VIH-SIDA

La infeccin por VIH se clasifica en diversas etapas, identificadas por un

conjunto de sntomas e indicadores clnicos. El virus se replica constantemente
e infecta los linfocitos T-CD4, que constituyen una parte esencial del sistema
inmunolgico en los seres humanos. Por su parte, el sistema inmunolgico del
portador del VIH reacciona ante la presencia del virus produciendo una
respuesta que puede mantener temporalmente bajo control la infeccin,
mediante la reposicin de clulas defensivas. Al trmino de un perodo que se
puede prolongar por varios aos, el VIH se vuelve resistente a las defensas
naturales del cuerpo y destruye el sistema inmune del portador. De esta
manera, el seropositivo queda expuesto a las enfermedades oportunistas y
muere
Fase aguda
La fase de la infeccin aguda por VIH inicia en el momento del contagio. El
virus se propaga por el cuerpo de la persona contagiada en un plazo de das, el
VIH infecta no slo las clulas expuestas inicialmente (por ejemplo, las clulas
de la mucosa vaginal o rectal en el caso de una infeccin por va sexual) sino
tambin los ganglios linfticos. Durante ese tiempo, el VIH se multiplica dentro
del organismo hasta alcanzar niveles propios de la infeccin crnica. El tejido
linfoide asociado a los intestinos constituye uno de los principales espacios del
cuerpo humano donde tiene lugar la reproduccin inicial del VIH por su alto
porcentaje de linfocitos T CD4.
El VIH ataca principalmente los linfocitos T CD4+, que forman parte del sistema
inmune de los seres humanos. Aunque estas clulas por s mismas no tienen
una funcin de ataque contra clulas extraas al cuerpo, tienen un papel
importante en la respuesta inmunolgica adaptativa. En una persona con
buena salud, el nmero de linfocitos T CD4+ oscila entre 1200 y 500/l.
Durante la fase asintomtica de la infeccin, la proporcin de linfocitos
infectados 1/1000-1/100 000, que aumentar progresivamente hasta llegar a
1/100 en la infeccin crnica. Durante la fase aguda de la infeccin, las
pruebas tradicionales siempre darn negativo porque no detectan
directamente el VIH, sino los anticuerpos producidos como respuesta por el
sistema inmune, lo que ocurre alrededor de la 12a semana despus de la
exposicin. En contraste, las pruebas de carga viral, que contabilizan el nmero
de copias del ARN del virus en la sangre, arrojarn como resultado una elevada
cantidad de copias del VIH durante la fase aguda de la infeccin.
Fase crnica
La fase crnica de la infeccin por VIH se suele llamar tambin latencia clnica
porque el portador es asintomtico. Esto no quiere decir que el virus se
encuentre inactivo. Por el contrario, durante la fase crnica el VIH se multiplica
incesantemente. Se calcula que, en un sujeto infectado, diariamente se
producen entre mil y diez mil millones de nuevas partculas virales y son
destruidos alrededor de cien millones de linfocitos T CD4. Los pacientes son
asintomticos gracias a que el sistema inmune tiene una gran capacidad para
regenerar las clulas destruidas por el virus, pero pueden presentar
adenopatas y la disminucin del conteo de plaquetas en la sangre.

