UNIVERSIDAD AUTNOMA TOMAS FRIAS

FACULTAD DE CIENCIAS PURAS

CARRERA DE QUMICA

PRACTICA N 3
CROMATOGRAFA ASCENDENTE Y SEPARACIN DE ANTOCIANINAS DE
LAS FLORES
Docente:

Lic. Rene Jess Baldivieso Saenz

Auxiliar:

Univ. Eveling Villca Guerra

Nombre:

Univ. Rubn Emilio Choque Gutirrez

Fecha:

15 de abril de 2014

Potos - Bolivia

CROMATOGRAFA ASCENDENTE Y SEPARACIN DE ANTOCIANINAS DE LAS

FLORES
1.- OBJETIVOS:
Mostrar la separacin de los pigmentos de antocianinas en los ptalos de las flores.

 Determinar la distancia de retencin de la fase mvil.

Determinar la distancia retencin de la fase estacionaria.
Determinar la distancia retencin total de cada una de las muestras.
2.- FUNDAMENTO TERICO:
Cromatografa en papel: Se toma una pieza de papel de filtro y cerca de uno de sus extremos se
deposita una gota de la solucin que contiene la mezcla de las sustancias que se quieren separas. Se
deja secar la gota y quedara la mancha de las sustancias mezcladas. El extremo del papel ms prximo
a la mancha se introduce en un disolvente apropiado, pero sin que la mancha llegue a introducirse en l.
Existen muchos tipos de cromatografa sobre papel, una primera divisin de las variadas clases podra
ser:
1 Cromatografa ascendente: el disolvente se encuentra en el fondo del recipiente que sostiene al papel
y va subiendo a traves de el por capilaridad.
2 Cromatografa descendente: el disolvente esta en un recipiente esta en un recipiente del que cuelga el
papel, fluye por l hacia abajo por una combinacin de capilaridad y gravedad.
En ambos casos el disolvente avanza a lo largo del papel pasando por encima de la mancha, al avanzar
disuelve y arrastra las sustancias de la mancha, cada una de ellas se mueve, por lo general a distinta
velocidad que las otras.
Se deja actuar el disolvente un tiempo determinado, se seca el papel y se observan las sustancias
separadas si tienen color, o en caso de no tener color se procede al revelado por una reaccin qumica
apropiada.
Esta tcnica se conoce como cromatografa monodimencional y el papel resultante recibe el nombre de
cromatograma monodimencional.
PIGMENTACION.- La pigmentacin es la coloracin de una parte determinada del organismo de un ser
vivo por el depsito en ella de pigmentos. Tales principios son sustancias con propiedades cromticas e
intervienen en numerosos procesos biolgicos, tanto en los vegetales como en los animales. En los
primeros destacan la clorofila y los carotenoides y en los segundos, la melanina y los pigmentos
respiratorios
ANTOCIANINAS.-Las antocianinas (del griego (anthos): flor + (kyneos): azul) son
pigmentos hidrosolubles que se hallan en las vacuolas de las clulas vegetales y que otorgan el color
rojo, prpura o azul a las hojas, flores y frutos. Desde el punto de vista qumico, las antocianinas
pertenecen al grupo de los flavonoides y son glucsidos de las antocianidinas, es decir, estn
constituidas por una molcula de antocianidina, que es la aglicona, a la que se le une un azcar por
medio de un enlace glucosdico. Sus funciones en las plantas son mltiples, desde la de proteccin de la
radiacin ultravioleta hasta la de atraccin de insectos polinizadores.
El trmino antocianina fue propuesto en 1835 por el farmacutico alemn Ludwig Clamor Marquart (18041881) para describir el pigmento azul de la col lombarda (Brassica oleracea). En realidad, las
antocianinas no slo incluyen a los pigmentos azules de las plantas sino tambin a los rojos y violetas.

El inters por los pigmentos antocinicos se

recientemente debido a sus propiedades
teraputicas. Por lo tanto, adems de su
como colorante alimenticios, las antocianinas
potenciales en la obtencin de productos con
el consumo humana

ha
intensificado
farmacolgicas
y
papel
funcional
son
agentes
valor agregado para

Estabilidad.-La
estabilidad
de
las
determinada por el grado de oxidacin, la
fuerza inica, la acidez y la interaccin con
molculas complejas.

