DETERMINAO DA COMPOSIO DE CIDOS GRAXOS DA FRAO

LIPDICA DE CPSULAS CONTENDO LEO DE LINHAA, LEO DE PEIXE E

LEO DE ABACATE POR CROMATOGRAFIA GASOSA
Elenita Bastos Almeida Costa*
RESUMO
Os cidos graxos da frao lipdica das cpsulas do leo de linhaa Triple mega 3-6-9, do
leo de peixe mega 3 EPA/DHA e do leo de abacate Flora 7 Ervas foram estudados atravs
da cromatografia em fase gasosa. Utilizou-se o contedo das cpsulas como matria-prima,
procedeu-se a extrao dos lipdios e, em seguida, a metilao. Aps estas etapas, realizou-se
a extrao dos steres metlicos dos cidos graxos, onde foi efetuada a determinao
qualitativa e quantitativa dos cidos graxos atravs da anlise cromatogrfica. A anlise
qualitativa dos cidos graxos foi realizada atravs da comparao dos tempos de reteno da
amostra padro com os da amostra-teste e leitura na curva construda com o logaritmo do
tempo de reteno contra o nmero de carbonos. J para a anlise quantitativa desses cidos
utilizou-se as reas sob os picos apresentados nos cromatogramas obtidos, sendo os resultados
expressos em valores de massa. Sobre os resultados obtidos, estes foram comparados com os
valores referenciados nos rtulos dos suplementos alimentcios analisados e, com isto, foi
possvel observar que grande parte das amostras possuam variaes no teor de cidos graxos
acima dos limites referenciados (variao de 20%) na Resoluo RDC n 360/2003.
PALAVRAS-CHAVE: Lipdios. cidos graxos.

1 INTRODUO

O crescente mercado dos produtos naturais, aliado ao interesse dos consumidores na

preveno de doenas, tem pressionado a indstria alimentcia na busca por produtos mais
saudveis e direcionado pesquisas nesse sentido. Em tal contexto, os alimentos funcionais
ganharam destaque pelos efeitos benficos que promovem sade (ANJO, 2004).
Composio, qualidade e aproveitamento de alimentos esto inseridos no conceito de
segurana alimentar e nutricional. Essa questo, no Brasil, tem gerado aes no sentido de se
adotar uma Poltica Nacional de Alimentao e Nutrio poltica atravs da qual planos,
programas e projetos so incentivados quanto sua elaborao e readequao (BRASIL,
1999).
** Acadmica do Curso de Bacharelado em Farmcia da Universidade Federal da
Bahia. E-mail: <elenitabcosta@gmail.com>.

Os cidos graxos so os principais constituintes dos lipdios e, em geral, possuem

longas cadeias de cidos carboxlicos. Mais de 50 tipos foram identificados na natureza, sendo
que todos estes contm um nmero par de tomos de carbono. Destes, poucos so ramificados
alguns so cidos graxos insaturados, que contm uma ou mais ligaes duplas.
Os cidos graxos esto presentes nas mais diversas formas de vida, desempenhando
importantes funes na estrutura das membranas celulares e nos processos metablicos. Em
humanos, os cidos linoleico (18:2n-6, AL), alfa-linolnico (18:3n-3, AAL) e oleico (18:1n-9)
so necessrios para manter sob condies normais as membranas celulares, as funes
cerebrais e a transmisso de impulsos nervosos. Esses cidos graxos tambm participam da
transferncia do oxignio atmosfrico para o plasma sanguneo, da sntese da hemoglobina e
da diviso celular, sendo denominados essenciais por no serem sintetizados pelo organismo a
partir dos cidos graxos provenientes da sntese de novo (MARTIN et al., 2006).

2 MATERIAIS E MTODOS

2.1 OBTENO E ARMAZENAMENTO DAS AMOSTRAS

As anlises foram realizas nas cpsulas contidas nos potes do leo de linhaa Triple
mega 3-6-9, do leo de peixe mega 3 EPA/DHA e do leo de abacate Flora 7 Ervas. Os
critrios de escolhas das cpsulas foram do tipo randomizado. Deve-se frisar que estas
estavam armazenadas em local temperatura ambiente.