La reaccin ante la presencia del virus termina por desgastar al sistema

inmunolgico. En ausencia de tratamiento, la mayora de los portadores del
virus desarrollan el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (sida) en un plazo
de 5 a 10 aos. La causa de esto es que, mientras el virus sigue
reproducindose de manera constante y aumenta la carga viral en su anfitrin,
disminuye tambin la capacidad de recuperacin del sistema inmune. Al
trmino fase crnica, los pacientes desarrollan otras manifestaciones de la
infeccin como dermatitis seborrica, lceras bucales y foliculitis.
Sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA)
El sida constituye la etapa crtica de la infeccin por VIH. En esta fase de la
infeccin, el portador del VIH posee un sistema inmunolgico que
probablemente sea incapaz de reponer los linfocitos T CD4+ que pierde bajo el
ataque del VIH y tambin ha visto reducida su capacidad citotxica hacia el
virus. Este fenmeno coincide con el aumento en las tasas de replicacin del
virus, que merma la capacidad de reaccin del anfitrin ante otros agentes
causantes de enfermedades. De esta manera, el portador del virus es presa
potencial de numerosas infecciones oportunistas que le pueden conducir a la
muerte. La neumona por P. jiroveci, el sarcoma de Kaposi, la tuberculosis, la
candidiasis y la infeccin por citomegalovirus son algunas de las infecciones
ms frecuentes que atacan a los seropositivos que han desarrollado sida.
Ciclo de replicacin
Las clulas que el VIH invade son esencialmente los linfocitos T CD4+, pero
tambin en menor medida los monocitos/macrfagos, las clulas dendrticas,
las clulas de Langerhans y las clulas de microgla del cerebro. La replicacin
viral tiene pues lugar en tejidos diversos (de ganglios linfticos, intestino,
cerebro, timo). Los rganos linfoides, sobre todo los ganglios linfticos,
constituyen la principal sede de su replicacin.
La fijacin representa la primera etapa en la invasin de una clula. Se basa en
el reconocimiento mutuo y acoplamiento de protenas de la envoltura del
virin, las gp120 y gp41, y los receptores de la clula blanca, los CD4. Este
reconocimiento no es posible sin ayuda de correceptores propios de las clulas
susceptibles de ser invadidas; en el caso de los macrfagos son los CCR5 y en
el caso de los LT4, los CXCR4, que interactan con la protena superficial.
Macrfagos y LT4 tienen en comn su principal receptor: el receptor CD4. Este
reconocimiento es condicin obligada para que el virus llegue a penetrar en la
clula y continuar con el proceso de infeccin.
La penetracin es el segundo paso: una vez reconocido el virin por los
receptores de superficie, se vaca dentro de la clula fusionndose la envoltura
lipdica del virin con la membrana plasmtica de la clula. Protegidos por la
cpside y las nucleocpsides, los dos ARN mensajeros que forman el genoma
viral y sus protenas asociadas se encuentran ahora en el citoplasma.
Eliminacin de las cubiertas proteicas, cpside y nucleocpsides, quedando el
ARN vrico libre en el citoplasma y listo para ser procesado. La transcripcin
inversa del ARN vrico para formar ADNc (ADN complementario,
monocatenario) con la misma informacin. Cada una de las dos molculas de
ARN llega desde el virin asociada a una molcula de transcriptasa inversa que
se ocupa del proceso. Las dos molculas de ADNc se asocian para formar una

