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HEMATOLOGIE ET HEMOSTASE

HEMATOLOGIE
Groupage sanguin ABO-RH1 (RhD)
Lucienne MANNESSIER. EFS Nord de France. Site de Lille.
Dtermination des autres antignes rythrocytaires (phnotypage tendu)
Lucienne MANNESSIER. EFS Nord de France. Site de Lille.
Biopsie mdullaire
Jean-Marie GIRARDEL CH BELFORT-MONTBELIARD
Cytogntique sanguine et/ou mdullaire
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Epreuve directe de compatibilit au laboratoire (EDC)
Lucienne MANNESSIER. EFS Nord de France. Site de Lille.
Recherche de drpanocytes - Test de falciformation
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Facteur II ou Prothrombine (mesure de lactivit)
Franois DEPASSE - LCL
Facteur V ou Proacclrine (mesure de lactivit)
Franois DEPASSE - LCL
Facteur VII ou Proconvertine (mesure de lactivit)
Franois DEPASSE - LCL
Facteur VIII ou FACTEUR ANTI-HEMOPHILIQUE A (mesure de lactivit)
Franois DEPASSE - LCL
Facteur X ou Facteur Stuart (mesure de lactivit)
Franois DEPASSE - LCL
FIBRINOGENE FONCTIONNEL
Franois DEPASSE - LCL
Corps de HEINZ
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Hmaties ftales
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Populations lymphocytaires immunophnotypage
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Mylogramme
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Hmogramme (Numration formule sanguine)
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Numration plaquettaire isole
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Phnotypage rythrocytaire RH-KEL1 (RH-KELL)
Lucienne MANNESSIER. EFS Nord de France. Site de Lille.
Phosphatases alcalines leucocytaires
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Recherche, identification, titrage et dosage pondral des anticorps anti-rythrocytaires (RAI)
Lucienne MANNESSIER - EFS Nord de France, Site de Lille.
Rticulocytes
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD
Temps de cphaline + activateur (TCA)
Franois DEPASSE - LCL

Temps de thrombine
Franois DEPASSE - LCL
Test direct lantiglobuline (TDA)
Lucienne MANNESSIER. EFS Nord de France. Site de Lille.
Taux de prothrombine Temps de quick INR
Franois DEPASSE - LCL
Vitesse de sdimentation
Jean-Marie GIRARDEL - CH BELFORT-MONTBELIARD

HEMOSTASE

ACTIVITE ANTI-Xa
Franois DEPASSE - LCL
D-DIMERES
Franois DEPASSE - LCL
FACTEUR WILLEBRAND
Franois DEPASSE - LCL
RESISTANCE A LA PROTEINE C ACTIVEE
Franois DEPASSE - LCL
TEMPS DE SAIGNEMENT - TEMPS DOCCLUSION PLAQUETTAIRE
Franois DEPASSE - LCL

GROUPAGE SANGUIN ABO-RH1 (RhD)


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques
Le groupage sanguin ABO-RH1 coupl au phnotype RH-KEL1 est obligatoire avant toute transfusion
avre ou potentielle, chez la femme enceinte et le nouveau-n issu dune mre RH :-1 (RhD ngatif).

BIOPATHOLOGIE
Lge : chez le nouveau-n, les antignes ABO sont mal dvelopps et les anticorps anti-ABO sont
absents. De mme chez le sujet g les antignes ABO et les anticorps anti-ABO peuvent tre
affaiblis.
Lge de la grossesse : une hmorragie foeto-maternelle peut fausser le groupage RH1.
La pathologie du patient (AHAI, maladies des agglutinines froides, mylome, Waldenstrm) peut
entraner de fausses ractions positives ou ngatives lors du groupage sanguin ABO-RH1
Les traitements en cours doivent tre signals car certains mdicaments peuvent entraner une
auto-immunisation, des phnomnes de rouleaux pouvant perturber le groupage ABO-RH1.
Une image de double population peut tre observe en raison de transfusion non isogroupe ou
dexsanguino-transfusion, de greffe de moelle osseuse ou de cellules souches. Le groupage
sanguin ABO-RH1 doit tre ralis distance des transfusions (3 4 mois), la date de la
transfusion doit donc tre mention
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
La dtermination du groupe sanguin ABO-RH1 doit imprativement tre ralise sur un chantillon
de sang prlev sur anticoagulant : citrate ou EDTA sec (en raison de lautomation) et en quantit
suffisante pour pouvoir effectuer
Prlvement
Contraintes : aucune.
Des contrles et des examens complmentaires.
Pour tre valide, un groupage sanguin ABO-RH1 doit tre effectu sur 2 prlvements effectus
des moments rellement diffrents.
Cas particulier des nouveau-ns : le bon de demande dexamen doit mentionner en plus lidentit
complte de la mre et son statut immuno-hmatologique (groupes sanguins ABO-RH1,
phnotypes RH-KEL1, rsultat et date de la dernire RAI).
Les rsultats antrieurs des typages rythrocytaires doivent tre fournis si le laboratoire na pas
effectu les premires analyses.
Particularits
Le sang du nouveau-n prlev au cordon risque dtre contamin par du sang maternel, ou
souill par de la gele de Wharton entranant de fausses ractions positives ou encore contenir
des caillots rendant impossible lautomation de lanalyse.
Une agglutination faible ou absente lors du groupage sanguin ABO peut tre observe aprs une
transfusion incompatible ABO, ou lors de certaines hmopathies malignes.
Les prlvements hmolyss sont viter, car la lyse affaiblie les ractions dagglutination et les
rend difficiles interprter.
Transmission
Le groupage sanguin ABO-RH1 est dtermin sur un prlvement strile de moins de 7 jours et
conserv dans de bonnes conditions +4C.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

DETERMINATION DES AUTRES ANTIGENES


ERYTHROCYTAIRES (PHENOTYPAGE ETENDU)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.
La dtermination des autres antignes rythrocytaires, en particulier, ceux possdant un fort pouvoir
immunogne et correspondant au phnotype tendu : FY1 (Fya), FY2 (Fyb), JK1 (Jka), JK2 (Jkb), MNS3 (S)
et MNS4 (s) (si possible) est obligatoire dans les cas dallo-immunisation complexe, propos, titre
prventif, chez certains polytransfuss itratifs et linitiative du biologiste lors de lidentification dun
anticorps anti-rythrocytaire.

BIOPATHOLOGIE
La pathologie du patient (AHAI, maladies des agglutinines froides, mylome, Waldenstrm) peut
entraner de fausses ractions positives ou ngatives lors du phnotypage rythrocytaire du
patient.
Les traitements en cours doivent tre indiqus car certains mdicaments peuvent entraner une
auto-immunisation, des phnomnes de rouleaux pouvant perturber la dtermination des divers
antignes rythrocytaires.
Une image de double population peut tre observe en raison de transfusion non isogroupe ou
dexsanguino-transfusion, de greffe de moelle osseuse ou de cellules souches. Le phnotypage
rythrocytaire doit tre ralis distance des transfusions (3 4 mois), la date de la transfusion
doit donc tre mentionne.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
La dtermination doit imprativement tre ralise sur un chantillon de sang prlev sur
anticoagulant : citrate ou EDTA sec (en raison de lautomation) et en quantit suffisante pour
pouvoir effectuer des contrles et des examens complmentaires.
Prlvement
Contraintes : aucune.
Pour tre valide, un phnotype tendu doit tre effectu sur 2 prlvements effectus des
moments rellement diffrents.
Cas particulier des nouveau-ns : le bon de demande dexamen doit mentionner en plus lidentit
complte de la mre et son statut immuno-hmatologique (groupes sanguins ABO-RH1,
phnotypes rythrocytaires, rsultat et date de la dernire RAI).
Les rsultats antrieurs des groupages sanguins ABO-RH1 et phnotypages rythrocytaires
doivent tre fournis si le laboratoire na pas effectu les premires analyses.
Particularits
Le sang du nouveau-n prlev au cordon risque dtre contamin par du sang maternel, ou
souill par de la gele de Wharton entranant de fausses ractions positives ou encore contenir
des caillots rendant impossible lautomation de lanalyse
Les prlvements hmolyss sont viter, car la lyse affaiblie les ractions dagglutination et les
rend difficiles interprter
La dtermination du phnotype tendu est couple au groupage sanguin ABO-RH1 et au
phnotypage RH-KEL1 lors dun bilan pr-transfusionnel ou pr-natal.
Transmission
Le phnotypage tendu est ralis sur un prlvement strile de moins de 7 jours et conserv
dans de bonnes conditions +4C
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels

BIOPSIE MEDULLAIRE
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Prciser les traitements en cours, en particulier toxiques, anticoagulants.
Prescription motive et/ou concerte : la biopsie est indique chaque fois quil y a suspicion dun
dfaut ou dun dficit de la synthse mdullaire : aplasie, hmopathie, polycythmie,
immunoglobulinopathies .
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Fragment dos spongieux, forme dune zone corticale et dune zone mdullaire recueillie dans le
liquide de fixation.
Prlvement
Acte mdico-chirurgical effectu laide dun trocard de YAMSHIDI usage unique, au niveau
dune crte iliaque, aprs anesthsie locale.
Particularits
La connaissance dun hmogramme contemporain est ncessaire.
La PBO est contre-indique chez les patients sous anticoagulants ou thrombopniques svres.
Lors de la PBO, si le biologiste neffectue pas lui-mme la ponction, sa prsence est souhaitable
pour raliser des empreintes mdullaires avant la fixation du fragment osseux
Transmission
Dans les plus brefs dlais au laboratoire danatomocytopathologie.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

CYTOGENETIQUE SANGUINE et/ou MEDULLAIRE


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Prescription motive et concerte dun caryotype
Hmopathie
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total ou matriel mdullaire prlevs sur Hparine
Prlvement
Dans des conditions dasepsie optimales
Le prlvement mdullaire est un geste mdical
Particularits
Pour tre tudie et interprte dans de bonnes conditions, la cellularit concerne par le
caryotype,
doit tre suffisante, contrle par un hmogramme ou un mylogramme
contemporains.
Transmission
Les chantillons doivent tre transmis dans les 24 heures, la temprature ambiante,
accompagns de la fiche de suivi mdical et de l hmogramme et/ou du mylogramme
correspondant.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

EPREUVE DIRECTE DE COMPATIBILITE AU LABORATOIRE (EDC)


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.
LEDC dunits de sang phnotyp RH-KEL1 a minima est obligatoire chez tout patient prsentant ou ayant
prsent un ou plusieurs allo-anticorps anti-rythrocytaires. Elle doit tre pratique de faon scurise vis
vis de la tubulure correctement identifie du concentr globulaire antigno-compatible avec les anticorps du
patient. En cas de RAI positive, les anticorps doivent donc tre identifis extemporanment, afin de choisir
des units de sang qualifies phnotypes et dpourvues de lantigne correspondant aux anticorps
identifis.

