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FIJACIN, USO DE ACUERDO AL ESPCIMEN, VENTAJAS Y DESVENTAJAS, ACCIN EN LOS TEJIDOS Y TIEMPO
DE EXPOSICIN EN EL PERSONAL DE LABORATORIO DE ANOMIA PATOLGICA.
GRUPO N 3
TERCER SEMESTRE
PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016
Grupo N-3
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RIOBAMBA ECUADOR
GRUPO N-3
INTEGRANTES:
N1
2
3
APELLIDOS Y NOMBRES
Collaguazo Enrquez Erika Gabriela
Molina Ortiz Jhonnatan Paul
Valarezo Flores Stefanye Anah
TEMA:
FIJADORES
DE
TEJIDOS:
FIJADORES
CON
SIN
FORMOL,
N1
25%
Grupo N-3
50%
75%
PARTICIPACIN
100%
Observacin
100%
Trabajo correctamente, y
colaboro en todo lo
necesario.
100%
Colaboro con todas las
necesidades requeridas,
para la elaboracin del
presente trabajo
100%
Su colaboracin fue clave
para la correcta
elaboracin del trabajo.
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Cal. Docente
INTRODUCCIN
El Laboratorio de Anatoma Patolgica es un rea donde se trabaja como mucha precaucin y sobre
todo sin cometer errores ya que estos conllevaran un resultado que perjudicara al paciente y en si al
mismo profesional.
En el rea de anatoma patolgica se subdivide en fases que son:
La fase pre
analtica-analtica-post analtica.
Dentro de la fase analtica se encuentra la sub rea fijacin la cual indicaremos cuales son los tipos
de fijadores con o sin formol con sus respectivas caractersticas utilizados en distintas muestras de
rganos.
Antes de la fijacin tisular debemos de obtener la muestra. La extraccin de esta constituye la
primera parte del estudio histolgico; es el Antomo Patlogo el que se pone en contacto con el
rgano que se vaya a estudiar. A ser posible se debe efectuar la extraccin tomando un fragmento de
la lesin y una toma de los tejidos subyacentes. Su grosor no debe sobrepasar los 5 mm.
La fijacin tisular consiste en interrumpir los procesos degradativos que a parecen tras la muerte
celular es decir evitar la autolisis, tratando de conservar la morfologa y composicin de los tejidos
lo ms prxima a la normalidad. La fijacin debe ser inmediata (dentro del minuto que sigue a la
extraccin del tejido).
La fijacin proporciona una imagen esttica:
Imagen real: es la imagen que tena el tejido cuando estaba vivoImagen equivalente: es el que se obtiene despus de la manipulacin y comprende la
fijacin, inclusin, corte y coloracin.
Grupo N-3
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OBJETIVO GENERAL:
Dar a conocer los tipos de fijadores utilizados en distintos rganos dentro del laboratorio de
anatoma patolgica
OBJETIVO ESPECFICOS:
Conocer e identificar las caractersticas de los fijadores con o sin formol.
Identificar las ventajas y desventajas que producen estos fijadores.
Dar a conocer el uso de los fijadores de acuerdo al espcimen.
Conocer el tiempo de exposicin del personal de anatoma patolgica a estos fijadores.
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DESARROLLO
La Fijacin
Los fijadores adems de conservar intacta la estructura durante un espacio de tiempo ms o menos
largo, paralizan todos los procesos orgnicos.
La fijacin ideal se realiza entre 0C y 4C porque aunque el fro retarda la accin del fijador al
contraer la pieza, tambin paraliza la autolisis del tejido que ser ms o menos rpida dependiendo
por ejemplo los tejidos ricos en enzimas digestivas como el pncreas o aquellos que tienen gran
cantidad de grmenes sufran la autolisis con mayor intensidad.
Las soluciones fijadoras tienen por objeto precipitar las protenas, aumentar la consistencia de los
tejidos, inactivar las enzimas proteolticas e inhibir el crecimiento bacteriano y por lo tanto,
preservar la constitucin qumica y la morfologa de los componentes titulares.
Cuando las piezas quirrgicas son pequeas o las muestras son obtenidas por aspiracin y de no
existir indicaciones de realizar improntas, frotis para citologa, estudios inmunohistoqumicos o
de microscopa electrnica que requieran fijacin especial se colocarn inmediatamente en
formol buferado al 10% en una relacin de 10 a 1 fijador/muestra. Para una mejor fijacin las piezas
no deben exceder de un espesor de 3 mm y un tamao de 3 x 2 cm
Principios generales de la fijacin.
