UNIVERSIDAD DEL ZULIA

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE BIOANALISIS
CATEDRA DE INMUNOLOGA

PRACTICA DE HEMAGLUTINACIN

NOVIEMBRE DE 2009

DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA TOXOPLASMOSIS

OBJETIVO GENERAL
Definir las reacciones de hemaglutinacin pasiva
Objetivos especficos
1. Explicar las pruebas de hemaglutinacin pasiva
2. Explicar el fundamento de la prueba para el diagnstico de Toxoplasmosis
3. Interpretar los resultados obtenidos
Reacciones de hemaglutinacin
Son reacciones de aglutinacin donde se utilizan glbulos rojos (GR). En la
hemaglutinacin directa el antgeno forma parte intrnseca del GR, y se utilizan para
determinar anticuerpos contra antgenos propios de la superficie de los GR, tal como
ocurre en la identificacin de los grupos sanguneos.
En la hemaglutinacin pasiva o indirecta, los GR son usados como soporte sobre el
que se absorbe el antgeno. La adherencia del antgeno a la superficie del GR puede ser
espontnea, como sucede con la tiroglobulina, albmina bovina, etc, o previo
tratamiento de ste (GR) por diversos mtodos qumicos, lo que permite la fijacin de
la protena a la membrana celular formando un reactivo estable.
El tratamiento de los GR con cido tnico es uno de los mtodos ms usados para
adherir antgenos proteicos. Su accin sobre la membrana es similar al tratamiento con
enzimas proteolticas. Estos exponen en la clula un mayor nmero de receptores para
las protenas, lo que permite que se cubran con una alta densidad de antgenos,
aumentando la sensibilidad de la reaccin. Se requiere de antgenos altamente
purificados y su preparacin es laboriosa; sin embargo, se usa con mucha frecuencia
debido a su alta sensibilidad y por la estabilidad del reactivo.
Un ejemplo de las pruebas de hemaglutinacin pasiva es la determinacin de
anticuerpos antitoxoplasma para el diagnstico de toxoplasmosis.

TOXOPLASMOSIS
La toxoplasmosis es una enfermedad infecciosa ocasionada por un parsito, el
Toxoplasma gondii, protozoario intracelular obligado.
Es una enfermedad extendida por todo el mundo, su frecuencia vara mucho segn las
zonas geogrficas y los hbitos alimenticios. Es benigna o asintomtica, cuando afecta
a nios o adultos, sin embargo en fetos o en pacientes inmunodeprimidos las
consecuencias pueden ser graves. Debido a la variedad fisiopatolgica y la clnica de la
infeccin, los mtodos de diagnstico usados y sus interpretaciones sern diferentes
segn se trate de una primoinfeccin, de una infeccin congnita, o de una reactivacin
en un paciente inmunodeprimido.

El parsito se presenta bajo tres formas diferentes: trofozoto (antes taquizoto), quistes
tisulares y ooquistes. Estos ltimos slo se producen en los intestinos de los huspedes
definitivos.

Ciclo de vida de T. gondii

El ciclo vital del Toxoplasma tiene como husped definitivo al gato, o miembros de su
familia, que tras ingerir alguna de las formas del parsito sufre en las clulas epiteliales
de su intestino un ciclo asexual y luego un ciclo sexual, eliminndose en sus heces
millones de ooquistes. Cuando estos esporulan se vuelven infecciosos pudindose
infectar otros animales por su ingestin Ej: (el ganado ovino, bovino, cerdos y a
numerosos vertebrados homeotermos como roedores, ratn blanco, hmster, conejo,
palomas, perro y monos). Por debajo de 4 grados C, o por encima de 37, no se produce
la esporulacin y los ooquistes no son infecciosos.
El gato se comporta como husped intermediario y definitivo, por lo que el parsito
realiza en l su ciclo asexuado y sexuado. A diferencia del hombre que slo es un
husped intermediario, en el gato puede realizar el ciclo completo