antocianinas
est
temperatura,
la
otros radicales y

Distribucin.-En las plantas superiores las antocianinas se encuentran en todos los tejidos, incluyendo
las hojas, los tallos, las races, las flores y los frutos. Las antocianinas pueden confundirse con los
carotenoides, que tambin le dan color a las flores y hojas, aunque a diferencia de las antocianinas, stos
no son solubles en agua, sino que estn adosados a las protenas de los cloroplastos. Los carotenoides
dan colores rojo-anaranjados o amarillos, mientras que las antocianinas dan un abanico inmenso de
colores: la malvidina da color purpreo, las flavonas dan marfil o amarillo, muy frecuente en las hojas de
Agave, Erythrina indica, Pandanus y Sanseviera; la delfinidina, azul; la cianidina, violeta; la pelargonidina,
rojo y salmn como en Pelargonium, Dahlia, o Papaver. Un factor que contribuye a la variedad de colores
en flores, hojas y frutas es la coexistencia de varias antocianinas en un mismo tejido, por ejemplo en las
flores de la malva real (Althaea rosea) se puede encontrar malvidina y delfinidina.
Las antocianinas se encuentran en muchas frutas oscuras (como la frambuesa azul y negra, zarzamora,
cereza, mora azul, uva azul y negra) y muchas verduras. Segn el pH su color est dado por los grupos
hidroxilos de los anillos fenlicos y el benzopirilio, de modo tal que en medio cido (con un pH menor a 5)
toma coloraciones rojizas, mientras que en un medio alcalino (con pH mayor a 7) adquiere coloracin
prpura.
FUNCIONES.-Las antocianinas pueden encontrarse en las hojas, haciendo que las mismas muestren un
color rojizo. Esta coloracin puede deberse a un mecanismo de defensa, para proteger a las plantas, sus
flores y sus frutas contra la luz ultravioleta (UV) y, por su propiedad antioxidante, evitar la produccin de
radicales libres. Las hojas de muchas especies muestran un color rojo bien diferenciado durante el otoo,
tales como: Amherstia, Andira, Bombax, Brownea, Calophyllum, Cecropia, Ceiba, Cinnamomum,
Coccoloba, Diospyrus, Eugenia, Gustavia, Lophira, Mangifera, Mesua, Pachira, Persea, Saraca, Triplaris.
Tambin se hallan altas concentraciones de antocianinas en Acalypha y en muchas especies de las
familias Araceae, Bromeliaceae, Marantaceae, Liliaceae y Euphorbiaceae, que atraen a los polinizadores
a sus flores mediante los brillantes colores provistos por estos compuestos. En algunos rboles, como el
arce rojo Americano (Acer rubrum) o el roble escarlata (Quercus coccinea), los flavonoles (un tipo de
flavonoide) incoloros se convierten en antocianinas rojas cuando la clorofila de sus hojas se degrada. En
otoo, cuando la clorofila se descompone, los flavonoides incoloros se ven privados del tomo de
oxgeno unido a su anillo central, lo que los convierte en antocianinas, dando colores brillantes. Esta
transformacin qumica que consiste slo en la prdida de un tomo de oxgeno es la responsable de
nuestra percepcin de los colores del otoo. Las antocianinas que aparecen en el otoo probablemente
son las que protegen a las hojas del efecto de los rayos UV del Sol. Se especula que esta proteccin de
las hojas aumenta su efectividad para transportar nutrientes durante su senescencia

LOS CAROTENOIDES.- El otro gran grupo de pigmentos

que dan color rojo-anaranjado o amarillo a las flores,
semillas, y se diferencian de las antocianinas por su
su localizacin celular. Los carotenoides no son solubles
encuentran unidos a las protenas de la membrana
cloroplastos o asociados a protenas o en forma de
de plstidos.

son los carotenoides,

hojas,
frutos
y
estructura qumica y
en agua, sino que se
tilacoidal
de
los
cristales en otro tipo

LAS BETALAINAS.- Al igual que los carotenoides y flavonoides, las betalanas tambin cumplen una
funcin importante en la atraccin de animales, pero se cree que tienen funciones adicionales como la
absorcin de luz ultravioleta y proteccin contra los herbvoros. Estos pigmentos, rojo-violeta y amarillos,
estn presentes en 10 familias de plantas. Las betalanas y las antocianinas son mutuamente
excluyentes, por lo que cuando se encuentran betalanas en una planta, estarn ausentes las
antocianinas, y viceversa.
Antocianinas en vinos.- Los vinos estn compuestos por varias familias de compuestos qumicos.
Dentro de estas familias, las antocianinas son un importante parmetro de calidad de uvas rojas, debido
a la importancia que estos compuestos tienen en el color de los respectivos vinos. Las antocianinas estn
en las plantas en una distribucin especfica, tanto cualitativa como cuantitativamente, lo que las hace un
marcador bioqumico muy til en quimiotaxonomia, al igual que un ndice de control de calidad y
aseguramiento de calidad en productos de origen vegetal. En las uvas y en los vinos realizados a partir
de ellas, las antocianinas presentes estn estructuralmente basadas en cinco agliconas, denominadas
malvidina, petunidina, peonidina, delfinidina y cianidina. Las antocianidinas glicosiladas (antocianinas)
existen como 3-O-glucsidos, 3-O-acetilglucsidos y 3-O-(6-O-p-cumaroil) glucsidos
PTALO.-Ptalos y spalos en una flor.En
un antfilo que forma parte de la corola de una
interior del perianto, el cual comprende las
una flor. En una flor "tpica" los ptalos son
coloreados, y rodean las partes reproductivas.