molcula de ADN, que es la forma qumica de guardar la informacin que una

clula eucariota es capaz de procesar. El paso siguiente es la integracin del
genoma vrico en el genoma de la clula husped. Para ello penetra en el
ncleo y se inserta en el ADN celular con ayuda de una integrasa, que procede
del virin infectante. La transcripcin del ADN vrico por los mecanismos
normales de la clula. El resultado de la transcripcin es un ARNm (ARN
mensajero). El ARNm obtenido es complejo, constituido por una sucesin de
intrones (partes no informativas) y exones (partes informativas). Debe ser
procesado por cortes y reempalmes antes de que la informacin que contiene
pueda servir para fabricar las protenas correspondientes. Una vez procesado,
el ARNm puede salir del ncleo a travs de los poros nucleares. Una vez en el
citoplasma el ARNm proporciona la informacin para la traduccin, es decir, la
sntesis de protenas, que es realizada a travs del aparato molecular
correspondiente, del que forman la parte fundamental los ribosomas. El
resultado de la traduccin no consiste inmediatamente en protenas
funcionales, sino en poliprotenas que an deben ser cortadas en fragmentos.
Por accin de proteasas especficas del VIH, las poliprotenas producto de la
traduccin son procesadas, cortndolas, para formar las protenas constitutivas
del virus. Las protenas vricas fabricadas se ensamblan, junto con ARN
provirales, para formar los componentes internos de la estructura del virin, los
que constituyen la cpside y su contenido. El ltimo paso es la gemacin,
cuando los nucleoides vricos se aproximan a la membrana plasmtica y se
hacen envolver en una verruga que termina por desprenderse, formando un
nuevo virin o partcula infectante. En cada clula infectada se ensamblan
varios miles de nuevos viriones, aunque muchos son incompletos y no pueden
infectar.
Pruebas para la Deteccin del VIH
No existe ninguna manifestacin clnica que sea caracterstica de la infeccin
VIH o del SIDA y, aunque la presencia de alguna de ellas puedan sugerir en un
contexto determinado la presencia de la infeccin, no es posible establecer un
diagnstico clnico de la enfermedad por lo que ste solo se puede establecer
de un modo definitivo por tcnicas de laboratorio. Por medio de ellas es posible
detectar al propio virus o algunos de sus componentes, como protenas y
cidos nucleicos (mtodos directos, ya sea mediante cultivo vral, deteccin de
antgeno viral o la amplificacin de una parte del material gentico del virus,
por ejemplo por PCR (reaccin en cadena de la polimerasa), bDNA (ADN
ramificado), etc.).
Sin embargo la prctica habitual es detectar los anticuerpos especficos que el
organismo produce como respuesta a la presencia del virus (mtodos
indirectos) y la mayora de las tcnicas empleadas se basan en el
enzimoinmunoanlisis (mtodo ELISA) para las pruebas masivas de cribado o
en los inmunoblots (Western Blot) para las pruebas de confirmacin o
suplementarias.
Por lo tanto en la mayora de los casos la seropositividad frente al VIH se
detecta a partir de una extraccin de sangre del paciente con la que se realiza
la determinacin de anticuerpos anti-VIH por alguna tcnica serolgica.
Despus de la exposicin al VIH cerca de la mitad de los pacientes que se
infectan desarrollan en las primeras semanas de infeccin (10-30 das) un
cuadro pseudogripal conocido como sndrome retroviral agudo y que