BIOPATHOLOGIE
La frquence des RAI positives augmente chez les femmes enceintes multipares ainsi quau cours
du dernier trimestre de la grossesse, chez les polytransfuss et dans certaines pathologies comme
les connectivites, les cirrhoses
La pathologie du patient (AHAI, maladies des agglutinines froides, mylome, Waldenstrm) peut
entraner de fausses ractions positives lors de la RAI et de lEDC.
Les traitements en cours doivent tre signals car certains mdicaments peuvent entraner une
auto-immunisation, des phnomnes de rouleauxpouvant perturber lEDC.
Linjection d immunoglobuline anti-D avec la date doit tre mentionne.
Les transfusions incompatibles peuvent neutraliser partiellement ou totalement les anticorps
ventuellement prsents. La notion de transfusion avec la date doit tre mentionne.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
LEDC doit tre ralise sur un chantillon de sang prlev sur anticoagulant : citrate ou EDTA sec
et en quantit suffisante pour pouvoir effectuer des contrles et examens complmentaires.
Prlvement
Contraintes : aucune.
Cas particulier des nouveau-ns : le bon de demande dexamen doit mentionner en plus lidentit
complte de la mre et son statut immuno-hmatologiques (groupes sanguins ABO-RH1,
phnotypes RH-KEL1, rsultat et date de la dernire RAI).
Les rsultats antrieurs de RAI doivent tre fournis si le laboratoire na pas effectu les analyses
antrieures ou si lidentit nest pas strictement identique celle fournie antrieurement.
Particularits
Les prlvements hmolyss sont viter, car la lyse affaiblie les ractions dagglutination et les
rend difficiles interprter
Transmission
La RAI doit tre pratique extemporanment sur le mme prlvement strile (et non pipet) de
moins de 3 jours et conserv dans de bonnes conditions +4C
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

RECHERCHE DE DREPANOCYTES
TEST DE FALCIFORMATION
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Origine gographique : la drpanocytose est prsente dans 5 20 % des populations originaires
dAfrique occidentale et dAfrique centrale et dans quelques familles des Antilles et du pourtour
mditerranen.
Manifestations microthrombotiques
Anmies hmolytiques
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total EDTA.
Prlvement
Serrage garrot limit afin dviter une hmoconcentration.
Le jene est inutile, laugmentation post-prandiale des hmaties restant modre par rapport aux
fourchettes de normalit.
Particularits
La drpanocytose est observe dans des rgions dendmie palustre. Lhmoglobine S nest pas
favorable au dveloppement du plasmodium falciparum.
Transmission
Dans les 3 4 heures temprature ambiante.
Eviter les chocs thermiques et mcaniques
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FACTEUR II ou PROTHROMBINE
(mesure de lactivit)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Variation de lactivit avec lge : les taux de facteur II sont plus bas chez le nouveau-n terme
ou prmatur. Les valeurs de ladulte sont atteintes entre lge de six mois et lge dun an. Les
taux de facteur II sont augments au cours de la grossesse et des traitements oestro-progestatifs.
Le facteur II est un facteur vitamine K dpendant : les taux sont abaisss en cas de carence en
vitamine K ou de traitement AVK. Les taux de facteur II sont abaisss en cas dinsuffisance
hpato-cellulaire et de CIVD (coagulation intra-vasculaire dissmine).
Il a t montr lchelon de groupes de patients dfinis que les taux de facteur II sont plus levs
chez les sujets porteurs de la mutation G20210A du gne de la prothrombine que chez les sujets
normaux (il existe nanmoins un recouvrement important entre les deux populations, ce qui rend le
dosage du facteur II inutilisable en pratique comme test de dpistage de la prsence de cette
mutation).
Renseignements cliniques indispensables
- diagnostic dun syndrome hmorragique
- exploration systmatique suite une anomalie du temps de Quick
- enqute familiale
- diagnostic dune carence en vitamine K ou dune intoxication par les AVK
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillons
Le dosage est ralis exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu
par ponction veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] dIngram volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Lutilisation de tubes en matire plastique est
possible si elle a t valide (lutilisation de polypropylne serait prfrable celle du polystyrne).
La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont
t incrimins pour certains tests (TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.

Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu chez le patient en position couche depuis 30 minutes. Cette
prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en position
assise.
Lchantillon de sang destin au dosage du facteur II doit tre prlev aprs coulement des
premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Le dosage est coupl celui du temps de Quick (ou taux de prothrombine) et, le cas chant,
celui des autres facteurs de la voie extrinsque (V, VII, X) ou des autres facteurs vitamine K
dpendants (VII, IX, X), un bilan de CIVD (facteurs V et VII, PDF / D-dimres, numration du
chiffre de plaquettes) ou biochimique dinsuffisance hpato-cellulaire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Tubes conservs bouchs temprature ambiante.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FACTEUR V ou PREACCELERINE
(Mesure de lactivit)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Les taux de facteur V sont augments au cours de la grossesse. Ils sont abaisss en cas
dinsuffisance hpato-cellulaire et de CIVD (coagulation intra-vasculaire dissmine).
Renseignements cliniques indispensables :
- diagnostic dun syndrome hmorragique
- exploration systmatique suite une anomalie du temps de Quick
- enqute familiale
- suivi des atteintes hpatiques
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Le dosage est ralis exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu
par ponction veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Lutilisation de tubes en matire plastique est
possible si elle a t valide (lutilisation de polypropylne serait prfrable celle du polystyrne).
La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont
t incrimins pour certains tests (TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lchantillon de sang destin au dosage du facteur II doit tre prlev aprs coulement des
premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.

Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu chez le patient en position couche depuis 30 minutes. Cette
prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en position
assise.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Le dosage est coupl celui du temps de Quick (ou taux de prothrombine) et, le cas chant,
celui des autres facteurs de la voie extrinsque (II, VII, X), un bilan de CIVD (facteurs II et VII,
PDF / D-dimres, numration du chiffre de plaquettes) ou biochimique dinsuffisance hpatocellulaire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Tubes conservs bouchs temprature ambiante.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FACTEUR VII ou PROCONVERTINE


(mesure de lactivit)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Variation de lactivit avec lge : les taux de facteur VII sont plus bas chez le nouveau-n terme
ou prmatur. Les valeurs de ladulte sont atteintes entre lge de six mois et lge dun an.
Les taux de facteur VII sont augments au cours de la grossesse et des traitements oestroprogestatifs. Le facteur VII est un facteur vitamine K dpendant : les taux sont abaisss en cas de
carence en vitamine K ou de traitement AVK. Les taux de facteur VII sont abaisss en cas
dinsuffisance hpato-cellulaire et de CIVD (coagulation intra-vasculaire dissmine).
Renseignements cliniques indispensables :
- diagnostic dun syndrome hmorragique,
- exploration systmatique suite une anomalie du temps de Quick,
- enqute familiale,
- diagnostic dune carence en vitamine K ou dune intoxication par les AVK.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Le dosage est ralis exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu
par ponction veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%) dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de
sang prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte.
Lutilisation de tubes en verre silicon est recommande. Lutilisation de tubes en matire plastique
est possible si elle a t valide (lutilisation de polypropylne serait prfrable celle du
polystyrne). La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes
remplissage partiel ont t incrimins pour certains tests (TCA) et doivent donc tre vits dans
lattente dtudes plus compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lchantillon de sang destin au dosage du facteur II doit tre prlev aprs coulement des
premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine, dipyridamole).
Tout autre anticoagulant est proscrit.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant

Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu chez le patient en position couche depuis 30 minutes .Cette
prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en position
assise.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Le dosage est coupl celui du temps de Quick (ou taux de prothrombine) et, le cas chant,
celui des autres facteurs de la voie extrinsque (II, V, X) ou des autres facteurs vitamine K
dpendants (II, IX, X), un bilan de CIVD (facteurs II et V, PDF / D-dimres, numration du chiffre
de plaquettes) ou biochimique dinsuffisance hpato-cellulaire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Tubes conservs bouchs temprature ambiante.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FACTEUR VIII ou FACTEUR ANTI-HEMOPHILIQUE A


(mesure de lactivit)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Variation de lactivit avec lge : les taux de facteur VIII sont levs au moment de la naissance et
se normalisent vers le 10me jour de vie. Les taux de facteur VIII sont augments au cours de la
grossesse et des traitements oestro-progestatifs. Les taux de facteur VIII sont abaisss en cas
dhmophilie A, dans la plupart des formes de maladie de Willebrand (diagnostic diffrentiel) et en
cas dinhibiteur spcifique dirig contre le facteur VIII (anti-VIII)
Renseignements cliniques indispensables :
- diagnostic dun syndrome hmorragique
- exploration systmatique suite une anomalie du temps de cphaline + activateur
- enqute familiale
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillons
Le dosage est ralis exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu
par ponction veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)].
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Lutilisation de tubes en matire plastique est
possible si elle a t valide (lutilisation de polypropylne serait prfrable celle du polystyrne).
La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont
t incrimins pour certains tests (TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lchantillon de sang destin au dosage du facteur II doit tre prlev aprs coulement des
premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu chez le patient en position couche depuis 30 minutes. Cette
prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en position
assise.

Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie
Le dosage est coupl la mesure du temps de cphaline + activateur ou la recherche
danticoagulant circulant et, le cas chant, celui des autres facteurs de la voie intrinsque (IX,
XI, XII) et, ventuellement du facteur Willebrand.
Selon la cphaline utilise pour le dosage, une interfrence plus ou moins importante peut
abaisser artificiellement le rsultat de la mesure du taux de facteur VIII en prsence dun
anticoagulant circulant de type lupique (antiphospholipides) : devant un rsultat abaiss, le dosage
doit tre rpt sur des dilutions plus importantes du plasma tester afin de tenter de lever cette
interfrence.
Un taux anormalement bas de facteur VIII chez un patient sans antcdent hmorragique doit faire
suspecter la prsence dun inhibiteur spcifique dirig contre le facteur VIII qui ncessite une prise
en charge immdiate par un centre dhmophilie (dautant plus que le patient a des hmatomes ou
de saignements)
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Tubes conservs bouchs temprature ambiante.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FACTEUR X ou FACTEUR STUART


(mesure de lactivit)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Variation de lactivit avec lge : les taux de facteur X sont plus bas chez le nouveau-n terme
ou prmatur. Les valeurs de ladulte sont atteintes entre lge de six mois et lge dun an.
Les taux de facteur X sont augments au cours de la grossesse.
Le facteur X est un facteur vitamine K dpendant : les taux sont abaisss en cas de carence en
vitamine K ou de traitement AVK.
Les taux de facteur X sont abaisss en cas dinsuffisance hpato-cellulaire et de CIVD
(coagulation intra-vasculaire dissmine).
Renseignements cliniques indispensables :
- diagnostic dun syndrome hmorragique
- exploration systmatique suite une anomalie du temps de Quick
- enqute familiale
- diagnostic dune carence en vitamine K ou dune intoxication par les AVK
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Le dosage est ralis exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu
par ponction veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)]ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande.
Dans tous les cas : respecter le volume de sang prlever. Une tolrance de 10% par rapport au
volume nominal peut tre accepte. Lutilisation de tubes en verre silicon est recommande.
Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne
serait
prfrable

celle
du
polystyrne).
La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont
t incrimins pour certains tests (TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lchantillon de sang destin au dosage du facteur II doit tre prlev aprs coulement des
premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.

Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris. Le
prlvement est effectu chez le patient en position couche depuis 30 minutes. Cette prcaution
est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en position assise.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl celui du temps de Quick (ou taux de prothrombine) et, le cas chant,
celui des autres facteurs de la voie extrinsque (II, V, VII) ou des autres facteurs vitamine K
dpendants (II, VII, IX) ou biochimique dinsuffisance hpato-cellulaire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Tubes conservs bouchs temprature ambiante.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FIBRINOGENE FONCTIONNEL
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Le taux de fibrinogne augmente progressivement au cours de la grossesse.
Le taux de fibrinogne fonctionnel est abaiss dans les hypofibrinognmies (dans lesquelles le
taux de fibrinogne antigne est abaiss dans les mmes proportions que lactivit) et dans
dysfibrinognmie (dans lesquelles le taux de fibrinogne antigne est normal, mais lactivit
abaisse). Le taux de fibrinogne est abaiss en cas dinsuffisance hpato-cellulaire ou de CIVD
(coagulation intra-vasculaire dissmine). Le taux de fibrinogne est abaiss au cours de
traitements thrombolytiques. Le taux de fibrinogne augmente au cours des syndromes
inflammatoires. Le taux de fibrinogne augmente au cours des syndromes nphrotiques. le taux
de fibrinogne est augment chez les patients VIH sro-positifs et plus encore chez les patients
infects par le VIH.
Renseignements cliniques indispensables :
- diagnostic dun syndrome hmorragique
- bilan systmatique ou pr-opratoire
- insuffisance hpato-cellulaire
- CIVD
- autres, la discrtion du clinicien
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Dosage exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne serait prfrable celle du polystyrne) La taille du tube doit tre adapte au
volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour certains tests (en
particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).

Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Lchantillon de sang destin la mesure du fibrinogne doit tre prlev aprs coulement des
premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de mico-caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl le cas chant, celui du taux de prothrombine, du TCA, un bilan de CIVD
(facteurs V et VII, PDF / D-dimres, numration du chiffre de plaquettes) ou biochimique
dinsuffisance hpato-cellulaire ou de syndrome inflammatoire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Les tubes sont conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans
des limites acceptables.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C. Lanalyse doit tre
effectue dans les quatre heures suivant le prlvement.En cas danalyse diffre, le plasma peut
tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une dure infrieure une
semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

CORPS de HEINZ
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Exploration tiologique de certaines anmies hmolytiques et intoxications.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total prlev sur EDTA.
Prlvement
Serrage garrot limit afin dviter une hmoconcentration.
Le jene est inutile, laugmentation post-prandiale des hmaties restant modre par rapport aux
fourchettes de normalit.
Particularits
Demande couple un hmogramme
Transmission
Pas dexigences particulires
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

HEMATIES FOETALES
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Grossesses antrieures
Injection dImmunoglobulines anti D
Groupe sanguin et phnotype Rhsus
Agglutinines irrgulires
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang prlev sur EDTA
Prlvement
Sang veineux (quantit rduite tube pdiatrique)
Frottis sanguin extemporan possible
Particularits
Examen pratiqu en fin de grossesse ou dans les 3 premiers jours du post-partum.
Dosage pondral Ig anti-D associ.
Transmission
Conservation +4 plusieurs jours avant coloration
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

POPULATIONS LYMPHOCYTAIRES
IMMUNOPHENOTYPAGE
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Des variations circadiennes importantes sont mises en vidence pour les populations
lymphocytaires T et B normales.
Ces variations circadiennes peuvent tre modifies chez les sujets VIH + et par la thrapie
antirtrovirale pour les sujets VIH.
Lge, le stress, le nyctmre peuvent modifier le rapport CD4/CD8.
Prescription motive et concerte, accompagne dune demande dHmogramme.
Hmopathie
Statut VIH
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total prlev sur EDTA
Prlvement
A horaire fixe au cours du suivi des patients, si possible le matin 8 heures
Serrage du garrot limit.
Particularits
Accompagner lchantillon du rsultat dun hmogramme contemporain du prlvement.
Transmission
A la temprature ambiante dans les 24 heures
Les chantillons prlevs pour immunophnotypage sont stables 30 heures la temprature
ambiante.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

MYELOGRAMME
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Prciser les traitements en cours, en particulier avec toxicit mdullaire. Anticoagulants.
Transfusion rcente (hmodilution possible)
Prescription motive et/ou concerte :
Hmopathies anmie, aplasie, hmolyse, polycythmie, dysglobulinmie, Leishmaniose
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Etalements et / ou crasements extemporans de matriel mdullaire sur lame
Matriel mdullaire prlev sur une goutte dEDTA (facultatif)
Prlvement
Acte mdical pratiqu selon protocole clinico-biologique prcis sur chaque site (anesthsie locale
facultative)
Le prleveur doit savoir effectuer des frottis impeccables, sinon il doit solliciter le concours du
laboratoire
Des trocarts usage unique sont obligatoires chez les patients quil y ait certitude, suspicion ou
mconnaissance du statut VIH+ VHC+ ou infectieux.
Particularits
Prciser les intolrances liode et aux anesthsiques locaux.
Le mylogramme est dconseill chez les patients hypocoaguls.
Le mylogramme est contre-indiqu en cas de dfibrination.
La connaissance dun hmogramme contemporain est indispensable pour linterprtation dun
mylogramme
La ponction sternale est risque voire dangereuse chez lenfant avant 8 ans ; dautres points de
ponctions (pilon tibial avant 6 mois, apophyses pineuses et crtes iliaques sont prfrables)
Il faut tre prudent lors de ponctions sternales (ostoporose) chez le sujet g.
Transmission
Les talements-crasements extemporans ou le matriel mdullaire prlev sur EDTA doivent
tre transmis le plus rapidement possible au laboratoire.
Les frottis raliss extemporanment sont identifis, placs labri de tout contact extrieur, et
transmis rapidement au laboratoire.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

HEMOGRAMME
(NUMERATION FORMULE SANGUINE)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Age : les variations de la leucocytose et de lhmoglobine sont importantes chez lenfant avec une
hyperleucocytose avec polynuclose chez le nouveau-n ; prdominance lymphocytaire un an et
modification progressive jusquaux chiffres de ladulte vers 12 ans. Variations importantes de
lhmoglobine chez lenfant avec augmentation notable chez le nouveau-n, diminution entre 3 et 6
mois et remonte jusquau chiffre adulte avec stabilisation entre 10 et 12 ans sans quil y ait une
limite dge stricte.
Sexe : lhmoglobine est physiologiquement plus basse chez la femme.
Grossesse : Lhmoglobine est physiologiquement abaisse de 0,5 g/ pendant la grossesse. La
leucocytose slve au cours du 3me trimestre avec polynuclose.
Origine gographique :
- On constate une neutropnie modre chez les noirs dAfrique, des Carabes et
chez les juifs ymnites.
- En dehors des hmoglobinopathies et hmoglobinoses avres, une polyglobulie
microcytaire peut tre observe chez les populations originaires du pourtour
mditerranen.
Des augmentations importantes de lhmoglobine sont possibles en altitude, proportionnelles
laltitude et la dure du sjour.
Modifications induites : Un exercice physique intense peut entraner une lvation du nombre
des globules rouges et de la leucocytose.
Les chiffres de la leucocytose slvent au cours du stress, pendant lexposition au froid, la
tachycardie paroxystique, lexposition au soleilet aux rayons UV.
Laugmentation de la leucocytose avec polynuclose est possible chez les fumeurs.
Laugmentation du VGM est frquente dans lthylisme chronique.
Traitement et surveillance thrapeutique :
Transfusions rcentes
Saignes thrapeutiques rcentes
Mdicaments cytopniants
Facteurs de croissance mdullaire (GCSF EPO)
Renseignements cliniques :
Etat fbrile
Organomgalie
Hmopathie connue
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total prlev sur EDTA
Prlvement
Serrage garrot limit afin dviter une hmoconcentration.
Vrifier labsence de micro-caillots
Le jene est inutile, laugmentation post-prandiale des leucocytes et des plaquettes reste modre
par rapport aux fourchettes de normalit.
Particularits
Homogniser par retournements successifs du tube sitt le prlvement.
Transmission
Dans les 3 4 heures temprature ambiante, les paramtres restant parfaitement stables 6
heures aprs le prlvement.
Eviter les chocs thermiques et mcaniques.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

NUMERATION PLAQUETTAIRE ISOLEE


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Transfusions plaquettaires rcentes
Mdicaments cytopniants
Etat fbrile
Organomgalie
Hmopathie thrombopniante ou thrombocythmique
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total prlev sur EDTA
Sang total prlev sur citrate : mention obligatoire car le citrate induit une dilution.
Prlvement
Serrage garrot limit afin dviter une hmoconcentration.
Le jene est inutile, laugmentation post-prandiale des leucocytes et des plaquettes restant
modre par rapport aux fourchettes de normalit
Particularits
La numration plaquettaire, bien quelle puisse tre prescrite isolment, est le plus souvent
couple une numration sanguine formule leucocytaire (hmogramme)
Vrification microscopique des plaquettes si il y a un doute sur les rsultats.
Transmission
Dans les 3 4 heures temprature ambiante, les paramtres restant parfaitement stables. 6
heures aprs le prlvement.
Eviter les chocs thermiques et mcaniques.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

PHENOTYPAGE ERYTHROCYTAIRE RH-KEL1 (Rh-Kell)


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.

Le phnotypage RH-KEL1 coupl au groupage sanguin ABO-RH1 est obligatoire avant toute
transfusion avre ou potentielle, chez la femme enceinte, chez les polytransfuss et linitiative
du biologiste lors de lidentification dun anticorps anti-rythrocytaire.
BIOPATHOLOGIE
La pathologie du patient (AHAI, maladies des agglutinines froides, mylome, Waldenstrm) peut
entraner de fausses ractions positives ou ngatives lors du phnotypage rythrocytaire du
patient.
Les traitements en cours doivent tre signals car certains mdicaments peuvent entraner une
auto-immunisation, des phnomnes de rouleauxpouvant perturber le phnotypage RH-KEL1.
Une image de double population peut tre observe en raison de transfusion non isogroupe ou
dexsanguino-transfusion, de greffe de moelle osseuse ou de cellules souches. Le phnotypage
RH-KEL1 doit tre ralis distance des transfusions (3 4 mois), la notion de transfusion avec la
date doit donc tre mentionne.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
La dtermination du phnotype RH-KEL1 doit imprativement tre ralise sur un chantillon de
sang prlev sur anticoagulant : citrate ou EDTA sec (en raison de lautomation) et en quantit
suffisante pour pouvoir effectuer des contrles et des examens complmentaires.
Prlvement
Contraintes : aucune
Pour tre valide, un phnotypage RH-KEL1 doit tre effectu sur 2 prlvements effectus des
moments rellement diffrents.
Cas particulier des nouveau-ns : le bon de demande dexamen doit mentionner en plus lidentit
complte de la mre et son statut immuno-hmatologique (groupes sanguins ABO-RH1,
phnotypes RH-KEL1, rsultat et date de la dernire RAI).
Les rsultats antrieurs des typages rythrocytaires doivent tre fournis si le laboratoire na pas
effectu les premires analyses.
Particularits
Le sang du nouveau-n prlev au cordon risque dtre contamin par du sang maternel, ou
souill par de la gele de Wharton entranant de fausses ractions positives ou encore contenir
des caillots rendant impossible lautomation de lanalyse
Les prlvements hmolyss sont viter, car la lyse affaiblie les ractions dagglutination et les
rend difficiles interprter
Transmission
Le phnotype RH-KEL1 est dtermin sur un prlvement strile de moins de 7 jours et conserv
dans de bonnes conditions +4C
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

PHOSPHATASES ALCALINES LEUCOCYTAIRES


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

BIOPATHOLOGIE
Etat fbrile
Organomgalie
Hmopathie connue
Hyperleucocytose/ polynuclose avec ou sans mylmie
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total EDTA ou sang natif priphrique tal sur lame
Prlvement
Serrage garrot limit afin dviter une hmoconcentration
Le jene est inutile, laugmentation post-prandiale des leucocytes et des plaquettes restant
modre par rapport aux fourchettes de normalit.
Prlvement capillaire au bout du doigt si talement extemporan sur lame.
Particularits
Demande couple un hmogramme
Transmission
Prise en charge du prlvement EDTA et des frottis ventuels dan la demi heure aprs le
prlvement.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

RECHERCHE, IDENTIFICATION, TITRAGE ET DOSAGE PONDERAL


DES ANTICORPS ANTI-ERYTHROCYTAIRES
(RAI)
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

La RAI est obligatoire avant toute transfusion avre ou potentielle, chez la femme enceinte quel
que soit son groupe RH1 (RhD), chez les polytransfuss et aprs transfusion dans le cadre de
lhmovigilance.
BIOPATHOLOGIE
La grossesse doit tre mentionne car en cas de RAI positive, lidentification doit tre
extemporane, et couple au titrage et au dosage pondral.
La frquence des RAI positives augmente chez les femmes enceintes multipares ainsi quau cours
du dernier trimestre de la grossesse, chez les polytransfuss et dans certaines pathologies comme
les connectivites, les cirrhoses
La pathologie du patient (AHAI, maladies des agglutinines froides, mylome, Waldenstrm) peut
entraner de fausses ractions positives lors de la RAI.
Les traitements en cours doivent tre signals car certains mdicaments peuvent entraner une
auto-immunisation, des phnomnes de rouleauxpouvant perturber la RAI.
Linjection d immunoglobuline anti-D avec la date doit tre mentionne, pour viter de rendre
tort : prsence danticorps dimmunisation active.
Les transfusions incompatibles de concentrs rythrocytaires peuvent neutraliser partiellement ou
totalement les anticorps ventuellement prsents. La date de la transfusion ainsi que la quantit
transfuse doivent tre mentionnes.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
La RAI doit tre ralise sur un chantillon de sang prlev sur anticoagulant : citrate ou EDTA
sec. Quant au dosage pondral, il doit imprativement tre ralis sur un chantillon de sang
prlev sur tube sec.
Le volume et le nombre de rcipients de recueil doivent tre suffisants pour effectuer des
contrles, des examens complmentaires et pourvoir la srothque.
Prlvement
Contraintes : aucune
Cas particulier des nouveau-ns : le bon de demande dexamen doit mentionner en plus lidentit
complte de la mre et son statut immuno-hmatologique (groupes sanguins ABO-RH1,
phnotypes RH-KEL1, rsultat et date de la dernire RAI).
Les rsultats antrieurs de RAI doivent tre fournis si le laboratoire n a pas effectu les analyses
antrieures ou si lidentit nest pas strictement identique celle fournie antrieurement.
Particularits
Les prlvements hmolyss sont viter, car la lyse affaiblie les ractions dagglutination et les
rend difficiles interprter
Transmission
La RAI est ralise sur un prlvement strile (et non pipet) de moins de 3 jours et conserv
dans de bonnes conditions +4C
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

RETICULOCYTES
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.

BIOPATHOLOGIE
La rticulocytose est la traduction du taux de restauration du nombre de globules rouges
Crise rticulocytaire dans les anmies macrocytaires carentielles traites par Vit. B12
EPO
Dialyss rnaux
Transfusion : la mesure des rticulocytes est inutile
Paramtre hmatologique non informatif dans les tats non anmiques
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Sang total prlev sur EDTA (la numration des rticulocytes est couple celle des hmaties et
en rgle automatise)
Prlvement
Serrage limit du garrot afin dviter une hmoconcentration
Le jene est inutile, laugmentation post-prandiale des hmaties et rticulocytes reste modre par
rapport aux fourchettes de normalit.
Particularits
Demande couple un hmogramme
Les fourchettes de normalits bien qutant larges, les modalits techniques manuelles de
comptage doivent tre mentionnes, celles-ci entranant des coefficients de variations levs
Transmission
Stabilit identique de la rticulocytose et des paramtres de lhmogramme : six heures ; viter les
chocs thermiques ou mcaniques.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

TEMPS DE CEPHALINE + ACTIVATEUR (TCA)


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques
Le temps de cphaline + activateur est le temps de coagulation dun plasma citrat recalcifi en prsence
phospholipides apports en tant que substitut plaquettaire par la cphaline. Lactivateur utilis est de nature
variable : kaolin, silice micronise, acide ellagiqueLorsque cet activateur est le kaolin, le TCA est appel
TCK. Le rsultat est exprim en secondes par rapport au temps de coagulation dun plasma tmoin normal.
Le TCA est sensible aux dficits en facteurs de la voie dite intrinsque de la coagulation (facteurs VIII,
IX, XI, XII), en prkallicrine et kininogne de haut poids molculaire, ainsi, dans une moindre mesure,
quaux dficits en facteurs II, V, X et en fibrinogne. Le TCA a galement t propos pour le suivi des
traitements par lhparine non fractionne et pour le diagnostic des anticoagulants circulants de type lupique.

BIOPATHOLOGIE
Diagnostic dun syndrome hmorragique
Bilan systmatique ou pr-opratoire
Insuffisance hpato-cellulaire
CIVD
Suivi des traitements par hparine non fractionne
Recherche dun anticoagulant circulant
Les taux de facteurs IX, XI, XII, prkallicrine et kininogne de haut poids molculaire et, facteurs
II, VII, X sont bas comparativement ceux de ladulte chez le nouveau-n prmatur et le
nouveau-n terme : le TCA est allong en proportion du taux de ces facteurs et de la sensibilit
du ractif utilis. Le taux de ces facteurs se normalise en gnral vers lge de 6 mois. Compte
tenu du fait que le TCA est plus court au fur et mesure que lge du patient augmente, il est
frquent que chez le jeune enfant le TCA soit un peu plus long que le tmoin (qui est constitu
dun pool de plasmas normaux obtenu chez des adultes).
Le TCA est allong en cas de dficit constitutionnel ou acquis en facteurs VIII, IX, XI, XII, et dans
une moindre mesure en facteurs II, V, X et/ou en fibrinogne. Le TCA est allong en prsence
dun inhibiteur spcifique dirig contre un facteur de la voie intrinsque de la coagulation (anti-VIII
ou anti-IX).
Le TCA est allong en cas dinsuffisance hpato-cellulaire ou de CIVD (coagulation intravasculaire dissmine). Le TCA peut tre allong en cas de carence en vitamine K ainsi quau
cours des traitements par AVK.
Le TCA est utilis dans le suivi du traitement par lhparine non fractionne ; la sensibilit est
nanmoins variable dun ractif lautre et il y a lieu de vrifier la zone thrapeutique en fonction
du ractif utilis. Le TCA est peu ou pas allong au cours des traitements par les hparines de bas
poids molculaire ; lallongement est fonction de la sensibilit du ractif utilis, de la prparation et
de la posologie dhparine de bas poids molculaire utilise. Aux dosages utiliss en prophylaxie,
lallongement est minime ou nul pour toutes les hparines de bas poids molculaire.
Le TCA est allong au cours des traitements par lhirudine (ou ses drivs).
Le TCA est allong au cours des traitements par le mlagatran / ximlagatran.
Le TCA nest pas allong au cours des traitements par le fondaparinux aux concentrations
thrapeutiques.
La sensibilit du TCA aux anticoagulants circulants de type lupique est variable dun ractif
lautre.

PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS


Echantillon
Mesure exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole), en particulier dans le cas du suivi dun traitement par lhparine non fractionne
pour viter la neutralisation in vitro de lhparine par le facteur 4 plaquettaire. Tout autre
anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne serait prfrable celle du polystyrne). La taille du tube doit tre adapte au
volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour certains tests (en
particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Lchantillon de sang destin la mesure du TCA doit tre prlev aprs coulement des premiers
millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres chantillons
prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Le TCA mesur peut tre plus court que celui du tmoin normal en cas de problme de
prlvement (activation de la coagulation in vitro), en cas de taux lev de facteur VIII (syndrome
inflammatoire, grossesse) et chez certains patients ayant une rsistance la protine C active.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl le cas chant, celui du taux de prothrombine, des facteurs de la voie
intrinsque (VIII, IX, XI, XII), un bilan de CIVD (facteurs V et VII, PDF / D-dimres, numration du
chiffre de plaquettes) ou biochimique dinsuffisance hpato-cellulaire.

Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans des limites
acceptables.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Lutilisation de tubes CTAD permet dviter la neutralisation de lhparine par
le facteur 4
plaquettaire et de prolonger le dlai admissible entre le prlvement et le traitement de
lchantillon par le laboratoire.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

TEMPS DE THROMBINE
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

Le temps de thrombine est le temps de coagulation dun plasma citrat en prsence dune quantit
dfinie de thrombine calcique. Le rsultat sexprime en secondes, par rapport au temps de
coagulation dun plasma tmoin normal. Le temps de thrombine explore la fibrinoformation. Il est
insensible aux dficits en facteur XIII.
BIOPATHOLOGIE
Diagnostic dun syndrome hmorragique
Bilan systmatique ou pr-opratoire
Insuffisance hpato-cellulaire
CIVD
Suivi dun traitement par lhparine nonfractionneou dun traitement thrombolytique
Allongement
Le temps de thrombine est allong dans les hypofibrinognmies (dans lesquelles le fibrinogne
fonctionnel et le fibrinogne antigne sont abaisss dans les mmes proportions) et
dysfibrinognmies (dans lesquelles le taux de fibrinogne fonctionnel est abaiss tandis que le
taux de fibrinogne antigne est normal).
Le temps de thrombine est allong en cas dinsuffisance hpato-cellulaire ou de CIVD (coagulation
intra-vasculaire dissmine).
Le temps de thrombine est allong en prsence dhparine non fractionne.
Le temps de thrombine est peu ou pas allong en prsence dhparine de bas poids molculaire :
lallongement dpend de la sensibilit du ractif et de la prparation dhparine de bas poids
molculaire utilise.
Le temps de thrombine est allong en prsence dinhibiteurs spcifiques de la thrombine (antithrombines) tels que lhirudine (ou ses drivs) ou certains nouveaux mdicaments
antithrombotiques (mlagatran / ximlagatran).
Le temps de thrombine est allong en prsence de taux significativement levs de produits de
dgradation de la fibrine et au cours des traitements fibrinolytiques.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Dosage exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs.

Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de


polypropylne serait prfrable celle du polystyrne).
La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont
t incrimins pour certains tests (en particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente
dtudes plus compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lchantillon de sang destin la mesure du temps de thrombine doit tre prlev aprs
coulement des premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et
avant dautres chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl le cas chant, celui du taux de prothrombine, du TCA, un bilan de CIVD
(facteurs V et VII, PDF / D-dimres, numration du chiffre de plaquettes) ou biochimique
dinsuffisance hpato-cellulaire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Les tubes peuvent tre conservs bouchs temprature ambiante dans des limites acceptables
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les quatre heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

TEST DIRECT A LANTIGLOBULINE (TDA)


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.
Le test direct lantiglobuline permet le dpistage des auto et/ou allo anticorps IgG ainsi que des fractions
du complment fixs in vivo sur les globules rouges. Il est recommand chez les patients en cas de
syndrome hmolytique clinique ou biologique ou encore en cas de raction transfusionnelle. Il est
recommand aussi chez le nouveau-n pour dceler une ventuelle incompatibilit foeto-maternelle ainsi
que chez les patients anmis pour dmontrer lorigine auto-immune de lanmie hmolytique et chez ceux
prsentant dautres maladies auto-immunes.

BIOPATHOLOGIE
Lge du patient doit tre mentionn car en cas de TDA positif, sil sagit dun nouveau-n anmi,
la transfusion ne pourra tre ralise quaprs avoir effectu une RAI et une EDC avec le plasma
(ou le srum) maternel.
La pathologie du patient (mylome, Waldenstrm) peut entraner de fausses ractions positives
lors de la dtermination du TDA.
Une image de double population peut tre observe en raison de transfusion incompatible dans le
systme ABO ou chez un patient possdant un anticorps anti-rythrocytaire. La notion de
transfusion avec la date doit donc tre mentionne.
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
La dtermination du TDA doit imprativement tre ralise sur un chantillon de sang prlev sur
anticoagulant : citrate ou EDTA sec et en quantit suffisante pour effectuer des contrles et/ou des
examens complmentaires.
Prlvement
Contraintes : aucune.
Cas particulier des nouveau-ns : le bon de demande dexamen doit mentionner en plus lidentit
complte de la mre et son statut immuno-hmatologique (groupes sanguins ABO-RH1,
phnotypes RH-KEL1, rsultat et date de la dernire RAI).
Particularits
Le sang du nouveau-n prlev au cordon risque dtre contamin par du sang maternel, ou
souill par de la gele de Wharton entranant de fausses ractions positives ou encore contenir
des caillots rendant impossible lautomation de lanalyse.
Les prlvements hmolyss sont viter, car la lyse affaiblit les ractions dagglutination et les
rend difficiles interprter.
Transmission
Le TDA est ralis sur un prlvement strile de moins de 2 jours et conserv dans de bonnes
conditions +4C
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

TAUX DE PROTHROMBINE TEMPS DE QUICK INR


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.
Le temps de Quick est le temps de coagulation dun plasma citrat recalcifi en prsence de facteur
tissulaire et de phospholipides apports en large excs par le ractif thromboplastine. Ce temps sexprime
en secondes, par rapport au temps obtenu pour un plasma tmoin.
Classiquement en France, cest lexpression en pourcentage, appele taux de prothrombine, qui est utilise.
Ce rsultat en pourcentage est obtenu en reportant le temps de coagulation obtenu pour le plasma tester
sur la droite dtalonnage obtenue en testant des dilutions successives dun plasma tmoin normal (droite de
Thivolle) ; lactivit du plasma normal tant par dfinition de 100%, celle du plasma normal dilu au demi de
50% etc
Pour la surveillance des traitements anticoagulants oraux par anti-vitamines K (AVK), lexpression en INR
(International Normalized Ratio) est prfre lexpression en secondes ou en pourcentage. Lexpression
en INR tient compte de la sensibilit du ractif utilis et permet de limiter les diffrences observes entre
deux laboratoires. Sagissant dun rapport entre deux temps de coagulation (entre celui du plasma tester et
celui du plasma tmoin) lev la puissance ISI (indice de sensibilit international spcifique de la
thromboplastine utilise), lINR est un chiffre sans unit.
Le taux de prothrombine explore la voie dite extrinsque de la coagulation : il est abaiss en cas de
dficit constitutionnel ou acquis en facteurs II, V, VII, X et/ou en fibrinogne.

