Licda.

Yarisel Rodrguez
Mgtra. Dalis Mojica
ICGES/LCRSP

RED NACIONAL DE DENGUE

PROGRAMA DE EVALUACIN
EXTERNA DE LA CALIDAD

SUPERVISIONES

PRUEBAS DE
PROFICIENCIA

CONTROL DE
CALIDAD
INDIRECTO

No hay laboratorios de la red

Evaluacin de los Kits comerciales para diagnstico que

ingresen a Panam (Decreto 148 del 9 de agosto de 1999 (gaceta oficial 23868)

ACCESIBILIDAD

MTODOS DIRECTOS

Aislamiento
Viral

Deteccin del
genoma

Deteccin de
antgeno

MTODOS INDIRECTOS

Serologa
IgM

Serologa
IgG

CONFIABILIDAD

Guzman et al., Nature Rev, 2011

 MUESTRAS: Suero
Momento de recoleccin:
- 5 a 21 das
CADENA DE FRO: Muestras <
4 das (4-8C) y > 4 das (-20
C)
DATOS COMPLETOS :
Formulario nico de vigilancia
epidemiolgia: (Fecha de
inicio de los sntomas, Fecha
toma de muestra, Historia de
viajes, etc.)
CONDICIONES DE
BIOSEGURIDAD

MUESTRAS: Suero (1ml) o

sangre completa (sin aditivos
o con gel)
Momento de recoleccin:
> 9 das de inicios de
sntomas hasta 45 das
CADENA DE FRO: Muestras < 4
das (4-8C) y > 4 das (-20
C)
DATOS COMPLETOS :
Formulario nico de
vigilancia epidemiolgica
(Fecha de inicio de sntomas,
Fecha toma de muestra,
Historia de viajes, etc.)
CONDICIONES DE
BIOSEGURIDAD

IMPORTANTE EVITAR CICLOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO

DE LAS MUESTRAS

 Transmisin de CHIKV: Por picaduras de artrpodos infectados.

Protegerse: ropa, mosquitero impregnado, repelente e insecticida

CHIKV es un agente de bioriesgo de nivel 3, La viremia es ms alta y

se transmite ms facilmente que el dengue (sangre-piel). Se considera que se
pueden transmitir por el contacto con animales infectados, sangre, suero,
plasma y tejidos

Durante toma de muestra y manipulacin: Equipo de proteccin

personal: guantes, bata, mascarilla, lentes protectores o mascara protectora
de rostro. Diagnstico molecular o de serologa: BSL2, aislamiento BSL2* o
BSL3
Las muestras deben enviadas como material potencialmente
infeccioso, utilizar guantes cuando se manipulan

Toda muestra sospechosa o todo instrumento en contacto con esas muestras:

descartar en basuras de bioriesgo

IgG
Signos y sntomas

Viremia

IgM

Signos y sntomas

Viremia

Vaughn, 2005

ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO DE DENGUE EN LA

RED NACIONAL DE DENGUE
LABORATORIO DE LA RED NACIONAL DE DENGUE

RECIBE PACIENTE CON FORMULARIO COMPLETO

CLASIFICA MUESTRAS

0-3 DAS DE SNTOMAS

DIAGNSTICO VIROLGICO
-Deteccin del AgNS1 - Pacientes
hospitalizados
- Vigilancia del serotipo circulanteEnviar muestra al ICGES
POSITIVO

REPORTAR

4 DAS DE SNTOMAS*

5-21 DAS DE SNTOMAS

NO TOMAR MUESTRA Y CITAR

AL PACIENTE PARA TOMARLA
DEL DA 5 AL 21 DE INICIO DE
SNTOMAS

DETERMINACIN DE
ANTICUERPOS IgM/IgG
PRUEBA DE ELISA

NEGATIVO

ENVIAR 10% DE MUESTRAS

PARA CONTROL DE CALIDAD Y
VIGILANCIA VIROLGICA AL
ICGES*

CITAR AL PACIENTE
PARA II MUESTRA
EN FASE
CONVALESCIENTE

POSITIVO
REPORTAR

NEGATIVO

ENVIAR 10% DE
REPORTAR
MUESTRAS PARA
CONTROL DEENVIADAS POR LOS LABORATORIOS DE LA RED NACIONAL DE DENGUE AL
MUESTRAS
CALIDAD AL ICGES
INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD

CLASIFICACIN
DE MUESTRAS
*Los casos con sospecha de Dengue Grave deben ser enviados inmediatamente al ICGES previa notificacin
a
Epidemiologa local y al ICGES.
0-4 DAS DE SNTOMAS

5-21 DAS DE SNTOMAS

RT-PCR TIEMPO REAL *

PRUEBAS SEROLGICAS

POSITIVO

NEGATIVO

REPORTAR

REPORTAR

CASO
CONFIRMADO

NEGATIVO
REPORTAR

POSITIVO
REPORTAR

CASO
CONFIRMADO

* En caso de agotarse los reactivos para RT-PCR Tiempo Real, las muestras sern analizadas mediante cultivo
celular, del cual se obtienen resultados entre los 14 a 30 das.

Versin 2013

NOTA: Los Laboratorios de la Red enviarn el 10% de muestras Negativas y Positivas para deteccin de anticuerpos
IgM e IgG y Antgeno NS1, adems las muestras agudas para vigilancia virolgica de acuerdo a lo establecido en
los lineamientos para la temporada baja y de brote de casos de dengue.