2.2 ESTERIFICAO

Inicialmente, foram pesados separadamente 25mg do leo contido nas cpsulas de cada
um produtos em tubos de ensaio com tampa e com rosca. Posteriormente, foram adicionados
com uma pipeta de preciso 1,5 mL de hidrxido de sdio (NaOH) 0,5N em metanol (MeOH)
nos tubos de ensaio. Aps esta etapa, o tubo foi cuidadosamente fechado, passando nitrognio
de alto teor de pureza a fim de garantir uma atmosfera inerte.
Os tubos foram aquecidos temperatura de ebulio da gua (100C) por um perodo de

10 minutos. Passado isto, cada tubo foi retirado do banho, resfriado e adicionado com auxilio
da pipeta volumtrica 2,0 mL de trifluoreto de boro (BF3) em metanol, seguido pelo seu
fechamento em atmosfera inerte e vedao.
As amostras foram novamente conduzidas ao banho por um perodo de 40 minutos e,
aps esse tempo, resfriadas com gua corrente. Em seguida, foram adicionados 2,0 mL de
isooctano com posterior agitao no vortex por cinco minutos. Aps, foram adicionados 5,0
mL da soluo saturada de cloreto de sdio (NaCl) e posterior agitao no vortex.
Aps a separao das fases, foram retiradas cuidadosamente com uma pipeta Pasteur de
vidro a fase superior de cada amostra (contendo iso-octano e steres metlicos de cidos
graxos). Em seguida, tais fases foram armazenadas em frascos mbar de 5,0 mL, mantendo a
atmosfera inerte at o momento da anlise por cromatografia gasosa (CG).

2.3 ANLISE CROMATOGRFICA DOS STERES METLICOS DE CIDOS GRAXOS

Os steres de cidos graxos foram analisados em um cromatgrafo gasoso CP 3800

(Varian), utilizando uma coluna capilar CP-WAX 58 (FFAP) CB (25m X 0,25mm X 0,2m)
equipado com detector de ionizao de chama (CG-DIC). Os fluxos dos gases foram de 1,3
mL.min-1 para o gs de arraste H2; 30 mL.min-1 para o gs auxiliar (make-up) N2; e 30 e 300
mL.min-1 para os gases da chama H 2 e ar sinttico, respectivamente. A razo de diviso (split)
da amostra foi de 1:100. A temperatura da coluna foi programada a 150C por 16 minutos,
sendo ento elevada para 180C a uma taxa de 2C.min-1, permanecendo nesta temperatura
por 20 minutos. Em seguida, a temperatura foi elevada para 210C a uma taxa de 5C. min -1,
permanecendo nesta temperatura por 20 minutos. As temperaturas do injetor e detector foram
de 250C e 280C, respectivamente. A esterificao e a injeo (1L) foram realizadas em
triplicata para cada amostra analisada. A quantificao foi realizada por normalizao das
reas dos picos, e a identificao dos picos por comparao dos tempos de reteno das
amostras com os de padres de steres metlicos de cidos graxos (Sigma189-19 USA).

3 ANLISE ESTATSTICA DOS DADOS

Com relao aos dados obtidos, a ANVISA, em sua Resoluo RDC n 360, de 23 de

dezembro de 2003, trata da variao mxima entre os valores. Segundo o item 3.5.1 da
referida norma, Ser admitida uma tolerncia de + 20% com relao aos valores de
nutrientes declarados no rtulo (AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA,
2003).
Para anlise dos dados , foi utilizado o padro Mix Supelco, comparando o tempo de
reteno do padro com o tempo de reteno dos compostos das amostras nas mesmas
condies cromatogrficas. Os resultados do padro podem ser observados no Quadro 1
abaixo.
Figura 1 Cromatograma padro

Fonte: Elaborado pela autora

Quadro 1 Perfil de cidos graxos presentes no padro Mix Supelco

Identificao
Solvente
C4:0
C6:0
C8:0
C10:0
C11:0
C12:0
C13:0
C14:0
C14:16
C15:0
C15:1
C16:0
C16:1 7
C17:0
C17:1
C18:0
C18:19 c
C18:19 t
C18:26 c
C18:26 t

cido Graxo
Saturado
Saturado
Saturado
Saturado
Saturado
Saturado
Saturado
Saturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Insaturado
Insaturado
Insaturado