No existe un mtodo universal de fijacin, por lo que un agente fijador para un tejido no
tiene porque ser adecuado para otro.
No todos los fijadores conservan indefinidamente el tejido, porque fijacin no equivale a
conservacin tisular.
Un defecto en la fijacin nunca puede ser corregido.
Es intil realizar un estudio histolgico sobre un material con grandes defectos de fijacin.
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d) Tiempo de fijacin.
El tiempo en la fijacin es importante en dos aspectos.
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I.
El intervalo que media entre la interrupcin del aporte sanguneo y la inmersin de las
muestras en la solucin fijadora. Lo deseable es que las muestras se fijen inmediatamente
despus de obtenidas mediante una biopsia o que la necropsia se efecte al poco tiempo de
producida la muerte. Mientras ms largo es este lapso, los procesos autolticos que sufran
los tejidos sern ms evidentes.
II.
Debe tenerse en cuenta el tiempo que permanecern las muestras sumergidas en los
fijadores. Este tiempo vara con relacin al tipo de fijador que se utiliza; al tamao y la
naturaleza de la muestra y la temperatura de fijacin. Por lo tanto los lapsos de fijacin
varan en rangos muy amplios. En cualquier circunstancia, siempre deben respetarse los
tiempos recomendados para cada tipo de fijador para garantizar la conservacin de una
buena estructura celular y tisular de los tejidos.
e) Temperatura de la fijacin.
Es recomendable efectuar la fijacin a bajas temperaturas ( 4o C.) dentro de un refrigerador y con
la solucin fijadora enfriada previamente. Este procedimiento retardar el tiempo de fijacin pero
disminuir de manera notable la autlisis de los tejidos.
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Criosustitucin: es la sustitucin lenta y progresiva del agua congelada de un tejido por un lquido
fijador que en ocasiones puede actuar simultneamente como medio de inclusin. Tras la
congelacin instantnea del tejido con nitrgeno liquido o isopentano a -50C se coloca el tejido
congelado en el medio de sustitucin, este medio est formado por una mezcla de alcohol etlico,
acetona y propiln- glicol. Enfriado a -40C, el intercambio del agua tisular por el lquido de
sustitucin, se realiza dentro de un congelador y debe procurarse que la temperatura no disminuya
del punto de congelacin del lquido de sustitucin.
QUMICOS
FIJADORES QUE ACTAN POR RETICULARIZACIN DE LAS PROTENAS
El proceso que denominamos reticularizacin de las protenas sobreviene cuando la
desnaturalizacin de stas molculas de se produce no por precipitacin, sino porque el agente que
provoca el fenmeno induce la rotura masiva de los puentes de Hidrgeno determinantes de la
estructura helicoidal de las molculas proteicas, con la formacin posterior de una malla reticular
polipeptdica por asociacin qumica entre los grupos activos desenmascarados por el lquido
fijador.
Entre los principales fijadores tenemos:
Formaldehdo o formol: Es gaseoso en estado puro, se vuelve
txico y con un olor caracterstico. Se disuelve fcilmente en agua y
liquido
en
ste
21C,
es
estado
en
denomina
tiende a precipitar
NaOH
se emplea a una
concentracin del 4% pero como se parte de una solucin de formalina sta concentracin se
obtiene diluyendo una parte de sta de la formalina en 9 de agua en formacin salina o tampn.
Ventajas: Es el fijador ms barato que existe por lo tanto es de eleccin para los trabajos de rutina
en Anatoma patolgica.
Es un buen fijador nico que determina una moderado conversacin de la estructura tisular.
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Por ser buen desinfectante y no endurecer excesivamente los tejidos, es un medio ptimo
para conversar y almacenar biopsias y piezas quirrgicas.
Provoca escasa retraccin tisular
Posee una velocidad de penetracin intermedia entre la de los alcoholes y la del sublimado
Tiene aproximadamente una velocidad de un milmetro por hora apenas altera la coloracin
tisular, por eso es el agente de eleccin para fijar grandes piezas quirrgicas.
Es excelente fijador para el tejido adiposo y para lpidos en general y se emplea como agente
de eleccin para fijar el tejido nervioso y en general antes de cualquier impregnacin
argntica.
El proceso de fijacin puede ser acelerado o retrasado sin graves inconvenientes
modificando la temperatura, as a temperatura ambiente se consigue un fijador completa a
partir de las 36 horas. A 35 entre 12 y 24 horas y a 55C en solo 3 horas. Por este motivo la
formalina es un fijador de eleccin cuando se emplean hornos de microondas en tcnicas de
histotecnologa.
Es compatible con la mayor parte de las tinciones que se utilizan rutinariamente en
Anatoma patolgica.
Inconvenientes:
Produce abundantes vapores de carcter irritante sobre la conjuntiva y mucosa nasal.
Por accin de la luz y del oxgeno atmosfrico se transforma progresivamente en cido
frmico y sta sustancia tiene la propiedad de disolver rpidamente la cromatina nuclear por
eso con el paso del tiempo los ncleos celulares adoptan un aspecto fantasma para evitar
este inconveniente el formol debe guardarse en frascos opacos o emplearse en forma de
solucin neutra o tamponado.
Posee una relativa capacidad de fijacin sobre las protenas, los pigmentos que contienen
hierro y los derivados de la bilirrubina, a stos ltimos les da una coloracin verdosa.
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enzimas
citolgicas.
un
buen
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compensa
los
celular
la
y
destruye mitocondrias.
cido tricloroactico: Son cristales incoloros custicos, solubles en agua en solucin al 5 % fija
los nervios de 8 a 20 horas. Nunca se lavan el tejido despus de usar ste cido porque el edema que
produce es excesivo y de lugar a muchos artefactos. Al 2.5 % se usa mezclado con otras sustancias.
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cido sulfosaliclico: Se usa al 5% es buen fijador porque permite casi todas las coloraciones
endurece ptimamente los tejidos pero no los contrae despus hay que lavar el tejido con agua pero
la fijacin debe hacerse en la oscuridad de 6 a 24 horas.
cido crmico: Se emplea en disoluciones al 2% formando parte de mezclas fijadoras, se utiliza
bastante en microscopia electrnica.
Entre las ventajas que tiene:
Excelente fijador estructural y acta como mordiente en tinciones que emplean colorantes
bsicos, entre los colorantes que tiene es que incompatible con fijadores habituales como el
formol y alcohol.
Escasa velocidad de penetracin en trozos pequeos tarde varios das en penetrar en la pieza
Impregna de coloracin verdosa los tejidos por lo que hay que lavarlos abundantemente en
agua destilada tras el uso de ese acido, los tejidos quedan excesivamente blandos.
FIJADORES POR FORMACIN DE SALES CON LOS TEJIDOS
En estos casos el fijador es un catin metlico fundamentalmente cromo o mercurio o un derivado
orgnico como el cido pcrico que son susceptibles de formar con los tejidos sales denominados
protenatos metlicos o picratos por lo general todos los agentes d este grupo poseen gran velocidad
de penetracin y fijacin porque la formacin de la sal, se produce instantneamente.
Cloruro de mercurio o sublimado: es un polvo cristalino blanco y venenoso y hay que usarlo bajo
campana se usa en soluciones del 5-6%. El efecto fijador se consigue por la combinacin de los
iones de Mercurio con los grupos cidos de las protenas especialmente con los de carcter
carboxlico, hidroxlico, sulfidrilo y con los residuos fosfricos de las nucleoprotenas.
Entre sus ventajas tenemos:
Es un excelente fijador de los caracteres morfolgicos celulares por lo que es el de eleccin
para patologas hematopoyticas y renales, donde el diagnostico se apoya normalmente en la
observacin de finos detallesnucleares y citoplasmticos.
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para
Golgi que
de
las
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cido Pcrico: En el comercio se encuentra en forma de agujas cristalizadas de color amarillo muy
txicas de carcter explosivo.
Acta coagulando las protenas a travs de la formacin de picratos que las confieren gran apetencia
por colorantes cidos. Se utiliza en solucin saturada al 2%, es un excelente fijador estructural que
conserva adecuadamente la composicin proteica de los tejidos. Controlando adecuadamente el
tiempo de fijacin produce una ptima contraccin de los tejidos que favorece su procesamiento
histolgico.
Aunque tiene penetracin algo lenta posee buena velocidad de fijacin no disuelve el glicgeno ni
los lpidos es el fijador de eleccin para estas sustancias.
Posee una leve accin decalcificante por lo cual puede
emplearse
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MEZCLAS FIJADORAS
Tenemos dos tipos:
Glutaraldehido: lquido oleoso en comercios se
encuentra
el
mismo
Ventajas:
Es el mejor fijador estructural conocido, por eso se utiliza en microscopa electrnica
especficamente como 2 fijador.
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Inconvenientes
Muy caro y descompone en preseca de luz por lo que hay que conservarlo en recipientes
opacos y oscuridad.
