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Lavar con agua y aadir safranina. Se trata de un colorante de contraste que tie
de color rojo a aquellos microorganismos que por sus caractersticas no se han
teido con el cristal de violeta. Por lo tanto, se tratan de Gram negativos.
Lavar con agua y secar al aire. Tras esto, se puede visualizar al microscopio.
RESUMEN
GRAM POSITIVO
GRAM NEGATIVO
Gruesa capa de
peptidoglicano
Aplicar calor. Acta como mordiente para flamear hasta la emisin de vapores.
TINCION DE
GRAM
TINCION DE
ZIEHL-NEELSEN
NEELSEN
MEDIOS COMUNES.
1. Peptonas.
Consiste en la presencia de peptonas obtenidas por digestin enzimtica de protenas.
2. Caldo comn.
Se hierve carne y al lquido obtenido, se le aade una cierta cantidad de peptonas,
NaCl
3. Agar comn (mezcla de los 2 anteriores).
MEDIOS ENRIQUECIDOS.
2. Agar chocolate.
Similar al Agar sangre pero se diferencia en que los hemates se encuentran lisados.
3. Medio de CLED.
Contiene: C (cistina), L (lactosa) y ED (electrn deficiente). Tiene un indicador de pH
que es el azul de bromotimol que segn sea el pH presenta un color distinto:
pH cido: amarillo.
pH neutro: verde claro.
pH alcalino: azul.
MEDIOS SELECTIVOS.
1. Agar MacConkey.
Se trata de un medio para bacilos Gram negativos que est compuesto por Agar comn,
cristal de violeta, sales biliares, lactosa y rojo neutro (indicador de pH).
2. Agar sal manitol.
Contiene gran cantidad de sal, manitol y rojo fenol (indicador de pH). Con esa cantidad
de sal permite el crecimiento slo de Estafilococos. El indicador de pH es el siguiente:
3. Agar Sabouraud.
Contiene cloranfenicol (antibitico) que impide el crecimiento de las bacterias,
favoreciendo el de los hongos.
GRAM POSITIVO.
1. CATALASA.
Se basa en una reaccin enzimtica que consiste en la transformacin de agua
oxigenada en agua y oxgeno, apareciendo burbujas en la reaccin. Esto ocurre si el
microorganismo tiene la enzima catalasa.
2. NITRATOS.
Consiste en saber si la bacteria tiene la enzima nitrato-reductasa que reduzca los nitratos
en nitritos. Los pasos son los siguientes:
3. FERMENTACION GLUCOSA.
Consiste en determinar si el microorganismo oxido y/o fermenta la glucosa. Se requiere
un tubo con un medio de cultivo slido, un asa de platino y un indicador de pH que es el
azul de bromotimol cuyo color vara:
Uno de los tubos se le aade parafina para aislarlo del oxgeno del ambiente con el
objetivo de que tenga lugar la fermentacin en caso de que el microorganismo pueda.
Los resultados posibles son los siguientes:
OXIDACIN
FERMENTACIN
RESULTADO
+
+
-
+
+
-
Amarillo Amarillo
Amarillo Verde
Verde Amarillo
Verde - Verde
4. COAGULASA.
Se utiliza suero animal y, en caso, de que el microorganismo presente la enzima, ste
ser capaz de formar aglutinaciones como sucede con S. aureus.
5. BACITRACINA Y OPTOQUINA.
Se realiza en Agar Sangre. Consiste en impregnar a un disco de un dimetro inferior a 1
cm con bacitracina y otro con optoquina. Tras 24 horas a 37C, se observa:
GRAM NEGATIVO.
1. OXIDASA.
Consiste en determinar la presencia de la enzima citocromo-oxidasa en el
microorganismo. Se observa si ste es capaz de ennegrecer el disco presente en el medio
de cultivo y nos permite diferenciar entre algunas Enterobacterias y otras bacterias
Gram negativas.
2. MEDIO DE KLIGLER.
Esta prueba consiste en un calentador con un imn que va agitando al mismo tiempo.
Cuando se enfre (<50C) se inclina el tubo y se favorece su posterior obtencin de la
muestra. Luego, se utiliza el asa de punta con el que pinchamos el medio de cultivo en
la zona intermedia hasta el fondo del tubo.
Este medio mide el consumo de lactosa y glucosa con produccin o no de gas, consumo
de peptonas y produccin de sulfhdrico. Para ello, es necesario un indicador de pH que
es el rojo fenol que en medio cido se vuelve amarillo, en medio alcalino rojo intenso y
a pH neutro es rojo. Con todo esto, vamos a interpretar los distintos resultados:
3. ONPG.
Esta prueba se realiza de manera paralela al Kligler para valorar si el microorganismo es
lactasa positiva lenta o lactasa negativa. Si es lactasa positiva aparece de color amarillo
y si no lo es, no vara el color.
4. IMViC.
a) Indol.
Permite detecta la presencia de la enzima triptofanasa que reduce el triptfano presente
en los medios de cultivo de peptona. Se tiene un tubo de un caldo nutritivo con
peptonas, se emulsiona e incube a 37C durante 24 horas. Luego, el indol aparece
cuando se aade 1 reactivo con 2 componentes en el que uno hace que flote y el otro
revele el indol. Los resultados son los siguientes:
b) Rojo-Metilo.
Permite determinar si el microorganismo asimila la glucosa y qu cantidad.
c) Voges.
Determina la capacidad de consumir glucosa por la va 2-3 butilenglicolica. La
descompone en acetoina y se observa tras 24 horas a 37C.
d) Citrato de Simon.
Permite detecta la capacidad de consumir citrato como nica fuente de carbono. Para
ello, se usa un asa de platina en redondo y se siembra en la superior de la lengeta. Si se
consumen los citratos, queda libre Na+ y el pH aumenta. La variacin del pH la detecta
el azul de bromotimol:
5. LAO.
Se trata de una prueba que se realiza sobre bacterias que sabemos que consumen
glucosa. Consiste en 3 pruebas simultneas que detectan la presencia de una enzima.
Consiste en la adicin de glucosa y lisina a un medio liquido. Se utiliza como indicador
de pH el azul de bromocresol para valorar los resultados:
pH cido: Amarillo.
pH neutro: Prpura.
pH alcalino: Prpura ms intenso.
En paralelo, se cogen 2 tubos, uno con slo lisina y otro sin l durante 24 horas a 37C.
Los resultados son: