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PRCTICA 6
ACCIN ENZIMTICA
I.

Introduccin

Para que una reaccin qumica tenga lugar se debe superar el valor de la energa de activacin.
Las nicas molculas que reaccionan son aquellas que al chocar llevan consigo una energa
mayor que un cierto valor mnimo. A este valor de energa necesaria se lo denomina energa de
activacin y es un factor de suma importancia para determinar la magnitud de la velocidad de
reaccin. Una vez vencida esa barrera el sistema evoluciona de forma tal que llegar al estado
final de la reaccin. La velocidad de reaccin podra incrementarse de dos maneras:
aumentando la concentracin del "complejo activado" o eventualmente disminuyendo la energa
de activacin. Este ltimo mecanismo es el que se pone de manifiesto cuando se emplea
determinadas sustancias llamadas catalizadores. Estas sustancias aceleran las reacciones
qumicas disminuyendo la energa libre de activacin, se combinan con los reactivos para
producir un estrato de transicin de menor energa que el estado de transicin de la reaccin no
catalizada.
Las reacciones qumicas en sistemas biolgicos raramente ocurren en ausencia de un
catalizador. Estos catalizadores se denominan enzimas y son en su totalidad molculas de
naturaleza proteica. Las funciones vitales de cualquier clula seran imposibles de mantener si
las reacciones que ocurren en ella fueran extremadamente lentas.
Adems de incrementar la velocidad, las enzimas exhiben una elevada especificidad y en
algunos casos pueden ser reguladas por diferentes metabolitos, aumentando y otras veces
disminuyendo, de acuerdo a las necesidades del momento, su actividad.
Todas estas propiedades pueden ser cumplidas por molculas altamente complejas, que al ser
molculas orgnicas (macromolculas) comparten caractersticas con las protenas no
enzimticas y difieren de los catalizadores inorgnicos:
a) Son termolbiles y su actividad depende en ciertos casos del pH del medio.
b) El reconocimiento de la enzima con el reactivo a procesar (denominado sustrato) es altamente
especfico.
c) Tienen gran eficiencia, es decir, transforman un gran nmero de molculas de sustrato por
unidad de tiempo.
d) Estn sujetas a una gran variedad de controles celulares, genticos y alostricos.
Como todos los catalizadores las enzimas aceleran notablemente la velocidad de una reaccin
qumica y cumplen con las siguientes caractersticas:
1) Son efectivas en pequeas cantidades

2) No sufren modificaciones qumicas irreversibles durante la catlisis. Es decir que luego de la

reaccin enzimtica, las molculas de enzimas que reaccionaron son indistinguibles de las que
no lo han hecho, (la estructura de la molcula se mantiene, al principio y final de la reaccin,
exactamente igual).
3) No afectan la posicin de equilibrio de la reaccin que catalizan. El estado inicial y final de la
reaccin es el mismo, solo que se llega al equilibrio mucho ms rpidamente.
Accin de amilasa salival
La amilasa es una enzima que cataliza la hidrlisis del almidn en molculas de carbohidratos
mas pequeas. La -amilasa, que se encuentra en la saliva, jugo pancretico, malta y algunas
bacterias, cataliza la hidrlisis de los almidones a dextrinas, maltosa y maltotriosas.
La saliva es una mezcla derivada de la secrecin de 3 pares de glndulas, las partidas,
submaxilar y sublingual, como tambin de pequeas glndulas mucosas ubicadas difusamente
sobre la mucosa de la boca.
La enzima -amilasa, presente en la saliva, inicia la degradacin del almidn, la principal fuente
de carbohidratos de la dieta humana. Esta enzima hidroliza al azar los enlaces que unen
residuos de glucosa en el almidn, a excepcin de los enlaces cercanos a los extremos y a los
puntos de ramificacin de las cadenas. Por la accin de esta enzima activada por iones cloruro,
en la boca la longitud de la cadena del almidn se reduce de varios miles a unas ocho unidades
de glucosa. La alta concentracin de protones del estmago inactiva la -amilasa salival. La
digestin del almidn contina en el intestino delgado por la accin de la -amilasa pancretica,
como producto se forma una mezcla del disacrido maltosa, el trisacrido maltotriosa y
oligosacridos conocidos como dextrinas.
almidn

amilasa

maltosa maltotriosa

dextrinas

La maltosa y otros carbohidratos reductores producidos en la reaccin pueden ser detectados

por el test de Benedict. Este mtodo es cualitativo, consiste en una solucin alcalina de Cu 2+ que
se encuentra formando un complejo con citrato. El in cprico es reducido a Cu 1+ por
compuestos reductores con formacin de hidrxido cuproso amarillo o de xido cuproso rojo. El
cambio de coloracin o la formacin de un precipitado rojo-ladrillo (Cu 2O) indica la presencia de
un compuesto reductor.
II.

III.

Objetivos
Interpretar los mecanismos subyacentes de la accin enzimtica sobre sustratos
especficos.
Compruebe la accin enzimtica de la amilasa salival sobre el almidn.
Materiales

36 tubos de ensayo
Gradillas
50 ml HCl al 10 %
Agua destilada
6 pipetas Pasteur

6 probetas 10 ml
2 probetas 50 ml
6 beakers 50 ml
3 varillas agitacin
Solucin de almidn
Goteros con Lugol
Goteros con Benedict
Bao Maria
IV.

Procedimiento

Accin de la renina sobre la casena de la leche

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Disuelva de pastilla de cuajo (renina) en 25 ml de agua destilada.

Numere dos tubos de ensayo (1 y 2).
En el tubo 1 coloque 5ml de leche.
En el tubo 2 coloque 5ml de leche + 2 gotas de HCl al 10 %.
Agregue 10 gotas de solucin de renina a cada tubo numerado (1 y 2).
Observe y anote sus resultados.
Qu puede concluir acerca de cmo afecta a la actividad enzimtica, el tiempo, la
concentracin y la temperatura?

Digestin del almidn (Hidrlisis enzimtica)

1. Colocar un trozo pequeo de papa directamente en la boca y mezclar con la saliva por
espacio de 6 a 7 minutos. (No tragarlo)
2. Seguidamente transferirlo a un beacker y triturarlo perfectamente con un agitador de
vidrio.
3. Preparar dos series de tubos (5 tubos cada serie) y rotularlos con tiempo 0, 5, 10, 15, 20
minutos las dos series.
4. Al mismo tiempo tome 1 tubo de ensayo de cada serie (iniciando con el de 0 minutos) y
colocarle 1 ml de almidn a cada uno. Tratar cada tubo como sigue: a uno agregarle
lugol y al otro agregarle 10 gotas de reactivo de Benedict y calentar. Observar.
5. Al cabo de 5 minutos hacer el mismo procedimiento (mencionado en el paso 4) y as
sucesivamente hasta llegar a 20 minutos.
V.

Bibliografa

rea de Biologa. Fase I. Facultad de Medicina. 2005. Universidad de San

Carlos de Guatemala. CUM. Manual de Prcticas de Laboratorio.
Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia. 2005. Universidad de San Carlos de
Guatemala. Manual de Prcticas de Laboratorio.