ALGORITMO DE LABORATORIO PARA EL DIAGNSTICO DE CHIKUNGUNYA EN EL ICGES

MUESTRAS ENVIADAS POR LAS INSTALACIONES DE SALUD A NIVEL NACIONAL AL
INSTITUTO CONMEMORATIVO GORGAS DE ESTUDIOS DE LA SALUD
CLASIFICACIN DE MUESTRAS

0-8 DAS DE SNTOMAS

Mayor o igual a 9 DAS DE SNTOMAS

(PRIMERA MUESTRA)

RT-PCR TIEMPO REAL

CHIK V *
POSITIVO

NEGATIVO

REPORTAR

REQUIERE
SEGUNDA
MUESTRA*

CASO
CONFIRMADO

ELISA IgM CASERA PARA CHIKV O COMERCIAL CON R.S

NEGATIVO
REQUIERE SEGUNDA
MUESTRA*

NEGATIVO
REPORTAR

POSITIVO
SOSPECHOSO

POSITIVO

SOSPECHOSO

REQUIERE SEGUNDA
MUESTRA*

NEGATIVO

INDETERMINADO

POSITIVO
CASO
CONFIRMADO

* LA SEGUNDA MUESTRA DEBE OBTENERSE DOS SEMANAS DESPUS DE TOMADA LA PRIMERA MUESTRA.

Versin 2014

Standard test: Deteccin de IgM e IgG

Sencilla
Gran cantidad de sueros
Diagnstico de rutina
Ampliamente distribuda
Diagnstico rpido
ELISA (formato ms comn)
Infeccin reciente
Serum
MUESTRAS

Saliva
Filter paper

IgM

La prueba de ELISA de captura contra Acs IgM para Dengue utilizada en la red no
distingue entre Infeccin primaria o secundaria.

Ig G

La prueba de ELISA de captura contra Acs IgG para Dengue utilizada en la red slo
es positiva en casos de Infeccin Secundaria.

MUESTRAS DEL DA 4 NO SE DEBEN PROCESAR EXCEPTO CASOS FATALES , GRAVES U

HOSPITALIZADOS.

LOS LINEAMIENTOS DE LABORATORIO SOLO APLICAN PARA LAS MUESTRAS NO PARA

MANEJO CLNICO.

CONTROL DE CALIDAD (ENVIAR AL ICGES):

10% DE MUESTRAS POSITIVAS Y NEGATIVAS EN EL DX DE ACS
10% DE POSITIVAS Y 10% DE NEGATIVAS EN EL DX DE NS1

VIGILANCIA VIROLGICA (ENVIAR AL ICGES):

EN TEMPORADA BAJA: TODAS LAS MUESTRAS AGUDAS (O-3 DAS DE SNTOMAS)
EN BROTE O EPIDEMIA: SLO EL % DE MUESTRAS QUE ESTIPULE EPIDEMIOLOGA.

ES OBLIGATORIO EL USO DEL FORMULARIO UNICO PUES CONTIENE VARIABLES

NECESARIAS PARA LA TOMA DE DECISIONES EN LA REALIZACIN DE LAS PRUEBAS DE
LABORATORIO.

SE REQUIERE UNA COMUNICACIN Y COORDINACIN PERMANENTE ENTRE

LABORATORIO, EPIDEMIOLOGA Y CLNICOS PARA EL ADECUADO USO DE LAS PRUEBAS
Y RECURSOS DE LA INSTALACIN.

ELISA IgM DE CAPTURA

-ELISA Casera (Protocolo del CDC)

ELISAs COMERCIALES (IgM, IgG)

-En proceso de registro sanitario

1. Coat With Goat

anti-Human IgM
4
Overnight
2. Add Patient
Serum @ 1:400
37 @ 1
Hour

Reaccin cruzada posible con otros

alfavirus (Mayaro, EEEV)
Confirmar muestras positivas con 2nda
muestra (y neutralizacin en placas)
Neutralization

3. Add Antigen
4 Overnight
HRP

HRP

4. Add HRP antigroup McAb

37 1 Hour

No neutralization

CHIK IgM Capture ELISA (P/N)

CHIK

VEE

MAY

EEE

12.3

0.89

1.9

1.2

10.6

1.1

1.9

1.3

14.5

1.1

3.1

0.89

20.4

1.5

7.1

1.8

26.6

2.2

1.7

1.5

21.2

2.2

1.2

1.6

15.3

1.6

1.9

2.2

31.3

1.7

2.9

1.8

22

1.8

1.4

1.4

18.8

1.2

1.5

1.1

34.3

1.6

2.8

9.1

Cortesa, Dr. Robert Lanciotii, DVBID, CDC-USA

Colaboracin con el CDC

 Cada 15 das se realiza genrico de alfavirus para

muestras con sospecha de dengue que resulten
negativas. Identificacin de CHIK
-RT-PCR en tiempo final genrico para Alfavirus (Sanchez-Seco
MP, J Virol Methods 2001;95:153-61)
-Secuenciacin y comparacin por BLAST

Diagnstico diferencial slo clnicamente indicado

La confirmacin etiolgica especfica de CHICK slo es

posible por tcnicas de laboratorio.
Las plataformas para vigilancia de dengue, permitirn la
deteccin y vigilancia de CHICK.

Los laboratorios deben implementar y fortalecer la

capacidad bsica para la deteccin viral (limitaciones de
ensayos serolgicos)
La deteccin de IgM en una sola muestra es presuntiva.
Una vez demostrada la circulacin autctona, no ser
necesario confirmar el 100% de los casos.
PAHO/OMS