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UNIVERSIDAD DE NARIO
DEPARTAMENTO DE QUMICA
RESUMEN: Se realiz una prctica de extraccin y caracterizacin de ADN a partir de
levadura por un mtodo consistente en cuatro pasos; el rompimiento celular se llevo a
cabo con arena y la extraccin inicial del ADN se llevo a cabo en bao de hielo con SDS y
EDTA. La desnaturalizacin de las protenas se llevo a cabo con una solucin de
cloroformo-alcohol isoamlico y posterior centrifugacin a 3000 rpm. La extraccin final
del ADN se logro mediante precipitacin con etanol. El ADN obtenido correspondi a un
slido de color amarillo y apariencia coloidal muy soluble en agua. Las pruebas de
caracterizacin de ADN fueron positivas para la identificacin general de ADN por el
mtodo de Feulgen-Schiff y la prueba de fosfatos. La prueba de desoxipentosas con
difenilamina present un resultado negativo debido a la contaminacin del reactivo de
difenilamina, debido a esto se utiliz una prueba con el reactivo de Bial que present un
resultado positivo.
INTRODUCCIN
La informacin que permite vivir a los
seres vivos est contenida en los
cidos
nuclecos.
Estos
son
macromolculas
compuestas
por
nucletidos,
que
tienen
en
su
estructura un azcar (ribosa o
desoxirribosa), una base nitrogenada
(adenina, guanina, citosina, timina,
uracilo) y un grupo fosfato.
En
principio, segn el azcar que forma
su esqueleto se distinguen dos tipos
de cidos nuclecos: el ADN, con
desoxirribosa y el ARN, con ribosa. El
ADN contiene la informacin gentica
necesaria para la sntesis de las
protenas que forman los seres vivos y
llevan a cabo todos los procesos
fisiolgicos de los seres vivos. El ARN
tiene diversas funciones siendo una de
las principales el transporte de la
informacin desde el ADN hasta la
maquinaria donde se producen las
protenas.
A
nivel
estructural
encontramos que mientras el ADN se
encuentra mayoritariamente formado
por una doble hlice con dos hebras
complementarias, el ARN est formado
por molculas de una sola hebra que
se
pliegan
sobre
s
mismas
adquiriendo estructuras internas. (1)
En su estructura secundaria, y de
acuerdo a los diversos estudios
fisicoqumicos, el ADN en solucin
acuosa ha demostrado que se trata de
un
polmero
de
elevado
peso
molecular (5 x 106) y que ofrece una
de
caracterizacin
del
Prueba de fosfatos: A 1 mL de la
solucin
de
cido
nucleico
se
agregaron 2 mL de molibdato de
amonio y 1 mL de cloruro estannoso
hasta observar la aparicin de un color
azul que indica la presencia del grupo
fosfato.
Prueba para desoxipentosas: a) A 1
mL de la solucin de cido nucleico se
adicionaron
2
mL
de
cido
tricloroactico al 10% y se calent el
conjunto en bao mara durante unos
15 min. Posteriormente se agregaron
6 mL de difenilamina agitando la
solucin y dejndola otros 10 min en el
bao
mara
hasta
observar
el
desarrollo de una coloracin azul que
indica la presencia de una 2desoxipentosa.
b) A 1 mL de la solucin de cido
nucleico se adicionaron 2 mL de cido
tricloroactico al 10 % y 2 mL del
reactivo de Bial colocando la solucin
en bao mara durante algunos
minutos hasta observar el desarrollo
de una coloracin verde que indica un
resultado positivo para la prueba.
Reaccin de Feulgen-Schiff: En un
tubo de ensayo se colocaron 2 mL del
reactivo de Schiff y se agregaron 2 mL
del hidrolizado colocando el tubo en un
bao mara durante 5 min hasta
observar
la
formacin
de
una
coloracin azul que indica un resultado
positivo para la prueba.
ANLISIS DE RESULTADOS
El mtodo de extraccin del ADN de
levadura permiti la obtencin de un
precipitado amarillo que present una
solubilidad apreciable en agua, debido
probablemente a la presencia de los
muchos grupos fosfato aninicos en la
molcula de ADN(3). El primer paso de
la extraccin permiti la ruptura de las
clulas de levadura por un medio
fsico, la friccin con arena. El SDS
utilizado como detergente permiti la
degradacin de los componentes
celulares para permitir la liberacin del
ADN.
Fosfat
os
+
FeulgenSchif
+
+ = positivo
- = negativo
O
R O P O
+ (NH4)2MoO4
O
O
R O P O NH4 + SnCl2
O NH4
O
R O P O
O
+ 2Cl
Sn
Azul
OH
H+
H
N
(fucsina
bsica)
de
color
caracterstico(4).
En este caso, la
prueba positiva se evidenci por la
formacin de una coloracin violeta
intensa.
CONCLUSIONES
Complejo verde
OH
Difenilamina
-D-2-Desoxirribosa
H+
HC O
C
CH
HC OH
CH
CH2OH
HC
2-D-desoxiribosa
Furfural
CH3
OH
O
Fe3+
CHO
Furfural
Complejo verde
OH
Orcinol
BIBLIOGRAFA
(1) Martnez, J. L. Extraccin de ADN.
Biologa:
Ciencias
Ambientales.
UNED. Mxico, 1985. Pg. 98
101.
(2) Luque, E.
Bioqumica Descriptiva.
UDENAR. Pasto, 1995. Pg. 186 188.
(3) Bohinski, Robert. Bioqumica. Quinta
Edicin.
Addison
Wesley
Iberoamericana.
Mxico, 1998. Pg.
255, 256.
(4) Stains, Microscopic. Schmidt, Ute. June
15, 2000. Ullmans Encyclopedia of
Industrial Chemistry. Willey VCH Verlag
GmbH & Co. 2002.