botnica, el ptalo es
flor. Es la parte
partes estriles de
llamativos
y

El nmero de ptalos en una flor es indicativo

la planta: dicotiledneas, que tpicamente tienen
ptalos; y monocotiledneas, que tienen tres o
ptalos. La funcin principal de los ptalos o de
atraer los polinizadores.

de la clasificacin de
cuatro
o
cinco
algn mltiplo de tres
la corola es la de

Existe una considerable variacin en la forma

de ptalos entre
plantas. Los ptalos pueden estar unidos en la base, formando un tubo floral. En algunas flores, el
perianto entero forma una taza (llamada tubo de cliz) rodeando el gineceo, con los spalos, ptalos, y
estambres unidos al borde del cliz.
Las flores de algunas especies carecen o han reducido mucho sus ptalos. Son llamadas aptalas.
Ejemplos de flores con periantios muy reducidos pueden ser vistos entre las gramneas. Esto es
caracterstico de plantas polinizadas por el viento que no necesitan atraer a polinizadores.
Anatoma

La estructura de tpalos y ptalos es similar a la de los spalos. Las paredes de las clulas epidrmicas
frecuentemente son convexas o papilosas, especialmente en la cara adaxial. En muchos ptalos, como
los de Brassica napus, las papilas son cnicas, con un engrosamiento cuticular marcado en el pice, y
estras radiales hacia la base. Se ha sugerido que estos engrosamientos permiten una difusin pareja de
la luz emergente, de manera que el brillo de los ptalos es uniforme en cualquier ngulo de iluminacin.
Algunas clulas epidrmicas de los ptalos son osmforos, contienen aceites esenciales que imparten la
fragancia caracterstica a las flores. El mesfilo generalmente no presenta parnquima clorofiliano, sino
parnquima fundamental.
Color de los ptalos
El color de los ptalos resulta de la presencia de pigmentos. En muchas flores las clulas presentan
cromoplastos con pigmentos carotenoides (rojos, anaranjados, amarillos). Los pigmentos ms
importantes son los flavonoides, principalmente antocianinas, que se encuentran disueltos en el jugo
celular; los pigmentos bsicos son pelargonidina (rojo), cianidina (violeta), y delfinidina (azul), los
flavonoles (amarillos o color marfil). El color de los pigmentos antocinicos depende del pH del jugo
celular: en Brunfelsia australis (azucena del monte) las flores son violceas, al envejecer se vuelven
blancas por un cambio en el pH.
El color blanco de muchas flores, como por ejemplo Magnolia grandiflora, se debe al fenmeno de
reflexin total de la luz. Los ptalos pueden presentar espacios de aire en posicin subepidrmica o una
capa de clulas con abundantes granos de almidn, y en ambos casos la luz se refleja. Los colores
oscuros, se deben a una absorcin total de la luz operada por pigmentos complementarios. En Tulipa
gesneriana (tulipn negro) hay antocianina azul en las clulas epidrmicas y caroteno amarillo en las
subepidrmicas.
En algunas especies las partes basales de los ptalos contienen un flavonolglucsido llamado chalcona,
que absorbe la luz ultravioleta, convirtindolas en "guas de nctar" para los insectos polinizadores. Este
color particular, visible slo para los insectos, se denomina "prpura de abejas".
A qu deben su color las flores
Las flores deben sus colores a pigmentos, es decir sustancias naturales coloridas. El pigmento de las
hojas es la clorofila, muy conocida. Aparte de la clorofila, las plantas tienen 2 tipos de pigmentos que se
pueden clasificar en dos categoras: los amarillos y los lilas.
El pigmento amarillo: Este tipo de pigmentos, las xantofilas ofrecen una paleta de colores que va desde
el amarillo plido hasta el rojo casi marrn. Cuanto ms elevada es la concentracin de estos pigmentos,
ms oscuro es el color de la flor.
El pigmento lila: Este tipo de pigmentos, las antocianinas, ofrecen una gama de colores que cubre todos
los tonos de azul de malva y de lila. La presencia de antocianinas es tpica de las de las petunias. Una
fuerte concentracin de estos pigmentos da una flor de color lila.
3.- MATERIALES:
Materiales
Cronometro
Embudo

Reactivos
cido clorhdrico
Hidrxido de amonio

Equipo
Cubeta cromatogrfica
Campana

Gotero
Mortero de porcelana
Papel filtro
Pera
Piceta
Pipeta
Probeta
Regla y lpiz
Tijeras
Varilla de vidrio
Vaso de precipitado
Vidrio de reloj

