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PRACTICA N06
CALIDAD DE LAS PROTEINAS, EXPERIMENTADAS EN RATAS
I.
INTRODUCCION
OBJETIVOS
Determinar la eficiencia proteica de la leche en las ratas Hmster, por el mtodo del PER
(Razn de Eficiencia Proteica).
Cuantificar el PER, teniendo como referencia el peso ganado por el animal, en relacin a la
protena ingerida, tomando en cuenta el animal con dieta proteica.
Determinar la Razn Proteica Neta (NPR), tomando en cuenta los animales experimentados
(con dieta proteica y aproteica), en relacin a la protena ingerida por el animal con dieta
proteica.
1
III.
REVISION BIBLIOGRAFICA
III.1.
EVALUACIN BIOLGICA DE LA CALIDAD NUTRITIVA DE ALIMENTOS
La composicin qumica de un alimento puede ser slo el contenido terico o bruto de energa y
nutrientes del mismo, ms no su disponibilidad biolgica para el humano, por lo que es necesario
contar con un ajuste biolgico respectivo.
Actualmente existen muchas revisiones sobre evaluaciones biolgicas aplicables a la evaluacin
nutritiva de un alimento, generando posibilidades y limitaciones desde diferentes puntos de vista.
La evaluacin de la calidad de las protenas constituye un factor esencial para determinar su
valor nutricional y comercial. Las protenas no son iguales, ellos varan de acuerdo a su origen
(animal, vegetal), su composicin de aminocidos (contenido de aminocidos esenciales), su
digestibilidad, textura, etc. Una buena calidad de protena es cuando stos son fcilmente
disponibles y contiene aminocidos esenciales en cantidades que correspondan a los
requerimientos humanos.
Estudios clnicos con humanos que miden crecimiento y otros indicadores metablicos proveen la
valoracin ms exacta de calidad de protena. Por razones ticas y de costos tales tcnicas no
pueden ser utilizadas. Consecuentemente se han utilizado las tcnicas de los ensayos diseados
para medir eficacia de una protena utilizando animales de experimentacin. Los principios de un
ensayo biolgico en general son aplicados a casi todas las especies animales, pero se trabaja
principalmente con roedores por la facilidad de manejo de sus bajos costos de mantenimiento.
III.2.
III.3.
La prueba tiene duracin de 4 semanas y los resultados varan de cero (protenas que no
permiten el crecimiento) y 4,4 como mximo. Los valores obtenidos varan con el nivel de
protena de la dieta y por convencin internacional la prueba se realiza a una concentraron
proteica en la dieta del 10%.
Ventajas
Mtodo sencillo y prctico.
Prueba fcil de replicarse.
Permite aplicar los clculos estadsticos.
Hay amplia difusin en evaluacin de alimentos.
Limitaciones
Supone que la ganancia de peso se debe exclusivamente al aporte proteico del alimento,
aunque hay dietas que pueden provocar retencin de agua y/o grasa.
La relacin entre el peso corporal y la ingestin de nitrgeno no puede extenderse hasta la regin de
peso cuando la ingestin de nitrgeno es cero. Bender y Doell (1957) disearon este ndice que
elimina la crtica fundamental que se le ha hecho al PER y es que este ltimo no tiene en cuenta el
mantenimiento y asume que la ingestin de nitrgeno est solo disponible para el crecimiento. Esta
relacin es la suma de la prdida de peso de un control negativo con la variacin de peso de un grupo
que est ingiriendo la dieta experimental, contra el nitrgeno ingerido. La mayora de las limitaciones
del PER se pueden superar si es que en el ensayo anterior se introduce un grupo del todo
comparable que se alimente con una dieta proteica. Este mtodo a diferencia del PER incluye una
tolerancia para el mantenimiento, lo cual se consigue agregando la prdida de peso de un grupo de
ratas alimentadas con una dieta libre de protenas, a la ganancia de peso del grupo problema.
III.5.
Mtodos Basados en el Balance de Nitrgeno
III.5.1. Utilizacin proteica neta (NPU)
Uno de los mtodos ms frecuentemente usados es la determinacin de la utilizacin proteica neta.
Cuantitativamente el NPU est representado por una frmula simple:
El NPU representa la proporcin del nitrgeno del alimento ingerido que es retenido. El nitrgeno
retenido puede ser medido por estudios de balance de nitrgeno (humanos) o por anlisis directos del
cuerpo del animal. Este ltimo es el ms comn y de manera prctica se plantea la diferencia entre el
nitrgeno corporal de ratas alimentadas con la dieta en ensayo, menos el nitrgeno corporal de ratas
alimentadas con una dieta aproteica en el mismo tiempo de ensayo, es decir:
Dnde:
Nx = N corporal de ratas alimentadas con protena evaluada.
