Aprender a identificar a las bacterias de acuerdo a las
reacciones metablicas que tienes frente a los diferentes reactivos y medios de cultivo ( uso de las pruebas bioqumicas para la identificacin de microorganismos) Entender los principios bioqumicos de las pruebas.
2- Fundamento:
Hidrolisis de la urea: Determinar si la bacteria degrada la
Urea a partir de las enzimas hidroliticas ureasas. La urea (H2N-CO-NH2) se escinde en 2NH3+CO2. La sustancia producto de la hidrolisis va alcalinizar el medio haciendo virar el reactivo indicador rojo de fenol a un rojo grosella.
La hidrlisis de la urea se lleva a cabo por medio de la siguiente
reaccin:
La ureasa es una enzima que existe de forma natural que
cataliza la hidrlisis de la urea en cido carbnico inestable. La descomposicin rpida del cido carbnico ocurre sin catlisis enzimtica para formar dixido de carbono y amoniaco. El amoniaco es probable que escape de la atmosfera a menos que reaccione con agua para formar amonio. Hidrolisis de la gelatina: Esta prueba se utiliza para determinar la capacidad de un microorganismo para producir enzimas proteolticas que lican la gelatina (gelatinasas). Hidrolisis del almidn: Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una hidrlisis extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio. El objetivo de esta prctica es comprobar qu bacterias producen amilasa y son por tanto capaces de utilizar el almidn como nutriente.
Prueba xido - Fermentativa o de Hugh-Leifson:
Estudia si el microorganismo es capaz de metabolizar un hidrato de carbono por via oxidativa o por va fermentativa. 3- Marco teorico:
Hidrolisis de la urea: Para esta prueba es necesario el caldo urea.
El caldo urea es un medio muy pobre y bastante tamponado que permite determinar la presencia de la actividad de la enzima hidrolitica ureasa, cuya actividad provoca la degradacin de la alcalinizacin. Este cambio de pH es detectado por cambio de color del indicador azul de bromotimol desde el verde original al azul intenso . Tambin es vlido usar el reactivo indicador Rojo de fenol el cual vira por la alcalinizacin del medio a un rojo grosella. Prueba de la gelatina: La gelatina tiene la propiedad de precipitar cuando se aaden metales pesados, los microorganismos que degradan la gelatina es porque segregan enzimas hidroliticas transformndose esta protena en peptonas haciendo perder la capacidad de precipitar los metales pesados. Prueba de la hidrolisis del almidon: Las bacterias pueden usar alimentos macromoleculares; para ello, es necesario una hidrlisis extracelular preliminar, igual que sucede en los animales superiores. Las distintas bacterias elaboran para este fin una cierta variedad de enzimas extracelulares que se segregan al medio. El almidn es un carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que contienen amilasas. Las molculas de yodo estn atrapadas dentro de la hlice no ramificada de unidades de glucosa de la cadena de amilosa para formar un compuesto de inclusin azul. Si la red se desintegra como ocurre durante la hidrlisis del almidn y las dextrinas por definicin se produce una mezcla de dos molculas de polisacridos poliglucosa: amilosa lineal que solo da glucosa con la hidrlisis se denomina glucosn. Prueba de oxidacin fermentativa: Es una prueba que indica del tipo de metabolismo energtico: respiratorio (O) o fermentador (F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulacin de cidos con un indicador cido-base (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura) y se incuba en condiciones aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina, tubo cerrado), simultneamente. Las bacterias que respiran
aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto.
Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se ver ligeramente amarilla (por la formacin de cido carbnico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el tubo cerrado el cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias fermentadoras producen cidos a partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los cidos pueden difundir por todo el medio virndolo a amarillo. 4- Parte experimental:
HIDROLISIS DE LA UREA
Esta prueba no reacciono la cepa que se uso fue Staphylococcu s aureus HIDROLISIS DE LA GELATINA
Produce cidos por:
TUBO ABIERTO (O) TUBO CERRADO (F) Respiracin Ligeramente amarillo en superficie Verde Fermentacin Amarillo Amarillo No produce cidos Verdeo o azulado Verde o azulado