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Comprendre la peau

Examens complmentaires

Ann Dermatol Venereol


2005;132:8S89-104

Examen bactriologique
Examen bactriologique de base des prlvements
cutans
TYPES DE LSIONS
Lsion superficielle ferme
Abcs, furoncle, anthrax, panaris, sycosis, phlyctne, bulle,
vsicule, pustule, onyxis, acn, folliculite.
Lsion superficielle ouverte
Imptigo, suppuration ( crote), prionyxis, brlure, escarre,
plaie ulcre exsudative, mal perforant plantaire (diabte,
lpre), lsion fistuleuse, hidrosadnite suppurative, intertrigo
inter-orteils, syndrome de Lyell.

Exsudat peu abondant : frotter un couvillon dans la


lsion contre le bord.
Particules purulentes au bord de la lsion : prlever la
curette.
Dcharger le prlvement dans un tube strile standard
contenant quelques gouttes de srum physiologique strile
quand la recherche de bactries anarobies strictes est inutile.
Lcouvillon doit tre introduit dans un tube Portagerm
arobie. Seuls staphylocoques et streptocoques hmolytiques se conservent sur un couvillon sec.

Lsion profonde(T3)
Hypodermite, rysiple, cellulite, gangrne gazeuse, granulome hypodermique.
Maladie transmise par les animaux (brucellose, maladie
des griffes du chat, maladie de Lyme, pasteurellose, rouget
du porc, tularmie).

Lsion profonde
Nettoyer la surface lalcool 70C.
Deux types de prlvements sont possibles :
injection dans la lsion, laide dune seringue et dune
aiguille fine, d1 ml de srum physiologique strile et raspiration du liquide.
biopsie par punch biopsie.
Dposer le prlvement dans un tube strile standard,
sauf en cas de recherche de bactries anarobies strictes.

MODE DE PRLVEMENT

RECHERCHE DE BACTRIES ANAROBIES STRICTES

Lsion superficielle ferme


Nettoyer la surface lalcool 70C.
Prlvement.
Lsion fluctuante :
Aspirer le pus au travers de la peau la seringue avec une
aiguille introduite dans le foyer infectieux. Si le volume du
prlvement est faible, ajouter quelques gouttes de srum
physiologique strile laiguille et dcharger le contenu de
la seringue dans un tube strile.
Acn ou folliculite :
Ouvrir une lsion folliculaire avec la pointe dun vaccinostyle et prlever la scrtion folliculaire laide dun couvillon fin. Dcharger le prlvement dans un tube hmolyse
strile contenant quelques gouttes de srum physiologique
strile quand la recherche de bactries anarobies strictes est
inutile.

Les bactries anarobies strictes ne peuvent survivre en prsence dair.


Prlvement.
Introduire le prlvement laiguille dans un tube de
conservation de type Portagerm anarobie.
Dposer le pot contenant la biopsie dans un sachet
hermtique contenant un rducteur de lair.

Lsion superficielle ouverte


Nettoyer le pourtour de la lsion lalcool 70C.
ponger la plaie avec une compresse ou un couvillon strile
(selon la taille) humect de srum physiologique.
Prlvement.
Exsudat ou pus : aspirer avec une seringue monte dun
cathlon.
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ACCOMPAGNEMENT DU PRLVEMENT TRANSPORT AU LABORATOIRE


Prciser le site anatomique, le contexte clinique, lexistence
dune antibiothrapie. Prciser la demande de culture anarobie stricte et la recherche dune espce bactrienne particulire.
Le transport au laboratoire doit tre rapide ou le prlvement dpos 4C pour une dure infrieure 24 h.
TUDE BACTRIOLOGIQUE DE BASE
Frottis color au Gram et au May Grunwald Giemsa
Polynuclaires : abondance.
Bactries : morphologie, coloration de Gram, abondance,
groupement (amas, chanettes).

Ann Dermatol Venereol


2005;132:8S89-104

Examens complmentaires

Culture
Milieux de culture de base glose au sang, glose au sang cuit.
Milieux slectifs selon laspect des bactries au Gram, ou
selon lindication.
Staphylocoques : milieu de Chapman.
Bacilles Gram : milieu de Drigalski.
Incubation 37C, les milieux arobie 18 h 36 h, les
milieux anarobies 5 jours.
Un antibiogramme (tude de la sensibilit de la bactrie
aux antibiotiques) est ralis systmatiquement.
CULTURE DE BACTRIES ANAROBIES
La culture est faite sur des milieux riches en atmosphre
doxygne. Les colonies apparaissent au bout de plusieurs
jours. Elles sont en gnral petites, parfois la limite de la
visibilit, comparativement celles de staphylocoque.
CAS DEXAMEN BACTRIOLOGIQUE NGATIF
Rle dune antibiothrapie pralable au prlvement
La bactrie responsable de linfection est incapable de se
multiplier in vitro mme si lantibiotique est inefficace in
vivo.
Infection dissmine
Des hmocultures (culture du sang en milieu liquide dans
un flacon contenant un bouillon de culture) doivent tre ralises, et peuvent permettre de trouver la bactrie pathogne.
Examen srologique, diagnostic indirect
Dans certaines infections, des anticorps spcifiques sont
dtects dans le srum et permettent un diagnostic srologique :
de la brucellose par le srodiagnostic de Wright, alors
que Brucella melitensis est devenu indtectable dans les
tissus,
de la maladie des griffes du chat par la srologie de
Bartonella, en complment du test de biologie molculaire,
de la maladie de Lyme due Borrelia burgdorferi,
de la syphilis (Treponema pallidum), TPHA, VDRL.

