ENZIMAS

So protenas com atividade cataltica e alto grau de especificidade.

O primeiro reconhecimento que alguma forma de catlise existia em sistemas biolgicos
ocorreu no incio do sculo XIX, a partir de estudos da digesto da carne pelas secrees
estomacais e da transformao do amido em acar pela saliva e por vrios extratos de plantas.
Nos anos 1850, Louis Pasteur concluiu que a fermentao do acar em lcool era catalisada
por fermentos. Postulou que esses fermentos, depois chamados enzimas, no lvedo, eram
inseparveis da estrutura das clulas vivas do lvedo, idia que prevaleceu por muitos anos.
Em 1897, Eduard Bchner extraiu do lvedo, na forma solvel ativa, o conjunto de enzimas que
catalisava a fermentao do acar em lcool. Foi a prova que enzimas poderiam continuar
ativas depois de removidas da estrutura celular.
Em 1926, James Sumner, da Universidade Cornell, isolou a enzima urease a partir de extratos
da soja.
Apenas nos anos 1930, aps John Northtrop e Moses Kunitz cristalizarem pepsina, tripsina, e
outras enzimas digestivas e determinarem que eram protenas, como a urease, aceitou-se a
natureza protica das enzimas.
Alguns questionamentos ainda persistem:
Por que foram as protenas selecionadas para serem catalisadores celulares ?
Por que as enzimas so to maiores que os substratos sobre os quais elas agem ?
Como os aminocidos, incapazes de acelerar reaes qumicas, podem produzir tal fora
cataltica quando unidos em sequncias especficas ?

Com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA catalticas, todas as enzimas puras
conhecidas so protenas, e a atividade cataltica depende da integridade da estrutura protica.
Por exemplo, se uma enzima fervida com cido forte ou incubada com tripsina, que so
tratamentos que quebram cadeias polipeptdicas, sua atividade cataltica destruda, mostrando
que a estrutura primria da protena enzimtica necessria para a atividade.

As enzimas tm massa molecular variando de 12.000 at acima de um milho. So, portanto,

muito grandes quando comparadas com os substratos ou com os grupos funcionais sobre os
quais elas agem.

Algumas enzimas so formadas apenas por cadeias polipeptdicas e no contm nenhum outro
grupo qumico alm de resduos de aminocidos, como a ribonuclease pancretica.

Outra enzimas necessitam para a sua atividade de um componente qumico adicional chamado
cofator. O cofator pode ser inorgnico como Fe2+, Mn2+ ou Zn2+, ou pode ser uma molcula
orgnica complexa (coenzima).

Algumas enzimas podem precisar de ambos.

CLASSIFICAO E NOMENCLATURA DAS ENZIMAS

Muitas enzimas so denominadas pela adio do sufixo ase ao nome de seus substratos, como a
urease e a arginase.
Porm, outras enzimas receberam nomes que no tm qualquer relao com seus substratos, por
exemplo, pepsina e tripsina.
Para evitar confuses nas denominaes das enzimas, foi adotada uma base sistemtica para
classificar e denominar as enzimas, atravs de um acordo internacional.
Este sistema classifica as enzimas em 6 grandes classes, cada uma com subclasses, segundo o
tipo da reao catalisada.

A cada enzima dado um nmero de classificao com 4 dgitos e um nome sistemtico que
identifica a reao catalisada.
Exemplo:
ATP + D-Glicose ADP + D-Glicose-6-fosfato
O nome sistemtico da enzima que catalisa a reao acima ATP: glicose fosfotransferase, que
indica que ela catalisa a transferncia de um grupo fosfato do ATP para glicose. Seu nmero de
classificao 2.7.1.1, o primeiro dgito (2) indica o nome da classe (transferase), o segundo
(7) indica a subclasse (fosfotransferase), o terceiro dgito (1) indica a sub-subclasse
(fosfotransferase com um grupo hidroxila como aceptor), e o quarto dgito (1) indica a dGlicose como a substncia receptora do grupo fosfato.
O nome trivial dessa enzima hexoquinase.

