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TP A05.

Colorants alimentaires dans un sirop ou dans des confiseries


Objectifs
Optimiser, par le choix de lluant (nature et concentration), la sparation des constituants d'un
mlange de deux colorants, en utilisant la technique de chromatographie de partage sur papier.
support
papier Whatman n1

luants
divers

rvlation
visuelle

Appliquer une technique dextraction des colorants par fixation sur de la laine aux colorants dun
sirop de menthe.

Prsentation de la dmarche
Ralisation des chromatographies sur papier de solutions aqueuses de colorants (jaune de tartrazine
et bleu patent V) avec diffrents luants afin de dterminer celui qui convient le mieux pour la
sparation.
Application la chromatographie des colorants contenus dans un sirop de menthe. Les colorants du
sirop sont extraits laide dun morceau de laine pralablement traite par une solution basique
(solution dammoniac). Dans un premier temps, ils sont extraits du sirop dans un milieu acide
(vinaigre) o ils se fixent sur la laine. Dans un second temps, la laine est plonge en milieu basique
pour relarguer les colorants (et donc les faire passer en solution). La chromatographie est ralise
avec lluant dtermin prcdemment.
Prolongements
Pourquoi utiliser la laine pour extraire les colorants du sirop de menthe ?
Structure molculaire et couleur. Spectres dabsorption des colorants.
Variante : raliser la chromatographie des colorants contenus dans les fraises Tagada (voir le
protocole en fin de ce document).

Protocole
Matriel et produits
prouvettes gradues de 10 et 50 mL
Verre de montre
Tubes essais
Bechers
Matriel pour chromatographie sur papier
Agrafeuse
Plaque chauffante (ou agitateur magntique chauffant)
Laine
Solutions de chlorure de sodium de concentrations massiques 20 g.L -1, 40 g.L-1 et 100 g.L-1
Solution dammoniac de concentration molaire 0,1 mol.L -1.
thanol 95
Solution aqueuse de bleu patent V 1% (1 g de bleu patent V pour 100 mL deau)
Solution aqueuse de jaune de tartrazine 1% (1 g de jaune de tartrazine pour 100 mL deau)
Sirop de menthe
Vinaigre blanc
Mode opratoire
1. Ralisation de chromatographies avec diffrents luants
- Prparer six chromatogrammes (papier Whatman n1 ou papier filtre) et dposer chaque colorant
en solution aqueuse 1% sur chacune des feuilles de papier.

Raliser les dpts en laissant 2 cm entre les dpts et le premier dpt et le bord du papier (les
taches ont tendance stendre beaucoup plus quen chromatographie sur couche mince) ;
scher et faire une seconde application.
Scher et donner au papier une forme cylindrique de diamtre infrieur celui du diamtre
intrieur de la cuve en attachant les bords opposs avec des agrafes : il ne faut pas que les deux
bords du chromatogramme soient en contact et que le chromatogramme touche la paroi de la
cuve.

Raliser llution avec les luants suivants :


luant
1
2
3
4
5
6

composition
eau pure
thanol 95
thanol/eau dans le rapport 50/50 en volume
eau sale 20 g.L-1
eau sale 100 g.L-1
thanol 95/eau sale 40 g.L-1 dans le rapport 50/50 en volume

Scher le chromatogramme.
Conclure sur le choix de lluant pour lapplication.

2. Application : chromatographie dun sirop de menthe


Extraction des colorants
- Verser 50 mL de sirop dans un becher. Porter bullition (viter la caramlisation).
- Pendant ce temps, placer environ 70 cm de laine crue dans un autre becher contenant 10 mL de
solution dammoniac de concentration molaire 0,1 mol.L -1.
- Remuer avec lagitateur en faisant bien pntrer la solution dans la laine. Laisser reposer environ
trois minutes.
- Sortir la laine et la rincer sous leau courante puis bien lessorer.
- Placer la laine dans le becher contenant le sirop de menthe et ajouter 5 mL de vinaigre.
- Remuer laide dun agitateur. Laisser la laine en contact pendant au moins cinq minutes.
- Sortir la laine teinte du becher et la rincer sous leau courante puis bien lessorer.
- Verser 5 mL de solution dammoniac dans un becher propre puis y ajouter la laine teinte : la
solution se teinte. Laisser au moins trois minutes en agitant de temps en temps.
- Concentrer la solution de moiti en portant bullition douce.
Chromatographie des colorants
- Raliser les dpts suivants sur le papier :
colorants du sirop de menthe ;

solution aqueuse de bleu patent 1% ;


solution aqueuse de jaune de tartrazine 1%.
Raliser llution laide de lluant pralablement dtermin.
Conclure sur la nature des colorants prsents dans le sirop de menthe.

