ENTEROCOCOS: procedimientos de aislamiento e identificacin en el laboratorio

ENTEROCOCOS: PROCEDIMIENTOS DE AISLAMIENTO

E IDENTIFICACIN EN EL LABORATORIO
Loretta Durn
Esther Damiani
Christian Trigoso

RESUMEN
Los diferentes miembros del gnero Enterococcus han asumido un papel muy
importante entre las causas de infecciones intrahospitalarias. El creciente nmero
de infecciones causadas por dichos organismos y el progresivo desarrollo de
resistencia antimicrobiana hacen que su precisa identificacin hasta el nivel de
especie y la determinacin de su perfil de susceptibilidad antimicrobiana sean de
alta importancia para el laboratorio de bacteriologa.
El presente estudio resume los procedimientos actualmente recomendados
para el aislamiento, identificacin y determinacin de la susceptibilidad
antimicrobiana de estos patgenos en laboratorios clnicos de bacteriologa.
Correspondencia:

estherpaula@yahoo.es

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INTRODUCCION
Los enterococos son cocos Gram positivos que constituyen parte de la flora
normal del intestino humano y de animales. La dos especies de este gnero que
causan infecciones humanas con mayor frecuencia son Enterococcus faecalis y
Enterococcus faecium. (1)
Inicialmente se los reconoci como patgenos de infecciones urinarias,
bacteriemias y como causa infrecuente de endocarditis bacteriana subaguda.
En los ltimos 20 aos los Enterococcus vienen adquiriendo una inusitada
importancia hospitalaria, de hecho se los considera como la segunda causa
ms frecuente de infecciones del tracto urinario (ITU) y la tercera causa de
bacteriemia nosocomial. Tambin son causa de endocarditis bacteriana subaguda
y de abscesos intraabdominales. La terapia antimicrobiana masiva y la capacidad
intrnseca de resistir la accin bactericida de muchos antibiticos hacen posible
la supervivencia de dichos microorganismos en el entorno hospitalario. Por si
solos no presentan una alta virulencia ni capacidad de invasin de los tejidos, es
por lo que las infecciones solo se producen en determinados puntos anatmicos.
Los estreptococos fueron observados y descritos por primera vez a partir
de sepsis puerperal (Pasteur) y en infecciones de heridas (Koch). La frecuencia y
la importancia de las infecciones causadas por ellos fueron anotadas por Ogston,
Fehleisen y Rosenbach a mediados de la dcada de 1880. Griffith (1928),
estudiando la correlacin de especificidad y patogenicidad de los neumococos,
descubri el fenmeno de transformacin sirviendo de base para la demostracin
de Avery, Mc. Leod y Mc Carty (1994) de que los caracteres genticos radicaban
en el DNA.
En la dcada de 1930 Lancefield dise un sistema de tipificacin
serolgico en el que se clasific a los enterococos como Streptococcus tipo
D, incluyendo en el grupo al Streptococcus bovis. En 1937 Sherman clasific
a los estreptococos en los siguientes grupos: pigenos, lcticos, viridans y
enterococos. Dicha clasificacin se mantuvo hasta la dcada de 1980 cuando
avances en taxonoma basados en el anlisis del cido nucleico mostraron que
los enterococos ameritaban su designacin como un gnero separado. De esta
manera Streptococcus faecalis y S. faecium se convirtieron en Enterococcus
faecalis y E. faecium, respectivamente. (2) Subsecuentemente se reclasificaron
otras especies de estreptococos y se reconocieron nuevas especies dentro de
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este gnero. En el momento actual se reconocen ms de 12 especies dentro