Los humanos sufren la transmisin del parsito fundamentalmente por

va oral a travs de la ingesta de carnes, verduras, aguas, huevos, leche, etc.
contaminados por ooquistes o que contienen quistes tisulares: hasta un 25% de

carnes de cordero, cerdo y ms raros en

carne de vaca.
Los gatos, sobre todo si se manipulan sus excretas, pueden infectar si se ingieren
ooquistes.
La segunda va de transmisin es la materno-fetal o congnita, dando origen
a la toxoplasmosis congnita;
Ms raras son la transmisin por transfusiones o por recepcin de rganos.
Aunque se ha postulado el contagio interhumano, ste no se ha podido
demostrar.
Por qu es importante en los seropositivos
Tiene una distribucin mundial y el hombre, que es un husped intermediario, es
relativamente resistente; raramente produce infecciones generalizadas graves en los
adultos inmunocompetentes pero la afectacin del feto en el embarazo, ms frecuente y
grave, ocasiona toxoplasmosis neonatal.
El sistema inmunitario controla la infeccin por Toxoplasma produciendo quistes, que
persisten de por vida en los tejidos del sujeto infectado, con especial predileccin por el
cerebro, corazn y msculos.
Cuando se ha tenido una infeccin previa por el T. gondii el sujeto tiene
anticuerpos especficos, en mayor o menor cuanta, y se dice que son
seropositivos para T. gondii . Diferentes estudios sealan que entre un 30-50%
de estos pacientes y que tienen infeccin por VIH desarrollarn un
toxoplasmosis cerebral durante su evolucin, con un riesgo alto cuando sus
cifras de CD4 estn por debajo de 100/mm3.
En las personas infectadas por el VIH la toxoplasmosis ocasiona con frecuencia
afectacin del sistema nervioso central (toxoplasmosis cerebral).
Existen medidas para prevenir la toxoplasmosis en el paciente VIH+
Manifestaciones clnicas
Toxoplasmosis y el embarazo
La toxoplasmosis congnita se transmite por va transplacentaria y la condicin
necesaria es que la madre sufra durante el embarazo una diseminacin hematgena. Ello
ocurre cuando la madre adquiere una primoinfeccin durante el embarazo y, mucho ms
raramente, si como consecuencia de una inmunodepresin coincidente con el embarazo
se reactiva una toxoplasmosis latente.
Dicha infeccin debe tomar previamente la placenta. La frecuencia de la placentitis y de
la consiguiente infeccin fetal, depende de la edad gestacional a la cual ocurre.
En el primer trimestre el porcentaje es del 14%, del 29% para el segundo y el 59% para
el tercero. La contaminacin fetal pasa del 1% en el primer trimestre al 90% si ocurre
durante el tercer trimestre. La septicemia fetal se produce con difusin del parsito a los
diversos tejidos principalmente retina, cerebro, tejido muscular, corazn, hgado, bazo,
pulmn, etc.
Con la aparicin de anticuerpos se origina las formas qusticas, las cuales pueden
invadir e infectar otros rganos.