corresponde a las manifestaciones clnicas de la primoinfeccin. Aunque

despus de la infeccin el primer marcador serolgico que se detecta en
algunos pacientes es al antgeno p24, algunas semanas despus aparecen los
anticuerpos que se dirigen frente al VIH y se pueden detectar por las tcnicas
de cribado actuales en la mayora de los pacientes infectados antes de
transcurridos tres meses de la exposicin al virus. Dentro de los 3 meses de la
infeccin por VIH ms del 95% de las personas infectadas presentan
seroconversin (paso de seronegatividad a seropositividad) por estas tcnicas.
Sin embargo el tiempo que transcurre entre la fecha de exposicin de la
infeccin y la deteccin de la seropositividad, que se denomina periodo
ventana o periodo de seroconversin, es variable de unas personas a otras y
tambin depende de la va de transmisin por la que se ha adquirido el VIH; as
se ha visto que los pacientes que se han infectado a partir de la recepcin de
sangre contaminada por medio de transfusiones pueden tener anticuerpos
detectables en la mayora de los casos en 3-6 semanas, mientras que los
pacientes infectados por va sexual el periodo de ventana es algo ms largo (812 semanas).
En general las tcnicas que son ms sensibles para la deteccin de anticuerpos
dirigidos frente al core del VIH se pueden positivizar antes, al igual que las que
detectan anticuerpos de la clase IgM, si bien este tipo de anticuerpos no son
especficos solamente de la primoinfeccin y pueden aparecer en etapas
ulteriores del desarrollo de la infeccin. De este modo los primeros anticuerpos
que se suelen positivizar son los anti-p24 y anti-gp160, mientras que el resto
de los anticuerpos van apareciendo de modo progresivo en las semanas
siguientes.
A diferencia de otras enfermedades infecciosas, en las que la deteccin de
anticuerpos refleja usualmente una exposicin previa al agente patgeno y su
erradicacin en un tiempo pasado, en la infeccin VIH/SIDA la presencia de
anticuerpos expresa un estado de "portador" del virus, y por consiguiente la
posibilidad de transmitirlo a otros, an en ausencia de manifestaciones clnicas
de la infeccin.
Pruebas de Cribado o Screening.
La investigacin de anticuerpos especficos frente al VIH-1 es la metodologa
ms ampliamente utilizada para detectar a las personas infectadas por este
virus. Aunque la muestra que se puede analizar puede ser de diferente
naturaleza, en la actualidad lo ms frecuente es el empleo del suero o del
plasma obtenido de una extraccin sangunea del paciente; pero tambin
pueden emplearse diferentes lquidos orgnicos, especialmente orina y saliva,
con los que tambin pueden realizarse pruebas confirmatorias, y que pueden
ser tiles en cribados de amplios grupos poblacionales.
Existen diferentes mtodos para la realizacin de las pruebas de cribado para
la deteccin de anticuerpos especficos frente al VIH. Entre ellos las tcnicas
ELISA (Enzyme Linked ImmunoAbSsorbent Assay), Pruebas de aglutinacin de
ltex y Pruebas de Inmunofijacin de Dot-Blot son las ms utilizadas,
especialmente el ELISA que tambin se denomina anlisis inmunoenzimtico
(abreviado, EIA).
Los ELISA:
En ellas el antgeno puede proceder del lisado viral de un cultivo (como en los

primeros ELISA disponibles que se llamaron de 1 generacin) o bien de

protenas recombinantes o pptidos sintticos de 10-50 aminocidos
especficos del VIH (que se han calificado como ELISA de 2. y de 3
generacin). Segn su diseo para reconocer la presencia de anticuerpos se
habla fundamentalmente de cuatro tipos de EIA diferentes: indirecto,
competitivo, de captura y tipo sndwich. Los dos ltimos suelen ser los ms
sensibles y especficos; dentro de los primeros los indirectos son ms sensibles
que los competitivos y stos ms especficos que aquellos.
De un modo esquemtico, la muestra, suero normalmente, se enfrenta en un
soporte, que pueden ser receptculos de microtitulacin, esferas de plstico o
papel -usualmente nitrocelulosa-, a un componente vrico que acta como
antgeno. Si en el suero existen anticuerpos especficos, stos se unen con el
antgeno formando un complejo que se pone en evidencia mediante una
reaccin enzimo-cromtica que puede ser visualizada a simple vista o medida
con un fotmetro. Por lo general, en las tcnicas ELISA no competitivas, la
muestra es positiva cuando se desarrolla color. Mtodos ms modernos
emplean tcnicas de quimioluminiscencia.
Las tcnicas ELISA, por lo general muy sensibles, detectan mnimas cantidades
de anticuerpos por lo que pequeas interferencias de substancias similares
podran conducir a un resultado positivo falso. La probabilidad de un resultado
falsamente positivo es mayor cuanto ms baja es la prevalencia de la infeccin
en la poblacin estudiada. En contraposicin y en la actualidad tambin son
tcnicas muy especficas, pero la prctica habitual de los laboratorios que
obtienen resultados positivos es utilizar al menos otra tcnica ELISA para
reafirmar la positividad, a ser posible con un diseo de reconocimiento de
anticuerpos diferente; cuando la positividad se repite con un segundo ELISA se
confirman los resultados con otras tcnicas de alta especificidad, usualmente
con tcnicas de inmunofijacin dot-blot o IFI.
A pesar de todo hay descritas posibles causas de resultados falsos, positivos y
negativos, de las pruebas ELISA que se recogen en la siguiente tabla.

