = 0,13879 0,00112 mg/ml (Figure
5).

Figure 4: Pouvoir reducteur de lextrait Methanolique des graines de la Nigella Satival L.

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Selon les rsultats trouvs, lextrait mthanolique est dot dun pouvoir antioxydant modr, leur EC50 est de
160 mg/ml ce qui est largement suprieure celle de lacide ascorbique dont la valeur est de lordre de 34,69
mg/ml. Il a t dmontr que les molcules antioxydantes telles que lacide ascorbique, la tocophrol, les
flavonodes et les tanins rduisent et dcolorent le DPPH en raison de leur capacit cder lhydrogne [24].
Les polyphnols contenus dans les extraits de Nigella Sativa L. sont probablement responsables de lactivit
antioxydante de ces extraits dautant plus que lactivit antioxydant de lextrait thanolique trouv est toujours
suprieure que celle de lextrait aqueux [25]. Ceci est en accord avec les travaux mens sur les extraits de
Nigella Sativa L. qui ont mis en vidence une forte activit antioxydante de lextrait alcoolique, de lhuile, de
lhuile essentielle et de la Thymoquinone TQ extraits des graines de la Nigelle. Les mme tudes montrent que
la Nigella Sativa L., est une espce riche en composs phnoliques qui sont responsables de nombreuses
activits biologiques notamment lactivit antioxydante, anticancreux et antimicrobienne [25].

% dinhibhition

100
Y= 188,57x + 23,905
R = 0,6883

80
60
40
20
0
0

0.05

0.1

0.15

0.2

0.25

0.3

0.35

0.4

[C] de l'acide ascorbique (mg/ml)

Figure 5: Pourcentage dinhibition du DPPH en fonction de diffrentes concentrations de lacide ascorbique.

Conclusion
Ltude de lactivit antioxydante des extraits issus de lespce Nigella Sativa L., selon la mthode du pigeage
du radical libre DPPH a montr que lextrait mthanolique possde une activit antioxydante modre. Cet
extrait pourrait donc constituer une alternative certains additifs synthtiques. Il convient dattirer lattention
sur le fait que ces rsultats sont obtenus in vitro seulement. Leur intrt rside dans le fait quils permettent ainsi
de rechercher directement lactivit antioxydante ou prooxydante des composs ou des extraits in vivo pour
corrler les rsultats observs dans les deux cas.

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