BIOPATHOLOGIE
Compte tenu de limmaturit hpatique, et, le cas chant, dune ventuelle carence en vitamine K
chez le nouveau-n terme ou prmatur, les taux des facteurs vitamine K dpendants (II, VII, IX,
X) sont abaisss ; le taux de prothrombine est susceptible dtre abaiss en proportion du dficit
en facteurs II, VII et X observ.
Le taux de prothrombine est abaiss en cas de dficit constitutionnel ou acquis en facteurs II, V,
VII, X et/ou en fibrinogne.
Le taux de prothrombine est abaiss en cas dinsuffisance hpato-cellulaire ou de CIVD
(coagulation intra-vasculaire dissmine).
Le taux de prothrombine est abaiss en cas de carence en vitamine K ainsi quau cours des
traitements par AVK. De nombreux mdicaments sont susceptibles dinterfrer dans le
mtabolisme des AVK et de potentialiser ou rduire leffet anticoagulant des AVK (se rfrer au
dictionnaire Vidal) ; ces interfrences peuvent conduire des variations de lINR.
Le taux de prothrombine est abaiss au cours des traitements par lhirudine (et ses drivs) ainsi
que lors des traitements par le mlagatran / ximlagatran.
Dautres nouveaux mdicaments anticoagulants en dveloppement sont susceptibles de modifier
le taux de prothrombine.
Le fondaparinux ne modifie pas le taux de prothrombine aux concentrations utilises en
thrapeutique.
La sensibilit du taux de prothrombine aux anticoagulants circulants de type lupique est en
gnral faible et varie dun ractif lautre.
Les ractifs contiennent en gnral un inhibiteur de lhparine qui rend le taux de prothrombine
insensible aux concentrations dhparine habituellement observes dans les traitements par
lhparine ou les hparines de bas poids molculaire (HBPM).

Renseignements cliniques indispensables - contexte de la demande :


- diagnostic dun syndrome hmorragique
- bilan systmatique ou pr-opratoire
- insuffisance hpato-cellulaire
CIVD
- suivi des traitements par AVK
- diagnostic dune carence en vitamine K ou dune intoxication par les AVK
- autres, la discrtion du clinicien
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Echantillon
Mesure exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole). Tout autre anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL) x
[100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100
hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Lutilisation de tubes en matire plastique est
possible si elle a t valide (lutilisation de polypropylne serait prfrable celle du polystyrne).
La taille du tube doit tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont
t incrimins pour certains tests (TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Lchantillon de sang destin au dosage du taux de prothrombine doit tre prlev aprs
coulement des premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et
avant dautres chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique courante . Le prlvement peut tre effectu chez le
patient en position assise.

Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
LINR est considr comme un test robuste, la diffrence du TCA.
La mesure est couple le cas chant, celui des facteurs de la voie extrinsque (II, V, VII, X) ou
des facteurs vitamine K dpendants (II, VII, IX, X), un bilan de CIVD (facteurs V et VII, PDF / Ddimres, numration du chiffre de plaquettes) ou biochimique dinsuffisance hpato-cellulaire.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive.
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, sous rserve que celle-ci reste dans des
limites acceptables.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les quatre heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

VITESSE DE SEDIMENTATION
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifique.

BIOPATHOLOGIE
Diagnostic dun syndrome infectieux et/ou inflammatoire
La vitesse de sdimentation est lgrement acclre chez lenfant et le sujet de plus de 70 ans.
La vitesse de sdimentation est modrment acclre en fin de grossesse et en priode
menstruelle. La polyglobulie et la prsence abondante de cryoglobulines empchent toute
sdimentation des hmaties, quelle que soit la pathologie.
Lanmie en fonction de son importance, multiplie par 2 5 le chiffre de la V.S. Lhypofibrinmie,
lhypohaptoglobinmie et lagammaglobulinmie empchent la V.S. daugmenter. Laspirine et les
anti-inflammatoires non strodiens diminuent artificiellement le chiffre de la V.S. Les oestrognes
augmentent la VS

PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS


Echantillon
Sang citrat (1,6 ml de sang veineux sur 0,4 ml de citrate)
Prlvement
La priode post-prandiale lve lgrement la V.S.
Jene prfrable
Particularits
La VS est augmente par lhmodilution
Transmission
Dans les deux heures la temprature ambiante
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminent et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

HEMOSTASE

ACTIVITE ANTI-Xa
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.

La mesure de lactivit anti-Xa consiste mesurer la capacit des mdicaments anti-coagulants


possdant une activit anti-Xa inhiber le facteur Xa et, par suite, la coagulation.
NABM : 0186

BIOPATHOLOGIE
Lactivit anti-Xa est utilise lors des traitements antithrombotiques mettant en jeu des
mdicaments possdant une activit anti-Xa spcifique (comme cest le cas par exemple pour le
fondaparinux) ou associe dautre(s) activit(s), par exemple anti-IIa pour lhparine non
fractionne ou les hparines de bas-poids molculaire
Prciser le nom du mdicament son indication et la posologie.
Nature des tests et mode dexpression des rsultats : (note jointe)
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Personnes, prcautions standard : CDC Atlanta
Prlvements, chantillons : GBEA III.- 2.1.
Echantillon
Mesure exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole), en particulier dans le cas du suivi dun traitement par lhparine non fractionne
pour viter la neutralisation in vitro de lhparine par le facteur 4 plaquettaire. Tout autre
anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL)
x [100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x
[100 hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte.
Lutilisation de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon
matire plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure
rsistance aux chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide
(lutilisation de polypropylne serait prfrable celle du polystyrne). La taille du tube doit tre
adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour
certains tests (en particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Prlvement
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT) .
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Le prlvement doit tre effectu au moment du pic dactivit

Lhoraire de prlvement par rapport linjection doit galement suivre les recommandations
figurant dans le dictionnaire Vidal . Ces horaires sont rsums dans le tableau I.
Horaire de prlvement
Heure indiffrente, partir de
la 6me heure de traitement,
Injection intra-veineuse
puis 4 6 heures aprs
continue
chaque
modification
de
posologie
Injection discontinue sous- A mi-distance entre deux
cutane
injections
Schma thrapeutique
deux injections sous-cutane
par jour en curatif :
Enoxaparine
(Lovenox)
3 4 heures aprs linjection
Dalteparine
(Fragmine)
Hparines de bas poids
Nadroparine
molculaire
(Fraxiparine)
Schma thrapeutique une
injection sous-cutane par
jour en curatif :
4 6 heures aprs linjection
Tinzaparine
(Innohep)
Nadroparine
(Fraxodi)
Tableau I : horaires de prlvement pour mesure de lactivit anti-Xa
Lchantillon de sang destin la mesure de lactivit anti-Xa doit tre prlev aprs coulement
des premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et avant dautres
chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Lactivit anti-Xa est fonction de la prparation administre, du mode dadministration et de la
posologie utilise en fonction de lindication du traitement. Ces valeurs attendues sont prcises
dans le dictionnaire Vidal pour les principales indications ncessitant une mesure de lactivit
anti-Xa.
La mesure de lactivit anti-Xa nest en gnral pas recommande en prophylaxie et est rserve
certaines circonstances cliniques (patient insuffisant rnal, sujet g, femme enceinte, sujet de
poids cart des normes).
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans des limites
acceptables.

Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.


Lutilisation de tubes CTAD permet dviter la neutralisation de lhparine par
le facteur 4
plaquettaire et de prolonger le dlai admissible entre le prlvement et le traitement de
lchantillon par le laboratoire.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine..
NOTE :
Les tests sont le plus souvent des tests chromogniques mettant en jeu des substrats diffrents
selon le ractif utilis ; plus rarement, il peut sagir de tests chronomtriques. Les tests diffrent par
ailleurs notamment par la quantit de facteur Xa apporte par le ractif et lajot ou non
dantithrombine exogne.
Le rsultat est exprim en units internationales anti-Xa / mL de plasma, pour lhparine non
fractionne ou les hparines de bas poids molculaires pour lesquelles il existe un talon
international hparine non fractionne et un talon international hparine de bas poids molculaire.
Pour le danaparode de sodium, les rsultats sont exprims en units anti-Xa danaparode de
sodium /mL. Pour les nouveaux antithrombotiques activit anti-Xa tels que la fondaparinux, les
rsultats doivent tre exprims en units gravimtriques (ng ou g de produit /mL par exemple).
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

D-DIMERES
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques

Les D-dimres sont des produits de dgradation spcifiques de la fibrine.