Exemples de questions
Le sirop de menthe contient du bleu patent V, E 131, gnralement fourni sous la forme de sel
calcique et du jaune de tartrazine, E 102, gnralement fourni sous forme de sel trisodique.
Jaune de tartrazine (E102)

Bleu patent V (E131)

Na+, -O3S

C2H5

O
N

HO

C2H5

O-, Na+

N
OH
+

, 1/2 Ca2
C2H5

SO3-,

Na+

sel trisodique de l'acide (sulfo-4' phnylazo-1')-4 (sulfo-4


phnyl)-1 hydroxy-5 pyrazolecarboxylique-3

-O S3

SO3-

C2H5

sel calcique ou sodique du sel interne hydroxyde de N-thyl N[(dithylamino-4 phnyl) (hydroxy-5 disulfo-2,4 phnyl)
mthylne]-4 cyclohexadine-2,5 ylidne-11 thaneaminyium

1. Quel est lluant adapt pour analyser les colorants prsents dans le sirop de menthe ?
2. Au vu des formules chimiques, expliquer pourquoi le jaune de tartrazine est moins soluble dans
lthanol que le bleu patent.

3. En vous aidant des rsultats obtenus en chromatographie sur papier conclure sur les solubilits
compares des deux colorants selon la nature de lluant.

Exploitation de la manipulation
Principe de la chromatographie
La chromatographie est une mthode physique de sparation base sur les diffrences daffinit des
espces analyser lgard de deux phases, lune stationnaire ou fixe, lautre mobile.
Dans la chromatographie sur papier propose ici, la phase fixe est forme par leau adsorbe par les
molcules de cellulose du papier Whatman et la phase mobile est un liquide, lluant.
Cest une chromatographie de partage qui repose sur la diffrence de solubilit des espces dans les
deux solvants. Le coefficient de partage de lespce A entre les solvants S et S est dfini par :
[A]solvant S'
K=
[A]solvant S
. Si une espce est plus soluble dans la phase mobile, lluant, elle se dplace plus
rapidement quune espce qui lest moins et inversement. La polarit des phases est un autre
paramtre qui agit sur la progression de lespce.
La chromatographie sur papier est particulirement adapte lanalyse des composs trs polaires :
acides amins, sucres, composs polyfonctionnels.
Les chromatographies sur couche mince et sur colonne sont des chromatographies dadsorption o la
phase stationnaire est un solide, il sagit par exemple de silice ou dalumine traite et la phase mobile
un liquide.
La sparation est base sur ladsorption slective des espces la surface du solide.
Les interactions espce-adsorbant sont du type diple-diple, diple-ion ou des interactions de Van
der Waals. En gnral plus un adsorbant est polaire plus il fixe les espces polaires.
Les interactions espce-luant rsultent de la dissolution de lespce dans le solvant et du
dplacement des molcules de lespce par lluant, les molcules dluant recherchent les mmes
sites dadsorption que les molcules de soluts et dplacent ainsi ces dernires.
Lluant migre travers la phase stationnaire par capillarit.

Srie luotropique des solvants


Ether de ptrole
Cyclohexane
Trachloromthane
Tolune
Benzne
Dichloromthane
Ether dithylique
Trichloromthane
Ethanoate dthyle
Pyridine
Propanone
Propan-1-ol
Ethanol
Mthanol
Eau
Acide thanoque

Principaux adsorbants utilis en chromatographie

pouvoir
luant
croissant
ou
polarit
croissant

Papier, cellulose
Kieselguhr, terre de diatomes
Amidon
Sucres
Talc
Carbonate de sodium
Oxyde de magnsium
Gel de silice
Alumine
Charbon activ

Forces
dinteraction
s croissantes
avec les
composs
polaires

Extrait de Chimie organique exprimentale. Belin (voir bibliographie).


lments de rponse
Chromatogrammes obtenus avec les diffrents luants1

Eluant 1

Eluant 2

Eluant 3

Eluant 4

Eluant 5

Eluant 6

eau pure

thanol 95

thanol/eau
50/50

eau sale
20 g.L-1

eau sale
100 g.L-1

thanol 95/eau sale


40 g.L-1 (50/50)

