UNIVERSIDAD CESAR VALLEJO

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

UNIVERSIDAD CESAR VALLEJO

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ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

Facultad de Ingeniera
Escuela Profesional De
Ingeniera civil

Escuela Profesional De
Ingeniera civil
CONSTITUCIN Y REGISTRO DE
EMPRESA
CURSO:

FUNDAMENTOS DE GESTIN Y
ORGANIZACIN DE EMPRESAS

DOCENTE

INTEGRANTES

SORIANO COLCHADO, Jos

Luis.

: ROBLES ACUA , Lourdes

2014
1

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I.

OBJETIVOS
Graficar el espectro de pigmentos naturales.
Determinar la longitud de onda de mxima absorbanca de una solucin.

II.

FUNDAMENTO:
La radiacin electromagntica puede clasificarse segn la longitud de
onda o la frecuencia. La frecuencia y la longitud de onda estn
relacionadas por la siguiente frmula:
c
Donde es la longitud de onda (cm), v es la frecuencia y c es la
velocidad de la luz (3 x 10 10cm/s). Las unidades de la longitud de onda
son generalmente nanmetros, pero tambin pueden utilizarse
Angstroms, milimicras o centmetros.
1 A = 10-10m
1 nm = 10 -9m
1 m = 10-6m
1 cm = 10-2m
El Cuadro1 muestra los intervalos de longitudes de onda para las
diversas categoras de radiacin electromagntica.

Cuadro 1. Clasificacin de la radiacin electromagntica y efectos de la

radiacin sobre las molculas.
Regin
Rayos X
Ultraviolet Visible
Infrarrojo
Microonda
a
s
Longitud de 0.1-100
100-400
400-800
800 - 100 105-108
onda, nm
Excitacin
Excitacin
Excitacin 000
Aumento
Efecto sobre de los
de los
de los
Aumento
de las
la molcula
electrones
electrones
electrones de las
rotaciones
de
de
de
vibraciones moleculares
subvalenci valencia
valencia
moleculare
a
s

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Las especies qumicas interactan con la radiacin electromagntica en

formas que reducen la intensidad de la radiacin. Los efectos de la
interaccin varan con la longitud de onda de la radiacin y la naturaleza
de las especies qumicas, e incluyen transiciones en las vibraciones
moleculares, las rotaciones moleculares y en los niveles de energa. Las
interacciones pueden cuantificarse comparando la radiacin incidente
sobre una muestra con la radiacin transmitida por la muestra. En
general, estas comparaciones se hacen con instrumentos llamados
espectrofotmetros y requieren que la muestra se disuelva en un
disolvente que no absorba en forma apreciable a la longitud de onda de
inters.
Por lo general, los espectrofotmetros tienen la estructura bsica que se
muestra en la Figura 1.
A continuacin se describen los elementos esenciales y sus funciones:
1.

2.

3.

4.
5.

Fuente luminosa. Casi siempre se utiliza una lmpara de tungsteno

para generar longitudes de onda entre 340 y 900 nm (visible), y una
lmpara de hidrgeno para generar longitudes de onda entre 200 y
360 nm (uv).
Selector de longitudes de onda. Como es necesario tener una luz
incidente mono cromtica sobre la muestra, debe utilizarse algn
mtodo para obtener una banda angosta de longitudes de onda a
partir de la luz policromtica que generan las lmparas. Se utilizan
prismas o rejillas de difraccin para separar las diferentes longitudes
de onda en bandas estrechas.
Ranura. La luz que deja el selector de longitud de onda (tambin
llamado monocromador) no es verdaderamente monocromtica,
sino que est compuesta por una banda angosta de longitudes de
onda. El propsito de la ranura es reducir la amplitud de esta banda
para mejorar la pureza de la luz que llega a la muestra.
Contenedores para la muestra. En general se utilizan tubos de
ensayo de 1 cm de grosor o celdas rectangulares.
Fototubo o fotocelda detectora de luz. Estos son dispositivos que
contienen un material fotosensible que emite electrones cuando se
expone a la luz. Los electrones se emiten en una cantidad
proporcional a la intensidad de la luz. As, esposible medir la
intensidad de la luz transmitida (I).

