UNIVERSIDAD

NACIONAL
FEDERICO
VILLARREAL
ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

Curso

Profesor

Alumno

Bioqumica y Nutricin

Cesar Martnez Valdivia

Soplin Almeida, Angel Ramiro

2013

Universidad Nacional

Federico Villarreal

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

PRACTICA DE LABORATORIO N 1

CURSO

Bioqumica y Nutricin

DOCENTE

Prof. Cesar Martnez Valdivia

ALMUNO

SOPLIN ALMEIDA, ANGEL RAMIRO

LIMA PER

2013

CUESTIONARIO

1. Qu es la Fotometra?
La Fotometra (tambin conocida como Espectrofotometra) es uno de los
procesos o tcnicas que se realizan en los laboratorios de bioqumica,
resultando de gran utilidad para el hallazgo de la concentracin de una
sustancia problema, teniendo en cuenta la propiedad de las sustancias y los
cuerpos para poder absorber luz, dependiendo de su concentracin (cantidad de
soluto en una solucin). Es decir, mide la intensidad de la luz.
Para este fin, se usa un aparato denominado Espectrofotmetro, el cual permite
hallar la luz absorbida (radiacin) por una determinada muestra de la cual se
desconoce su concentracin.
La fotometra se basa en el principio del espectro visible de la luz. Se debe tener
en cuenta que todas las sustancias absorben luz (energa radiante), sin
embargo muchas veces no podemos observarla. Por ello se debe tener en
cuenta el denominado espectro visible de la luz.

Se denomina espectro visible de la luz al rango de longitud de onda promedio

entre 400 y 700 nm (380 720 nm), que representa los lmites que el ojo
humano puede percibir, por ello se habla de luz visible. Entendindose la luz
como un fenmeno electromagntico. Bajo este principio acta el
espectrofotmetro.
Como antes haba mencionado, las sustancias absorben una determinada
cantidad de luz (la cual ser expresada en nanmetros) que muchas veces
acaba a la sensibilidad del ojo humano. Longitudes menores a 400 nm son
denominadas en el rango de ULTRAVIOLETA y longitudes de onda mayores a
700 nm. se catalogan como INFRARROJA. Estos rangos fuera de la luz visible
son detectados por el espectrofotmetro.

2. Cul es el fundamento de la Fotometra?

El fundamento de la Fotometra considera lo antes mencionado: las sustancias

absorben una determinada cantidad de luz en proporcin a su concentracin.
Para ello se tiene conceptos de LUZ INCIDENTE, LUZ TRANSMITIDA,
ABSORBANCIA, TRANSMITANCIA, entre otros.
Todo esto se resume en la Ley de Lambert Beer. Antes es importante
indicar que la luz incidente, es la luz que enfocada por un lado de la muestra
inicialmente (la luz que entra).
La Ley de Lambert - Beer, es un medio matemtico que expresa como la
materia (soluto en una solucin) absorbe la luz. Esta ley indica que la luz que
atraviesa una muestra, se ve disminuida (en comparacin con la luz incidente)
debido a algunos fenmenos:
1. Cantidad de materia (soluto) que absorbi luz durante el trayecto de la
misma a travs de la muestra: CONCENTRACION DE LA MUESTRA
2. Distancia que debe atravesar el haz de luz a travs de la muestra:
LONGITUD DEL TUBO.
3. La probabilidad de que la luz (fotones) sea absorbida por esa muestra, lo
que se entiende por ABSORBANCIA (Coeficiente de extincin o de
absortividad)
Esta ley es consecuencia de dos leyes:
-

Ley de Lambert: implica la relacin entre la ABSORBANCIA de la muestra y

la longitud del medio que debe atravesar la luz:

Donde
A = Absorbancia
= Coeficiente molar de extincin
d = Distancia en cm
-

Ley de Beer: implica la relacin entre la ABSORBANCIA de la muestra y la

CONCENTRACION de la misma, de la siguiente manera:

Donde
A = Absorbancia
= Coeficiente molar de extincin

c = Concentracin molar
Resumiendo, la Ley de Lambert Beer quedara expresada de la siguiente
manera:

Y de modo prctico puede graficarse de la siguiente manera:

Donde
I0 = Luz incidente
I1 = Luz transmitida
= Coeficiente molar de extincin
c = Concentracin molar
l = Longitud o distancia recorrida

3. Cul es la utilidad prctica de la Fotometra?

Como haba mencionado al inicio, la fotometra es una prctica muy usada en
bioqumica. Como busca relacionar o hallar la concentracin de una muestra en
relacin con la luz absorbida, llevado al campo clnico nos permitir determinar
la concentracin de algunos indicadores biolgicos.

Es decir, es usada para analizar muestras biolgicas. Se debe tener en cuenta

que existe una longitud de onda especfica para cada sustancia. Algunos
ejemplos:
-

Test de glucosa pre prandial (ayuno) y post prandial (luego de probar

alimento): para apoyo en el diagnstico de Diabetes o hiperglicemias por
ejemplo.
Anlisis de muestra de orina: por ejemplo para detectar cocana o sus
metabolitos en orina o para el anlisis mismo de la muestra.
Identificacin de aminocidos: por ejemplo, los aminocidos Triptfano y
Tirosina absorben longitudes de onda de 280 nm
Identificacin de cidos nucleicos: los cidos nucleicos y las bases que lo
constituyen tienen una absorcin mxima de 260 nm. Los cidos nucleicos
parcialmente degradados, absorben mayor longitud de onda. Entonces esta
sera una forma de verificar la integridad del DNA.
Determinacin de Urea, Creatinina, Acido rico.
Determinacin de colesterol
Determinacin de Bilirrubinas
Determinacin de Hemoglobina: de gran utilidad para el diagnstico de
anemia.