INDICATION
Affection chronique : suppuration, granulome, lsion fistulise, abcs froid, adnite.
La recherche de mycobactrie doit tre prcise.
PRLVEMENT
Le prlvement est constitu soit de pus prlev la
seringue, soit dune biopsie cutane. La recherche ne peut se
raliser partir dun couvillon ! Si un examen bactriologique classique est galement demand, faire 2 prlvements spars, la recherche de mycobactries tant faite
indpendamment.
Les mycobactries sont des bactries arobies. Le prlvement peut tre entrepos 24 h 4C avant analyse.
TUDE BACTRIOLOGIQUE
Frottis color au Ziehl ou lauramine la recherche de
BAAR (bacilles acido-alcoolo-rsistants) (fig. 1).
Le prlvement est mis en culture sur milieu spcial :
milieu solide de Lowenstein incub 3 mois, milieu liquide
7H9 incub 2 mois. Lespce est identifie et la sensibilit
teste in vitro aux antibiotiques spcifiques des mycobactries, isoniazide, rifampicine, thamutol, pyrazinamide.

Recherche de bactries par biologie molculaire


INDICATION
Suspicion dinfection par une bactrie non cultivables au
laboratoire.

Examen bactriologique la recherche


de mycobactries
Le genre Mycobacterium se divise en de nombreuses espces.
Les mycobactries ne se colorent pas au Gram et ne poussent pas sur milieux de bactriologie de base.
La principale mycobactrie pathogne est Mycobacterium
tuberculosis, ou bacille de Koch (BK humain). Parmi les
autres mycobactries, dites atypiques, certaines sont responsables dinfection spcifique, telle Mycobacterium marinum
responsable du granulome cutan aprs inoculation dans
une piscine ou dans leau dun aquarium contamin.

Fig. 1. Broyat de biopsie color au Ziehl


Prsence de bacilles acido-alcoolo rsistants (BAAR)

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Examen bactriologique

Maladie de Lyme, suivant une morsure de tique infecte


par Borrelia burgdorferi.
Maladie des griffes du chat, suivant griffade ou morsure
de jeune chat infect par une Bartonella...

INDICATIONS

PRINCIPE DE LA RALISATION

Carte cutane
Patient ayant une maladie entranant une desquamation
cutane intense, mycosis fongode, rythme polymorphe,
syndrome de Lyell, brl...

Un ou plusieurs gnes spcifiques de la bactrie sont recherchs par amplification gnique et migration du produit
damplification sur gel dlectrophorse en prsence de
tmoins positif et ngatif (fig. 2).

Recherche de gtes staphylococciques


Furonculose rptition. Indication traiter un gte orificiel
ou localis aux plis cutans.

Protocoles dtude de la colonisation cutane


et muqueuse
PROTOCOLES
1 - Carte cutane bactrienne.
2 - Recherche de gtes staphylococciques.
3 - tude de la colonisation par des bactries dinfection
nosocomiale.

Recherche de la colonisation par des bactries nosocomiales


Patient entrant dans un service hospitalier aprs plusieurs
sjours hospitaliers de court ou de long sjour, ou patient
entrant dans un service de soins intensifs.
Des bactries rsistantes aux antibiotiques sont recherches : Staphylococcus aureus rsistant la mthicilline
(SARM), entrobactrie lactamase spectre largi, Acinetobacter baumanii.
Leur prsence indique disoler le patient pour viter la
transmission de ces bactries dautres patients.
MODE DE PRLVEMENT ET CULTURE
Carte cutane
Une empreinte de la peau est faite avec un tampon recouvert dun carr de vinyle sur un ct. Le tampon est appliqu successivement sur plusieurs botes de culture contenant des milieux gloss spcifiques, glose pour culture
des bacilles Gram et glose pour culture des bactries
Gram+.
Recherche de gtes staphylococciques
Des couvillonnages des narines, des aisselles, des aines, et
dventuels autres sites (anus, ombilic) sont raliss aprs
humidification des couvillons par du srum physiologique.
Les couvillons sont recapuchonns. Au laboratoire, ils sont
mis en culture sur milieu de Chapman.

Fig. 2. Identification bactrienne par migration du produit damplification gnique sur


gel dlectrophorse
1 - tmoin positif
2 - tmoin ngatif
3 - gne prsent
M - chelle de poids molculaire

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Recherche de la colonisation par des bactries nosocomiales


Des couvillonnage des narines, des aines, des aisselles, de
lanus sont raliss aprs humidification des couvillons.
Les milieux de culture sont adapts la recherche de bactries rsistantes aux antibiotiques :
a) Staphylococcus aureus rsistant la mticilline (pnicilline
M anti-staphylococcique) (SARM),
b) Klebsiella peumoniae et autres entrobactries porteuses
dun gne de lactamase spectre largi induisant une
rsistance la plupart des lactamines (pnicillines et
cphalosporines) et transfrable entre entrobactries
despce diffrente,
c) Acinetobacter baumannii.
Un prlvement sur couvillon partir de chaque site
suffit : le prlvement est directement ensemenc sur
milieux de culture en bote de Ptri et incub 18 h
37C.

Examens complmentaires

RSULTATS
Carte cutane
Estimation semi-quantitative de labondance des colonies
apparues sur le carr ayant reu lemprunte de chaque site.
Identification et antibiogramme de Staphylococcus aureus,
streptocoque hmolytique, entrobactrie, P. aeruginosa...

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Recherche de gtes staphylococciques


Identification et antibiogramme de Staphylococcus aureus.
Recherche de la colonisation par des bactries nosocomiales
Identification et antibiogramme des SARM, des entrobactrie lactamase spectre largi, et des Acinetobacter.
Lincidence des SARM prdomine largement sur celle des
2 autres groupes recherchs.

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