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en
la
separacin
entre
la
fase
primero
queda
delimitado
a la
superficie
Papel (particin)
placas
tienen
indicador
de
fluorescencia
f254
f366.
que
representan
los
utilizando
radiacin
UV
luz
visible.
Cromatografa en Columna.
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de
Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el cual
un
contenedor
por
la
parte
superior
de
la
columna.
difusinales,
disminuyendo
por
tanto
la
resolucin.
Cromatografa de gases.
Se utiliza para la separacin de sustancias gaseosas. La Fase Mvil es un Gas
(llamado Gas Portador) y la Fase Estacionaria puede ser un slido
(Cromatografa Gas-Slido) o una Pelcula de lquido de alto punto de ebullicin
(Generalmente Polietiln-Glicol o Silicn) recubriendo un slido inerte
(Cromatografa Gas-Lquido). El cromatgrafo de gases esta constituido
de aluminio,
por
tanto
la
resolucin.
Cromatografa
de
intercambio inico.
La Fase Estacionaria es
una resina de intercambio
inico que contiene grupos
cargados,
teniendo
propiedad
de
especies
la
separar
ionizadas
protena.
Cromatografa de afinidad
Se trata de un tipo especial de cromatografa de adsorcin slido-lquido en la
que la sustancia de naturaleza bioqumica (anticuerpos, cofactores, inhibidores
enzimticos, lectinas y otras molculas) denominadas ligandos de afinidad y
enlazados qumicamente en soportes slidos adecuados, retienen a los solutos
(analitos), tambin de naturaleza bioqumica, de manera reversible y selectiva.
Las separaciones se basan en el acoplamiento llave-cerradura tpico de la
biologa molecular.
Fundamento de la cromatografa de afinidad
En la figura
separaciones
mediante
cromatografa
de
afinidad.
Un
volumen
no
de
bajo
peso
molecular
de
biomolculas
pequeas
Tipos de cromatografa
Naturaleza de fase estacionaria
Naturaleza
de
fase Slido
estacionaria
Adsorcin
Exclusin
Cambio inico
Afinidad
Lquido
Naturaleza
de
fase Liquido
mvil
Particin
Lquido-lquido ((particin)
Lquido-slido)adsorcin,
exclusin, Afinidad.
Gas
Gas-lquido (CGL)
Gas-slido (CGS)
cambio
Soportes
El material sobre cuya superficie activada se establece el enlace covalente con
el ligando de afinidad. Debe poseer propiedades como tener una gran
superficie, tamao del grano controlable, porosidad controlable, carcter
suficientemente hidroflico para evitar adsorciones no especficas de protenas
u otras molculas, estabilidad mecnica, en especial para trabajar a alta
presin.
El material utilizado generalmente para el soporte son geles orgnicos
derivados de los polisacridos como la agarosa (sepharosa), polmeros de
acrilamida, fractogel TSK y slices CPG.
Inmovilizacin de ligandos
La inmovilizacin de los ligandos de afinidad es un proceso complejo que en
cada caso tiene connotaciones especficas.
El general, los ligandos de afinidad se inmovilizan mediante el establecimiento
de enlaces qumicos covalente con el soporte slido activado y un grupo
reactivo del ligando que est lo ms lejos posible de la zona activa de
bioadsorcin.
no restringida, para el paso de la fase mvil por el centro del tubo (Columna
Tubular Abierta).
Cromatografa plana: Tcnica de separacin en la que la fase estacionaria est
en forma de plano o sobre un plano. ste puede ser un papel, que sirva como
tal o que est impregnado con una sustancia que acte de fase estacionaria
(Cromatografa en Papel), o una capa de partculas slidas extendida sobre un
soporte, tal como una placa de vidrio (Cromatografa en Capa Fina, TLC). A
veces a la cromatografa plana se la llama tambin Cromatografa de Lecho
Abierto.
Literatura
recomendada
pp
335-336,
597-613.
Medica
Panamericana.
Junin,
Buenos
http://www.utoronto.ca/krause/affinity.html
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Servicios tcnicos de Investigacin. Cromatografa de alto rendimiento. [En
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Universidad
de
Alicante.
Ultima
actualizacin
oct
1996