Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Qumica
Laboratorio de Equilibrio y Cintica

Prctica 7
Conociemito de tecnicas alaliticas
(parte 1,fundamentos de espectrofotometra)

Profesor: QFB Ana Elena Garca Irritu

Introduccin
La espectroscopia de absorcin es la medida de la cantidad de luz absorbida por un
compuesto en funcin de la longitud de onda de la luz. En general, e irradia una
muestra con una fuente de luz y se mide la cantidad de luz transmitida a varias
longitudes de onda, utilizando un detector y registrando el fenmeno en un grfico.
La espectroscopia UV-Visible estudia el fenmeno de adsorcin de la radiacin UV
Visible de molculas orgnicas e inorgnicas.
La regin visible, a la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380 y 780
nm. La absorcin de la radiacin ultravioleta o visible por molculas orgnicas e
inorgnicas, generalmente se produce por la excitacin de los electrones de enlace,
por lo tanto, la longitud de onda de los mximos de absorcin se puede relacionar
con los enlaces de las especies absorbentes.
Para la determinacin del espectro de absorcin de una solucin colorida existen
dos mtodos fotomtricos generales:
La fotometra directa: Es el mtodo ms general. Se mide la absorbancia de la
especie a determinar, si es coloreada, o bien el producto de su reaccin de un
reactivo si no presenta color. La absorbancia es proporcional a la concentracin de
la sustancia.La fotometra indirecta: la sustancia a determinar origina la desaparicin
del color que se aprovecha con fines cuantitativos. La disminucin de absorbancia
es proporcional a la concentracin de la sustancia a determinar.La radiacin que
incide sobre la muestra absorbente debe de ser lo ms monocromtica posible, es
decir, debe tener slo un pequeo rango de longitudes de onda, porque:
Cuanto ms monocromtica sea la radiacin, mejor se cumplir la ley de BeerBourger. Puede aumentarse la selectividad, puesto que las sustancias absorban a
otra longitud de onda no interferirn si el rango es estrecho.
La sensibilidad es mucho mayor si se selecciona la longitud de onda de mxima
absorcin.
De esta manera, podemos decir que la ley de Beer- Bourger, establece una relacin
lineal entre la absorbancia y la concentracin:
A = -log T
A = log ( I / I0 ) = ( x b) x c
ABSORBANCIA = ( x b) x c
Mediante el registro de la absorbancia adecuada se construye una curva patrn y a
partir de aqu realizar los anlisis cuantitativos para determinar las concentraciones
desconocidas en disoluciones de las muestras. La curva de calibracin se
construye con las parejas de datos concentracin y absorbancia.

 Diseo experimental:

qu quiere hacer?
Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometra para determinar
concentraciones en soluciones
como se va hacer?
seleccionando la longitud de onda apropiada para poder determinar el coeficiente de
absorbancia y construir una curva patrn de la sustancia utilizando la ecuacin A= bc
para que se va hacer?
para poder determinar la concentracin en la solucin
Hiptesis:
Cada vez que aumentemos la longitud de onda, la absorbancia cambiar, mientras ms
grande la longitud, menor la absorbancia para la muestra experimental, de la misma manera
la absorbancia se ver modificada al someter distintas concentraciones.

Metodologa
espectro de absorcin

Curva patrn

 Datos, clculos y resultados

Temperatura: 21C
Espectro de absorcin de yodo (2x10-4M)
Longitud de onda ideal =475 nm
Tabla 1. Absorbancia de la disolucin de I2 a diferentes longitudes de onda.
Evento

(nm)

Absorbancia

325

1.413

335

1.842

345

2.214

355

2.441

365

1.838

375

1.383

385

0.960

395

0.660

405

0.445

10

415

0.312

11

425

0.237

12

435

0.185

13

445

0.140

14

455

0.100

15

465

0.074

16

475

0.052

17

485

0.036

18

495

0.025

La tabla 1 nos muestra los valores de absorbancia obtenidos de una muestra de

yoduro de potasio 2x10-4M realizando el barrido de onda desde 325 nm hasta 495
nm rango en el cual se encuentra el espectro de luz visible, se realiz esto con la
finalidad de graficar y observar la curva para la mxima absorbancia y la mnima. la
cual nos ayud para elegir la longitud de onda adecuada.
Esta longitud de onda debe estar en valores bajos de absorcin ya que esta podr
notarse cambios pequeos de la absorbancia con respecto a las concentraciones.
TABLA 2. Absorbancia a diferentes concentraciones molares de I 2
=470nm
Mezcla

I(0.002M)(mL)

HO (mL)

I (mol/L)

Abs

2x10-3

0.575

1.6x10-3

0.450

1.2x10-4

0.344

8x10-4

0.228

4x10-4

0.117

La tabla 2 nos muestra la absorcin de diferentes concentraciones propuestas con

respecto a la cantidad de mL colocados en la disolucin de KI en la longitud de
onda determinada. Con base a esto se obtendr la grfica patrn correspondiente
de Absorbancia vs concentracin.