Tempo de reteno (min)

2.060
2.168
2.355
2.793
3.820
4.770
6.217
8.417
11.764
13.437
16.818
19.002
22.587
23.943
27.913
29.156
32.943
33.896
34.047
36.630
37.020

rea
2498190
10281
14904
17650
19227
9722
20044
10075
20838
10396
10519
10383
32181
10535
6305
10763
21494
22179
10962
10065
10521

C18:36 c
C18:33
C20:0
C20:19
C20:26
C20:36
C21:0
C24:46
C20:33
C20:53 (EPA)
C22:0
C22:19
C22:26
C23:0
C22:63
C24:19
C24:0
-

Insaturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Insaturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Insaturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Insaturado
Saturado
Insaturado
Insaturado
Saturado
-

38.651
41.174
47.398
49.039
54.220
57.285
58.282
59.154
60.383
62.921
64.017
64.919
67.637
69.676
74.995
75.590
75.759
2979934

8492
8858
20775
11082
9804
8424
10988
7717
8194
6969
22205
11144
9463
10669
21426
5429
11061
-

Fonte: Elaborado pela autora

4 RESULTADOS E DISCURSES

4.1 LEO DE LINHAA

Dentre os alimentos funcionais, a linhaa (Linum usitatissimum L.) reconhecidamente

uma das maiores fontes dos cidos graxos essenciais -3 e -6, possuindo ainda vrios
nutrientes como as fibras e os compostos fenlicos, conhecidos por exercerem atividade
antioxidante (MAYES, 1994 apud GALVO et al., 2008).
Vrios estudos vm sendo realizados com base nesta propriedade da linhaa. Alm
disso, tambm tem se demonstrado que o consumo de linhaa pode reduzir o colesterol total e
o LDL, bem como a agregao plaquetria (OLIVEIRA, 2014, p. 1).
Nas anlises cromatogrficas da amostra citada, foi possvel separar componentes
saturados e insaturados sendo o mega 3, um acido graxo insaturado, o mais abundante. Os
valores obtidos podem ser observados no Quadro 2 a seguir.
Quadro 2 Perfil de cidos graxos presentes no leo de linhaa Triple mega 3-6-9

Identificao
Solvente
C12:0

cido Graxo
saturado

Tempo de reteno (min)

2.071
6.198

rea
2726488
1407

Porcentagem (%)
0.21

C14:0
C16:0
C18:0
C18:19 c
C16:19 t
C18:26 c
C18:33
C22:0
No identificado
-

saturado
saturado
saturado
insaturado
insaturado
insaturado
insaturado
saturado
-

11.709
22.524
32.877
33.875
34.238
36.587
41.245
63.914
76.599
-

719
39811
34249
142174
4821
96628
358972
960
991
3407220

0.11
5.85
5.03
20.88
0.71
14.19
52.74
0.14
0.14
100

Fonte: Elaborado pela autora

Avaliando os teores de cidos graxos presentes no leo de linhaa Triple mega 3-6-9
(Quadro 2), contido na poro de 2 cpsulas, que compreendem uma massa de 2,8g, foi
possvel observar que os teores de cidos graxos monoinsaturados (0,582g), mega 3 (1,56g),
mega 6 (0,397g) e mega 9 (0,604g) excedem os limites mximos de variao permitidos
pela Resoluo RDC n 360/2003. A divergncia entre os valores de referncia e os valores
obtidos nas anlises pode ter como possvel justificativa o fato de o produto apresentar prazo
de validade j ultrapassado.
Figura 2 Cromatograma do leo de linhaa Triple mega 3-6-9

Fonte: Elaborado pela autora

Quadro 3 leo de linhaa Triple mega 3-6-9

cidos Graxos
Saturados
Monoinsaturados
Poliinsaturados
mega 3
mega 6
mega 9

Valores do Fabricante
Resultados obtidos
0,33 g
0,336g
0,474g
0,582g
1,2g
1,87g
0,307g
1,56g
0,87g
0,397g
0,471g
0,604g
Lote n: 19991. Validade: 09/2014.
Fonte: Elaborado pela autora

