RESULTADOS

1. Datos para calcular la constante de Michaelis-Menten.

C (%p/p)

Conductividad
(s/cm.s)
50,2
54,4
51,7
55,8
V reaccin46,9
(s/cm.s)
47,4
21,6
50,9
53
19,44
48,2
52,8
12,6
46
47,3

0,40%
0,20%
0,10%
0,05%
0,03%
0,01%

6,84

2. Datos
burk.

3,6

para graficar la ecuacin de Linewearver-

1,62

C ure
(mmol/L)

C urea
(%P/P)

V reaccin
(s/cm.s)

1/ C ure
(mmol/L)

1/ V reaccin
(s/cm.s)

66,6
33,33
16,6
8,33
4,116
2,08

0,4
0,2
0,1
0,05
0,025
0,0125

19,2
17,28
11,2
6,08
3,2
1,44

2,5
5
10
20
40
80

0,05
0,06
0,09
0,16
0,31
0,69

C ure
(mmol/L)

V reaccin
(s/cm.s)

3. Datos para la determinacin de la inhibicin por sustrato

260
1,345
C (%p/p)
1,60%
0,80%
0,40%
0,20%
0,10%
0,05%
0,03%
0,01%

Conductivida
130
d (s/cm.s)
46,3
66,6
49,3
36,3
33,33
51,3
50,2
16,6
54,4
51,7
8,33
55,8
46,9
4,116
47,4
50,9
2,08
53
48,2
52,8
46
47,3

1,34
1,202
1,041
0,704
0,38
0,202
0,09

4. Datos del envenenamiento de la ureasa

C ure
(mmol/L)
Tiempo
100
200
300
400
500
600
700
800

260
conductivida
d (s/cm)
43,6
46,8
49,3
52,8
55,3
56,6
56,7
56,8

ANLISIS DE RESULTADOS
En el estudio cintico de la hidrolisis enzimtica de la urea se procedi a
determinar las conductancias aparentes de diferentes soluciones acuosas de
urea; observando un aumento con forme aumentaba la concentracin debido a
las especies que se producen, como dixido de carbono y amoniaco por accin
de la ureasa (Tabla 1). Con los datos obtenidos seguidamente se grafic la
velocidad de reaccin contra la concentracin de sustrato para calcular la
constante de Michaelis-Mente; la cual nos relaciona la afinidad de la ureasa
para catalizar la reaccin de hidrolisis de la urea, siendo tambien definida como
la mitad de la velocidad mxima en una reaccin enzimtica o mide la
concentracin de sustrato a la que la velocidad de reaccin es la mitad de la
velocidad mxima. La constante KM fue calculada grficamente y por medio de
la ecuacin cintica clsica de Michaelis-Mente (ver anexo 1), la grfica
presento un comportamiento hiperblico rectangular en la que la velocidad de
reaccin y la concentracin del sustrato son las coordenadas y la velocidad
mxima es la asntota de dicha grfica. El valor de KM obtenido es de 9.68
mmol/L el cual se encuentra desviado del valor real consultado
bibliogrficamente, pero esto se debe a que las condiciones de laboratorio no
fueron las ms ideales para dichas mediciones, no obstante fueron
aproximados y concuerdan con la afinidad que presenta la ureasa para
catalizar y realizar la actividad enzimtica sobre su sustrato.
En segunda instancia implementando la ecuacin de Linewearver-burk se
calcularon los parmetros de Michaelis-Menten para la reaccin de hidrolisis de
la urea, el grafico corresponde al reciproco doble de la velocidad de reaccin
contra el de la concentracin de sustrato, esta grafica como se observa es una
lnea recta cuya ordenada en el origen corresponde a 1/ Vmax y su pendiente
KM /Vmax (anexo 2). Los datos se observan en la tabla de datos nmero 2 y la
ordenada en el origen se calcul con su grafico correspondiente, obteniendo un
valor de 0.75, de lo cual se deduce que:
V max = 0.75 mmol/ L
1

Por lo cual;

de la pendiente que es

V max =

1
mmol
=1.33
0.75
L. S , con los datos

7,44 calculamos el valor de KM ya que

KM
= pendiente=7.44 KM =9.89
. Como observamos los
V max

resultados

obtenidos para los dos criterios son similares; lo cual es apropiado debido a
que las dos graficas son representaciones para calcular parmetros cinticosEnzimaticos de Michaelis-Menten. Cabe resaltar que los valores de KM y Vmax
son constantes cinticas que reflejan la accin de la enzima en este caso

ureasa sobre un sustrato a fin, de modo que constituyen la base para

comprender como funciona la enzima.
Ahora bien se logr calcular o determinar a inhibicin por sustrato, la cual
ocurri cuando adicionamos concentraciones demasiado altas por fuera del
intervalo de catlisis de la enzima ureasa, es decir la concentracin de enzima
era muy poca en comparacin con el sustrato y todos los sitios activos fueron
ocupados de modo que la actividad cataltica disminuyo, lo que se puede
observar en los valores de conductividad obtenidos, puesto que son menores
en comparacin a los de concentraciones de menor cantidad de sustrato. Todo
esto se corroboro grficamente al realizar la correlacin velocidad de reaccin
contra concentracin de sustrato (anexo 3). Con todo esto se logra inferir que la
concentracin a partir de la cual empieza la inhibicin por sustrato corresponde
al valor de 130 mmol/L debido al comportamiento de la velocidad de reaccin.
Para finalizar se realiz el envenenamiento de la enzima ureasa con nitrato de
plata, antes de la adiccin del inhibidor se determinaron las conductividades
cada 100 segundos durante seis ocasiones a una solucin de urea de
concentracin 260 mmol/L y se procedi a adicionar el nitrato, durante las
mediciones se observaron aumentos significativos en los valores de
conductividad antes de la accin del inhibidor, es decir la velocidad de reaccin
presentaba un tendencia creciente, pero cuando el agente qumico (Nitrato de
plata) empez a afectar la actividad enzimtica generando que la hidrolisis de
la urea empezara a disminuir paulatinamente hasta ser constante. Este efecto
se logra evidenciar en el comportamiento del grafico velocidad de reaccin
contra tiempo (anexo 4), del cual se afianza la idea de que la enzima ha sido
inhibida irreversiblemente, es decir ha sido modificada por dicha sustancia.