Nk = N corporal de ratas alimentadas con dieta aproteica.
Ni = N consumido por grupo evaluado.
A manera de ilustracin se presenta en el Cuadro 1 la valoracin nutritiva de la calidad biolgica de
protenas de algunos alimentos comunes.
Pero los valores de digestibilidad se clasifican como aparentes cuando no se hacen mediciones y
correcciones del nitrgeno que no proviene de la dieta sino de la descamacin del tubo digestivo, de
los jugos y secreciones y la flora intestinal que constituyen una prdida inevitable del nitrgeno. Por lo
tanto, es necesario estimar esa prdida, para ello se someten a los animales a una dieta aproteica y
se valora la excepcin del nitrgeno fecal endgeno y se utiliza para corregir el nitrgeno fecal, por lo
que la digestibilidad verdadera ser:
Medida de la digestibilidad
Para ajustar el dato al valor biolgico verdadero debe introducirse las correcciones por el N
metablico fecal y el N urinario endgeno, los cuales se determinan en otro grupo de animales
alimentados con dietas libres de nitrgeno. El valor biolgico de una protena diettica fue definido por
Thomas (1909).
Se expresa como la fraccin de nitrgeno absorbida que es retenida en el cuerpo, para el crecimiento
y mantenimiento. Se realiza por tanto la determinacin de nitrgeno eliminado por heces fecales y
orina, corrigindose los valores mediante la determinacin de estos en animales que ingieren una
dieta libre de nitrgeno.
Salvado de trigo
Maicena
Premix
50 gramos
640 gramos
60 gramos
8
Aceite
Afrecho
Azcar de mesa
Leche
160 gramos
120 gramos
50 gramos
50gramos
B) MATERIALES
2 Jaulas
2 comederos
2 bebederos
1 caja de cartn
Bolsas de polietileno
1 probeta
Aserrn
C) EQUIPOS
1 balanza de capacidad de 1Kg.
1 balanza analtica
IV.
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Primero se adquiri dos jaulas y se acondiciono con aserrn suministrar adecuadamente su
alimentacin y comederos, bebederos y la cama.
Seguidamente se procedi a realizar las formulaciones de las dietas alimenticias considerando
2 tipos de dieta con protena y aproteico, como se detalla a continuacin:
CUADRO N 01
DIETA PROTEICA
ALIMENTO
Leche (10%)
Premix (6%)
Aceite (8%)
CANTIDA
D
50 gr.
30 gr
40 gr.
DIETA APROTEICA
ALIMENTO
-----------------------------------Premix (6%)
Aceite (8%)
9
CANTIDA
D
----30 gr.
40 gr.
Afrecho (12%)
Azcar (5%)
Maicena (59%)
TOTAL (gramos)
60 gr.
25 gr.
295 gr.
500 gr.
Afrecho (12%)
Azcar (5%)
Maicena (69%)
TOTAL (gramos)
60 gr.
25 gr.
345 gr.
500 gr.
Luego se adquirieron los animales (2 ratas hmster) de 20 das de nacidos, las cuales se
pesaron, registraron sus pesos iniciales y por ltimo se colocaron en sus jaulas.
Se alimentaron las ratas de experimentacin durante 3 semanas, suministrndoles cada
racin correspondiente a cada da, as mismo se pesaron en ese lapso el alimento consumido
y no consumido; por ltimo se pesaron las ratas cada semana hasta cumplir el periodo de
experimentacin.
Finalmente se realizaron las clculos para determinar el PER y NPR, para determinar la
calidad proteica de la protena suministrada.
Aumento de Peso del Grupo con Protena test + Prdida de Peso del Grupo sin Protena
N.P.R =
Protena Ingerida por el grupo con Protena test
V.