4.2 LEO DE PEIXE

Variao mxima
0,264g-0,396g
0,379g-0,569g
0,96g-1,44g
0,245g-0,368g
0,696g-1,04g
0,376g-0,565g

O leo de peixe tem em sua composio cidos graxos poliinsaturados que so

encontrados em concentraes mais expressivas em lipdios de peixes e animais marinhos,
especialmente aqueles procedentes de regies frias, e so considerados de grande importncia
no metabolismo, por exercerem funes biolgicas especficas (SOFTECH, 2012).
Para as anlises de leo de peixe, os resultados obtidos na amostra do leo mega 3
EPA/DHA no foram satisfatrios. Apenas parte dos resultados apresentados na anlise
cromatogrfica encontravam-se dentro da variao permitida pela Resoluo RDC n
360/2003.
Quadro 4 Perfil de cidos graxos presentes na amostra de leo de peixe mega 3 EPA/DHA

Identificao
Solvente
C14:0
C15:0
C16:0
C16:17
No identificado
No identificado
No identificado
C18:0
C16:19 c
C18:1 9 t
C18:2 6 c
C18:3 3
No identificado
C21:0
No identificado
C20:5 3
No identificado
C22:6 3
C24:1 9
-

cido Graxo
saturado
saturado
saturado
insaturado
saturado
insaturado
insaturado
insaturado
insaturado
saturado
insaturado
insaturado
insaturado
-

Tempo de reteno (min)

2.057
11.747
16.766
22.539
23.883
26.973
28.669
31.499
32.833
33.793
34.199
36.496
41.003
43.490
58.957
61.715
62.813
68.704
74.321
75.466
-

rea
2638845
33067
1808
73375
39221
5255
6479
11090
14782
40515
13873
6506
2300
11640
4560
3464
84096
3415
9573
54402
3058266

Porcentagem (%)
7.88
0.43
17.50
9.35
1.25
1.54
2.65
3.52
9.66
3.30
1.55
0.55
2.77
1.08
0.82
20.05+0,04
0.81
2.28
12.97
100

Fonte: Elaborado pela autora

Alguns picos apresentados no cromatograma no foram passveis de identificao

quando comparados com o padro (Quadro 4).
Dentre os resultados obtidos, os teores de DHA (0,068g) so os que apresentam maiores
divergncias entre os dados de referncia e os resultados obtidos na anlise. Os resultados
obtidos foram comparados com os percentuais contidos na poro de 6 cpsulas que
compreendem uma massa de 6g (Quadro 5).
Com efeito, conforme afirma Shahidi (1988 apud PACHECO; REGITANO-DARCE,
2009), as variaes nos resultados podem estar relacionados com o

nvel de insaturao dos seus cidos graxos, os leos de peixes so muito

susceptveis a processos oxidativos, que comprometem a integridade das duplas
ligaes, a concentrao e a funcionalidade dos cidos graxos EPA e DHA, alm de
colocarem em risco a sade humana.

Para evitar os processos peroxidativos, a embalagem utilizada deve apresentar boa

barreira ao oxignio, umidade e s radiaes luminosas. Quanto mais insaturaes
possurem os lipdios, maior dever ser a proteo da embalagem, preservando a sade do
consumidor (PACHECO; REGITANO-DARCE, 2009).
Figura 3 Cromatograma do leo de peixe mega 3 EPA/DHA

Fonte: Elaborado pela autora

Quadro 5 leo de peixe mega 3 EPA/DHA

cidos Graxos
Saturados
Monoinsaturados
Poliinsaturados
DHA
EPA

Valores do Fabricante
Resultados obtidos
1g
0,880g
1g
0,959g
1g
0,766g
0,36g
0,068g
0,54g
0,602g
Lote: N/A. Validade: N/A.