Influence de la nature de lluant relations structure-proprits (solubilit)

1. Cest lluant n4 qui convient le mieux


2. Au vu des formules chimiques, il est possible de dire :
- le jaune de tartrazine est un anion trs hydrophile que lon peut prvoir soluble dans leau et moins
soluble dans lalcool ;
- le bleu patent V est galement un anion comportant quatre groupes thyle et un groupe
caractristique hydroxyde ; cest donc une molcule la fois hydrophile et proche de la structure des
alcools ; on peut la prvoir la fois soluble dans leau et dans les alcools, sans doute moins soluble
dans leau que le jaune de tartrazine.
1 Dure dlution pour une distance parcourue par le front de lluant mesure partir de la ligne de dpts de
6,5 cm environ :

Les expriences et les donnes de solubilit confirment ces prvisions.

Donnes : Solubilit des colorants 20 C


solubilit dans 100 mL deau (g) solubilit dans 100 mL dthanol (g)
Jaune de tartrazine
11
0,1
Bleu patent V
8,4
5,2
Ces valeurs constituent des ordres de grandeurs car la solubilit des colorants dpend du procd de
fabrication.

3. Daprs les rsultats obtenus en chromatographie sur papier :


- jaune de tartrazine :
s(luant 1) > s(luant 3) > s(luant 4) > s(luant 6) > s(luant 5) > s(luant 2)
s(luant 1) signifiant solubilit dans lluant 1
- bleu patent V :
s(luant 3) s(luant 6) s(luant 2) > s(luant 1) > s(luant 4) > s(luant 5)
Prolongement pour interprter la diffrence de solubilit du jaune de tartrazine dans leau et
leau sale

Lquation de dissolution du jaune de tartrazine, not Na 3Tar, dans leau scrit :


Na3 Tar(s) = 3 Na+ (aq) + Tar 3- (aq)

Q [Na ] 3 [Tar 3- ]
Lexpression du quotient de raction est : r
La constante dquilibre associe cette raction (valeur du quotient de raction dans ltat
Q KS
dquilibre) est ici appele produit de solubilit, not KS : r,q
Q KS
La solubilit du jaune de tartrazine diminue trs fortement en milieu salin car la condition r,q
+
traduisant ltat dquilibre, du fait de la prsence dions Na , est obtenue pour une quantit plus faible
de jaune de tartrazine2 .

Observations et interprtation
Eluant 1. Dans leau, pas de sparation, le partage se faisant entre l'eau et... l'eau.
Eluant 2. Le jaune de tartrazine, trs peu soluble dans l'alcool, n'est pas entran.
Eluant 3. Le jaune de tartrazine est plus soluble dans l'eau que dans le mlange eau-alcool ; il a donc
tendance rester sur la phase fixe bien qu'il soit entran en partie par l'luant. Le bleu patent est
peine plus soluble dans le mlange eau-alcool que dans l'eau.
Eluant 4. Le jaune de tartrazine est plus soluble dans l'eau que dans l'eau sale. La prsence dions
sodium diminue la solubilit du colorant.
Eluant 5. Le problme prcdent est accentu et confirm.
Eluant 6. La sparation des deux colorants est correcte mais le bleu patent atteint le front de lluant.

Pourquoi utiliser la laine pour extraire les colorants du sirop de menthe ?


1. Quel intrt y-a-t-il fixer de faon intermdiaire le colorant sur la laine plutt que doprer la
2.

3.

4.

chromatographie sur papier directement sur le filtrat ?


La laine est constitue dune protine, la kratine, comportant un assemblage dacides amins.
Les groupes terminaux des chanes protiques sont respectivement NH 2 et COOH. Cette
protine en milieu neutre peut scrire : +H3N-(R)n COO .
crire la formule simplifie de la laine en milieu acide.
R'SO 3 , Na
En schmatisant le colorant par une formule simplifie,
, crire une quation de la
raction montrant la fixation du colorant sur la laine, en milieu acide (dans ces conditions, le
R'SO 3 , Na
colorant garde sa structure :
).
crire une quation de la raction montrant le dgorgement du colorant en milieu ammoniacal.

2 La mme exprience avec le bleu patent montre que sa solubilit diminue beaucoup moins en milieu salin :
cest le mme phnomne qui explique le relargage.