Le rsultat est exprim en ng/mL ou g/mL ou g/L. Il peut sagir selon les ractifs soit dunits
quivalent-fibrinogne (FEU), soit dunits D-dimres (DDU). Il nexiste pas de standard
international.
Codes NABM : 0176 - 0177

BIOPATHOLOGIE
Les D-dimres augmentent dans de nombreuses circonstances comme la coagulation intravasculaire dissmine, la thrombose veineuse profonde ou lembolie pulmonaire,
mais aussi dans les tats dhypercoagulabilit, les syndromes inflammatoires,
la fibrillation auriculaire
les infections,
les hmatomes,
les artriopathies, les cancers,
ainsi quau cours de la grossesse
et chez le sujet g.
Le dosage des D-dimres est utilis pour le diagnostic de la coagulation intra-vasculaire
dissmine et pour le diagnostic dexclusion de thrombose veineuse profonde ou dembolie
pulmonaire rcente datant de moins dune semaine.
Dautres applications actuellement non valides sont en cours dtude dans des protocoles de
recherche telles que la prdiction du risque de rcidive daccident thrombo-embolique ou la
dtermination a priori de la dure de traitement anti-coagulant.
Les traitements anti-coagulants (AVK, hparine) provoquent une diminution du taux des dimres
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Personnes, prcautions standard : CDC Atlanta
Prlvements, chantillons : GBEA III.- 2.1.
Echantillon
Mesure exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole), en particulier dans le cas du suivi dun traitement par lhparine non fractionne
pour viter la neutralisation in vitro de lhparine par le facteur 4 plaquettaire. Tout autre
anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL)
x [100 hmatocrite (%)]ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x
[100 hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne serait prfrable celle du polystyrne). La taille du tube doit tre adapte au

volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour certains tests (en
particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus compltes.
Prlvement
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures). Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).Lutilisation
du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Lchantillon de sang destin la mesure du taux de D-dimres doit tre prlev aprs
coulement des premiers millilitres de sang (qui peuvent tre utiliss pour dautres analyses) et
avant dautres chantillons prlevs sur dautres anticoagulants.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl le cas chant un bilan de CIVD (facteurs V et VII, PDF, numration du
chiffre de plaquettes).
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans des limites
acceptables.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

FACTEUR WILLEBRAND
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.

Le facteur Willebrand est synthtis par les cellules endothliales et les mgacaryocytes. Cest
une glycoprotine de poids molculaire variable forme de multimres. Il joue un rle dans
lhmostase primaire (adhsion plaquettaire au sous-endothlium) et se lie dans le plasma au
facteur VIII quil protge de la protolyse.
Le facteur Willebrand constitue une entit indpendante du facteur VIII et la terminologie de
facteur VIII related antigen (ou FVIIIRAg) doit tre abandonne aujourdhui.
Les examens raliss en routine sont le dosage du facteur Willebrand antigne et de lactivit
cofacteur de la ristoctine. Dautres analyses, plus spcialises, telles que lanalyse des
multimres du facteur Willebrand, lanalyse de la liaiason du facteur VIII au facteur Willebrand, ou
lactivit de liaison au collagne sont rserves quelques laboratoires experts.
Code NABM : 0192

BIOPATHOLOGIE
Les taux de facteur Willebrand antigne et/ou activit cofacteur de la rsitoctine sont abaisss
dans certaines formes de maladie de Willebrand constitutionnelles ou acquises.
Les taux de facteur Willebrand antigne et cofacteur de la ristoctine sont en revanche normaux
dans la maladie de Willebrand de type 2 Normandie, dans laquelle une anomalie de liaison du
facteur Willebrand au facteur VIII est en cause et qui se traduit biologiquement par un taux bas de
facteur VIII, posant le problme du diagnostic diffrentiel avec lhmophilie A.
Les taux de facteur Willebrand augmentent au cours de la grossesse, avec lge, au cours des
syndromes inflammatoires et des traitements estro-progestatifs.
Les taux de facteur Willebrand sont un peu plus bas chez les sujets de groupe sanguin O que chez
les sujets de groupe sanguin non O.
Antcdents personnels ou familiaux de saignements, en particulier pistaxis, gingivorragies,
mnorragies
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Personnes, prcautions standard : CDC Atlanta
Prlvements, chantillons : GBEA III.- 2.1.
Echantillon
Mesure exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole), en particulier dans le cas du suivi dun traitement par lhparine non fractionne
pour viter la neutralisation in vitro de lhparine par le facteur 4 plaquettaire. Tout autre
anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL)
x [100 hmatocrite (%)] ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x
[100 hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation

de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne serait prfrable celle du polystyrne). La taille du tube doit tre adapte au
volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour certains tests (en
particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus compltes.
Prlvement
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl le cas chant au TCA, aux facteurs de la voie intrinsque de la coagulation,
en particulier celui du facteur VIII, ainsi quau temps de saignement dont la sensibilit peut
savrer limite la maladie de Willebrand, selon la mthode utilise et lintensit de la maladie.
Lutilisation du temps docclusion plaquettaire sur automate PFA-100 (Dade Behring) pourrait se
rvler utile au diagnostic de la maladie de Willebrand.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans des limites
acceptables.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

RESISTANCE A LA PROTEINE C ACTIVEE


Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.

La protine C active constitue un inhibiteur physiologique de la coagulation, lequel, en prsence


dun cofacteur, la protine S et de phospholipides, inactive le facteur V activ et le facteur VIII
activ. (Note jointe)
BIOPATHOLOGIE
La rsistance la protine C active est lanomalie exposant un risque de thrombose veineuse
la plus frquente : elle est retrouve en France ltat htrozygote chez environ 5% des sujets de
la population gnrale.
Elle expose un risque relatif de thrombose veineuse de lordre de 5 lorsquelle est prsente
ltat htrozygote et de 50 lorsquelle est prsente ltat homozygote.
Lassociation est frquente dautres thrombophilies, en particulier la mutation G20210A du
gne de la prothrombine.
La recherche de la rsistance la protine C active fait aujourdhui partie du bilan de
thrombophilie de premire intention.
Prcise : antcdents personnels ou familiaux de thrombose veineuse profonde, ge, grossesse,
traitementanticoagualnt(AVK,hparinenonfractionneouhparinedebaspoidsmolculaire)
PRELEVEMENT ET TRANSMISSION DES ECHANTILLONS
Personnes, prcautions standard : CDC Atlanta
Prlvements, chantillons : GBEA III.- 2.1.
Echantillon
Mesure exclusivement sur plasma citrat, aprs centrifugation du sang total obtenu par ponction
veineuse.
Le sang doit tre prlev sur citrate la concentration de 3,2% soit 0,109M (recueil sur citrate
3,8% soit 0,129M acceptable), 1 volume de citrate pour 9 volumes de sang. Le citrate doit tre
tamponn pH 5,1 5,3 da faon assurer un pH entre 7,3 et 7,45 dans lchantillon
plasmatique. Le sang peut galement tre recueilli sur tube CTAD (citrate, thophylline, adnine,
dipyridamole), en particulier dans le cas du suivi dun traitement par lhparine non fractionne
pour viter la neutralisation in vitro de lhparine par le facteur 4 plaquettaire. Tout autre
anticoagulant est proscrit.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL)
x [100 hmatocrite (%)]
ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x [100 hmatocrite (%)] /[
595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne serait prfrable celle du polystyrne). La taille du tube doit tre adapte au
volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour certains tests (en
particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus compltes.

Prlvement
Laiguille doit avoir un diamtre compris entre 0,7 et 1 mm (19 22 gauges).

Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute (recommandation du GEHT).
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude. Les prlvements sur cathters sont
proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de la coagulation). En cas de ncessit
absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des 5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets.
Labsence de micro-caillots doit tre vrifie.
Le dosage est coupl le cas chant dautres paramtres du bilan thrombose (protine S,
protine C, antithrombine, recherche de mutation G20210A du gne de la prothrombine,
homocystine).
La recherche danticoagulant circulant de type lupique est intressante double titre : dune part
pour complter le bilan tiologique de thrombose, et, dautre part pour mettre en vidence une
ventuelle interfrence de lanticoagulant circulant dans le test de dpistage de rsistance la
protine C active. Le dosage de facteur V et la mesure de lactivit anti-Xa peuvent galement
permettre de dpister une interfrence.
Transmission
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans des limites
acceptables.
Transmission au laboratoire dans lheure suivant le prlvement.
Les tubes doivent tre centrifugs rapidement aprs le prlvement suivant une double
centrifugation 2.000g pendant 15 minutes une temprature de 15 20C.
Lanalyse doit tre effectue dans les deux heures suivant le prlvement. En cas danalyse
diffre, le plasma peut tre congel 80C. A dfaut, il peut tre congel 20C pour une
dure infrieure une semaine.
NOTE :
Linactivation du facteur V activ se fait par clivage au niveau dun site principal en position 306, et
de deux sites secondaires en position 506 et 679.
Chez les patients ayant une rsistance la protine C active, il existe une anomalie au niveau du
site de clivage principal en 306, qui diminue lactivit protolytique de la protine C active vis vis
du facteur V activ, se traduisant par un dsquilibre dans le sens dune hypercoagulabilit.
Le diagnostic repose sur deux approches :
- une approche fonctionnelle base sur des tests chronomtriques de dpistage appels
tests de rsistance la protine C active,
- une approche molculaire consistant rechercher lanomalie molculaire principale
responsable du phnotype de rsistance la protine C active au niveau du site de
clivage principal du facteur V activ en position 306 par la protine C active
Cette fiche pr-analytique est limite au test chronomtrique de rsistance la protine C active.
Les tests de dpistage de rsistance la protine C active consistent mesurer le temps de
cphaline + activateur du plasma tudier en prsence de protine C active. En prsence de