Variao mxima
0,8g-1,2g
0,8g-1,2g
0,8g-1,2g
0,288g-0,432g
0,432g-0,648g

Fonte: Elaborado pela autora

4.3 LEO DE ABACATE

Sabe-se que se trata de um alimento rico em gordura monoinsaturada (mega 9),

gordura poli-insaturada (mega 6), vitamina E, beta-sisterol e glutationa, o que melhora o
funcionamento das hemoglobinas, melhora o perfil lipdico e reduz o estresse oxidativo,
diminuindo as chances de se desenvolver diabetes, doenas do corao, cncer, artrite e
catarata. O leo de abacate tambm pode ajudar a evitar o envelhecimento. Segundo a
concluso de uma pesquisa apresentada no encontro anual da Sociedade Americana para
Bioqumia e Biologia Molecular, em San Diego (EUA), o leo de abacate capaz de conferir

efeito protetivo contra os radicais livres (MACIEL; ALMEIDA, 2013).

Os resultados da corrida cromatogrfica podem ser avaliados a seguir (Quadro 6).
Quadro 6 Perfil de cidos graxos presentes no leo de abacate Flora 7 Ervas

Identificao
Solvente
C16:0
C16:17
C17:0
C18:0
C18:19 cis
C18:19 trans
C18:26 cis
C18:26 trans
C18:26 cis
C20:0
C20:19
C22:0
C22:63
-

cido Graxo
saturado
insaturado
saturado
saturado
insaturado
insaturado
insaturado
insaturado
insaturado
saturado
insaturado
saturado
insaturado
-

Tempo de reteno (min)

2.068
22.536
23.879
27.841
32.870
33.916
34.248
36.616
37.418
41.078
47.253
48.897
63.922
74.922
-

rea
2632062
46658
911
534
14916
235983
4672
143870
892
9181
2441
4138
8669
4510
3109437

Porcentagem (%)
9.77
0.19
0.12
3.12
49.44
0.98
30.13
0.19
1.92
0.51
0.87
1.81
0.95
100

Fonte: Elaborado pela autora

Os resultados obtidos foram avaliados com base nos teores de cidos graxos presentes
no leo de abacate (Quadro 6) contido na poro de 2 cpsulas, que compreendem uma massa
de 2,0g. Foi possvel observar que os valores de referncia diferem-se em sua totalidade dos
obtidos na anlise.
A auto-oxidao de cidos graxos poli-insaturados de leos comestveis resulta na
formao de hidroperxidos que sofrem transformaes qumicas com uma variedade de
rearranjos (PERJSI et al., 2002 apud PACHECO; REGITANO-DARCE, 2009). Estas
transformaes qumicas, degradaes e oxidao promovem alteraes estruturais nos cidos
graxos. Condies de armazenamento tambm so importantes na manuteno da integridade
dos compostos graxos.
Portanto, a partir dos dados e resultados obtidos, podemos concluir que o leo de
abacate encontra-se fora dos limites de aceitabilidades propostos na supracitada Resoluo
RDC n 360/2003.

Figura 4 Cromatograma de leo abacate Flora 7 Ervas

Fonte: Elaborado pela autora

Quadro 7 leo de abacate Flora 7 Ervas

cidos Graxos
Saturados
Monoinsaturados
Poliinsaturados
cido Linoleico (6)
cido Oleco (9)
cido Palmitoleico

Valores do Fabricante
0g
1,6g
0,2g
0,2g
1,3g
0,3g

Resultados obtidos
0,330g
0,101g
0,660g
0,602
0,990 g
0,0038g

Variao mxima
0g
1,28g 1,92
0,16g 0,24g
0,16g 0,24g
1,04g 1,56g
0,24g 0,36g

Fonte: Elaborado pela autora

5 CONCLUSO

Dentre as anlises realizadas, foi constatado que o leo de peixe apresentou os melhores
resultados. As demais amostras apresentaram alguns valores fora dos limites mximos de
variao, sendo que as anlises das cpsulas de leo de abacate apresentaram os piores
ndices, pois todos os seus resultados encontraram-se fora dos limites de aceitabilidade
propostos na Resoluo RDC n 360/2003.