RESULTADOS
10
CUADRO N 02
ALIMENTACION DE LA RATA HMSTER CON RACIN PROTEICA: PROTEINA CONSUMIDA
RACIONE
S
(c/u 10gr
Por da)
DIETA
CONSUMID
A
(gramos)
DIETA
NO
CONSUMID
leche
A
(gramos)
(gramos)
11.7
0.8376068
4
2da
RACION
12
0.875
10.6
0.8396226
4
4ta RACION 6
9.8
0.6122449
12.2
0.7704918
10.4
0.9903846
2
7ma
RACION
12.1
0.5785124
10.1
0.7227722
8
9na
RACION
8.2
12
0.6833333
3
10ma
RACION
10.1
0.5940594
1
11ma
RACION
8.1
9.5
0.8526315
8
12ma
RACION
7.6
9.3
0.8172043
13ra
RACION
8.3
10.6
0.7830188
7
10.5
11
14ta
RACION
8.6
12.8
0.671875
15ta
RACION
11.5
13.6
0.8455882
4
16ta
RACION
14.3
14.9
0.9597315
4
17ma
RACION
10.2
10.6
0.9622641
5
18va
RACION
10.6
11.4
0.9298245
6
19na
RACION
8.6
9.4
0.9148936
2
20ma
RACION
9.6
10.4
0.9230769
2
21ra
RACION
11.2
11.6
0.9655172
4
22da
RACION
9.3
11.8
0.7881355
9
23ra
RACION
7.5
10.2
0.7352941
2
24ta
RACION
8.1
11.3
0.7168141
6
25ta
RACION
6.7
10.6
0.6320754
7
26ta
RACION
7.3
11.4
0.6403508
8
27ma
RACION
9.7
12.2
0.7950819
7
28va
RACION
5.8
9.5
TOTAL
246.4
312.1
12
0.6105263
2
22.047932
7
CUADRO 2
ALIMENTACION DE LA RATA HMSTER CON RACIN APROTEICA: PROTEINA CONSUMIDA
RACIONES
(c/u 10gr
Por da)
DIETA
DIETA
NO
leche
CONSUM
CONSUM
(gramo
IDA
IDA
s)
(gramos) (gramos)
1ra RACION
10.2
12.5
0.816
2da RACION
8.7
9.8
0.88775
51
3ra RACION
9.2
11.2
0.82142
857
4ta RACION
9.7
11.7
0.82905
983
5ta RACION
10.6
11.5
0.92173
913
6ta RACION
4.4
9.7
0.45360
825
7ma RACION
9.4
10.2
0.92156
863
8va RACION
6.1
9.8
0.62244
898
9na RACION
10.8
11
0.98181
818
10ma RACION
10.6
11.5
0.92173
913
11ma RACION
11
11.4
0.96491
228
12ma RACION
8.6
8.9
0.96629
213
13
13ra RACION
10.1
10.5
0.96190
476
14ta RACION
5.1
9.5
0.53684
211
15ta RACION
8.4
10.4
0.80769
231
16ta RACION
8.3
10.4
0.79807
692
17ma RACION
9.4
11.9
0.78991
597
18va RACION
10.2
0.78431
373
19na RACION
10.8
12.5
0.864
20ma RACION
6.9
9.5
0.72631
579
21ra RACION
10.3
12.1
0.85123
967
22da RACION
5.6
9.2
0.60869
565
23ra RACION
6.8
9.8
0.69387
755
24ta RACION
8.5
12
0.70833
333
25ta RACION
5.1
10.6
26ta RACION
5.9
10.9
27ma RACION
5.6
9.6
28va RACION
4.4
10.6
TOTAL
228.5
298.9
14
0.48113
208
0.54128
44
0.58333
333
0.41509
434
21.2604
222
CUADRO N 03
GANANCIA Y PRDIDA DE PESO DE LAS RATAS HSMTER CON DIETA PROTEICA Y
APROTEICA
REGISTROS
Peso Inicial
11.6
10.5
14.6
13.1
21.5
13.7
27.5
17.3
28
19.3
16.4
8.8
1er
PESO
semana)
(1ra
2do
PESO
semana)
(2da
3er
PESO
semana)
4to
PESO
semana)
(3ra
DIFERENCIA
PESO
DE
(4ta
alimento
295
30
60
50
25
40
Aproteico
alimento
345
30
60
0
25
40
15
g
de
protena
consumida
0.885
0
9.3
1.75
0
0
1.035
0
9.3
0
0
0
500
500
11.935
10.335
CUADRO N 04
PER PARA LA RATA HSMTER CON DIETA PROTEICA (R1)
DESCRIPCIN
PROTEINA
CONSUMIDA
(g)
GANACIA
PESO
(g)
DE
PER
+ 16.4
2.79
CUADRO N 05
RPN PARA LA RATA HSMTER CON DIETA PROTEICA (R1), CONSIDERANDO LA PERDIDA DE
PESO DE LA RATA HMSTER CON DIETA APROTEICA (R2).
DESCRIPCIN
RATA
CON
PROTEICA
DIETA
RATA
CON
APROTEICA
DIETA
PROTEINA
CONSUMIDA
(g)
GANANCIA
DE PESO
(g)
PERDIDA
DE PESO
(g)
5.88
16.4
RPN
2.789
4.72
8.8
16
VI.