Patologa de la infeccin intrauterina

En general, todas las infecciones intrauterinas crnicas tienen retardo del crecimiento
intrauterino. Siendo los casos sintomticos y fatales propios de la infeccin del primer y
segundo trimestre. En la infeccin tarda el dao fetal es menor. El neonato puede tener
por lo tanto una enfermedad generalizada o puede tener un compromiso neurolgico
predominante, o un compromiso ocular aislado (imagen izquierda: lesiones activa y
curada; lesin de la mcula en la imagen derecha), as como una forma latente que se
manifieste aos ms tarde.
Toxoplasmosis en el VIH+
La afectacin del sistema nervioso central (SNC), y en especial la toxoplasmosis
cerebral, era una manifestacin rara en los pacientes inmunocomprometidos; sin
embargo desde el comienzo de la epidemia del SIDA es una causa comn de masa
expansiva intracerebral.
Por lo general, sobre la base de estudios seroepidemiolgicos, la afectacin del SNC por
el Toxoplasma se considera una reactivacin de una infeccin crnica latente. Se
presenta con frecuencia en pacientes que ya se sabe que tienen SIDA pero en algunos
casos es la primera manifestacin de este sndrome.
La forma de presentacin suele ser subaguda con sntomas que aparecen durante
semanas y el deterioro general precede a los trastornos de la conducta y a los sntomas
focales.
La respuesta inmune humoral y celular est alterada. A pesar de lo recrudente que se
torna la infeccin en ellos, la determinacin de anticuerpos no resulta til en el
establecimiento de la reactivacin.
En inmunocompetentes
La infeccin aguda con Toxoplasma activa una cascada de respuestas inmunes
protectoras. El parsito entra al hospedero a nivel del intestino mucosal y evoca la
produccin de anticuerpos de tipo IgA, lo que constituye ms del 80% del total de
anticuerpos en mucosa y ha mostrado ser un importante modulador de la proteccin e
indicador de la infeccin. Si el parsito evade la respuesta inmune mucosal, se activan
la inmunidad humoral y celular. Durante la respuesta humoral en la infeccin
toxoplsmica adquirida, el parsito induce rpidamente niveles detectables de
anticuerpos de tipo IgM e IgG en el suero. La evolucin ms frecuente (>90% de los
casos), sea o no la infeccin sintomtica, ocurre con nivel elevado de IgM que
desaparece despus de varios meses, ttulo de IgG ascendente durante dos o tres meses,
hasta llegar o pasar de 1000 UI/mL o ttulo de IgG persistente durante 6 a 12 meses,
para despus ir disminuyendo lentamente. En respuestas mayores y prolongadas estn
presentes ttulos muy elevados de IgG (>1000 UI/mL) durante aos, acompaados o no
de IgM. En respuestas mnimas, observadas frecuentemente cuando se aplica un
tratamiento precoz, los ttulos de IgM pueden ser mayores o menores, sin embargo
ocurre un ascenso lento y de dbil amplitud de los niveles de IgG, hasta un mximo de
100 UI/mL. Para considerar como primoinfeccin a las respuestas sin aparicin de IgM
se toma en cuenta la aparicin y aumento de los ttulos de IgG durante dos o tres meses,
hasta 1000 UI/mL o ms y la persistencia durante 6 a 12 meses de los ttulos de IgG.

Sin embargo, la inmunidad mediada por clulas es la mayor respuesta protectora

activada por el parsito durante la infeccin al hospedero. Los macrfagos son activados
siguiendo la fagocitosis de parsitos opsonizados por anticuerpos. Estudios recientes
han demostrado que si el parsito no es fagocitado y entra al macrfago por penetracin
activa, ste contina la replicacin. Las clulas T son activadas por una gran variedad
antignica, pudiendo ser antgenos asociados a membrana o citoplasmticos. La va de
presentacin de antgenos mediada por los linfocitos CD8+ est regulada por las
molculas del CMH y, de esta forma, parece controlarse el nmero de quistes de T.
gondii que sobrevivirn. La respuesta de clulas T CD4+ y CD8+ es antgeno
especfica, adems estimula la produccin de varias linfocinas (IL-2, IL-4, IL-5, IL-10).
Estas linfocinas junto a la IL-12 producida por los macrfagos expanden clulas T y
clulas asesinas naturales (NK). 2, 18, 20, 21 La IL-10 y la IL-12 parecen ser cruciales
en la fase inicial de la infeccin y menos importantes durante la toxoplasmosis crnica.
Mientras que la IL-12 juega un papel primordial en el inicio de una inmunidad mediada
por clulas, fuerte y efectiva contra los taquizoitos de T. gondii, la IL-10 parece
modular la sntesis, tanto de IL-12 como la del interfern (IFN-) in vivo, evitando
una respuesta inmune

DIAGNSTICO DE LA TOXOPLASMOSIS
Los procedimientos ms comnmente utilizados para el diagnstico de la toxoplasmosis
incluyen mtodos directos, los cuales evidencian la presencia del parsito en muestras
de fluidos o tejidos, principalmente durante la fase aguda de la infeccin. Estos son la
PCR, los cultivos celulares, la inoculacin en ratn, coloraciones de frotis o cortes, as
como tambin el xenodiagnstico, utilizado en etapas experimentales. Los mtodos
indirectos que evidencian la presencia del parsito detectando la presencia de
anticuerpos especficos contra el mismo, involucrando pruebas serolgicas.