ELISA tipo Indirecto

En la prueba ELISA indirecta la muestra del paciente se agrega a la fase slida
que contiene el antgeno y se realiza una primera incubacin durante un
perodo especifico de tiempo y a una temperatura particular(30 minutos y 2530). El ELISA indirecta produce ms color a medida que la concentracin del
Ac desconocido aumenta en la muestra. Inversamente, con pequeas
cantidades de Ac, menores cantidades de conjugado se fijaran con el resultado
de menor sustrato adherido, menor color producido, y lecturas DO ms bajas.
Cada componente se agrega por separado, con frases de lavado antes del
agregado del conjugado y antes del agregado de sustrato. Las frases de lavado
resumen el material no adherido.

ELISA tipo Competitivo

La prueba Elisa de tipo competitivo difiere en que el anticuerpo antivih de la
muestra compite con el conjugado (que es un anticuerpo tambin dirigido
contra el antgeno del VIH) para ocupar sitios reactivos en el antgeno fijado.
As, en este tipo de prueba, tanto la muestra que contiene el anticuerpo
antivih, como el conjugado se agregan a la fase slida (conteniendo el antgeno
del VIH) al mismo tiempo. Si la concentracin de anticuerpos en la muestra es
alta, muy poco del conjugado puede fijarse a los antgenos inmovilizados, ya
que muestra y conjugado compiten por los mismos lugares del antgeno. Habr
ausencia de coloracin dado que no habr fijacin de la enzima como para
unirse al sustrato.

Inversamente, con muestras que contienen poco o ningn anticuerpo antivih,

se fijar ms conjugado al antgeno en la fase slida y la consiguiente adicin
de sustrato provocar la presencia de color. Por esto, la cantidad de

anticuerpos desconocidos en la muestra analizada es inversamente

proporcional a la cantidad de coloracin que aparezca.
ELISA tipo Captura o de Captacin del Antgeno.
La prueba ELISA de captura del antgeno puede ser de tipo indirecto o
competitivo y slo difiere en la etapa inicial de fijacin del antgeno en la fase
slida. Un anticuerpo monoclonal (anticuerpo muy especfico dirigido slo hacia
un determinante antignico) es fijado al soporte slido para "capturar" al
antgeno especfico del VIH. Esto tiende a disminuir la cantidad de sustancias
contaminantes adheridas al soporte slido, resultando as una menor fijacin
no especfica. Estas pruebas son consideradas ms especificas que las pruebas
indirectas, que incorporan lisados virales totales.

ELISA tipo Sndwich.

Se incuba la muestra con la fase slida sensibilizada con un antgeno especfico
para el anticuerpo en la muestra se une a la fase slida. Se elimina todo el
material no ligado por lavados. Luego se agrega conjugado el cual se unir al
anticuerpo pegado. A un nuevo paso de lavados le sigue la adicin del sustrato,
que desarrollar color si est presente la enzima.
OTRAS TECNICAS DE CRIBADO
Las tcnicas de aglutinacin suelen emplear pptidos sintticos o protenas
recombinantes del VIH como fuente de antgeno y se realizan con partculas de
ltex o hemates entre otros. Por lo general son tcnicas menos complejas
metodologicamente que los Elisa, ms rpidas y baratas por lo que en algunas
situaciones, como pases en desarrollo, pueden ser una alternativa vlida a
pesar de que tambin su sensibilidad y especificidad son menores.
Las tcnicas de inmunoadherencia suelen ser de fcil y rpida realizacin
tcnica por lo que se han empleado algunas veces en procedimientos de
urgencia ya que poseen una sensibilidad alta. Sin embargo en muchos centros

se han desplazado por tcnicas Elisa que se pueden realizar con aparatos
automatizados y que permiten obtener resultados en poco menos de una hora.
Prueba de inmunofijacin de DOT-BLOT
Las pruebas para la deteccin del VIH. que usan soporte slido de papel
(nitrocelulosa) se conocen como pruebas de DOT-BLOT.
Esto es porque el Ag es absorbido pasivamente al soporte. A menudo el Ag que
se absorbe como una pequea gota (dot) es usualmente un Ag recombinante o
un pptido sinttico. Un dispositivo plstico sostiene el soporte slido y
contiene material absorbente debajo del papel, para juntar el suero y los
reactivos despus de la adicin.
Las pruebas de Dot-Blot son rpidas y fciles de realizar, pero al mismo tiempo
son costosas. Muchas producen resultados en 5 o 10 minutos, algunas en
apenas 3 minutos. En general se utilizan conjugados de anti-inmunoglobulina
ligados a una enzima que se fijan al Ac del paciente. La adicin de un sustrato
adecuado produce un color en el papel.
Prueba de Aglutinacin por Ltex (LA)
Las pruebas que utilizan la aglutinacin como sistema indicador han sido
empleadas durante muchos aos para diagnosticar una serie de enfermedades
infecciosas porque generalmente estas pruebas tienen muy buena sensibilidad
para detectar Ac. Sin embargo, la especificidad se ve a veces comprometida.
Las pruebas de aglutinacin incorporan una serie de agentes portadores
recubiertos de Ag. Los agentes portadores son partculas utilizadas para llevar
o sostener al Ag.
En las pruebas de deteccin del V.I.H., se usan comnmente como agentes
portadores, a hemates, partculas de ltex, partculas de gelatina y
microesferas. Los Ag del vih son absorbidos por los portadores, y estos
recubiertos de Ag quedan listos para ser usados. Los Ag se unen sin fijacin
especfica por lo que esta Tcnica se conoce como de aglutinacin pasiva. Si se
utilizan hemates como sistema portador, la Tcnica se conoce como prueba
pasiva de Hemaglutinacin (PHA).
Entre las partculas cubiertas de Ag y los Ac se forma una red a medida que los
Ac de la muestra reaccionan en el sistema. Esta reaccin da lugar a la
aglutinacin de las partculas.
Aunque las pruebas de rastreo o screnning del V.I.H. son adecuadas para
identificar la mayora de las infecciones por el V.I.H., generalmente carecen de
alto grado de especificidad necesario. Esto significa que estas pruebas son
responsables de producir algunos resultados falsos positivos. Debe recordarse
que las pruebas de rastreo o screnning fueron concebidas para proteger el
suministro de sangre, y su sensibilidad es lo suficientemente adecuada para
cumplir con este propsito.
Como se dijo previamente, la mayora de las pruebas de cribado o rastreo ms
utilizadas se basan en la tecnologa del lisado viral y en consecuencia
contienen contaminacin por productos de la clula husped. Dada la aparicin
de falsos positivos, los resultados de las pruebas de rastreo no pueden y no
deben, ser consideradas como concluyentes. Esto es particularmente evidente
cuando se examina ciertas poblaciones de bajo riesgo en las pruebas muestran
un escaso valor productivo de positividad.

Es por esto que cuando se realiza el diagnstico de infeccin por V.I.H. a un

individuo se pueden realizar pruebas complementarias o suplementarias de las
muestras que, en las pruebas de rastreo aparecen repetidamente como
reactivas para los Ac antivih, previo a producir el informe de los resultados. El
objetivo de determinar la mejor combinacin de pruebas es el de detectar
todos los sueros falsos positivos.
Pruebas complementarias o suplementarias
Las pruebas llamadas complementarias o suplementarias tienen como objeto
verificar (confirmar) que los resultados obtenidos con las pruebas de cribado
sean correctos.
Western Blot (WB).
El fundamento de la principal prueba confirmatoria de la actualidad, o Western
Blot (WB), es una discriminacin de los antgenos del VIH frente a los que se
dirigen los anticuerpos presentes en la muestra.
Bsicamente se basa en la separacin de las protenas y glicoprotenas
(antgenos) obtenidas del VIH-1 procedentes del lisado del cultivo del virus y
purificadas por centrifugacin. La protena viral as obtenida se coloca en un
gel de poliacrilamida en forma de lminas delgadas y luego se efecta una
electroforesis con la que las protenas de menor peso molecular (p17, p24)
emigran ms lejos en el gel mientras que las de mayor peso molecular se
mantienen cerca de su lugar de depsito. Despus se transfieren a una tira de
nitrocelulosa y se cortan en tiras de 1 o 0,5 cm de ancho. Estas son las tiras
que se exponen al suero humano diluido, despus de una incubacin se lavan y
se vuelven a incubar con una IgG antihumana marcada con una enzima que
con la exposicin a un revelador enzimtico producir una banda coloreada en
las zonas correspondientes a los anticuerpos especficos que contenga la
muestra. Por lo general cada uno de los diferentes equipos comerciales que
existen para la realizacin de la prueba contienen instrucciones precisas de
cmo interpretar los resultados obtenidos con unos criterios de positividad ms
o menos restrictivos y sus tiras pueden contener un nmero variable de
bandas; las principales bandas del WB se recogen en la tabla.

Por lo general se considera que el WB es una prueba sensible para las

protenas del core y algo menos para las de la envoltura. Por ello durante la
primoinfeccin por la escasez de anti-p24 o anti-gp41 es una prueba poco
sensible como los ELISA; algo similar ocurre en las fases terminales por la
prdida de anti-p24. En conjunto se considera que es una prueba altamente
especfica con menos de 1 falso positivo (en relacin a la IFI o RIPA) por cada
20.000 mientras que la tasa de falsos negativos es, en poblacin donante de
sangre, de 1 por cada 250.000 o ms. El WB puede ofrecer tres tipos de
resultados:

Positivo: Cuando cumple los criterios de positividad adoptados por la

tcnica que se est empleando (presencia de ciertas bandas).

Negativo: Cuando ninguna de las bandas presenta reaccin.

Indeterminado: Cuando no es positivo o negativo.

En general para la positividad del WB al VIH-1 se requieren al menos 2 bandas

de envoltura que se consideran las ms especficas y la negatividad se obtiene
por la ausencia de todas las bandas. Muchos laboratorios consideran los
criterios de la OMS como los ms especficos teniendo en cuenta que: (1) la
presencia aislada de p17 se suele considerar como negativa y no requiere
seguimiento ulterior, (2) la presencia de una sola banda de la envoltura es un
patrn infrecuente que puede observarse en la seroconversin y en la infeccin
VIH-2 por lo que se recomienda repetir en WB y en caso de persistencia
analizar una nueva muestra en 15 das, y (3) que los patrones de gag/pol sin
env pueden deberse tambin a una seroconversin por lo que se recomienda