lanomalie, les temps de coagulation sont plus longs que ceux observs en labsence danomalie.
Les rsultats peuvent tre exprims en temps de coagulation (secondes) (tests en un temps), ou
en rapport entre le temps de coagulation obtenu pour le plasma tudier en prsence de protine
C active et le temps de coagulation obtenu pour le mme plasma en absence de protine C
active ou entre le plasma tudier en prsence de protine C et celui dun plasma tmoin fourni
par le fabricant (tests en deux temps). Les tests de premire gnration rpondant ce schma
ractionnel sont sensibles lhparine, aux traitements par anti-vitamine K, aux anticoagulants
circulant, aux dficits svres en protine S et en facteur V, et les tats dhypercoagulabilit tels
que ceux observs au cours de la grossesse peuvent conduire des faux-positifs. Les rsultats
sont compars une valeur seuil fournie par la fabricant, qui peut dans certains cas varier dun lot
lautre. Dans certains cas, il peut exister une zone grise ne permettant pas de discriminer avec
certitude les sujets ayant une rsistance la protine C active des sujets sains. Il nexiste en
rgle gnrale pas de relation entre le rsultat du test de dpistage et le caractre htro- ou
homozygote de lanomalie molculaire lorsque celle-ci est prsente. Dans tous les cas, un test de
dpistage positif doit amener rechercher lanomalie molculaire, pour en confirmer la prsence et
en prciser le caractre htro- ou homozygote.
Les tests de seconde gnration ont introduit une pr-dilution du plasma tudier dans un plasma
dficient en facteur V apportant lensemble des facteurs ncessaires la raction, lexception du
facteur V dont la seule source demeure le plasma du patient tudier. Cette amlioration a permis
de limiter certaines interfrences, et, en particulier, de permettre lutilisation du test chez les
patients traits par AVK.
La plupart des ractifs contiennent par ailleurs un inhibiteur de lhparine permettant de raliser le
test chez des patients traits par hparine nonfractionne ou hparine de bas poids molculaire,
tout du moins tant que lactivit anti-Xa ne dpasse pas une certaine valeur (en gnral de lordre
de 1 unit anti-Xa/mL, valeur qui peut tre dpasse dans certains schmas thrapeutiques
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.

TEMPS DE SAIGNEMENT
TEMPS DOCCLUSION PLAQUETTAIRE
Les procdures communes aux prlvements et particulires au laboratoire font lobjet dinstructions
spcifiques.

La mesure du temps de saignement consiste mesurer le temps ncessaire larrt dune


hmorragie provoque par une incision standardise .
Le temps de saignement renseigne sur la qualit de lhmostase primaire.
Codes NABM : 0121 0171

BIOPATHOLOGIE
Le temps de saignement permet de mettre en vidence des anomalies de lhmostase primaire :
certaines thrombopathies et certaines formes de maladies de Willebrand
Le test est sensible la prise de certains mdicaments anti-plaquettaires telles que laspirine, les
anti-inflammatoires non strodiens, ou les anti-GPIIbIIa.
Les piges du temps de saignement sont la thrombopnie (allonge le temps de saignement) ou la
thrombocytmie (raccourcit le temps de saignement), la vasodilatation (allonge le temps de
saignement) ou la vasoconstriction (raccourcit le temps de saignement) (temprature, enfant qui
pleure), une anmie importante (allonge le temps de saignement), une insuffisance rnale
svre (susceptible dallonger le temps de saignement), un traitement par les -lactamines
(allongement du temps de saignement). La consommation dail peut galement interfrer dans le
temps de saignement.
La mesure du temps docclusion plaquettaire laide dun automate ddi, le PFA-100, simulant
une brche vasculaire ralise un temps de saignement in vitro . Diffrents agonistes sont
utiliss et la mthode semble performante pour le diagnostic de certaines formes de maladie de
Willebrand et pour dpister une prise d aspirine.
Lhmolyse peut interfrer sur les rsultats du temps docclusion plaquettaiire
Renseignements cliniques indispensables :
antcdents hmorragiques personnels ou familiaux, ge, grossesse, traitement anti-plaquettaire
(aspirine, AINS, anti-agrgants plaquettaires)
REALISATION / PRELEVEMENT TRANSMISSION DE LECHANTILLON
Personnes, prcautions standard : CDC Atlanta
Prlvements, chantillons : GBEA III.- 2.1.
Ralisation du temps de saignement
Deux mthodes sont principalement utilises :
- la mthode de Duke consiste pratiquer une incision horizontale de 5 6 mm de longueur
laide dune micro-lance au lobe de loreille pralablement dsinfect lther. Un
chronomtre est dclench lapparition de la premire goutte de sang et toutes les trente
secondes le sang est absorb avec un papier filtre, en prenant soin de ne pas toucher
lincision, jusqu larrt du saignement. Le temps de saignement est considr comme
normal avec cette mthode sil est infrieur 5 minutes et pathologique sil est suprieur
7 minutes. Cette mthode, assez mal standardise, est galement assez peu sensible.
- La mthode dIvy consiste utiliser un brassard de tensiomtre de faon assurer une
contre-pression de 40 mm de mercure et utiliser un dispositif dincision standardis
permettant un meilleur contrle de la longueur et de la profondeur de lincision. Le sang esr
recueilli toutes les minutes laide dun papier filtre dans des conditions similaires celles
de la mthode de Duke. Le temps de saignement est normal sil est infrieur 7 minutes et
pathologique au-del de 10 minutes. La mthode dIvy est rpute plus sensible que la
mthode de Duke.
Une variante consiste remplacer lincision horizontale par 3 points dincision, puis recueillir le
sang dans les mmes conditions que prcdemment.
Une deuxime variante consiste mesurer la quantit de sang coule.

Ces deux variantes sont peu utilises en pratique.


Echantillon
Temps docclusion plaquettaire (PFA-100)
La mesure est effectue exclusivement sur sang total citrat (0.129M ou 0.105M), aprs
coulement des premiers millilitres de sang dans un tube sec. Tout autre anticoagulant est
proscrit. Lchantillon doit tre analys dans les quatre heures suivant le prlvement et lanalyse
ne peut pas tre diffre. 2 fois 800 L de sang total sont au minimum ncessaires pour raliser le
test.
En cas dhmatocrite loign des normes (<30% ou >55%), le volume danticoagulant doit tre
adapt selon la formule de Mc Gann : volume danticoagulant (mL) = 0,00185 x volume final (mL)
x [100 hmatocrite (%)]ou dIngram : volume danticoagulant (mL) = volume de sang (mL) x
[100 hmatocrite (%)] /[ 595 hmatocrite (%)]
Lutilisation de tubes sous-vide est recommande. Dans tous les cas : respecter le volume de sang
prlever. Une tolrance de 10% par rapport au volume nominal peut tre accepte. Lutilisation
de tubes en verre silicon est recommande. Des tubes double paroi verre silicon matire
plastique peuvent galement tre utiliss ; ils prsentent lavantage dune meilleure rsistance aux
chocs. Lutilisation de tubes en matire plastique est possible si elle a t valide (lutilisation de
polypropylne serait prfrable celle du polystyrne).
La taille du tube doit
tre adapte au volume de lchantillon. Les tubes remplissage partiel ont t incrimins pour
certains tests (en particulier le TCA) et doivent donc tre vits dans lattente dtudes plus
compltes.
Prlvement
Temps docclusion plaquettaire
En dehors du contexte de lurgence, le prlvement est en gnral effectu le matin (entre 7 et 11
heures).
Le sujet doit tre de prfrence jeun : caf, tabac et alcool doivent tre vits dans lheure qui
prcde le prlvement. Un petit djeuner sans matires grasses peut tre autoris.
Le prlvement est effectu en thorie chez le patient en position couche depuis 30 minutes.
Cette prcaution est nglige en pratique. Le prlvement peut tre effectu chez le patient en
position assise.
Le sang est recueilli par ponction veineuse au pli du coude.
Laiguille doit avoir un diamtre gal ou suprieur 21 gauges.
Lutilisation du garrot doit tre limite moins de une minute.
Les prlvements sur cathters sont proscrits (risques de souillure par lhparine et dactivation de
la coagulation). En cas de ncessit absolue, le sang peut tre prlev sur cathter aprs rejet des
5 10 premiers millilitres de sang.
Les tubes doivent tre soigneusement agits par 8 10 retournements successifs afin
dhomogniser le sang et lanticoagulant.
Particularits
Le temps de saignement est utilis pour explorer lhmostase primaire chez des patients ayant
des antcdents hmorragiques personnels ou familiaux.
Son intrt en tant quexamen systmatique en pr-opratoire est discut.
Le temps de saignement ne doit pas tre ralis chez un patient ayant une thrombopnie
infrieure 50 G/L, ni chez des sujets chez lesquels on retrouve une prise de mdicament antiplaquettaire dans les 7 10 jours prcdant lexamen.
Les prlvements lactescents ou hmolyss doivent tre rejets. Labsence de micro-caillots doit
tre vrifie.

Transmission
Temps docclusion plaquettaire
Transport en position verticale.
Eviter toute agitation intempestive
Tubes conservs bouchs temprature ambiante, condition que celle-ci reste dans des limites
acceptables.
Lanalyse doit tre effectue dans les 4 heures suivant le prlvement.
Lhorodatage du prlvement ou du recueil, de lacheminement et de la rception de chaque chantillon au
laboratoire ainsi que lidentification de toutes les personnes qui accomplissent ces tches sont essentiels.