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FICHE TECHNIQUE

GALERIE API 20E

MICRO-GALERIE

PRINCIPE :
Le systme API BioMrieux (Appareillage et Procd dIdentification) est une version miniaturise et standardise
des techniques biochimiques conventionnelles pour lidentification des bactries.
Lorquune suspension bactrienne de densit convenable est rpartie dans les diffrentes alvoles qui composent la
microgalerie (contenant de substrats dshydrats), les mtabolites produits durant la priode dincubation se
traduisent par des changements de couleur spontans ou rvls par addition de ractifs.
Elle permet lidentification dune centaine de bacilles Gram ngatif dont les Entrobactries.
Elle comprend 20 tests biochimiques.
TECHNIQUE :
Prparation de la galerie
Runir fond et couvercle dune bote dincubation et rpartir de leau dans les alvoles pour crer une
atmosphre humide.
Dposer strilement la galerie dans la bote dincubation
Prparation de linoculum
Ouvrir une ampoule de Suspension Medium (ou un tube deau distille strile)
Prlever une seule colonie bien isole sur milieu glos
Raliser une suspension bactrienne faible (opacit 0,5 sur lchelle Mc Farland)
Inoculation de la galerie
Remplissage des tubes :
Remplir les tubules et les cupules des tests du type CIT
Remplir les tubules des tests du type ADH et remplir la cupule
avec de lhuile de paraffine, pour crer lanarobiose.

Pipette Pasteur
Cupule

Tubule

Remplir uniquement les tubules des tests restants

Remplir en posant la pipette


contre la paroi de la cupule.

Remarque : il est important de veiller ne pas crer de bulles lors de linoculation qui pourraient fausser le
rsultat. De plus lapparition de bulles aprs incubation apportera un caractre didentification supplmentaire
(GAZ+)
RESULTATS :
Noter sur la fiche de rsultats toutes les ractions spontanes.
Raliser les tests ncessitant laddition de ractifs : Test VP, TDA, IND, Nitrate rductase
IDENTIFICATION :
Avec le tableau didentification : comparer les ractions notes sur la fiche de rsultats avec celle du
tableau : chaque cellule de ce tableau contient les pourcentages de positivit
Avec le catalogue analytique : Les tests sont regroups en groupe de 3, et une valeur (1, 2 ou 4) est
indique pour chacun. Additionner lintrieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs.
On obtient un nombre 7 chiffres qui sert de code didentification
Avec un logiciel didentification

TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E


Microtube

Substrat

Caractre recherch

Lecture directe ou indirecte (Test si ncessaire)

ONPG

Ortho-Nitro-Phnyl-Galactoside -galactosidase

Lecture directe

ADH
LDC
ODH

Arginine
Lysine
Ornithine

Arginine dihydrolase
Lysine dcarboxylase
Ornithine dcarboxylase

Lecture directe

CIT

Citrate

Utilisation du citrate

Lecture directe

H2S

Thiosulfate de sodium

Production dH2S

Lecture directe

URE

Ure

Urase

Lecture directe

TDA

Tryptophane

Tryptophane dsaminase

Lecture indirecte
Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer

IND

Tryptophane

Production dindole

Lecture indirecte
Test : ajouter 1 goutte de ractif de Kovacs

VP

Pyruvate de sodium

Production dactone

Lecture indirecte (Attendre 10 minutes)


Test : ajouter 1 goutte de KOH et d-napthol

GEL

Glatine emprisonnant
particules de charbon

Glatinase

Lecture directe

Utilisation de substrat carbon

Lecture directe

Nitrate rductase

Lecture indirecte dans la cupule GLU


Test : ajouter 1 goutte de ractif de Griess
Ajouter de la poudre zinc en cas de rsultat ngatif

GLU ARA Substrat carbon


-/

NO2 N2

Nitrates (NO3)

des

Rsultat +

Rsultat -

TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E


Microtube
ONPG

Substrat

Caractre recherch

Lecture directe ou indirecte (Test si ncessaire)

Ortho-Nitro-Phnyl-Galactoside -galactosidase

Lecture directe

ADH
LDC
ODH

Arginine
Lysine
Ornithine

Arginine dihydrolase
Lysine dcarboxylase
Ornithine dcarboxylase

Lecture directe

CIT

Citrate

Utilisation du citrate

Lecture directe

H2S

Thiosulfate de sodium

Production dH2S

Lecture directe

URE

Ure

Urase

Lecture directe

TDA

Tryptophane

Tryptophane dsaminase

Lecture indirecte
Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer

IND

Tryptophane

Production dindole

Lecture indirecte
Test : ajouter 1 goutte de ractif de Kovacs

VP

Pyruvate de sodium

Production dactone

Lecture indirecte (Attendre 10 minutes)


Test : ajouter 1 goutte de KOH et d-napthol

Glatinase

Lecture directe

Utilisation de substrat carbon

Lecture directe

Nitrate rductase

Lecture indirecte dans la cupule GLU


Test : ajouter 1 goutte de ractif de Griess
Ajouter de la poudre zinc en cas de rsultat ngatif

GEL

Glatine emprisonnant
particules de charbon

GLU ARA Substrat carbon

-/

NO2 N2

Nitrates (NO3)

des

Rsultat +

Rsultat -