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Figura 1. Diagrama esquemtico de los componentes bsicos de un

espectrofotmetro. Modificado de la referencial.
La cantidad de luz que interacta con una muestra en un
espectrofotmetro puede expresarse como transmitancia o como
absorbancia. La transmitanciaT es la fraccin de luz transmitida por una
solucin:
T I / I0
Donde,I es la intensidad de la radiacin transmitida por la muestra e Io es
la intensidad de la radiacin incidente sobre esa misma muestra. La
absorbancia A es una expresin de la cantidad de radiacin absorbida
por la muestra y es igual al logaritmo negativo de T:
A log T log I 0 / I
La cantidad de radiacin monocromtica que una solucin absorbe es
proporcional a la concentracin de la especie absorbente en la solucin
y la distancia que la radiacin viaja a travs de la muestra. La ley de
Beer es una expresin de estas relaciones:

A bc
Donde, es el coeficiente de absorcin (tambin llamado coeficiente de
extincin molar), b es la longitud de la trayectoria de la radiacin en la
muestra y c es la concentracin de la especie absorbente. Las unidades
que ms se utilizan son las siguientes:
A: la absorbancia no tiene unidades
: Mol-1cm-1 o mMol-1cm-1
b: cm (las celdas con longitudes de trayectoria de 1 cm son las ms
comunes)
c: Mol o mMol

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La ley de Beer es til para determinar las concentraciones de los solutos

en solucin. Establece que debe haber una relacin lineal entre la
concentracin y la absorbancia. Por lo tanto, si se conocen y b, es
posible calcular la concentracin a partir de un valor de absorbancia que
se mide con un espectrofotmetro. Por supuesto, es necesario
asegurarse que el establecimiento de la longitud de onda y la lectura de
absorbancia del espectrofotmetro sean precisas y que no haya
sustancias interferentes presentes. En la prctica, usualmente es mejor
correr una serie de determinaciones con estndares de concentracin
conocida y determinar la concentracin de la muestra desconocida a
partir de una curva estndar.
En muchos casos, la sustancia que se va a medir no absorbe
apreciablemente a una longitud de onda adecuada, pero podra
reaccionar con una segunda sustancia para formar un compuesto
coloreado que s absorba. Cuando se lleva a cabo este tipo de anlisis,
es importante que la segunda sustancia est presente en exceso, de
manera que no limite la formacin de color. A continuacin se da una
ecuacin general para este tipo de anlisis:

Cuando se utiliza un espectrofotmetro para determinar la concentracin

de una sustancia en solucin, es mejor construir una curva estndar.
Esto se hace preparando una serie de estndares de diversas
concentraciones y hacindolos reaccionar con los reactivos que forman
el color en las mismas condiciones que se utilizarn al hacer el anlisis
de la muestra desconocida. En la mayora de los casos, los reactivos
que forman el color y los disolventes absorbern una pequea cantidad
de luz a la longitud de onda de inters. Por lo tanto, es una buena idea
preparar un testigo (o blanco) que contenga todos los reactivos en las
concentraciones apropiadas, pero no la sustancia que se va a analizar.
La absorbancia del testigo se resta de la absorbancia de la muestra
calibrando el espectrofotmetro a cero con el testigo o bien calibrando a
cero con el disolvente y restando la absorbancia del testigo a cada
lectura de absorbancia de la muestra. Las mediciones de la absorbancia
son ms precisas en el intervalo de 0.1 a 1.0 unidades de absorbancia.
Por lo tanto, es aconsejable ajustar las concentraciones (por dilucin o
por adicin de mayor cantidad de muestra) de modo que las lecturas de
absorbancia se encuentren en este intervalo. Los ajustes de
concentracin deben hacerse antes de agregar los reactivos que forman
el color.
Con respecto a la ley de Beer ocurren desviaciones evidentes, por lo que
es importante darse cuenta de las situaciones en que el comportamiento
no lineal podra constituir un problema. La ley de Beer slo es vlida en
el caso de soluciones diluidas. En soluciones concentradas, las
molculas pueden interactuar en formas que cambien sus propiedades
de absorcin. Si su curva estndar incluye concentraciones ms altas y
ms bajas que la concentracin de la muestra desconocida, sabr
entonces que tiene un problema y podr hacer los ajustes
5

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correspondientes. Otra causa comn de comportamiento no lineal es

que se agreguen cantidades insuficientes de los reactivos que forman
color. La Figura 2 muestra una curva estndar.