DISCUSIONES
Cuando un animal est situado en una dieta proteicamente deficiente, un nmero de cambios
llamativos pueden se notados. Si el objeto experimental est dentro de su periodo de
crecimiento puede ser retardado cesado completamente, o puede sobrevenir una prdida de
peso (Arbaiza, 1997). Pudimos ver durante la prctica que la rata que no contena protena en
su alimentacin su pelaje era como el de un erizo presentaba el pelo quebradizo.
La razn de eficiencia proteica (PER) ha sido reconocida tradicionalmente como el mtodo
preferencial de evaluacin de la calidad proteica; sin embargo, sobrestima el valor de ciertas
protenas animales y subvalora las de origen vegetal. En este sentido, la FDA (Food labeling,
1993), recomend la sustitucin del REP y la utilizacin, con propsitos regulatorios, del
cmputo de aminocidos corregido en funcin de la digestibilidad proteica (PDCAAS) para la
evaluacin nutricional de productos destinados al consumo humano.
Segn (Bartholomai, Tosi y Gonzles, 2000), mencionan que para determinar el PER, se
debe trabajar experimentalmente con un grupo de ratas en crecimiento en un periodo de 28
das, se deben trabajar con ratas machos de la cepa Wistar, de 20 a 23 das de edad, en
nmero de 10 por tratamiento. El material a estudiar se debe incorporar en la dieta en un 10%.
Sin embargo en el experimento realizado para determinar el PER, se trabaj con ratas de la
cepa Hmster, con una edad de 20 das y se trabaj con dos ratas una con una alimentacin
proteica y otra sin protenas .Sin embargo se coincide con la literatura sobre el periodo de
crecimiento, la incorporacin del material a estudiar en la dieta del animal y el sexo.
Segn (Bartholomai, Tosi y Gonzles, 2000), refiere que para determinar el NPR (mtodo
propuesto por Bender y Doell, 1957), el diseo del mtodo es igual al del PER, quiere decir,
que se trabajan con los mismo nmero de ratas del mismo sexo (machos), la misma edad y la
incorporacin del material a estudiar es igual al del PER, con la diferencia que se incluyen en
dicho estudio un grupo de 10 ratas que consumen una dieta sin protena por un periodo de
crecimiento de 2 semanas. Durante la prctica realizada se trabaj con dos ratas durante 3
semanas aproximadamente vindose los resultados en ese tiempo.
VII. CONCLUSIONES
Se pudo determinar la eficiencia proteica de la leche en las ratas Hmster, por el mtodo del
per (razn de eficiencia proteica), arrojando un valor de 2,79 lo que indica que la calidad
proteica de la leche se acerca a lo que indica crdenas que es 3,10.
Se cuantific el PER, teniendo como referencia el peso ganado por la rata hmster con dieta
proteica, en relacin a la protena que ingiri.
17
Se obtuvo la Razn Proteica Neta (RPN), tomando en cuenta a las ratas hmster
experimentadas (con dieta proteica y aproteica), en relacin a la protena ingerida por la rata
hmster con dieta proteica, obtenindose un valor de 2.789.
Adems, se concluye que a medida que el tiempo de experimento transcurra, la rata con dieta
aproteica incremento su peso pero mostraba una apariencia enferma su pelo se mostraba
quebradiza, debido a que en su dieta no se suministr ninguna fuente de protena, debido a
que la protena est relacionada con el crecimiento y mantencin de los tejidos corporales de
su consumidor.
VII.
BIBLIOGRAFIA
BARTHOLOMAI, TOSI Y GONZALES (2000). Caracterizacin de Compuestos Nutritivos, no
Nutritivos y Calidad Proteica, Editorial Universitaria de Buenos Aires Argentina.
Arbaiza, T. 1997. Manual de procedimientos para el anlisis proximal de alimentos. Fac. de
Medicina Veterinaria, UNMSM. Lima, Per. 13 p.
COLLAZOS, Carlos (1995) Tablas Peruanas de Composicin de los Alimentos, 7ma Edicin,
Instituto Nacional de Salud, Centro Nacional de Alimentacin y Nutricin, Lima-Per.
FDA. FOOD LABELING. General provisions, Nutrition labelling; State and local requeriments
and exemptions; Final rules. Food Drug Admin Fed. Register 1993; 58(3):2101-6.
McDONALD. P, MORAGAN. CA (2006). Nutricin Animal, 6TA Edicin. Editorial ACRIBIA S.A,
Zaragoza-Espaa.
DRIN, J. et al 2000. Anlisis nutricional de alimentos. Editorial Acribia S. A.,Zaragoza
Espaa.
CARDENAS, H. 1995. Evaluacin nutricional de alimentos para humanos.Programa de
investigacin y proyeccin social en alimentos. Universidad NacionalAgraria La Molina, Lima
Per.
18
19