PRUEBAS SEROLGICAS:
Dentro de las pruebas serolgicas se incluyen: Sabin-Feldman, Hemoaglutinacin
directa e indirecta, Aglutinacin en ltex, ensayo inmunoenzimtico (ELISA),
fijacin de complemento, inmunofluorescencia indirecta (IFI) y radioinmunoensayo
directo e indirecto.
Las diferentes tcnicas serolgicas difieren en el tipo de antgeno que emplean
(parsitos enteros, porciones solubles citoplasmticas o de membrana, productos de
secrecin-excrecin), y presentan diferente sensibilidad, especificidad, reproducibilidad,
valor predictivo y valor clnico (tambin diferente segn el isotipo de Ig considerado).
LA HEMOAGLUTINACIN INDIRECTA (HAI): es sensible y especfica para
laboratorios de rutina; pero para diagnstico individual debe complementarse con otras
tcnicas con ttulos similares a los de IFI en la poblacin inmune.
En el curso de la infeccin por T. gondii
Los primeros anticuerpos aparecen 8-20 das despus de la infeccin, estn dirigidos
contra los antgenos de membrana y son del tipo IgM. Luego aparecen los anticuerpos
de tipo IgG, los cuales se elevan rpidamente y luego se estabilizan, decrecen
lentamente hasta encontrar una estabilizacin que se mantiene de por vida.

En la interpretacin de la prueba se deben tener en cuenta los siguientes ttulos:

1:64.

Refleja experiencia toxoplasmsica pasada, incluso de aos atrs o una

muy reciente exposicin al parsito.

1:256

Reciente exposicin, debe observarse evolucin del paciente.

1:1024

Es una cifra significativa y nos indica probable toxoplasmosis.

La inmunidad conferida por el toxoplasma es muy slida, si se adquiere la enfermedad

durante los dos primeros trimestres del embarazo es muy posible que tenga un hijo con
toxoplasmosis congnita, pero un segundo hijo ya no presentar la enfermedad debido
a la inmunidad conferida a la madre.

El diagnstico de la enfermedad depende de si se trata de un paciente

inmunocompetente o inmunodeprimido. Para el primer caso, la toxoplasmosis
ganglionar implica caractersticas clnicas observables ms una serologa con un perfil
de agudo. Para el diagnstico de toxoplasmosis ocular, implica un examen
oftalmolgico, con una serologa y PCR positivas junto con la presencia de IgA en
humor acuoso. Para el caso de inmunodeprimidos, se analiza la presencia de
toxoplasmosis cerebral, junto con imagenologa y mtodos directos de anlisis en
sangre y lquido cefalorraqudeo.
Para el caso de diagnstico de infeccin aguda en la gestante, implica el anlisis de
seroconversin, presencia de IgM o IgA especfica, junto con un aumento de IgG
especfica de baja avidez. Para el diagnstico de infeccin fetal, se analizan signos
ecogrficos junto con anlisis de lquido de amniocentesis en inoculaciones en ratones,
PCR y cultivo celular del mismo. Para el caso del diagnstico de infeccin en el recin
nacido, se aplican mtodos directos en sangre de placenta y cordn umbilical, junto con
la bsqueda de anticuerpos especficos IgM e IgA.
TRABAJO PRCTICO EN EL LABORATORIO
El fundamento y procedimiento para la determinacin de anticuerpos anti-Toxoplasma
depender de la tcnica disponible al momento en el laboratorio de Inmunologa.