Figura 2. Una curva estndar del tipo que se obtiene en

espectrofotometra cuantitativa.
El color es una propiedad de la matera directamente relacionada con el
espectro de la luz y que, por lo tanto, se puede medir fsicamente en
trminos de su energa radiante o intensidad, y por su longitud de onda.
Los alimentos, tanto en su forma natural como procesada, presentan un
color caracterstico y bien definido mediante el cual el consumidor lo
identifica; cualquier cambio que este sufra puede causar rechazo de los
productos. Los pigmentos relacionados con los alimentos se pueden
dividir en 8 categoras:
1.

Caratenoides.

2.

Clorofilo.

3.

Antocianinas.

4.

Flavonoides.

5.

Betalanas.

6.

Taninos.

7.

Mioglobina y hemoglobina.

8.

Otros.

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Los seis primeros se encuentran fundamentalmente en productos

vegetales, el sptimo solo se encuentra en productos de origen animal y
el octavo grupo se incluye un gran nmero de compuestos que tambin
imparten color (quinonas, xantona, riboflavina, citocromos, etc).
III.

MATERIALES Y MTODOS
Materiales
- Beterraga
- Espinaca
- zanahoria
- 100 mL de acetona
- Espectrofotmetro
- 1 centrfuga
- 24 tubos de ensayo
- 4 pizetas con agua
destilada
- 4 morteros
- 8 pipetas 10 mL

8 pipetas 5 mL
8 beakers 250 mL
4 embudos
4 probetas 10 mL
4 matraces 250 mL
4 esptulas
4 cuchillos
4tablas de picar
1 licuadora
Papel filtro
Papel toalla

Mtodos
Extraccin de Pigmentos

Pesar cierta cantidad de muestra previamente acondicionada.

Aadir 10 ml de solucin extractora.
Homogenizar
Repetir la extraccin agregando solucin extractora si fuera

necesario.
Tomar el sobrenadante y filtrar.
Colocarlo en un tubo de ensayo.

Preparacin del espectrofotmetro

Encender el espectrofotmetro y esperar a su auto

calibracin.

Colocar la muestra y el blanco en sus respectivas

cubetas.

Programar la longitud de onda.

Medicin de absorbancia
-

Tomar los datos de absorbancia cada vez que se varie la longitud de

onda.
- Variar la longitud de onda cada 5 nm
IV.

RESULTADOS Y DISCUSIN
- Cuadro 1. Datos Curva Espectral
- Muestra: ZANAHORIA
A
A

8
-

0.405

GRAFICO DE ZANAHORIA

1
0.8
0.6

absorbancia

0.4
0.2
0
400

Abs
600

800 1000 1200

Muestra: ARRACACHA

6
6
6

6
6
6
6
6
7
7
7

7
7
7

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

8
8
8

8
8
9
9
9
9
9
9

9
9
1

0
0
0

0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0

GRAFICA DE ARRACACHA:

1
0.8
0.6
ABSORBANCIA 0.4
Abs

0.2
0
400 600 800 1000 1200

Muestra: BETERRAGA
-

350
360
370
380
390
400
410
420
430

Abs
2.162
1.906
1.861
1.442
1.377
1.455
1.586
1.902
2.646

GRAFICA DE BETERRRAGA
3
2.5
2

absorbancia

1.5
1
Abs

0.5
0
340 360 380 400 420 440

Muestra: PEREJIL

500
510
520
530
540
550
560
570

Abs
1.648
1.476
1.436
1.456
1.441
1.418
1.494
1.604

580
590
600
610
620
630
640
650

Abs
1.676
1.562
1.639
1.822
1.831
1.761
2.250
3.590

GRAFICO DE MUESTRA DE PEREJIL:

4
3.5
3
2.5
ABSORBANCIA

2
1.5
Abs

1
0.5
0
480500520540560580600620640660

Los carotenoides absorben la longitud de onda azul y un poco en el

verde,

Azul

425-490

Verde

490-560

- El espectro de absorcin del -caroteno muestra dos

picos de absorcin entre los 400 nm y 500 nm,
correspondiente al azul y verde, por lo que la luz roja-

anaranjada-amarilla que refleja le proporciona su color

caracterstico
V.
CONCLUSIONES
- Logramos graficar el espectro de pigmentos naturales y as conocer el
rango de cada uno de las muestras hechas.
La longitud de onda mxima de absorbancia es del perejil con 3.59 el
que lo sigue es el de la betarraga con 2.646.
VI.
BIBLIOGRAFA
- http://es.wikipedia.org/wiki/Caroteno
- http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm
-