GUIA DE MICRO LABORATORIO

TINCIONES:
-TINCION SIMPLE: solo se emplea un colorante para teir clulas bacterianas
ejemplos: soluciones de azul de metileno, de eosina, de verde de malaquita,
Wright.
-TINCION DE WRIGHT: se utiliza normalmente en histologa para teir clulas
de la sangre, normalmente se utiliza para teir frotis (conteo de glbulos
blancos) , en citogentica se utiliza para teir cromosomas y facilita el
diagnstico de enfermedades o sndromes.
-TINCION DE GRAM: fue creada por Hans Christian J. Gram por eso su nombre
de Gram se dice que es una tincin diferencial por que divide a las bacterias en
dos grandes grupos: Gram + y Gram PROCEDIMIENTO: en un porta objetos
poner la muestra, fijar con la flama, cristal violeta, lugol, alcohol-cetona,
safranina (CLASE)

Gram +

Gram-

PEPTIDOGLUCANO: cadenas de tipo

glucano de N- acetil glucosamina y
acido N- acetilmuronico, mediante un
puente peptdico
ACIDO TECOICO: fosfato de polirribitol
o
glicerol-fosfato
unidos
al
pptidoglucano

PEPTIDOGLUCANO:
versin
ms
delgada de peptidoglucano que se
encuentra en bacterias Gram-

ACIDO LIPOTEICOICO: cido teicoico

unido a lpidos

MEMBRANA EXTERNA: fosfolpidos con

cidos grasos saturados.

AZULES

PROTEINAS: porinas, lipoprotenas y

protenas de transporte.

ESPACIO PERIPLATICO: enzimas que

participan
en
el
transporte,
degradacin y sntesis.

LIPOPOLISACARIDOS:
lpido
polisacridos central y antgeno O.
ROJOS

A,

-TINCION DE ZHIEL NEELSEN: descubierta por el medico Franz Zhiel es una

tincin diferencial identifica microorganismos patgenos como tuberculosis

PROCEDIMIENTO: preparar frotis, poner carbolfuccina, dejar secar 20

minutos, lavar, decolorar con cido-alcohol, lavar, azul de metileno (1 min.),
lavar, secar y observar.

PRUEBAS BIOQUIMICAS
-OXIDASA: oxidacin del citocromo que es reducido por el oxgeno molecular
que produce el agua oxigenada o perxido de hidrogeno.
-CATALASA: enzima que descompone el perxido de hidrgeno. La mayora de
las bacterias anaerobias descomponen el perxido de hidrogeno.
-CUAGULASA: forma un halo amarillo en el agar
-AGAR KLIGER: tiene lactosa, dextrosa, tisulfato de sodio y rojo fenol como
indicador, sirve para valorar la fermentacin de estos dos azucares y la
produccin de sulfuro de hidrogeno.
-AGAR TRIPLE AZUCAR: este tiene dextrosa, lactosa y sacarosa y de igual
forma es para fermentar los azucares.
-AGAR CITRATO DE SIMMONS: contiene citrato de sodio como nica fuente
de energa es verde y su indicador cambia azul
-AGAR SIM: S: sulfuro de hidrogeno, I: indol se le agrega reactivo como Konvac
o de Erlich si hay cambio de color del reactivo de amarillo a negro positivo y si
se queda amarillo negativo. M: movilidad
-AGAR MIO: M: movilidad I: indol O:ornitina
-CALDO DE UREA: es una dimida del cido carbnico con liberacin de
amoniaco y dixido de carbono. Es til para la observacin de la produccin de
la ureasa por el gnero de las bacterias proteus.
CLASIFICACION DE BACTERIAS:
COCOS: La clasificacin de las clulas esfricas y esferoidales en distintos de
agrupamiento de clulas despus de su fisin.
ESTREPTOCOCOS: cocos reunidos en disposicin de collar o cadena
alineados.
ESTAFILOCOCOS: son cocos en forma de racimos de uvas
BACILOS: Son bacterias de forma alargada o de barra que cuando se observan
in vivo efectan un movimiento curvo en uno de sus extremos.

ESPIRILOS O BACTERIAS HELICOIDALES: Se encuentran dos tipos de

bacterias esta forma, las rgidas y las flexibles. Las especies rgidas se enrollan
en varias vueltas, otras tienen simplemente forma de coma.

ESTERILIZACION:
ESTERILIZACIN: Es el proceso por el que todas las clulas vivas, son
destruidos o eliminados de unos objetos o hbitat.
DESINFECCIN: consiste en la destruccin, inhibicin o eliminacin de
microorganismos que pueden causar enfermedad.
DESINFECTANTES: son agentes, normalmente qumicos, empleados para
desinfectar y se utiliza normalmente con objetos inanimados. Un desinfectante
no esteriliza necesariamente un objeto, porque pueden permanecer esporas y
algunos microorganismos viables.
ESTERILIZACION CALOR:
-Calor hmedo: 121C, durante diversos intervalos de tiempos
-Calor seco: 171C 1 hora.
-pasteurizacin con agua caliente: 75 a 100C
-perxido de hidrgeno: 3 al 6%
-formaldehido: 1 al 8%
-alcohol: 70%
-productos fenoliticos: 0.5 al 3%
-productos yodoforos: de 30 a 50 mg de yodo libre
AUTOCLAVE: esterilizacin con calor hmedo fue creada por Chamberland en
1884. Temperatura de 121C a 15 libras de presin 15 minutos.
Para desactivar bacterias es 120C 15 libras de presin y tiempo 20 a 30
minutos.