del gnero, de las cuales pocas son patgenos humanos. Tradicionalmente, la
mayora de estas infecciones ha sido causada por E. faecalis. Sin embargo, en
los ltimos 15 aos la incidencia de infecciones causadas por E. faecium, el cual
es muchas veces multiresistente, ha aumentado en forma muy rpida. En los EE.
UU. la distribucin por especie entre las bacteriemias causadas por enterococos
muestra los siguientes porcentajes: E. faecalis 60%, E. faecium 20%, E. rafinosus
2.0%, E. durans 0.5%, E. avium 0.5%, E. gallinarum 0.5%, E. casseliflavus y
Enterococcus spp. 16%.
Los laboratorios de bacteriologa tradicionalmente utilizan las siguientes
caractersticas para identificar a los enterococos: reaccin bilis esculina positiva,
reaccin con anticuerpos del Grupo D positiva y habilidad de crecer en ClNa al
6.5%. Sin embargo pueden surgir algunas dificultades de interpretacin utilizando
dichas caractersticas. Por ejemplo, en algunas cepas es difcil identificar la
reaccin con el anticuerpo D. Los lactococos tambin pueden crecer en ClNa
al 6.5% y/o ser bilis esculina positivos; sin embargo, los lactococos no crecen o
crecen muy lentamente a temperatura de 45 C.
Existen dos otros gneros (Pediococcus y Leuconostoc) que comparten
muchas de las caractersticas bioqumicas de los enterococos y que tambin
producen antgenos del Grupo D y pueden crecer a temperatura de 45 C.
Dichos organismos son intrnsicamente resistentes a la vancomicina, lo cual
permita su separacin de los enterococos antes de que surgieran las cepas de
enterococos resistentes a la vancomicina (ERV). Actualmente, se separa dichos
gneros de los ERV por la produccin de pirrolidonilarilamidasa (PIR) y leucina
aminopeptidasa (LAP). En dichos casos las reacciones tpicas son las siguientes:
+/+ para enterococos; +/- para Pediococos; y -/- para Leuconostoc. Este ltimo
tambin produce gas de la glucosa. (3)
Previa la aparicin de los ERV no se justificaba tratar de identificar a los
enterococos en el laboratorio hasta el nivel de especie puesto que 90% de las
infecciones eran causadas por E. faecalis, susceptible a la ampicilina. Dicho
panorama ha cambiado drsticamente con el desarrollo de resistencia y sobre
todo con la aparicin de cepas resistentes a la vancomicina, la mayora de las
cuales son E. faecium pero tambin incluyen E. casseliflavus y E. gallinarum. Por
esta razn en la prctica laboratorial actual es necesario poder identificar hasta el
nivel de especie. Dicho nivel de especificacin es til al seleccionar antibiticos
para infecciones severas puesto que existen diferencias en la susceptibilidad
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antimicrobiana de las diferentes especies de enterococos. Igualmente es til

para detectar brotes de infecciones nosocomiales o para determinar si un mismo
paciente con infecciones repetidas por enterococos sufre de relapsos de infeccin
a causa de tratamiento no adecuado o de nuevas infecciones.
Se diferencian las especies de enterococos por una serie de pruebas que
incluyen la acidificacin de carbohidratos, hidrlisis de la arginina, tolerancia
a la telurita, motilidad y pigmentacin. Por ejemplo, las cepas de E. faecalis
caractersticamente toleran a la telurita y producen colonias de color negro. Las
especies motiles incluyen a E. casseliflavus (E. flavescens) y E. gallinarum.
E. casseliflavus y E. mundtii producen pigmento amarillo. La motilidad y la
produccin de pigmento son particularmente tiles en diferenciar E. gallinarum
y E. casseliflavus de E. faecium aunque se reconoce que algunas cepas pueden
mostrar reacciones atpicas.
La identificacin de los enterococos hasta el nivel de especies puede ser
complicada a causa de las mltiples pruebas requeridas y la existencia de cepas
con caractersticas fenotpicas atpicas. (4) Por estas razones, los laboratorios de
referencia han utilizado pruebas de biologa molecular para dicho propsito.
(5-7)
Desde el punto de vista prctico el mayor imperativo es poder identificar
las cepas de E. faecalis y de E. faecium y de poder establecer sus perfiles de
susceptibilidad. Es til reconocer que las cepas de E. faecalis son susceptibles a la
ampicilina y resistentes a la quinupristina-dalfopristina y las cepas de E. faecium
son resistentes a la ampicilina y susceptibles a la quinupristina-dalfopristina.

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Flujograma para la identificacin del gnero Enterococcus

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300
, ,

, ,
-
+
+
+
+ *
+
+ *
+
- *
- *

Hemlisis

Catalasa

Cl Na 6,5%

Bilis esculina

Crecimiento a 45 C

Hidrlisis Arginina

Hidrlisis Piruvato

Sorbitol

Manitol

Rafinosa

Arabinosa

+ *

+ *

E. faecium

E. faecalis

Prueba Bioqumica

- *

E. durans

Tabla de interpretacin de Pruebas Bioqumicas

+*

S. bovis
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TABLA2. CARACTERSTICAS FENOTPICAS

UTILIZADAS PARA LA IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE ENTEROCOCCUS Y
ALGUNAS ESPECIES RELACIONADAS DE COCOS GRAM POSITIVOS

a Abreviaturas y smbolos MAN, manitol; Sor, sorbosa;ARG, arginina; ARA, arabinosa; SBL, sorbitol;
RAF, rafinosa; TEL, 0.04% telurito; MOT, mobilidad; Pig, pigmento; SUC, sucrosa; PYU, piruvato;
MPG, metil-o-Dglucopiranosido; +,90% o ms de las cepas son positivas; -,10% o menos de las cepas
son positivas; V variable(11 al 89% de las cepas son positivas).
b Caratersticas fenotpicas basadas en datos de la cepa tipo.
c Las caractersticas fenotpicas de E. porcinus son idnticas a las de E. villorum. Estas dos especies
recientemente descriptas corresponden a un solo taxon.
d Existen excepciones (-3% de cepas que muestran reaccines aberrantes)

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