Flores

4.- PROCEDIMIENTO:
Se procedi de la siguiente manera:
Se usaron las 3 muestras de flores de diferentes colores, luego se les quitaron los tallos a cada
flor, para dejar solo el ptalo
Se pasaron los ptalos al mortero para su posterior trituracin o molienda, para as conseguir el
pigmento de antocianina.
Se lleva a filtrar, recibiendo el pigmento en un vidrio de reloj.
Por otro lado en la hoja de papel filtro (fase estacionaria) que es de 20.5cm x 20cm se debe
marcar con la regla de medicin y con un lpiz de punta fina 1cm de la parte inferior de la hoja que
se denominara lnea de referencia donde se asienta la muestra da cada una de las muestras, de la
siguiente manera:

Se marca otra lnea de la misma manera a un centmetro de la parte superior.

Luego en la lnea de referencia se realiza la siembra de las muestras en el papel filtro.
Por otro lado en la cubeta cromatogrfica preparar la siguiente disolucin (fase mvil):
VOL (ml)
30

Reactivos
H2O
(Destilada)
25
HCl
15
NH4OH
Agitar de manera moderada casi inclinada de un lado hacia el otro.
Una vez preparado todo se introduce el papel filtro a la cubeta cromatogrfica y tapar muy bien la
cubeta, desde el momento en que el papel tenga contacto con el disolvente se debe cronometrar
por un tiempo aproximado de 45min, para que la fase mvil ascienda por el papel filtro.
Observar lo que ocurre durante ese tiempo.

 Hacer secar el papel filtro por unos minutos para el siguiente paso.
Posteriormente se realiza la medicin con una regla de la distancia del afluyente y eluyente y por
clculos matemticos determinar la distancia de retencin total.
5.- CALCULOS Y RESULTADOS:
DRT = DRE/DRA
Dnde:
DRT = Distancia de retencin total
DRE = Distancia de retencin eluyente (Fase estacionaria)
DRA = Distancia de retencin afluyente (Fase mvil)
Datos:
Muestra
Naranja
Lila
Rojo
DRTNaranja = DRTLila =

8
10.2

= 0.78

DRTRojo =

8
10.2

= 0.78

DRE
8
8

DRA
10
10
10

6.- OBSERVACIONES:
En los aspectos fsicos del disolvente el cido clorhdrico lquido, toxico corrosivo e incoloro,
hidrxido de amonio lquido, incoloro que desprende un gas toxico, agua destilada liquido incoloro
no peligroso, el disolvente preparado en la cubeta cromatogrfica con estos reactivos fue incoloro
no muy toxico y lleno de gases txicos los cuales nos ayudan a la separacin.
Las muestras que se utilizaron son flores de diferentes colores.
Se observ que no se debe de dejar escapar los gases de la solucin preparada.
De los datos y clculos se observ que son valores iguales.
Para la medicin, se ve que se tiene o debe de tener mucho cuidado al medir los datos o valores
requeridos para nuestra prctica.
Tambin se vio que se debe de colocar la lnea de referencia ms arriba de los 1cm que se coloc.
Al finalizar el tiempo que estuvo el papel en la cubeta se ve que los pigmentos o antocianinas
subieron al mismo nivel a excepcin del color naranja.
7.- CONCLUSIONES:
De la solucin se concluye que no se debe de dejar escapar los gases que desprenden la misma,
ya que el gas ayuda a que la muestra suba a travs del papel, adems que es toxico (por lo cual
se hace uso de la campana de absorcin).

 En esta prctica se concluy que las distancias de retencin totales (DRT) para las distintas
muestras son idnticas.
Se concluye que al medir la distancias de retencin del eluyente y afluente debe de tenerse mucho
cuidado, ya que varias veces no se podr observar donde es exactamente el trmino o hasta
donde pudo llegar la antocianina a travs del papel filtro.
Se concluye que la lnea de referencia en el papel filtro debe de ser a un centmetro y medio o ms
para evitar errores, como ocurri en esta prctica. La muestra naranja al colocar el papel en la
cubeta, estaba cerca a la solucin o fase mvil que se cay la muestra en la disolucin. De este
modo que la muestra no ascendi o subi por el papel, y no se tomo en cuenta esta muestra.
Se concluye que las otras muestras subieron al mismo nivel, pero no asi la muestra naranja.
8.- BIBLIOGRAFA:
http://es.wikipedia.org/wiki/Antocianina
http://es.wikipedia.org/wiki/Pigmento
http://www.botanica.cnba.uba.ar/Trabprac/Tp6/Pigmentos.htm
http://www.mclibre.org/otros/daniel_tomas/laboratorio/cromatografia/cromatografia.html
http://laboratoriosdequimicaorganica.bligoo.es/cromatografia-en-papel#.UkXVoDtg948