Aunque sea soluble en agua es difcil preparar disoluciones acuosas con las que se trabaja
Muy txico y en estado cristalino emite vapores que irritan la crnea mucosa respiratoria. Su
manipulacin es obligatoria en una campana de extraccin de gases para prevenir la
aparicin de queratitis.
Posee muy baja capacidad de penetracin tisular por lo que las muestras deben tener muy
poco volumen.
Es incompatible con formol y dificulta la coloracin nuclear, esto obliga a lavar
abundantemente los tejidos tras utilizarlo.
La combinacin de diversos fijadores simples formando soluciones, complejas llamadas mezclas
fijadoras pretende sumar las ventajas de cada una de ellas amortiguando sus inconvenientes. Desde
un punto de vista general se clasifican en dos grupos:
AQUELLAS QUE CONTIENEN FORMOL
Liquido
de Bouin:
Solucin
muy usada
como
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alternativo a la
piel rganos
Sin
los
embargo
cuales
PH. FINAL2.2
TIEMPO DE FIJACIN..2 a 24 horas
Bouin
biopsia
fijacin de
conservar
de
2.5 gr.
C. PCRICO..4.0 gr.
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C. PCRICO0.5 gr.
FORMALINA CONCENTRADA.....30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL...7.5 ml.
Mezclar antes de usar el tiempo medio de fijacin para fragmentos con un espesor en torno a 5
milmetros es de 2 a 3 horas.
Liquido de Gendre: Es una variacin que est especialmente diseada para la fijacin del
glucgeno y pigmentos derivados de la hemoglobina. Se prepara por:
SOLUCIN SATRUADA DE C. PCRICO
EN ALCOHOL ETLICO AL 70%.....................................80.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...15.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.7.5 ml.
El tiempo de fijacin oscila entre 1 y 4 horas. Tras acabar el proceso debe realizarse sucesivamente
2 lavados cortos en etanol al 80, 95 y 100
Fijador de Mller: Es la disolucin acuosa de un fijador simple de dicromato potsico con la
adicin de sulfato sdico su importancia actual radica en que se emplea para fabricar los fijadores
de Orth y de Zenker. Lo que llamamos solucin madre. Est compuesta de:
DICROMATO POTASICO2.5gr.
SULFATO SDICO..1.0 gr.
AGUA DESTILADA 100.0 ml.
Tiempo de fijacin 4 y 8 horas. Tras la fijacin es necesario lavar abundantemente en agua corriente
durante unas horas.
Fijador de Orth: Hoy da se emplea exclusivamente en ciertas tcnicas de fijacin de tejido
nervios. Se prepara de la siguiente manera:
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el tiempo de fijacin no debe superar las 4 horas. Adems el espesor mximo de las muestras no
debe superar los 4 mm debido al escaso poder de penetracin de la mezcla fijadora. Debido a la
aparicin de precipitados mercricos sobre los tejidos las secciones histolgicas antes de ser
coloreados. Han de ser sometidas a un tratamiento especfico mediante soluciones que eliminan
estos depsitos. Tras la fijacin los tejidos se pueden conservar indefinidamente en alcohol etlico al
70-80%
SOLUCIN STOCK DE B520.0 ml.
FORMALINA CONCENTRADA .2.0 ml.
Solucin de Zenker-Formol Eliminacin del pigmento mercrico:
*Solucin stock de Zenker:
CLORURO MERCRICO5gr.
DICROMATO POTSICO...2.5 gr.
-SULFATO SDICO 1 gr.
AGUA DESTILADA C.S.P. ....100.0 ml.
* Solucin de trabajo: en el momento de su uso mezclamos:
SOLUCIN STOCK DE ZENKER..95 ml.
FORMALINA CONCENTRADA...5 ml.
Tanto para la solucin almacenada como para la de trabajo deben guardarse las mismas
precauciones que para la de B5
Eliminacin del pigmento mercrico o deszenkerizacin:
Se realiza tratando las secciones histolgicas antes de su coloracin con soluciones yodadas y
utilizamos:
*Solucin de LUGOL:
YODURO POTSICO..2gr.
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favorables
ha
del
sido
restringido
sometidas
inicial con
B5.
Se prepara de la siguiente manera.
SOLUCIN STOCK DE ZENKER95.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL.. 5.0 ml.
El cido actico reacciona con el dicromato y hace que la solucin se oscurezca progresivamente,
por lo que debe recomponerse antes de su uso.