CARACTERSTICAS CATALTICAS DAS DAS ENZIMAS

As enzimas so catalisadores verdadeiros. Aumentam a velocidade de reaes qumicas

especficas e no alteram a constante de equilbrio das reaes que catalisam.

A velocidade de qualquer reao qumica proporcional concentrao de molculas em

estado de transio. Assim, a velocidade de uma reao qumica ser muito alta se uma grande
frao das molculas do reagente estiverem no estado de transio.
Pode-se elevar a velocidade de uma reao pelo aumento da temperatura ou pela adio de um
catalisador ao sistema reacional.

EFEITO DA CONCENTRAO DE SUBSTRATO NA VELOCIDADE DE REAO.

Supondo-se a concentrao enzimtica constante:

Quando as concentraes de substrato so baixas, a velocidade de reao tambm baixa.
Aumentando-se a concentrao de substrato, aumenta-se a velocidade da reao.
Medindo-se a velocidade de reao a cada aumento da concentrao de substrato, percebe-se
que o aumento da velocidade da reao cada vez menor. Finalmente, aps aumentos
sucessivos na concentrao do substrato, haver apenas acrscimos desprezveis na velocidade
da reao.

Ou seja, existe um limite de concentrao de substrato alm do qual no haver mais

influncia na velocidade da reao.
Nesta situao, chamada de velocidade mxima (Vmx), a enzima est saturada com o substrato
e no pode funcionar mais rpido.
Este fato levou Victor Henri, em 1903, concluso que uma enzima combina-se com a
molcula dos seu substrato para formar um complexo enzima-substrato.
Esta idia foi ampliada em uma teoria geral das enzimas , por Leonor Michaelis e Maud
Menten em 1913. Eles propuseram que:
E + S ES
ES P + E

A enzima combina-se com o seu substrato, formando um complexo, numa reao relativamente
rpida. Numa segunda reao reversvel, menos rpida, o complexo desfeito liberando o
produto da reao e a enzima livre.

Como a segunda etapa o passo limitante da velocidade, a velocidade observvel deve ser
proporcional concentrao do complexo ES.

A VELOCIDADE DA REAO CATALISADA SER MXIMA QUANDO

VIRTUALMENTE TODAS AS MOLCULAS DA ENZIMA ESTIVEREM NA FORMA
COMPLEXADA (ES) E A CONCENTRAO DA ENZIMA LIVRE (E) FOR
DESPREZVEL.

Esta condio existe quando a concentrao do substrato muito alta.

RELAO QUANTITATIVA ENTRE A CONCENTRAO DO SUBSTRATO E A

VELOCIDADE DA REAO ENZIMTICA

A figura acima mostra a relao entre a concentrao de substrato e a velocidade da reao

enzimtica.
A curva que expressa esta relao tem a mesma forma geral para a maioria das enzimas.
Michaelis e Menten definiram uma constante, chamada KM, que til para estabelecer a relao
precisa entre a concentrao de substrato e a velocidade da reao enzimtica.
KM a concentrao de substrato especfico na qual uma enzima produz metade de sua
velocidade mxima.

A forma caracterstica da curva de saturao de uma enzima pode ser expressa

matematicamente pela equao de Michaelis-Menten:

A Equao de Michaelis-Menten
A deduo comea com as duas reaes bsicas envolvendo a formao e a quebra do
complexo enzima-substrato:

Algumas condies:
Se [Et] representa a concentrao total da enzima (a soma da enzima livre e da combinada),
[ES] a concentrao do complexo enzima-substrato, e [Et] [ES] representa a concentrao
da enzima livre. [S] a concentrao do substrato , ordinariamente, muito maior que [E t] de
forma que a quantidade de S (substrato) ligado pela E (enzima) , a qualquer instante, muito
pequena comparada com a concentrao total de S. A deduo comea considerando as
velocidades de formao e quebra de ES:

1- Velocidade de formao de ES:

2- Velocidade de quebra de ES:

3- O equilbrio estacionrio:
velocidade de formao de ES = velocidade de quebra de ES

4- Separao das constantes de velocidade:

5- Simplificando a expresso:

6- Resolvendo a equao em termos de [ES]:

7- Simplificando e combinando as constantes de velocidade em uma nica expresso:

Definindo-se a constante de Michaelis-Menten como km = (k2 + k-1)/k1

E a velocidade inicial, de acordo com Michaelis-Menten, sendo dada pela velocidade de quebra
da segunda reao, cuja constante de velocidade k2:

E substituindo-se o valor de [ES] na equao anterior, obtemos:

E ainda, definindo-se Vmx = k2[Et], ou seja, a velocidade da reao quando toda enzima
presente est saturada pelo substrato na forma de ES ([ES] = [Et]), temos a Equao de
Michaelis-Menten:

Esta a equao da velocidade para reaes enzimticas com um substrato. D a relao

quantitativa entre a velocidade inicial V0, a velocidade mxima Vmx e a concentrao inicial do
substrato, todas relacionadas atravs da constante Km de Michaelis-Menten.
Uma relao quantitativa importante surge desta equao quando a velocidade inicial da reao
exatamente igual metade da velocidade mxima, isto , quando V0 = 1/2 Vmx. Ento:
Vmx/2 = Vmx [S] / Km + [S]

Dividindo-se esta equao por Vmx :

Resolvendo Km, temos:

A equao de Michaelis-Menten bsica em todos os aspectos da cintica enzimtica.

Conhecendo-se km e Vmx podemos calcular a velocidade de uma reao enzimtica em qualquer
concentrao de substrato.

CADA ENZIMA TEM UM km CARACTERSTICO PARA UM DADO SUBSTRATO

Em condies definidas de pH e temperatura o km de uma enzima para um dado substrato
caracterstico.

Certas enzimas, como a anidrase carbnica, requer uma concentrao relativamente alta de
substrato para atingir a metade da velocidade mxima de catlise. Outras enzimas, como a
hexoquinase do crebro que catalisa a transferncia de um grupo fosfato do ATP para glicose,
atingem a metade da velocidade mxima com concentraes de substrato muito baixas.
Enzimas que trabalham com dois ou mais substratos podem ter um km diferente para cada
substrato.
AS ENZIMAS TM UM pH TIMO PARA SUAS REAES

As enzimas tm um pH timo caracterstico, no qual a sua atividade mxima. As curvas,

acima, de variao da atividade enzimtica em diferentes valores de pH refletem o pH no qual
importantes grupos doadores ou receptores de prtons no stio cataltico esto em seus estados
de ionizao adequados. A atividade cataltica das enzimas pode, portanto, ser regulada ao
menos em parte por variaes de pH do meio em que se encontram.

AS ENZIMAS TM ESPECIFICIDADE POR SEUS SUBSTRATOS

Algumas tm especificidade quase absoluta por um dado substrato e no reagir nem mesmo
molculas muito semelhantes. Outras enzimas, tm especificidade relativamente ampla e agem
em muitos compostos com caractersticas estruturais comuns.
A regio da molcula da enzima onde acontece a interao com o substrato e sua transformao
qumica chamado stio ativo ou stio cataltico.

Apesar das enzimas diferirem muito em estrutura, especificidade e modo de catlise, podem-se
estabelecer algumas generalizaes acerca de seus stios catalticos:
1- O stio ativo ocupa uma parte relativamente pequena do volume total de uma enzima;
2- O stio ativo um entidade tridimensional;
3- Os substratos ligam-se s enzimas por mltiplas atraes fracas;
4- Os stios ativos so depresses ou fendas;
5- A especificidade de ligao depende do arranjo, definido com preciso, dos tomos no stio
ativo.

As formas dos stios ativos das enzimas so modificadas pela ligao com o substrato. Ou seja,
os stios tm formas que so complementares do substrato s depois do substrato estar ligado.
Este processo de reconhecimento dinmico chamado de encaixe induzido.