DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN

AGUA RESIDUAL POR EL MTODO DEL NUMERO MAS

PROBABLE (NMP)

1. INTRODUCCION
Debido a que las aguas residuales son de
composicin variada provenientes de
descargas
de
usos
municipales,
industriales, comerciales, de servicios,
agrcolas,
pecuarios,
domsticos,
incluyendo fraccionamientos y en general
de cualquier uso, as como la mezcla de
ellas, contienen diferentes tipos de
microorganismos contaminantes y las
diferentes concentraciones, dependiendo
de su fuente. La variada poblacin de
microorganismos en esta agua, proviene del suelo y de origen intestinal,
incluyen aerobios y anaerobios estrictos y facultativos as como tambin
numerosos virus como: Poliovirus y virus de la hepatitis. Igualmente
pueden contener formas parasitarias variables como quistes de
Protozoarios y huevecillos de Helmintos (Metazoarios)
Asimismo, existe en nuestro pas el grave problema de contaminacin de
ros, lagos acuferos y costas debido a que estos son utilizados como
depsito de todos los desechos generados por las actividades humanas.
Estos microorganismos pueden sobrevivir al tratamiento, por lo que su
reso p.ej., en riego agrcola, actividades recreativas: Aguas de piscinas,
baos de hidromasaje, aguas potables naturales, actividades pisccolas y
aguas marinas superficiales (playas), representan un riesgo potencial a
la salud pblica.
La presencia y extensin de contaminacin fecal es un factor importante
en la determinacin de la calidad de un cuerpo de agua. Las heces
contienen una variedad de microorganismos y formas de resistencia de
los mismos, involucrando organismos patgenos, los cuales son un
riesgo para la salud pblica al estar en contacto con el ser humano. El
examen de muestras de agua para determinar la presencia de
microorganismos del grupo coliforme que habitan normalmente en el
intestino humano y de otros animales de sangre caliente, da una

indicacin, pues dada la limitada capacidad de algunos miembros del

grupo de organismos coliformes para sobrevivir en agua; sus nmeros
tambin pueden emplearse para estimar el grado de contaminacin
fecal.
Son Organismos coliformes aquellos
capaces de crecimiento aerbico ya sea
35 37 1C en un medio de cultivo
lquido lactosado con produccin de acido
y gas dentro de un periodo de 48 h. El
mtodo de la NPM es un mtodo robusto
por lo que puede aplicarse en cualquier
tipo de agua, an aquellos que contienen
gran cantidad de materia orgnica. Para la
determinacin del NMP de Coliformes
Totales y Fecales en este tipo de aguas, es
necesario proceder a preparar diluciones decimales de la muestra,
debido a que se espera que la concentracin de coliformes sea superior
en stas que en un agua potable. El nmero de diluciones vara mucho,
dependiendo del origen de la muestra a tratar. Por lo dems, para su
anlisis de procede en la misma forma que para una muestra de agua
potable.
2.TECNICA PRUEBA PRESUNTIVA

Todas las operaciones debern efectuarse en absolutas

condiciones de asepsia. . Agitar vigorosamente la muestra por lo
menos 20 veces para lograr una distribucin uniforme de los
microorganismos.
Dependiendo del origen de la
muestra y el contenido bacteriano
esperado preparar diluciones.
Para preparar las diluciones, con una
pipeta estril tomar una alcuota de 1
mL de la muestra original y llevarlo a
uno de los tubos conteniendo 9 mL
de
agua
de
dilucin
estril,
obteniendo de esta manera una
dilucin de 10-1
Agitar el tubo de la dilucin 10-1 y
con otra pipeta estril tomar una alcuota de 1 mL y llevarlo a otro

tubo con 9 mL de agua de dilucin estril para obtener una

dilucin de 10-2
Proceder de la misma manera hasta obtener una dilucin de 10-3
o hasta donde sea necesario.
Inocular aspticamente con 1 mL de muestra por triplicado, tubos
de fermentacin conteniendo caldo lactosado o caldo lauril
triptosa, a partir de las ltimas 3 diluciones y conservar todas las
anteriores en refrigeracin por si se requiere su utilizacin
posterior.
Incubar todos los tubos a una temperatura de 35 C durante
24horas.
Despus de 24 horas de incubacin efectuar una primera lectura
para observar si hay tubos positivos, es decir, con produccin de
cido, si el medio contiene un indicador de pH, turbidez y
produccin de gas en el interior de la campana Durham.
Al hacer esta verificacin es importante asegurarse que la
produccin de gas sea resultado de la fermentacin de la lactosa,
en cuyo caso se observar turbidez en el medio de cultivo, y no
confundir con burbujas de aire.
Para evitar este tipo de confusiones es recomendable revisar las
campanas Durham antes de proceder a la inoculacin y desechar
aquellos tubos cuyas campanas contengan burbujas de aire de
alguna manera eliminar stas y as poder utilizarlos.
De los tubos que en la primera lectura den positivos, ya se pueden
hacer las pruebas confirmatorias para coliformes totales y
coliformes fecales.
En caso de no apreciarse crecimiento en el resto de los tubos,
continuarn en incubacin 24 horas ms.
Despus de 48 horas ( 2h) a partir de la inoculacin, se hace la
lectura final.
Si pasadas 48 h tampoco se aprecia crecimiento ni produccin de
gas, los tubos se toman como negativos.

INTERPRETACIN:
Si el total de tubos son NEGATIVOS:
El examen se da por terminado,
reportando
la
AUSENCIA
DE
COLIFORMES TOTALES Y FECALES
en la muestra analizada.
Todos aquellos tubos que den
POSITIVOS para prueba presuntiva

se anotarn convenientemente y se proceder a realizar la

PRUEBA CONFIRMATORIA para Coliformes Totales y Fecales.
3. PRUEBA CONFIRMATORIA PARA COLIFORMES TOTALES:
A partir de cada uno de los tubos que han resultado positivos en
la prueba presuntiva, agitndolos para homogeneizar, inocular
con tres asadas tubos conteniendo caldo Lactosa Bilis Verde
Brillante (LBVB).
Incubar durante 48 3 h a 35 0.5 C. 3. Despus de la
incubacin observar la presencia de turbidez y de gas.
INTERPRETACIN:
Si se observa turbidez y produccin de gas: La prueba se considera
POSITIVA, debiendo anotar el nmero de tubos positivos para
posteriormente hacer el clculo del NMP.
Si en ninguno de los tubos se observa produccin de gas, aun
cuando se observe turbidez: Se consideran NEGATIVOS,
establecindose el Cdigo 0,0,0 para efecto del clculo del NMP
Si todos los tubos dan negativos todos dan positivos, con base
en los grados de dilucin analizados, considerar la necesidad de
repetir el anlisis a partir de grados de dilucin menores (mayores
volmenes de muestra) mayores (menores volmenes de
muestra), respectivamente