Clculos
C1V1 = C2 V2
C2 = C1V1 / V2

C=(0.002M)(0.01L)/0.01L=0.002 M
C=(0.002M)(0.008L)/0.01L=0.0016 M
C=(0.002M)(0.006L)/0.01L=0.0012 M
C=(0.002M)(0.004L)/0.01L=0.0008 M
C=(0.002M)(0.002L)/0.01L=0.0004 M

Grficas
1) Trazar la grfica Absorbancia vs. (Espectro)

La grfica corresponde al barrido realizado en una muestra prueba con concentracin de

2x10-4M

de KI para la cual se observa en qu longitud de onda se muestra la mxima y la mnima

absorbancia
2) Trazar la grfica Absorbancia vs. Concentracin (Curva patrn)

La grfica realizada representa la ley de Lambert - Beer la cual expresa la relacin

entre la absorbancia de luz monocromtica y la concentracin de un cromforo
A= log I / Io = bc donde la ecuacin de la lnea recta representa y= A, m= b, x= c
A= absorbancia, = constante de extincin b= Longitud de recipiente y c= concentracin
Y= 284.5 X + 0.0014

Anlisis de resultados
A qu longitud de onda se localiza el mximo de Absorbancia de la disolucin de
yodo 2x104M?

Lo encontramos para este caso en 355 nm

Qu longitud de onda empleaste para construir la curva patrn y porque?

475 nm, elegimos esta cantidad debido a que fue el trmino que tuvo un grado
menor de variacin entre uno anterior y uno posterior, siendo este el del medio.
Qu representa la pendiente de la grfica de la curva patrn?
Representa el producto de b donde es la cte. de proporcionalidad llamada
coeficiente de absorcin molar, de absortividad y b es el paso ptico, anchura de la
celda que contiene la muestra.
Qu relacin presenta la absorbancia con la concentracin en la curva
patrn?
Que a mayor concentracin mayor absorbancia.
Conclusiones
La absorbancia de una sustancia con concentracin especfica depende de la
longitud de onda que le apliquemos, mientras ms alta longitud de onda ms baja
ser la absorbancia.
La absorbancia tambin depende de la concentracin de la muestra, manteniendo
la longitud constante, mientras ms concentrado ms grande ser la absorbancia.
Para seleccionar la longitud de onda con la que se maneja el experimento se
seleccionan los valores bajos y los ms cercanos entre s, tomando como definitivo
el que est en el centro de estos.
Aplicaciones
Las molculas de inters biolgico tienen una variedad de cromforos UV
intrnsecos adems de los que estn asociados con otros cromforos UV y visible
en la forma de cofactores, grupos prostticos y sustratos. El grupo de pptidos de la
cadena principal, se puede identificar absorbancia que tenga.
Medicin de concentracin. El uso ms comn de las mediciones de absorbancia es
determinar la concentracin. Algunas veces, el material a medir consiste de
partculas que absorben la luz en suspensin ms que en solucin, tal es el caso de
bacterias, en el que se determina la densidad ptica.
Ensayos de reacciones qumicas. Muchas reacciones qumicas pueden ensayarse si
uno de los reactivos cambia en absorbancia durante el curso de la reaccin.
Se puede usar el espectrofotmetro para la medicin de consistencia y precisin de
color en pinturas y recubrimientos, en la medicin de frescura y calidad en productos
alimenticios o la determinacin de la finalizacin de los procesos en la industria
qumica.
Manejo de residuos
Agua: Se desecha a la tarja directamente, ya que no causa ningn dao.

Yodo: se deposita en un contenedor especfico y con condiciones apropiadas para

almacenar al yodo, ya que es un compuesto txico.
Bibliografa

Arenas, I. & Lpez, J. (2004). Espectrofotometra de absorcin.

http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/espectrometria_de_absorcion.pdf
Octubre-2015 a las 18:30 hr.

Recuerado de
el
da
18-

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/PresentacionTecnicasanaliticasESPECTRODEEMIS
IONYCURVAPATRON2016-1_31796.pdf

Chang, R. Fisicoqumica para las ciencias qumicas y biolgicas.Mxico: Mc Graw Hill, 2008
pg 701-710