hacer un seguimiento peridico durante 3-6 meses tras los cuales si persiste el
WB indeterminado y no concurren factores de riesgo en el paciente se puede
considerar negativo.
Las principales causas de WB indeterminado suelen obedecer a:
Infeccin por VIH-2 u otros retrovirus humanos
Seroconversin al VIH-1
Estado avanzado de infeccin VIH-1
Hijo de madre seropositiva
Divergencias genticas de la cepa del VIH-1 (africanos)
Aunque se han descrito diferentes causas de reacciones de WB falsas positivas
para antgenos del VIH-1 las principales son similares a las que acontecen en
los ELlSA y se suelen deber a reacciones cruzadas con ribonucleoprotenas
humanas, otros retrovirus, anticuerpos frente a antgenos mitocondriales,
nucleares, de clulas T y leucocitarios, anticuerpos frente a antgenos HLA
clases I y II y globulinas en una gammopata monoclonal.
Prueba de radioinmunoprecipitacin (RIPA)
La RIPA puede ser usarse junto a, o como una alternativa del WB para
confirmar la infeccin por el V.I.H.. Dado que es esencialmente una tcnica de
investigacin y requiere el uso de sustancias radiactivas, no es utilizada por
muchos laboratorios clnicos. La RIPA es extremadamente sensible. Adems, la
reaccin Ac-Ag sucede bajo condiciones no reductivas, lo que permite que la
prueba sea muy especfica. En esta tcnica se agregan algunos aminocidos
marcados(cisteina) a los cultivos de clulas infectadas por el V.I.H..
A medida que el virus se replica, incorpora esta protena marcada
construyendo bloques dentro de sus componentes estructurales.
Posteriormente, las partculas virales que han quedado marcadas son reunidas,
lisadas y las protenas solubilizadas. El lisado viral se agrega al suero para
analizar. Los complejos inmunes resultantes son precipitados de la solucin con
protena A.
A continuacin, el precipitado marcado pasa por un proceso de electroforesis
(SDS-PAGE) y las protenas marcadas separadas se visualizan exponindolas a
un film especial capaz de detectar la marca(un proceso llamado
autoradiografa). Generalmente los Ag marcados son las glicoprotenas de
envoltura gp160 y gp120. Deben detectarse las dos bandas para poder
asegurar que el suero es positivo. La tcnica es sensible en detectar Ac contra
las protenas de envoltura, y por lo tanto es muy especfica puesto que los Ac
contra estos componentes estn presentes en casi todos los individuos
infectados por el V.I.H. despus de la seroconversin.

Mtodos directos
Son aquellos capaces de detectar el virus como infeccin, como partcula viral,
o bien, la presencia de organismos que puedan repeler al anticuerpo del VIH y
cidos nucleicos virales.
Cultivo vrico o aislamiento viral
Se trata bsicamente de detectar el virus o alguno de sus componentes
mediante el estudio y cultivo de una muestra que normalmente, tendr que

estar sometido a un riguroso anlisis durante semanas o meses, con lo que

este proceso puede ser lento.
Deteccin de antgeno p2
Esta protena viral caracterstica del VIH determinar con su presencia en la
sangre del paciente el diagnstico de infeccin por VIH. Existen distintas
tcnicas inmunolgicas como son las siguientes:
Inmunofluorescencia Directa (ID)
Es de las ms antiguas y usadas clnicamente. Nos ofrece la opcin de
identificar rpidamente el virus sobre la muestra, o bien, realizar distintas
confirmaciones en cultivos celulares.
Investigacin de cidos nucleicos virales (PCR)
Es una tcnica que localiza una parte de los genes del virus, encontrado en la
sangre del paciente, y se obtienen numerosas copias de dicho fragmente,
detectando as la presencia del virus en la sangre, an cuando se traten de
cantidades muy bajas
Pruebas Rapidas
SUDS
Prueba rpida que se prctica en EEUU principalmente, similar a la prueba
ELISA y que arroja resultados en 10-15 minutos. Preferiblemente debe
confirmarse con un Western Blot antes de iniciar un tratamiento o lanzar un
diagnstico precipitado.
Prueba de orina (prueba "Sentinel")
A pesar de no estar disponible para consumidores, est tcnica fue aprobada a
mediados de los 90. Se basa en la metodologa de ELISA con modificaciones, la
tcnica es menos sensible y por ello se precisa una confirmacin con anlisis
de sangre.
OraQuick-Advanced
Esta prueba ofrece resultados con un 99.6% de precisin y exactitud, en 20-30
minutos ya se puede conocer el resultado. El mecanismo es sencillo, y basta
con una muestra de saliva o sangre, es un resultado preliminar que en caso de
ser positivo, habr que someterlo a una prueba confirmatoria (usando las
tcnicas descritas).

http://es.wikipedia.org/wiki/Virus_de_la_inmunodeficiencia_humana#Ciclo_de_r
eplicaci.C3.B3n
http://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_VIH
http://www.sivida.com.ar/medica/infeccion_metodosindirectos.htm
http://www.inspiraction.org/sida/prueba-del-sida