El tiempo de fijacin puede ser ms prolongada que con la solucin de b5 porque el cido actico
que contiene, produce un excesivo endurecimiento. Pero no se deben sobrepasar las 48 horas. Tras
la fijacin el material debe ser tratado con sulfato sdico al 5% durante 1-2 horas.
Liquido de Carnoy: Es el mejor fijador conocido para el glucgeno y en general, para los hidratos
de carbono simples y para protenas fibrilares y sobre todo miofibrillas, su accin fijadora es
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extremadamente rpida deshidratando el tejido al mismo tiempo, sin embargo produce una excesiva
retraccin mstica y una hemlisis masiva de eritrocitos as como una pobre conservacin
estructural del ADN. Est compuesta por:
ETANOL ABOSLUTO..60.0 ml.
CLOROFORMO.30.0 ml.
C. ACTICO GLACIAL..10.0 ml.
El tiempo de fijacin puede ser acortado hasta 3 horas. Las muestras deben cambiarse directamente
a alcohol etlico absoluto. El mayor endurecimiento se produce al prolongar demasiado la
deshidratacin en alcohol, para prevenirlo se puede sustituir el etanol por metanol en la
composicin de lquido fijador, que adems provoca menor retraccin tisular, y para conservar la
pieza se deposita en alcohol etlico absoluto.
Lavado postfijacin.
Es el aclarado que se realiza despus del proceso de fijacin para eliminar los residuos del agente
fijador, con el fin de limitar el tiempo de contacto entre el fijador y el tejido o impedir el contacto
del fijador con los medios de inclusin utilizados, para proseguir el tratamiento de la muestra, a
veces algunos colorantes alteran su efecto si la pieza contiene restos de determinados fijadores,
como es el caso por ejemplo del cido pcrico. No todos los fijadores deben lavarse igual:
Las piezas fijadoras en formalina se lavan con agua prolongadamente.
Fijadas por cido pcrico hay que introducir las piezas hasta quitar color amarillo.
Fijadas por tricloroactico hay que introducirlas en alcohol de 90%.
Conservacin de tejidos.
Cuando se practica un estudio histolgico, solo se incluyen una pequea porcin del material
remitido para el anlisis. El resto se guarda de reserva para estudios complementarios. Casi nunca
es posible conservar el tejido en el mismo lquido utilizado para la fijacin.
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La solucin conservante ms indicada en la mayor parte de los casos es el alcohol etlico al 70% en
l adems de iniciarse la deshidratacin, el tejido una vez fijado puede conservarse durante meses
sin apenas sufrir cambios, como alternativa ms simple y siempre que no se desee preservar el
tejido para posteriores estudios inmunohistoqumicos, pueden usarse como conservante una
solucin de formalina neutra o tamponada al 10%.
Cuando lo que se produce exclusivamente es derramar la intrusin del tejido en parafina sobre todo
para pequeas muestras delicadas se puede realizar la deshidratacin completa en alcoholes
crecientes y conservarlos en butanol que permite una conservacin indefinida y mejora la textura
tisular.
Cuando se deseen conservar rganos completos procedentes de necropsias podemos utilizar las
soluciones de JORES.
JORES I:
SULFATO SDICO.22 gr.
SULFATO POTSICO..1 gr.
CLORURO SDICO..9 gr.
BICARBONATO SDICO..18 gr.
FORMOL 10%.............................................................................................50 ml.
SOLUCION ACUOSA SATURADA DE HIDRATO DE CLORAL.50 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P.1000 ml.
JORES II:
ACETATO POTSICO300 gr.
GLICERINA.600 ml.
AGUA DESTILADA C.S.P. ..1000 ml.
En recipiente bien cerrado se conserva hasta aos.
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CONCLUSIONES
Se determin que el correcto conocimiento de los fijadores con o sin formol ayudara a un
RECOMENDACIONES
Debe tenerse en cuenta el tiempo especfico de fijacin de acuerdo al fijador que estemos
usando, para evitar se dae la muestra.
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BIBLIOGRAFA
Google Books, (2015). Tecnico Especialista en Anatomia Patologica Del Servicio Gallego
de Salud.volumen i Ebook. [online]Disponible en: https://books.google.com.ec/books?
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ed=0ahUKEwia2fehq7zJAhXF4SYKHVA-CYQQ6AEIIjAB#v=onepage&q&f=false
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TEJIDOS,
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PROCESAMIENTO
DE
TEJIDOS.
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Nancycepedablogs.blogspot.com. Disponible en: http://nancycepedablogs.blogspot.com/
[Accessed 3 Dec. 2015].
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