MEDIOS DE CULTIVOS:
SOLIDOS: las colonias se logran a ver en la superficie y se pueden describir y
tambin contabilizarlas

LQUIDOS: crecen sin forma de colonia ejemplos: caldo nutritivo, caldo

destrozado, sirven como medio de transporte o medios de conservacin
SEMISLIDOS : no solidifican totalmente ejemplo es el SIM

a).- Medios simples o bsales:

Estos medios son de uso general en el laboratorio, para grmenes no
exigentes, entre los cuales estn los siguientes:
-Agua peptonada: Se emplea como solucin de peptona al 1 0 2 % y
suministra metabolitos nitrogenados.
-Agar nutritivo: Consiste en extractos de carne, peptona, agar y agua. Es de
uso general y se emplea a menudo como base en la elaboracin de medios
ms complejos.
-Caldo nutritivo: Es un extracto acuoso de carne con peptona al 1%
adicionado con Cloruro de Sodio. Su uso principal en el laboratorio es de
almacenaje de especmenes
b).- Medios enriquecidos:
Estos medios estn adicionados con complementos para crecer, necesarios
para microorganismos patgenos importantes. Algunos de estos complementos
pueden ser: sangre fresca desfibrinada, suero, huevo y glicerol. Entre los
medios enriquecidos ms usados se encuentran los siguientes:
-Agar sangre (o gelosa sangre): Es un medio base al que se le adiciona un 10
% de sangre desfibrinada estril, el cual debe tenerse a 45 C
aproximadamente y vaciarse directamente a cajas de Petri. Este medio se
recomienda para identificar bacterias hemolticas como el gnero
Streptococcus.
-Agar chocolate: Es el medio base para agar sangre, solo que es llevado a
100 C antes de vaciarse a cajas de Petri, durante un minuto en bao Maria
hirviendo, con lo que ocurre la hemlisis y se vuelve un mejor sustrato para
Haemophilus sp.
-Medio Leffler: Es un medio sumamente enriquecido con suero, de utilidad
para el cultivo de bacterias del genero Corynebacterium.
-Medio de Bordet-Gengou: Es un medio complejo que contiene patata,
glicerol y sangre, se emplea en el aislamiento y cultivo de Bordetella pertusis.

-Medio de Robertson: Este medio contienen adems de la sustancia basal,

carne cocida, peptona y cloruro de sodio. Es til para el cultivo de anaerobios y
para mantener algunos cultivos patrn.

c).- Medios de cultivo selectivos:

Son medios que deben su importancia al hecho de que contienen sustancias
que impiden el desarrollo de la flora bacteriana no patgena, permitiendo el
crecimiento solo de los grmenes patgenos para los que este formulado. Para
tal objetivo se emplean diferentes sustancias como por ejemplo, sales biliares
que impiden el desarrollo de microorganismos no entricos; el verde malaquita,
que impide el crecimiento de bacterias que no pertenecen a las Mico bacterias,
reactivos que proporcionan un pH cido, con lo que se permite el desarrollo de
los hongos pero se inhibe el de las bacterias, etc.
Tambin en algunos de estos medios se incorporan sustancias que estimulan el
desarrollo de bacterias especficas.
Algunos de estos medios son:
-Agar McConckey: A este medio se le han incorporado sales biliares, ya que
es selectivo para bacilos entricos, adems de los nutrientes bsicos contienen
lactosa y rojo neutro como indicador de fermentacin.
-Agar SS: El cual aparte de las sales biliares contienen verde brillante que
inhibe a bacterias coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella
-Agar Sabouroud: Es un medio de dextrosa y peptona con un pH ajustado a 5
o 5.5 con lo que se favorece el desarrollo de los hongos e inhibe las bacterias.
-Medio de Lowenstein Jensen: Es u medio completo que Contiene varios
fosfatos minerales, sulfatos y citratos as como glicerol, almidn y huevo,
sustratos necesarios para el desarrollo de la familia de las Micobacterias.
Adems se ha adicionado con verde de malaquita como inhibidor de
otros microorganismos.

-Infusin de cerebro y corazn o BHI: Este es un medio lquido muy til,

pues permite el desarrollo de microorganismos delicados. Puede adicionarse
con agar.
-Agar soya tripticasa: En este medio la triptona y la peptona de soya
permiten el desarrollo de microorganismos delicados que requieren de suero.
-Medio de Thayer-Martin: En este medio se han incorporado dos
antibiticos, la polimixina y la ristocetina, que inhiben el desarrollo de la
mayora de los microorganismos, con excepcin de las especies patgenas de
Neisseria, gonococos y meningococos.