REFERNCIAS
AGNCIA NACIONAL DE VIGILNCIA SANITRIA. Resoluo RDC n 360, de 23 de
dezembro de 2003. Aprova Regulamento Tcnico sobre Rotulagem Nutricional de Alimentos
Embalados, tornando obrigatria a rotulagem nutricional. Dirio Oficial [da] Repblica
Federativa do Brasil, Braslia, 26 dez. 2003. Disponvel em:
<http://portal.anvisa.gov.br/wps/wcm/connect/ec3966804ac02cf1962abfa337abae9d/Resoluca
o_RDC_n_360de_23_de_dezembro_de_2003.pdf?MOD=AJPERES>. Acesso em: 21 out.

2014.
ANJO, Douglas Faria Corra. Alimentos funcionais em angiologia e cirurgia vascular. Jornal
Vascular Brasileiro, So Paulo, v. 3, n. 2. p. 145-154, jun. 2004. Disponvel em:
<http://jornalvascularbrasileiro.com.br/04-03-02/04-03-02-145/04-03-02-145.pdf>. Acesso
em: 21 out. 2014.
BRASIL. Ministrio da Sade. Portaria n 2.715, de 17 de novembro de 2011. Atualiza a
Poltica Nacional de Alimentao e Nutrio. Dirio Oficial [da] Repblica Federativa do
Brasil, Braslia, 11 jun. 1999. Disponvel em:
<http://bvsms.saude.gov.br/bvs/saudelegis/gm/2011/prt2715_17_11_2011.html>. Acesso em:
21 out. 2014.
GALVO, Elisngela Lopes et al. Avaliao do potencial antioxidante e extrao subcrtica
do leo de linhaa. Food Science & Technology = Cincia e Tecnologia de Alimentos,
Campinas, v. 28, n. 3, p. 551-557, jul./set. 2008. Disponvel em:
<http://dx.doi.org/10.1590/S0101-20612008000300008>. Acesso em: 22 out. 2014.
MACHADO, Bruna Aparecida Souza et al. Composio em cidos graxos e estabilidade
lipdica em acaraj da Bahia. Alimentos e Nutrio = Brazilian Journal of Food and
Nutrition, Araraquara, v. 24, n. 3, p. 265-274, jul./set. 2013. Disponvel em: <http://servbib.fcfar.unesp.br/seer/index.php/alimentos/article/viewFile/273/2222>. Acesso em: 21 out.
2014.
MACIEL, Letcia; ALMEIDA, Fernanda de. Maravilhas do abacate. Revista Viva Sade,
So Paulo, 21 mar. 2013. Nutrio. Disponvel em:
<http://revistavivasaude.uol.com.br/nutricao/maravilhas-do-abacate/39/>. Acesso em: 22 out.
2014.
MARTIN, Clayton Antunes et al. cidos graxos poliinsaturados mega-3 e mega-6:
importncia e ocorrncia em alimentos. Revista de Nutrio, Campinas, v. 19, n. 6, p. 761770, nov./dez. 2006. Disponvel em: <http://dx.doi.org/10.1590/S1415-52732006000600011>.
Acesso em: 22 out. 2014.
OLIVEIRA, Mrcia Lage de. Avaliao da produo e dos efeitos das radiaes gama em
macarro enriquecido com bagao de linhaa. 2014. 69 f. Tese (Doutorado em Cincias na
rea Tecnologia Nuclear) Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares, Universidade de
So Paulo, So Paulo, 2014. Disponvel em:
<http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/85/85131/tde-23042014110500/publico/2014OliveiraAvaliacao.pdf>. Acesso em: 21 out. 2014.
PACHECO, Selma Guidorizzi Antonio; REGITANO-DARCE, Marisa Aparecida Bismara.
Estabilidade oxidativa de leo de peixe encapsulado em diferentes tipos de embalagem em
condio ambiente. Cincia e Tecnologia de Alimentos, Campinas, v. 29, n. 4, p. 927-932,
out./dez. 2009. Disponvel em: <http://www.scielo.br/pdf/cta/v29n4/34.pdf>. Acesso em: 22
out. 2014.
SOFTECH: cpsulas gel leo de peixe. Anpolis: Ideal Farma, 2012. Bula de remdio.
Disponvel em:
<http://www.vitalpharmaudia.com.br/site/public_images/produto/2a1bf9767a87c7e18cdcd5d7

2ed8c1f8.pdf>. Acesso em: 22 out. 2014.