Prolongement : structure molculaire et couleur ; spectres dabsorption des


colorants du sirop de menthe
1. Structure molculaire et couleur
Ractiver les connaissances de physique acquises en classe de seconde sur les spectres dmission
(spectres continus dorigine thermique, spectre de raies) et dabsorption (bandes dabsorption de
solutions colores, raies caractristiques dun atome ou dun ion) (BO HS n 6 du 12 aot 1999 p.19) ;
faire un lien avec le programme de physique de la classe de terminale scientifique : Latome et la
mcanique de Newton : ouverture au monde quantique (BO HS n 4 du 30 aot 2001 page 87).
Dfinir un compos aromatique, reprer les doubles liaisons conjugues et conclure sur structure
molculaire et couleur : La formule chimique du bleu patent et du jaune de tartrazine permet-elle
dexpliquer quelles soient colores ?
2. Spectres dabsorption des colorants du sirop de menthe
Spectre dabsorption du bleu patent V
1 mg pour 100 mL eau

Spectre dabsorption du jaune de tartrazine


2 mg pour 100 mL eau

Spectre dabsorption du sirop de menthe


Belle France dilu 10 fois

Questions possibles et expriences


1. Peut-on raliser un dosage par talonnage dune solution de bleu patent V ? De jaune de
tartrazine ? Choisir les longueurs donde et laborer un protocole. Le tester ventuellement.
2. Au vu des spectres dabsorption, est-il possible de dterminer les concentrations des deux
espces contenues dans le sirop de menthe ?
3. Peut-on raliser un dosage par talonnage des colorants contenus dans un sirop de menthe ?
Elaborer un protocole et le tester ventuellement.
Elments de rponse
Pour doser le bleu patent V, seul, se placer au maximum dabsorption (640 nm).
Pour doser le jaune de tartrazine seul, se placer au maximum dabsorption (425 nm).
Pour doser les deux colorants contenus dans le sirop de menthe 3, on peut se placer 640 nm mais
pas 425 nm car le bleu patent absorbe galement.

3 Le maximum dabsorption du jaune de tartrazine est un peu dplac vers les basses longueurs donde dans le
sirop de menthe tudi.

Spectre dabsorption du jaune de tartrazine

Spectre dabsorption du sirop de menthe

Spectre dabsorption du bleu patent V

640 nm

425 nm

425 nm

450 nm

640 nm

H5C2

C2H5

Remarque
Attention, il existe deux bleus patents (V et VF)
qui nont pas la mme formule chimique.
Bleu patent VF :

H5C2

-O

3S

SO3-, Na+

C2H5

Bibliographie
Chromatographie
- Un excellent ouvrage de rfrence pour la chromatographie :
Beaudouin G.-J., Chavanne M., Flamand E., Jullien A. (1986). Chimie organique exprimentale. Belin
- Pour approfondir :
Smith I. & Feinberg J.G. (1972). Paper & thin layer chromatography & electrophoresis. Longman.
Fibres textiles, colorants
CAPON M., COURILLEAU-HAVERLANT V., VALETTE C. (1983). Chimie des odeurs et des couleurs,
Cultures et techniques.
Davous D., Besseyre J., Jus de fruits, boissons rafrachissantes sans alcool, Bulletin de lUnion des
Physiciens n816, septembre 1999 pp 1197-1215
Solubilit : http://home.primus.com.au/royellis/solchart.htm

Variante : Colorant alimentaire dans des confiseries


Il est possible de raliser dautres extractions du mme type, impliquant galement lextraction de la
laine. Il est indiqu ci-dessous les lments pour laborer le protocole concernant les Fraises
Tagada . Il est possible de raliser les spectres dabsorption de solutions aqueuses de chacun des
colorants, mais leurs spectres dabsorption sont tels quil nest pas envisageable de travailler sur une
solution de Fraises Tagada
Composition : elles contiennent trois colorants
E 104 : Jaune de quinoline ; E124 : Rouge cochenille A ; E 129 : Rouge allura AC.
Identification par chromatographie
support

luant

rvlation

plaque de silice

propan-2-ol / ammoniaque
41/1 en volumes

visuelle

Formules chimiques
HO

Rouge cochenille
(E 124)

Na+, -O3S

Soluble dans leau

Na+,-O3S
SO3-, Na+

CO2-, Na+ H3C

Rouge allura AC
(E 129)

Na+,-O3S

Soluble dans leau


CH3
SO3-, Na+
O

Jaune de quinoline
(E 104)

Na+, -O3S
Na+, -O3S

N
H